枸杞多糖对树突状细胞的成熟及免疫学功能的影响

目的:研究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)的成熟和免疫学功能的影响。方法:运用体外大量扩增培养小鼠骨髓来源的DC的技术,在DC的分化,成熟、活化这一系列过程中加入枸杞多糖观察其影响。在BMDC体外培养时加入低、中、高3种浓度(5,10,20 mg/L)的LBP进行干预,同时设生理盐水对照组,培养至第6天,以流式细胞仪(flow cytometer,FCM)分析各组细胞的免疫表型及T细胞的增殖情况;用Western-Blot方法测定其分泌的白介素-12P40(interleukin-12P40,IL-12P40)水平;MTT法检测体外经冻融的H22肝癌细胞冲击后的DC刺激同种反应性T细胞的杀伤活性。结果:体外加入LBP培养后,DC表达高水平共刺激分子CD86和CD11a(加药组与NS组对比,差别有统计学意义,P0.05);其分泌的IL-12P40水平升高;DC刺激同种反应性T细胞的杀伤活性增加,其中以10 mg/L LBP培养时上述指标增加最为明显,与其他组对比,差别有统计学意义(P0.05);而以LBP 5 mg/L,20 mg/L培养时,共刺激分子CD86和CD11a以及IL-12P40并没有高表达(加药组与NS组对比,差别无统计学意义,P0.05)。DC刺激同种反应性T细胞的杀伤活性也没有变化(加药组与NS组对比,差别无统计学意义,P0.05)。结论:LBP能够促进体外培养的DC的分化、成熟,提高其表面表达CD86(B7-2)以及CD11a(LFA-1)的水平;能够促进DC分泌IL-12P40;提高CTL的特异性杀伤能力,并且这种作用有其最佳剂量。     

致敏树突状细胞抗乳腺癌作用的实验研究

目的 探讨负载肿瘤抗原DC诱导的CTLs对乳腺癌细胞的杀伤作用.方法 以负载肿瘤细胞抗原的DCs体外诱导CTLs,用ELISA法检测IFN-γ和IL-12的表达水平,用LDH法检测CTL对乳腺癌细胞的杀伤作用.结果 负载肿瘤抗原DC组IFN-γ和IL-12的浓度高于未致敏DC组、抗原组及单核细胞对照组(P＜0.05),且负载抗原DC组所刺激的CTLs的杀伤作用也强于未致敏DC组、抗原组及单个核细胞组(P＜0.01)及对照的HT-29组(P＜0.01).结论 采用乳腺癌细胞冻融抗原体外致敏DC,诱导产生肿瘤抗原特异性CTLs具有显著的抑瘤效应,实验证明致敏DC治疗乳腺癌是一种有效的方法 ,有望成为乳腺癌免疫治疗的新疗法.     

补骨脂二氢黄酮甲醚调控Gamma delta T细胞消减胃癌SGC-7901研究

目的：探讨补骨脂二氢黄酮甲醚调控γδT细胞消减胃癌SGC-7901程度。方法：获取人外周血中单个核细胞,体外扩增γδT细胞,不同浓度BVC诱导γδT细胞、SGC-7901细胞24 h、48 h和72 h,CCK-8检测BVC对γδT细胞增殖率、SGC-7901抑制率影响;流式细胞术测γδT细胞GZMB、PF、CD107a产生量;LDH法测γδT细胞消减SGC-7901程度。结果：体外扩增8 d,γδT细胞比例由3.54%增至85.34%。与对照组比较,BVC诱导24 h,浓度10～80 nmol/L促进γδT细胞增殖（P<0.05）。BVC诱导48 h、72 h,浓度5～80 nmol/L促进γδT细胞增殖（P<0.05）。同样浓度,72 h γδT细胞增殖率最大。BVC作用肿瘤细胞24 h、48 h、72 h,浓度160～640 nmol/L SGC-7901生长抑制率高于对照组（P<0.05）,浓度10～40 nmol/L,GZMB、PF、CD107a表达高于对照组（P<0.05）。BVC诱导γδT细胞72 h,一定浓度该T细胞消减SGC-7901程度随浓度增高而增高,浓度40 nmol/L消减程度最大,后呈下降趋势。结论：BVC适宜浓度促进γδT细胞增殖,抑制SGC-7901生长,加强γδT细胞消减SGC-7901程度,机制考虑：PF、GZMB、CD107a表达提高增强γδT细胞消减能力。     

