尼美舒利对丝裂霉素-c抑制人胃癌细胞株细胞增殖及诱导凋亡影响的实验研究

目的 研究环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)选择性抑制剂尼美舒利(Nimesulide，NIM)对丝裂霉素-c(Mitomycin，MMC-c)抑制体外培养人胃癌细胞株SGC7901及MGC803细胞增殖及诱导凋亡作用的影响。方法 采用MTT比色法观察NIM对MMC-c抑制人胃癌细胞SGC7901及MGC803细胞增殖的影响；采用流式细胞仪技术及吖啶橙荧光染色观察NIM对MMC-c诱导人胃癌细胞SGC7901及MGC803细胞凋亡的影响。结果 NIM能增强MMC-c抑制SGC7901细胞增殖及诱导SGC7901细胞凋亡，而对MGC803细胞无明显影响。结论 COX-2选择性抑制剂NIM能增强MMC-c对部分人胃癌细胞抑制增殖与诱导凋亡作用，作用有无可能取决于癌细胞COX-2的表达情况。     

尼美舒利抑制结肠癌裸鼠移植瘤血管生成

目的:研究选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂尼美舒利对人COX-2高表达的结肠癌细胞的裸鼠移植瘤血管生成的影响,探讨其抗血管生成的可能机制。方法:建立结肠癌裸鼠移植瘤模型,荷瘤裸鼠随机分为荷瘤未用药组和尼美舒利组。用药30d后,观察各组裸鼠移植瘤体积变化及抑瘤率;利用免疫组化观察移植瘤中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,对移植瘤中的微血管密度(MVD)进行计数,同时用RT-PCR技术观察VEGF的表达。结果:①尼美舒利组能缩小瘤体体积,其与荷瘤未用药组比较有显著差异(P<0.05),尼美舒利组随着尼美舒利剂量增加,抑瘤率增加,呈剂量依赖关系;②尼美舒利组能抑制肿瘤新生血管生成,降低VEGF mRNA的表达(P<0.05)。结论:尼美舒利有一定抑瘤效果,其机制可能是通过抑制种瘤血管生成,从而抑制肿瘤的生长。     

舒林酸对结肠癌SW1116细胞生长的影响

目的观察选择性环氧化酶－2（COX－2）抑制剂尼美舒利（nimesulide）与非选择性COX抑制剂舒林酸（sulindac）对结肠癌细胞株SW1116前列腺素E2（PGE2）释放的影响,以及舒林酸对细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响,以探讨非甾体抗炎药（NSAIDs）的抗癌机制。方法采用放射免疫法检测尼美舒利和舒林酸作用前后细胞上清液中PGE：水平的变化;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察舒林酸对结肠癌细胞SW1116增殖的抑制作用;流式细胞术（FCM）分析舒林酸对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果放免检测发现,尼美舒利、舒林酸作用1h即可出现细胞上清液中PGE2水平下降,且呈剂量依赖性,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;MTT比色法显示舒林酸呈时间和剂量依赖性抑制细胞的增殖（P〈0．05或P〈0．01）;FCM分析结果显示舒林酸能促进细胞的凋亡且改变细胞周期的分布（降低G0／G1期细胞的比例、增加S期和G2／M期细胞的比例）,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论NSAIDs能抑制结肠癌SW1116细胞的生长,其机制可能与阻滞细胞周期的进程、促进细胞凋亡、抑制PGE2的释放等有关。     

