腺病毒载体介导gfp基因在树突细胞的转导及其影响因素的分析

目的：研究腺病毒载体介导外源基因在人树突细胞转染的有效方法。方法：绿色荧光蛋白（gfp）报告基因重组腺病毒的构建采用直接连接法。人树突细胞的制备通过分离人外周血单核细胞，然后在体外经过诱导过程再生。结果：经腺病毒介导实现了gfp基因在树突细胞的转导和表达。病毒滴度对转导效率影响较大，只有使用高滴度（MOI〉100）的重组腺病毒才能获得较高的转导效率（40％以上）；脂质体和多聚赖氨酸可以明显提高转导效率（提高50％左右）。转导效率最高可达65％左右。结论：由腺病毒介导进行树突细胞的转基因需要较高的病毒滴度；脂质体和多聚赖氨酸可以提高基因的转导效率。     

T细胞受体基因转导的研究和应用

T细胞受体（TCR）作为T细胞识别抗原的分子,在免疫应答和免疫调节中发挥重要的作用。利用转基因技术,将识别特定抗原的TCR基因转导到正常T细胞中,使其强制性表达了识别特异抗原TCR,从而达到发挥特异性免疫效应的目的,为产生有效的特异性免疫治疗开辟了一条新途径。     

提高逆转录病毒介导的基因转导效率的研究

在基因治疗研究中，８０％左右采用逆转录病毒作为基因载体，由于逆转录病毒整合至靶细胞具有选择性，所以如何提高其转导效率便成为许多研究者关注的焦点，并从转导技术方面作了不少探讨。本文报告在进行细胞内免疫抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因治疗研究中，应用４种不同转导条件，对基因转导效率进行比较的结果，以探讨既有实用价值，又能获得满意的转导效率的方法。１　材料和方法１－１　细胞培养　２株含抗ＨＢＶ核心抗原单链抗体基因（ＨＢｃＳＦＶ）的包装细胞系ｐＡ３１７，ＮＩＨ３Ｔ３和人肝癌细胞系Ｈｅｐ３Ｂ，均培养于含１０％…     

代谢型谷氨酸受体的分子构造与转导机制

谷氨酸（Glu），作为中枢神经兴奋性突触的化学信使，除激动NMDA、AMPA和KA等离子型谷氨酸受体、中介快速兴奋性突触反应外”‘，还类似GA－M，5－HT和ACh，激动与G一蛋白耦联的代谢型谷氨酸受体（mGluR），调节快速兴奋性突触传递，参与神经元发育、死亡、突触可塑性等许多功能D’。由于分子生物学技术的发展以及一系列特异性试剂的发现，已克隆出8种编码mGluR的基因（Schoepp，。tal．1993）；表达研究还证实与PLC耦联和对L－AP。敏感的mGluR以及与AC负耦联的mGIuR的存在。首先克隆出来的是mGIuRI。［‘’，随即利用mGI…     

细菌毒素的受体和信号核转导

已知内毒素脂多糖（ＬＰＳ）与细胞膜相互作用的信号转导中有５个受体蛋白和３种可溶性蛋白起作用。哺乳动物细胞存在２种ＣＤ１４,即膜ＣＤ１４（ｍＣＤ１４）和可溶性ＣＤ１４（ｓＣＤ１４）。在单核巨噬细胞和中性粒细胞等髓样细胞表达的为ｍＣＤ１４,即ＧＰＩ－ＣＤ１４,连接于细胞外侧膜。血管内皮细胞和上皮细胞等非髓样细胞不表达ＣＤ１４。ＬＰＳ诱导的细胞活化需要血清中ｓＣＤ１４的参与,其Ｃ端缺乏ＧＰＩ尾。研究发现一种能与ＬＰＳ类脂体Ａ结合的６０ｋＤ糖蛋白ＬＢＰ,有结合区和调节区。ｍＣＤ１４作为ＬＰＳ的受体有３…     