中药多糖与过继免疫联合治疗卵巢癌

目的:观察比较中药多糖干预后的多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞在不同条件下特异性杀伤卵巢癌SKOV3细胞的效果,探讨中药与过继免疫联合治疗卵巢癌的可行性。方法:实验分4组,CIK组、PBOC-CIK组、SKOV3Ag-PBDC-CIK组及SKOV3Ag-ADC-CIK组。联合猪苓多糖(100 mg.L-1)、茯苓多糖(100 mg.L-1)、黄芪多糖(100 mg.L-1)及多种细胞因子对卵巢癌患者外周血CIK细胞进行体外诱导和扩增,以卵巢癌细胞株SKOV3冻融抗原致敏外周血与腹水来源的DC细胞,比较单纯CIK、未经抗原负载的外周血树突状细胞(DC)活化的CIK、经抗原负载的外周血DC活化的CIK、经抗原负载的腹水DC活化的CIK对SKOV3细胞的杀伤作用,并动态观察CIK细胞的增殖情况。结果:①CIK与DC共培养可显著增加CIK增殖倍数(P<0.01);②中药多糖干预后CIK对SKOV3卵巢癌细胞株有明显杀伤作用,且杀伤率随效靶比增加而提高,细胞杀伤率分别为(9.12±0.21)%,(10.15±0.27)%,(11.20±0.34)%和(12.73±0.43)%(P<0.05);③SKVO3冻融抗原负载的外周血DC可显著增加CIK特异性杀伤卵巢癌SKOV3细胞的能力,杀伤率显著高于未负载抗原外周血DC活化的CIK细胞和单纯CIK细胞(P<0.05或P<0.01);④腹水来源DC负载抗原后所活化的CIK细胞对SKOV3细胞杀伤率,与负载抗原的外周血来源DC活化的CIK无明显差异。结论:经SKOV3肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏的DC,可促进中药多糖干预后CIK细胞扩增,增强CIK细胞对SKOV3卵巢癌细胞的杀伤作用,且卵巢癌腹水可作为过继免疫治疗中效应细胞的一个重要来源。     

枸杞多糖对人树突状细胞成熟的影响

目的：研究枸杞多糖对人树突状细胞（DC）表面标志及功能成熟的影响。方法：通过密度离心法分离人外周血单核细胞,采用细胞因子体外培养7d后,实验组加入枸杞多糖（100ug／m1）,空白对照组加等量RPMI1640,两组分别同时作用48h,观察细胞的形态变化及用免疫细胞化学法检测其表面标志的表达。通过混合淋巴细胞反应检测细胞提呈抗原的能力。结果：用枸杞多糖刺激的人DC表达MHC-Ⅱ、CD83、CD86和促进T细胞的增殖的能力比空白对照组增加。结论：枸杞多糖可以促进体外培养的人DC的成熟,促进DC诱导的免疫应答启动。     

姬松茸多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞抗肿瘤作用的影响

目的:研究姬松茸多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞抗肿瘤功能的影响,为临床应用提供理论依据。方法:体外培养小鼠骨髓来源DC,加入ABP溶液,流式细胞仪检测DC表面CD86和CD11a的表达,混合淋巴细胞反应检测ABP对DC抗原提呈能力的影响,MTT法检测ABP对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对H22肝癌细胞杀伤功能的影响。结果:中剂量ABP组(100μg/mL)DC表面CD86、CD11a表达上调;CTL对肿瘤细胞的杀伤率升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:适当浓度的ABP能促进DC分化成熟,增强DC的抗肿瘤作用。     