尼美舒利不依赖环氧合酶-2途径抑制胃癌生长的机制研究

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利不依赖COX-2途径抑制胃癌细胞移植瘤的可能机制。方法应用W estern-b lotting方法从人胃癌细胞株MKN45、AGS、MKN28、SGC-7901以及BGC-823中筛选出COX-2极低表达的细胞株MKN28,将其收集后皮下注射在BALB/C裸鼠的右侧前肢腋下。24只裸鼠分为模型组和干预组,干预组给予300 mg/L的尼美舒利灌胃,每日1次。每10天测定瘤体的大小,第40天终止实验,处置动物,留取移植瘤组织,免疫组化检测核因子-κB(NF-κB)和p21WAF1的表达;提取瘤组织总RNA进行RT-PCR,测定模型组和干预组过氧化物酶体增殖蛋白激活受体-γ(PPAR-γ)mRNA的表达水平。结果干预组移植瘤体积显著小于模型组(P<0.05),提示选择性COX-2抑制剂对MKN28胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型具有良好的抑瘤作用。干预组NF-κB的表达显著低于模型组(P<0.05),p21WAF1的表达则显著高于模型组(P<0,05);RT-PCR发现干预组PPAR-γmRNA的表达较模型组增强。结论选择性COX-2抑制剂尼美舒利对COX-2表达水平极低的胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型具有抑瘤作用。其机制可能是通过影响细胞凋亡相关蛋白p21WAF1的表达以及NF-κB和PPAR-γ转录因子等不依赖COX-2途径的作用得以实现。     

新型mTORC1/mTORC2双重抑制剂OSI-027对人结肠癌细胞株HT-29的体外抑制作用

目的:探讨新型mTORC1/mTORC2双重抑制剂OSI-027对人结肠癌细胞株HT-29的体外抑制作用。方法:体外培养的人结肠癌HT-29细胞株,给予不同浓度(0.1、1、10、25、50 nmol/L)的OSI-027处理,或以25 nmol/L OSI-027处理0、24、48、72、96h后,采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、细胞集落形成实验观察HT-29细胞的生长增殖情况;应用流式细胞仪(FACS)及台盼蓝染色法检测OSI-027处理后HT-29细胞的凋亡和死亡情况;采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测HT-29细胞凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3和细胞色素C(cytochrome C)的表达。结果:OSI-027可抑制HT-29细胞的存活,且呈浓度和时间依赖性;还可抑制HT-29细胞的增殖,呈浓度依赖性;此外,OSI-027还能诱导HT-29细胞的凋亡和死亡,并呈浓度依赖性。OSI-027处理后,HT-29细胞中凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3和cytochrome C的表达水平上调。结论:新型mTORC1/mTORC2双重抑制剂OSI-027可抑制人结肠癌细胞HT-29的增殖并诱导细胞凋亡。     

粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响

目的:通过观察粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响,初步探讨粉防己碱对结肠癌的体外抗肿瘤效应。方法:采用MTT比色法观察粉防己碱对HT-29细胞的增殖抑制效应,利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳及细胞凋亡荧光染色法检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用,以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和BAX表达水平的影响。结果:MTT比色法显示粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖有抑制作用,其抑制效应具有剂量依赖的特点,细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳表明粉防己碱可诱导HT-29细胞凋亡,免疫细胞化学法显示粉防己碱上调BAX基因表达,下调Bcl-2基因表达。结论:粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖的抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

辛伐他汀对人结肠癌细胞增殖的影响

目的体外观察辛伐他汀对人结肠癌HT-29、colo-320细胞增殖、细胞周期及环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）蛋白表达的影响。方法采用噻唑蓝（MTT）法观察辛伐他汀对结肠癌HT-29、colo-320细胞增殖的影响，流式细胞仪（FCM）研究辛伐他汀对细胞周期的作用，免疫细胞化学法观察辛伐他汀对COX-2蛋白表达的影响。结果体外辛伐他汀可抑制结肠癌HT-29（F=15．400，P〈0．001）、colo-320（F=5．162，P=0．004）细胞的增殖，辛伐他汀处理组内G0／G1期细胞增多，辛伐他汀可抑制结肠癌HT-29（F=5．699，P=0．002）、colo-320（F=7．214，P=0．001）细胞COX-2蛋白的表达。结论体外辛伐他汀对colo-320细胞增殖有抑制作用，该作用可能与其使细胞生长阻滞于G0／G1期及抑制COX-2蛋白表达有关。     