病毒与非病毒介导的绿色荧光蛋白基因转导的比较研究

自 1992年绿色荧光蛋白 (ＧＦＰ)基因的ｃＤＮＡ被成功克隆以来 ,由于ＧＦＰ结构稳定、在受到蓝光或紫外光照射时可自发发出绿色荧光 ,而这一过程不需要其他共刺激因子、底物或其他基因产物的协助 ,故在生物医学领域的应用日益广泛[1,2 ] 。因此 ,深入研究各种基因转导方法在ＧＦＰ基因转导方面的效率及优缺点、分析ＧＦＰ对细胞生长速度和生物学行为的影响等 ,对于合理应用ＧＦＰ十分重要。一、材料与方法1 重组质粒 :ＧＦＰ真核表达质粒ｐＥＧＦＰ Ｎ1购自Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司。ＧＦＰ重组逆转录病毒质粒ｐＬＮＣＸ ＥＧＦＰ是我们自己构…     

PrPC介导的细胞信号转导

朊病毒病的发生是由于细胞正常朊蛋白PrPC转变成了异常构象的PrPSc形式.PrPC 的生理学功能目前尚不完全明确,可能与铜离子代谢、脂质摄取以及细胞信号传递有关.PrPC可以与小窝蛋白相互作用而活化Fyn非受体酪氨酸激酶从而引起下游信号通路的转导;可以作为受体与PrPC键合多肽结合后激活cAMP/PKA信号通路;以及引起细胞内钙离子浓度变化而活化信号通路.     

Fas基因转导逆转胃癌耐药细胞的作用及其机制分析

目的　 观察Fas基因转导人胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR对化疗药物的敏感性 ,并初步探讨其机制。方法　 以流式细胞仪检测Fas基因转导和对照胃癌细胞在细胞周期中的分布 ;用MTT实验检查癌细胞对多种药物的敏感性 ;用免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞P 糖蛋白 (P gp)和拓扑异构酶II(TopoII)的表达。结果　与胃癌细胞SGC790 1和pBK SGC790 1/VCR相比较 ,Fas SGC790 1/VCR在G2期减少 ,S期增多 ,并出现明显的凋亡峰 ;Fas SGC790 1/VCR对DDP ,MMC和 5 Fu的敏感性增加 ,但对VCR和DOX的敏感性无明显变化 ;SGC790 1,pBK SGC790 1/VCR和Fas SGC790 1/VCRTopoII的表达无明显差别 ;Fas SGC790 1/VCRP gp的表达水平明显低于 pBK SGC790 1/VCR ,仅显示弱阳性。 结论　Fas基因可在一定程度上逆转人胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR的多药耐药性 (MDR) ,其涉及的相关机制可能是增强细胞对凋亡诱导剂的敏感性 ,以及降低细胞P gp的表达水平     

视黄酸核受体γ重组腺病毒构建及其鉴定

目的 构建携带大鼠视黄酸核受体γ(retinoic acid receptor γ,RARγ)的重组腺病毒,为研究RARγ在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成神经分化中的作用奠定基础.方法 体外扩增大鼠RARγ基因,将其定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrace-TOX构建重组质...     

生长因子及其受体介导的RAS信号系统研究进展

多肽类生长因于是一个大家族，其受体是位于细胞膜上的酪氨酸激酶，调控细胞的增殖分化。ｒａｓ蛋白在调控途径中起着重要作用，其上下游分子通过影响ｒａｓ－ＧＴＰ的活性而调节信号传递过程。本文综述了ｒａｓ信号系统的组成、调节机制以及与癌基因协同在肿瘤发生中的作用。     

受体介导基因转移的策略研究与进展

基因转移是基因治疗中一个关键的环节。受体介导的基因转移具有靶向、有效和安全、无毒的特点,且操作简便,因此有望成为一种理想的体内基因转移技术用于基因治疗。     

受体介导的基因转移研究进展

受体介导的基因转移具有靶向、高效、安全、低免疫原性和制备简单等许多优点。简要综述了受体介导基因转移的主要类型、影响受体介导基因转移的因素和提高基因转移效率的策略等方面的进展。     