黄芪提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制研究

目的:研究黄芪提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度的黄芪提取物干预人胃癌SGC-7901细胞。MTT比色法观察黄芪提取物对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位;分光光度法检测细胞Caspase-3和Caspase-9活性;电泳法检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:黄芪提取物(25、50、100 mg/L)以剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖,诱导其凋亡,并且降低线粒体膜电位;增加Caspase-3和Caspase-9活性,上调Bax蛋白表达的同时下调Bcl-2蛋白表达。结论:黄芪提取物可抑制人胃癌SGC-7901细胞体外增殖且通过线粒体途径诱导其凋亡。     

大剂量黄芪对急性白血病患儿外周血树突状细胞的诱导和抗原呈递功能的影响

目的观察大剂量黄芪对急性白血病患儿外周血单核细胞体外诱导扩增为树突状细胞（DC）及对DC抗原呈递功能的影响。方法44例急性白血病完全缓解期患儿分为黄芪组与对照组,黄芪组20例,对照组24例。黄芪组于常规化疗同时应用大剂量黄芪（90g／d）1个月,对照组仅常规化疗。提取两组外周血单个核细胞（MNC）,贴壁获得单核细胞,加入白细胞介素-4（IL-4）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、肿瘤坏死因子（TNF-α）等细胞因子培养7～8天,利用流式细胞仪进行DC的表型鉴定,用混合淋巴细胞反应鉴定DC的抗原呈递能力。结果黄芪组与对照组从外周血单核细胞诱导生成的DC形态学差异无显著性;黄芪组DC的细胞数量平均为4．4×10^6／2．5×10^6MNC,对照组DC的数量平均为2．6×10^6／2．5×10^6MNC,两组比较差异有显著性（P〈0．001）;黄芪组DC可较强地刺激同种异体淋巴细胞增殖,与对照组比较差异有显著性（P〈0．001）。结论大剂量黄芪可提高急性白血病患者外周血单核细胞诱导生成DC的数量并增强DC的抗原呈递功能。     

黄芪多糖体外对非接触共培养HUVECs细胞诱导SGC7901细胞转移的影响

目的探索黄芪多糖体外对人血管内皮细胞HUVECs诱导的胃癌细胞系SGC7901细胞EMT转化及其转移的影响。方法 MTT检测黄芪多糖对HUVECs、SGC7901细胞增殖抑制的影响。建立Transwell细胞共培养系统,并分为SGC7901组(单独培养SGC7901细胞)、HUVECs/SGC7901组(共培养HUVECs/SGC7901细胞)、黄芪多糖组(黄芪多糖干预共培养HUVECs/SGC7901细胞),Transwell实验检测各组SGC7901细胞侵袭能力,qRT-PCR检测各组细胞E-cadherin、Vimentin mRNA表达,免疫荧光检测各组细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达,Western blot检测各组细胞LOX、Snail1蛋白表达。结果与单独培养的SGC7901细胞相比,共培养的SGC7901细胞侵袭能力,MMP-2、MMP-9、LOX、Snail1蛋白及Vimentin mRNA表达均升高(P<0. 01),E-Cadherin mRNA表达下降(P<0. 05)。经黄芪多糖干预后,共培养的SGC7901细胞侵袭能力、MMP-2、MMP-9、LOX、Snail1蛋白及Vimentin mRNA表达下降(P<0. 01),ECadherin mRNA表达升高(P<0. 05)。结论与HUVECs细胞共培养可激活SGC7901细胞EMT转化,促进SGC7901细胞转移,但黄芪多糖可通过抑制EMT转化阻止非接触共培养人血管内皮细胞诱导的SGC7901转移。     

黄芪甲苷联合树突状细胞瘤苗抗胃癌免疫的体外实验研究

目的 通过体外实验观察中药单体黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AⅣ)联合树突状细胞(DC)瘤苗对机体免疫功能的调节作用.方法 外周血单个核细胞体外诱导、培养,负载胃痛SGC7901冻融抗原.制备DC瘤苗,分别观察AⅣ联合DC瘤苗、DC瘤苗、AⅣ淋巴细胞增殖情况及其激活的效应细胞在体外杀伤胃癌细胞的活性.结果 ...     