尼美舒利联合表阿霉素对人膀胱癌EJ细胞的体外作用

目的:探讨尼美舒利对人膀胱癌EJ细胞的体外作用及其与表阿霉素的协同抗肿瘤作用。方法:通过MTT法检测尼美舒利及其与表阿霉素联合对EJ细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI荧光染色法检测EJ细胞在尼美舒利作用下的凋亡率,免疫组化SP法检测尼美舒利对EJ细胞中Bcl-2和Bax表达的影响。结果:40μmol/L尼美舒利作用24、48、72h细胞生长抑制率分别为15.18%、30.79%和43.50%;浓度360μmol/L时,抑制率分别升为50.45%、70.98%和88.67%。单用表阿霉素(0.2mg/L)作用48h抑制率为25.51%;合用40、120、400μmol/L尼美舒利抑制率升为58.52%、69.38%和80.30%。40、120、400μmol/L的尼美舒利作用12h时细胞的凋亡率为2.41%、8.27%和15.05%,作用36h时凋亡率分别升为13.32%、27.60%和42.48%。随着尼美舒利浓度增加,EJ细胞中Bcl-2表达下调,Bax的表达上调(P<0.05)。结论:尼美舒利可能通过下调Bcl-2表达和上调Bax表达来抑制人膀胱癌EJ细胞的增殖并诱导其凋亡,...     

尼美舒利对人胃癌SGC7901细胞生长及细胞周期分布的影响

目的探讨尼美舒利对体外培养的胃癌细胞生长及细胞周期分布的影响。方法以人胃癌细胞株SGC7901为对象,用放射免疫分析法测定细胞培养上清PGE2水平,体外药物敏感实验（MTT）法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞周期分布变化情况。结果尼美舒利可减少PGE2产生,尼美舒利对人胃癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,尼美舒利可改变胃癌细胞株细胞周期的分布,明显降低其增殖指数。结论尼美舒利可通过抑制环氧合酶-2（COX-2）活性抑制肿瘤细胞的分裂和增殖、阻止细胞周期进展,诱导其凋亡中起重要作用。     

粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响．初步探讨粉防己碱对结肠癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用MTT比色法观察粉防己碱对HT-29细胞的增殖抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳及细胞凋亡荧光染色法检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用．以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bct-2和BAX表达水平的影响。结果：MTT比色法显示粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖有抑制作用。其抑制效应具有剂量依赖的特点，细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳表明粉防己碱可诱导HT-29细胞凋亡，免疫细胞化学法显示粉防己碱上调BAX基因表达．下调Bcl-2基因表达。结论：粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖的抑制效应具有剂量依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关     

非选择性环氧化酶抑制剂诱导结肠癌细胞凋亡的研究

目的：研究非选择性环氧化酶抑制剂舒林酸对结肠癌细胞株HT-29生长的影响及其参与引起细胞凋亡的可能机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测舒林酸对结肠癌细胞增殖的抑制作用,采用激光共聚焦显微镜（LSM）观察细胞凋亡情况,采用流式细胞仪（FCM）分析其对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果：舒林酸能呈剂量和浓度依赖性押制HT-29的增殖．在4．8mmol·L^-1时其抑制率可迭91．8％。AnnexinV／H染色后LSM观察到凋亡细胞胞膜绿染,胞核红染或呈桔黄色。FCM显示此药能促进细胞的凋亡,使处于G0／G1期的细胞比例显著降低。结论：舒林酸可抑制结肠癌细胞株HT-29生长,其机制可能与其阻止细胞周期的进展,诱导细胞凋亡有关。     

熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞凋亡与凋亡相关基因的关系

目的：体外实验探讨熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与其相关基因之间的关系。方法：采用四甲基偶氮唑蓝比色、TUNEL法、流式细胞术检测熊果酸对结肠癌HT-29细胞的增殖抑制与杀伤作用；应用免疫组织化学SP法检测凋亡相关基因caspase-9、bcl-2、bax的表达。结果：熊果酸在体外对HT-29细胞有中度增殖抑制效应，在熊果酸作用下，HT-29细胞出现显著的细胞凋亡征象，TUNEL法显示细胞固缩，核染色质聚集或断裂，形成凋亡小体。流式细胞术检测在G1期之前出现sub-G1峰，凋亡率最高为11．63％，熊果酸的作用具有浓度和时间依赖性。在HT-29细胞凋亡过程中，凋亡相关基因caspase-9、bax的表达增强，bcl-2的表达减弱。结论：熊果酸在体外对结肠癌HT-29细胞有诱导凋亡作用，而caspase-9和bax的表达增强，bcl-2的表达减弱可能是其作用机制之一。     