腺相关病毒载体介导造血干/祖细胞的基因转导

造血干细胞 (HSCs)具有自我更新、分化和增殖的独特特性，并可用自体移植法移植给病人,这使其成为基因治疗中引人注目的靶点。到目前为止尚未发现腺相关病毒（AAV）载体与任何恶性疾病有明确的关系。在利用造血干细胞的基因治疗中，AAV载体受到人们的广泛关注。既往的AAV转导HSCs的研究结果不完全一致,现将该方面的研究进展作一概述。     

介导RA538与反义c-myc腺病毒对肿瘤细胞的作用及其分子机理

目的　比较全反式维甲酸诱导基因 RA5 38及反义 c- myc对人胃癌细胞的生物学特性 ,并探讨其作用的分子机理。方法　采用细胞生长曲线、DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪、逆转录 -聚合酶链反应、蛋白质印迹分析、裸鼠致瘤性、裸鼠皮下移植瘤模型实验等方法 ,对 RA5 38、反义 c- myc重组腺病毒在人胃癌细胞系 (SGC790 1)中的生物学作用及其分子机理进行体内外研究。结果　 RA5 38及反义 c- myc重组体腺病毒 (Ad- RA5 38及 Ad- ASc- myc)对 SGC790 1细胞生长抑制率分别为 76 .3%和 44 .1%。 DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪显示 Ad- RA5 38及 Ad- ASc- myc诱导 SGC790 1细胞凋亡。它们均能抑制SGC790 1细胞 c- myc、bcl- 2、cyclin D1基因表达 ,并刺激 bax基因表达 ,对 p5 3、p16、TGase、ras基因的表达没有影响。经 Ad- RA5 38及 Ad- ASc- myc处理的 SGC790 1细胞致瘤性消失。Ad- RA5 38及 Ad- ASc- myc对裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射能有效降低肿瘤的生长速度 ,生长抑制率分别为 6 0 .7%和 6 8.9%。结论　 Ad-RA5 38、Ad- ASc- myc对胃癌细胞具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用。其作用是 c- myc、bcl- 2、bax、cyclin D1等一系列基因表达变化及其相互作用的结果 ,与 p5 3、p16、TGa     

腺病毒介导的T-bet基因转染诱导Th1型淋巴细胞分化

目的：构建含有T细胞转录因子T-bet(T-box expressed in T cells)的重组腺病毒Ad.T-bet，并诱导Th1型淋巴细胞分化。 方法： 采用RT-PCR的方法从健康人外周血淋巴细胞的总RNA中克隆T-bet基因，亚克隆入腺病毒穿梭载体成为pAdtrack-CMV.T-bet，与腺病毒基因组载体pAdeasy-1同源重组为pAd.T-bet，经Pac I酶切后转染293细胞，用 Western blotting 和RT-PCR的方法鉴定Ad.T-bet；联合腺病毒和脂质体以感染倍数(m.o.i) 5000感染活化的淋巴细胞，用ELISA 法检测培养液中IFN-γ含量。 结果： 采用RT-PCR方法从健康人外周血淋巴细胞中扩增出T-bet基因，构建出重组腺病毒Ad.T-bet，Western blotting 和RT-PCR均检测出细胞内T-bet蛋白表达；联合Ad.T-bet和脂质体感染淋巴细胞诱导Th1型细胞因子IFN-γ持续高表达。 结论： 重组腺病毒Ad.T-bet有效诱导Th1型细胞分化，有望成为改变肿瘤患者免疫抑制状态的有效方法。     

死亡分子受体介导凋亡信号的研究进展

死亡分子受体与死亡分子相互作用引发的细胞凋亡倍受人们关注。Fas、TNFR、DR3/Wsl-1和CAR 4个死亡分子受体已被确定,它们参与免疫调节、CTL杀伤活性、肿瘤消退、移植排斥反应等并发挥着重要的生物学作用。     

