三氧化矿物凝聚体对人乳牙牙髓细胞增殖和分化影响的实验研究

目的 对比三氧化矿物凝聚体(mineral trioxide aggregate,MTA)和氢氧化钙对人乳牙牙髓细胞增殖和分化的影响,为MTA应用于乳牙活髓保存治疗提供实验依据.方法 培养原代人乳牙牙髓细胞,采用噻唑蓝比色法检测乳牙牙髓细胞生长增殖的变化;von Kossa染色观察牙髓细胞钙结节形成情况,并计数分析;使用实时荧光定量聚合酶链反应法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因的表达.结果 氢氧化钙组牙髓细胞增殖率显著低于对照组和MTA组(F=1792.301,P<0.01),最大增殖率为89.7%;MTA组牙髓细胞增殖率显著高于氢氧化钙组和对照组(F=1835.065,P<0.01),最大增殖率为118.4%.氢氧化钙组和MTA组牙髓细胞von Kossa染色均呈阳性,两组间钙结节计数分析差异无统计学意义(P>0.05).三组间ALP基因表达量差异有统计学意义(F=349.651,P<0.01),氢氧化钙组显著低于对照组和MTA组,MTA组显著高于氢氧化钙组和对照组;三组间DSPP基因表达量差异也有统计学意义(F=1653.001,P<0.01),氢氧化钙组显著低于对照组和MTA组,MTA组显著高于氢氧化钙组和对照组.结论 从促进乳牙牙髓细胞的增殖和分化来看,MTA比氢氧化钙更适合作为乳牙的盖髓剂.     

RANKL在人乳牙根生理性吸收过程中的表达

目的:探讨核因子κB受体活化剂配体RANKL在人乳牙根生理性吸收过程中的表达及作用。方法:运用免疫组织化学的方法检测人乳牙根生理性吸收过程中RANKL蛋白的表达。结果:乳牙的破牙细胞、牙髓成纤维细胞及成牙本质细胞胞浆中RANKL免疫组化染色阳性,且表达高于恒牙组,差异有统计学意义(P<0.05),乳牙牙周韧带成纤维细胞RANKL染色结果与恒牙组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:RANKL在人乳牙牙根生理性吸收过程中有表达,其可能对乳恒牙替换起到一定的促进作用。     

MTA对牙周膜干细胞RANKL/OPG表达水平的影响

目的 探讨MTA对人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法 通过酶消化法分离培养PDLSCs,依据碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性筛选最佳MTA刺激浓度,将PDLSCs分别于对照组（普通培养基）和2 mg/mL MTA条件培养液培养3 d和7 d后,蛋白免疫印迹法分别检测RANKL、OPG蛋白表达。结果 MTA刺激3 d和7 d组,OPG蛋白表达较对照组升高,RANKL蛋白表达较对照组降低。结论 MTA可通过调节RANKL/OPG系统,参与调节PDLSCs成牙/骨及破牙/骨活性。     

核因子κB受体活化剂配体对乳牙根吸收的影响

核因子κB受体活化剂配体（RANKL）是新近发现的破骨细胞活化因子，它与核因子κB受体活化剂（RANK）、骨保护素（OPG）组成一个具有调节破骨细胞增殖、分化、融合、激活和凋亡的相关细胞因子系统。与破骨细胞生物学行为相似的破牙质细胞调节乳牙根生理性吸收，表达于该过程中的RANKL对乳牙根吸收起到一定的促进作用，且对乳恒牙替换具有调控作用。本文就RANKL对乳牙根吸收所起的作用作一综述．     