启膈散对食管癌EC9706细胞株抑制树突状细胞成熟的影响

目的观察启膈散对食管癌细胞干预树突状细胞成熟的影响。方法制备条件培养基,用Fieoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,体外诱导培养树突状细胞(Dendritic Cells,DCs),流式细胞术检测DCs表面标志物,MTT法检测淋巴细胞细胞增殖;LDH释放法检测细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)杀伤力;ELISA检测细胞因子分泌,Western blot检测STAT3蛋白表达。结果食管癌EC9706细胞条件培养基可以减少外周血单核细胞诱导的树突状细胞表达CD80、CD86、CD1a,抑制DCs刺激淋巴细胞增殖和减弱CTL的杀伤力,减少IL~(-1)2分泌,增加STAT3蛋白表达和磷酸化;与肿瘤条件培养基相比,启膈散条件培养基组DCs CD80、CD86、CD1a增加,淋巴细胞的增殖能力、CTL杀伤作用增强,IL~(-1)2分泌增加,STAT3蛋白表达和磷酸化减少。结论启膈散可以通过STAT3信号通路减弱食管癌细胞上清对树突状细胞成熟的影响。     

中药联合树突状细胞激发T细胞杀伤力的实验观察

目的观察研究体外培养诱导树突状细胞(DC)激发正常人及患者自体T细胞后T细胞对K562细胞的杀伤作用。方法用清毒饮、养正片灌胃动物(新西兰兔)制备中药含药血清备用。在签署知情同意书后,取急性髓系白血病缓解期患者骨髓,经抗凝后,应用羊红细胞玫瑰花结程序从骨髓中分离出T细胞的骨髓单个核细胞(TD-BMNC),以中药含药血清与细胞因子联合培养,诱导含药血清对TD-BMNC来源的DC分化成熟,用此法诱导分化的DC与纯化的正常人或缓解期患者外周血T细胞共同培养,观察对T细胞增殖能力的影响。用激发的T细胞与K562细胞共同培育,以MTT法测定该T细胞对K562细胞的杀伤活性。结果各中药组与对照组相比,自体及异体T细胞清毒饮合养正片低剂量组均高于单纯细胞因子组,有统计学意义。结论清毒饮合养正片联合细胞因子诱导的DC可以激发T细胞产生更强的杀伤力。     

黄芪多糖诱导淋巴细胞增殖及肿瘤细胞杀伤作用的研究

目的:探索注射用黄芪多糖促进人淋巴细胞体外增殖及对于人未分化胃癌细胞HGC-27体外杀伤作用。方法:取正常健康人全血10ml,分离获得原代人淋巴细胞并进行体外培养。利用不同浓度的黄芪多糖进行干预,CCK-8法检测细胞增殖、Elisa法检测IFN-γ的表达。以人未分化胃癌细胞HGC-27为靶细胞进行体外杀伤实验,CCK-8检测肿瘤细胞存活率。结果:黄芪多糖对人淋巴细胞体外有增殖有一定的促进作用,体外有明显的肿瘤细胞杀伤作用,相关的肿瘤细胞杀伤作用可能与促进IFN-γ的分泌有关。结论:黄芪多糖可以增强人免疫系统功能,且可以促进淋巴细胞的增殖,IFN-γ的分泌。这些功能可能是肿瘤细胞毒性的药理基础。     