树突状细胞的抗原基因转导及其抗肿瘤免疫作用的研究

目的制备整合素靶向性腺病毒载体RGD-Adv,向树突状细胞（DCs）转导抗原基因,并研究表达特异性抗原DCs的免疫学特点和抗肿瘤效果。方法使用体外连接法构建RGD-Ad,并以流式细胞技术检测其基因转导效率,通过抗原呈递试验、CTL效应试验和小鼠体内抗肿瘤试验考察表达特异性抗原DCs诱导产生CTL效应和在体抗肿瘤作用情况。结果RGD-Adv可安全高效转导DCs,且为病毒载体剂量依赖性;表达特异性抗原DCs能有效诱导抗原特异性CTL效应,并具有显著抗肿瘤效果。结论RGD-Adv是一种理想的载体系统,通过使DCs表达特异性抗原,诱导机体特异性免疫机制,产生抗肿瘤效果,是一种极具前景的肿瘤免疫治疗方法。     

重组腺病毒介导的BCL-Xl基因过表达治疗急性肝衰竭大鼠的研究

目的 明确肝细胞凋亡与急性大鼠肝衰竭模型肝组织损伤程度的关系;明确BCL-Xl过表达对急性肝衰竭大鼠肝脏的治疗保护作用.方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、处理组三组.正常对照组及模型组给予门静脉注射生理盐水,处理组予门静脉注射重组BCL-Xl腺病毒.预处理7 d后模型组及处理组予D-氨基半乳糖+脂多糖建立肝衰竭模型,观察各组大鼠的BCL-Xl蛋白的表达、ALT、AST水平、肝细胞凋亡率及死亡率.结果 BCL-Xl基因在处理组的表达高于在模型组中的表达;建立大鼠肝衰竭后6 h,处理组的血清ALT、AsT水平低于模型组(P<0.05).处理组的肝细胞凋亡率低于模型组(P<0.05).处理组的大鼠死亡率低于模型组(P<0.05).结论 在急性肝衰竭大鼠中,肝细胞的凋亡率与大鼠的死亡率呈正相关;BCL-Xl在肝组织中的过表达能减少急性肝衰竭模型大鼠的肝细胞凋亡率,降低急性肝衰竭大鼠的死亡率.     

腺病毒介导STAT-3基因感染ARIP细胞表达的研究

信号转导和转录活化蛋白(STAT)家族有7个成员：STAT-1、2、3、4、6及STAT-5a和STAT-5b。有报道STAT-3在早期胚胎发育中扮演抑制分化的独特角色。是否可以通过先解除干细胞分化的抑制状态，然后再施加特定影响因素，以促进干细胞定向分化的易于完成?为此用我们制造的含STAT-3与腺病毒基因的野生型(Wild type，WT)、     

重组腺病毒介导的BCL-Xl基因过表达治疗急性肝衰竭大鼠的研究

目的 明确肝细胞凋亡与急性大鼠肝衰竭模型肝组织损伤程度的关系;明确BCL-Xl过表达对急性肝衰竭大鼠肝脏的治疗保护作用.方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、处理组三组.正常对照组及模型组给予门静脉注射生理盐水,处理组予门静脉注射重组BCL-Xl腺病毒.预处理7 d后模型组及处理组予D-氨基半乳糖+脂多糖建立肝衰竭模型,观察各组大鼠的BCL-Xl蛋白的表达、ALT、AST水平、肝细胞凋亡率及死亡率.结果 BCL-Xl基因在处理组的表达高于在模型组中的表达;建立大鼠肝衰竭后6 h,处理组的血清ALT、AsT水平低于模型组(P<0.05).处理组的肝细胞凋亡率低于模型组(P<0.05).处理组的大鼠死亡率低于模型组(P<0.05).结论 在急性肝衰竭大鼠中,肝细胞的凋亡率与大鼠的死亡率呈正相关;BCL-Xl在肝组织中的过表达能减少急性肝衰竭模型大鼠的肝细胞凋亡率,降低急性肝衰竭大鼠的死亡率.