多西苯醌联合塞来昔布对结肠癌细胞抑制作用的研究

目的通过体外实验对比研究单独及联合应用多西苯醌（AA-861）与塞来昔布对结肠癌的抑制作用。方法体外分组培养的结肠癌HT-29细胞,通过倒置相差显微镜观察AA．861与塞来昔布单独及联合应用48h后细胞形态变化;通过细胞增殖试验（MTr）检测细胞吸光度,以此检测细胞增殖状态;应用免疫荧光染色方法在共聚焦显微镜下观察细胞内VEGF表达变化。结果倒置相差显微镜观察到各药物组细胞形态发生明显变化,其中AA-861与塞来昔布联合应用组变化最明显;MTY结果提示两种药物联合应用组细胞增殖率最低;免疫荧光染色实验观察到细胞内VEGF表达减少,两种药物联合应用组VEGF表达量最低。结论多西苯醌与塞来昔布联合应用比单独应用,更能有效抑制结肠癌,并且可能与抑制VEGF表达有关。     

塞来昔布联合 PDTC 对人结肠癌细胞 HT-29 的抑制增殖和促凋亡作用及其机制

目的研究塞来昔布联合吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）对人结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及其对COX-2、NF-κB、Caspase-3基因表达的影响,探讨塞来昔布联合用药抗肿瘤的机制。方法用不同浓度的塞来昔布（30、60、120、240μmol／L）（单药组）以及不同浓度塞来昔布联合不同浓度的PDTC（50、100μmol／L）（联合组）分别处理人结肠癌细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞COX-2、NF-κB、Caspase-3表达的变化。结果塞来昔布单药组对结肠癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡作用,其作用随着药物浓度、给药时间的增加而增强（P均〈0．05）;同时检测到COX-2、NF-κBKBmRNA的表达降低（P均〈0．05）,Caspase-3表达升高（P〈0．05）,且具有浓度依赖性;联合组较同一塞来昔布浓度的单药组上述作用更明显（P均〈0．05）。结论塞来昔布单药组和联合组均能抑制人结肠癌细胞的增殖,促进其凋亡;联合组作用强于单药组;其机制可能与COX-2、NF-κB的下调和Caspase-3表达上调有关。     

Inhibition of 5-lipoxygenase by MK886 augments the antitumor activity of celecoxib in human colon cancer cells

Cyclooxygenase (COX)-2 and 5-lipoxygenase (5-LOX) are key enzymes involved in arachidonic acid metabolism. Their products, prostaglandins and leukotrienes, are involved in colorectal tumor development. We aimed at evaluating whether combined blocking of the COX-2 and 5-LOX pathways might have additive antitumor effects in colorectal cancer. The expression/activity of COX-2 and 5-LOX were assessed in 24 human colorectal cancer specimens. The effects of the COX-2 inhibitor celecoxib and the 5-LOX inhibitor MK886 on prostaglandin E(2) and cysteinyl leukotriene production, tumor cell proliferation, cell apoptosis, and Bcl-2/Bax expression were evaluated in the Caco-2 and HT29 colon cancer cells. We also investigated the effect of the enzymatic inhibition on mitochondrial membrane depolarization, one of the most important mechanisms involved in ceramide-induced apoptosis. Up-regulation of the COX-2 and 5-LOX pathways was found in the tumor tissue in comparison with normal colon mucosa. Inhibition of either COX-2 or 5-LOX alone resulted in activation of the other pathway in colon cancer cells. Combined treatment with 10 micromol/L celecoxib and MK886 could prevent this activation and had additive effects on inhibiting tumor cell proliferation, inducing cell apoptosis, decreasing Bcl-2 expression, increasing Bax expression, and determining mitochondrial depolarization in comparison with treatment with either inhibitor alone. The administration of the ceramide synthase inhibitor fumonisin B1 could prevent some of these antineoplastic effects. In conclusion, our study showed that inhibition of 5-LOX by MK886 could augment the antitumor activity of celecoxib in human colorectal cancer.