HepG2肝癌细胞外泌体对人树突状细胞成熟与功能的影响

目的:观察HepG2肝癌细胞外泌体对人树突状细胞(Dendritic cells,DC)成熟和功能的影响。方法:采用透射电镜、Nano FCM和Western Blot鉴定和测定外泌体的形态、粒径分布及特征性蛋白的表达,用细胞因子GM-CSF(20 ng/ml)、IL-4(10 ng/ml)、IFN-β(105U/ml)和LPS(10 ng/ml)诱导刺激DC成熟,用流式细胞术检测DC成熟相关表面分子CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达,ELISA检测培养上清液中细胞因子IL-12的水平,CCK-8法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结果:HepG2、MIHA来源外泌体表达CD63、Alix,同时不表达细胞色素C(Cytochrome C);在HepG2肝癌细胞外泌体刺激下,DC的CD80、CD83阳性表达率较仅加入LPS的对照组明显降低(P<0.05),而CD86、HLA-DR表达较对照组无明显差异;ELISA测定结果显示,200μg/ml HepG2 EXO干预后的DC较对照组分泌IL-12的量明显减少(P<0.05);CCK-8检测显示,200μg/ml HepG2EXO干预的DC较对照组刺激异体淋巴细胞增殖的能力明显降低(P<0.05)。结论:HepG2肝癌细胞外泌体对DC表面成熟相关分子表达、细胞因子的分泌、刺激异体T淋巴细胞增殖的能力均有一定的抑制作用。     

香菇多糖增强树突状细胞瘤苗的抗肿瘤作用及其机制研究

目的 进一步提高树突状细胞（DC）瘤苗的抗肿瘤作用,探索有效的抗肿瘤生物疗法。方法 以腺病毒为载体介导黑色素瘤抗原（gp100）转染至DC制备成DC瘤苗,研究不同剂量香菇多糖（lentinan,LNT）单独或联合gp100-DC瘤苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用及其相关机制。结果 LNT联合gp100-DC瘤苗能有效抑制恶性黑色素瘤生长,无瘤生存率达到66．7％。LNT联合gP100-DC瘤苗治疗后,能显著增强荷瘤小鼠的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和自然杀伤（NK）细胞活性,提高脾细胞的干扰素-γ（IFN-γ）和IL-2分泌水平,组织学检查发现瘤体及瘤周有大量炎性细胞浸润,肿瘤细胞发生明显坏死。结论 LNT联合gp100-DC瘤苗能有效地增强DC瘤苗的抗肿瘤免疫反应。     

姬松茸菌孢多糖对SGC-7901胃癌细胞增殖影响的实验研究

目的:研究姬松茸菌孢多糖体外对SGC-7901胃癌细胞恶性增殖的影响.方法:采用集落形成法、MTT比色法、生长曲线法.结果:与对照组相比,各剂量姬松茸菌孢多糖对SGC-7901细胞成集落数均有抑制作用(P<0.01),其IC50是31.25mg/mL,且随剂量增加其抑制作用增强,呈剂量-效应关系;与对照组相比较,姬松茸菌孢多糖各剂量对SGC-7901细胞增殖均有抑制作用(P<0.01),当其为31.25μg/μL时其细胞存活率为51%,有剂量-效应关系;生长曲线显示,对照组SGC-7901细胞在接种后第二天开始快速生长,第三天细胞数量已高于药物组(P<0.05),而姬松茸菌孢多糖处理的SGC-7901细胞从第一天起生长即受到不同程度抑制,且随剂量和时间的增加,抑制作用越明显.结论:姬松茸菌孢多糖在体外能抑制SGC-7901胃癌细胞增殖.     

复方扶正中药含药血清对急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞来源树突状细胞影响

目的:研究复方扶正中药对急性髓细胞白血病完全缓解期(AML-CR)患者骨髓单个核细胞(BMNC)来源树突状细胞(DC)的影响。方法:分离培养AML-CR患者的BMNC,用不同浓度复方扶正中药含药血清与之进行体外培养,倒置显微镜下观察诱导转化的DC形态学特征,流式细胞术检测DC表面分子CD86、CD-1a、HLA-DR的表达。以诱导转化的DC分别与异体T细胞、自体T细胞共同培养,以激发T细胞,MTT法检测激发后的T细胞在不同效靶比时对人白血病细胞株K562的杀伤作用。结果:复方扶正中药含药血清与AML-CR患者BMNC培养能促进BMNC分化为形态特征典型的DC,高表达成熟DC的特异性标记(CD86、CD-1a和HLA-DR),并激发T细胞杀伤K562细胞。结论:复方扶正中药对AML-CR患者BMNC来源DC具有明显的促进作用。     

砂生槐种子生物碱诱导SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的:研究砂生槐生物碱对SGC-7901细胞系的增殖抑制和凋亡诱导作用.方法:MTT比色法检测生物碱对SGC-7901胃癌细胞增殖的抑制作用;荧光显微镜观察细胞的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡过程中DNA碎片的形成;流式细胞仪分析并测定细胞凋亡率.结果:砂生槐生物碱在0.6～4.8mg·mL.的范围内对SGC-7901胃癌细胞的增殖有明显抑制作用,与SGC-7901细胞株共培养24h后,观察到典型的细胞凋亡形态学特征,DNA凝胶电泳呈现梯形条带,流式细胞仪检测形成一个DNA含量＜2n的分布区,即"亚G1峰".结论:砂生槐生物碱在体外明显抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖,诱导SGC-7901细胞系凋亡的作用,并呈浓度、时间的依赖关系.     

榄香烯对人胃癌细胞SGC-7901的体外生长及CD_（44v6）、CD_（44）的影响

目的：探讨榄香烯对人胃癌细胞株SGC-7901体外生长及细胞黏附分子CD44v6、CD44的影响。方法：Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测榄香烯对SGC-7901细胞增殖的影响;采用DAPI荧光染色法进行细胞核形态学分析;流式细胞仪检测细胞膜表面CD44v6、CD44表达。结果：榄香烯抑制SGC–7901细胞增殖,其呈量效和时效关系;DAPI染色显示榄香烯诱导SGC-7901细胞凋亡并显示特征性的凋亡细胞核形态;流式细胞仪检测结果显示榄香烯20、30、40μg/mL组与对照组相比,SGC-7901细胞膜表面CD44v6表达明显减少（P〈0.01）,CD44表达的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：榄香烯能抑制SGC-7901细胞增殖、诱导细胞凋亡,其抗肿瘤转移的机制可能与下调CD44v6表达相关。     

当归多糖对树突状细胞成熟和功能的影响

目的:探讨当归多糖对外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)体外分化、成熟和功能的影响。方法:以外周血单个核细胞为来源,联合应用 GM-CSF、IL-4及 TNF-α,在体外诱导培养 DC。采用 MTT 法测定 DC 诱导的混合淋巴细胞反应分析 APS-3对 DC 刺激淋巴细胞增殖功能的影响;采用流式细胞术检测细胞表面标志 CD1a,HLA-DR,CD86的表达,来评价 APS-3对 DC 分化的作用;RT-PCR 技术研究 DC IL-12p40mRNA 的表达,探讨 APS-3对 DC 分泌 Th1型细胞因子 IL-12的影响。结果:人 PBMC 在体外可诱导培养出具有典型形态、表型及免疫活性的 DC。采用不同浓度APS-3(0.1、0.3、1.0μg/mL)处理培养的 DC 表面标志 CD1a、CD86、HLA-DR 及 IL-12mRNA 表达量均呈上升趋势。经不同浓度 APS-3处理的 DC 诱导的 MLR,在小剂量范围(0.01-1μg/mL)是剂量依赖性的增强作用,在高剂量范围(30-100μg/mL)表现为抑制效应;常规培养8天生成的 DC 与淋巴细胞共培养后,加入不同浓度 APS...