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目的    研究核因子κB受体活化因子配基（RANKL）在人继承恒牙缺失滞留乳牙及乳牙根生理性吸收不同时期的表达。方法    选取2010年6-12月沈阳市口腔医院正畸科及儿童牙病科10～15岁患者因治疗需要拔除的乳牙18颗,按牙根吸收长度不同分为牙根吸收早、中、晚期（早期组、中期组、晚期组）,各6颗。同时选取无恒牙胚滞留乳牙（滞留组）和正畸拔除的正常恒牙（对照组）各6颗。采用免疫组化方法检测RANKL蛋白的表达,并测定累积光密度值。结果    牙髓成纤维细胞：对照组RANKL累积光密度值明显低于其余组（均P < 0.01）;早期组、中期组明显低于晚期组（均P < 0.01）。成牙本质细胞：对照组RANKL累积光密度值亦明显低于其余组（均P < 0.01）;早期组、中期组、晚期组三者间差异均有统计学意义（P < 0.01）。破牙细胞：对照组未见破牙细胞;早期组、中期组与晚期组比较差异有统计学意义（P < 0.01）。结论    RANKL是引起乳牙牙根缓慢吸收的因素之一。     

核因子κB受体活化剂配体对乳牙根吸收的影响

核因子κB受体活化剂配体(RANKL)是新近发现的破骨细胞活化因子,它与核因子κB受体活化剂(RANK)、骨保护素(OPG)组成一个具有调节破骨细胞增殖、分化、融合、激活和凋亡的相关细胞因子系统.与破骨细胞生物学行为相似的破牙质细胞调节乳牙根生理性吸收,表达于该过程中的RANKL对乳牙根吸收起到一定的促进作用,且对乳恒牙替换具有调控作用.本文就RANKL对乳牙根吸收所起的作用作一综述.     

破骨细胞核因子κB受体活化因子配体和骨保护素在根尖周囊肿和肉芽肿中的表达及意义

目的检测破骨细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）和骨保护素（OPG）在根尖周囊肿及根尖周肉芽肿中的表达水平,探讨RANKL和OPG在不同根尖周疾病周围骨质破坏机制中的作用。方法收集根尖周囊肿组织20例为囊肿组,根尖周肉芽肿组织20例为肉芽肿组,正常牙的牙周膜组织20例为对照组。采用免疫组织化学法检测RANKL和OPG在根尖周囊肿、根尖周肉芽肿和正常牙周膜组织中的阳性表达。结果在囊肿组、肉芽肿组、对照组中,RANKL的表达分别为75.00±7.54、68.40±6.74和29.40±2.46,OPG的表达分别为38.10±7.09、47.65±13.85和58.60±5.88,3组间的差异均有统计学意义（P<0.01）。相关性分析表明,囊肿组中RANKL与OPG呈负相关关系（r=-0.56,P=0.01）,肉芽肿组和对照组中RANKL和OPG无相关关系（P>0.05）。结论RANKL与OPG参与了根尖周病变引起的骨吸收过程。在根尖周病变中,RANKL和OPG的表达失调,RANKL增加而OPG减少,骨吸收活跃,导致溶骨性病变。根尖周囊肿的骨吸收活动较根尖周肉芽肿更活跃。     

生理性根吸收过程中乳牙牙髓干细胞通过α7nAChR调节破骨细胞分化能力的研究

目的:探讨生理性根吸收过程中乳牙牙髓干细胞(DDPSCs)通过α7亚型烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)对破骨分化能力的调节作用.方法:酶消化法和有限稀释法分离培养根吸收不同时期DDPSCs和恒牙牙髓干细胞(DPSCs).采用实时定量PCR和Western blot,检测各组细胞α7nAChR、RANKL、OPG的表达及其比值差异,以及阻断α7nAChR后RANKL、OPG的表达及其比值变化.结果:α7nAChR表达及RANKL/OPG比值在根吸收中期DDPSCs中明显升高(P＜0.05).阻断α7nAChR后,RANKL/OPG明显下降(P＜0.05).结论:在乳牙生理性根吸收过程中,α7nAChR通过上调自身表达,参与对RANKL/OPG的调节,影响DDPSCs的破骨分化能力.     

人乳恒牙牙髓组织中P2X3受体mRNA的表达研究

目的:探讨乳牙和恒牙牙髓组织中P2X3受体的差异及与炎症引发的牙齿疼痛的关系。方法:选择14个正常恒牙、10个正常乳牙及疼痛乳恒牙各12个的牙髓组织为实验对象,用基质金属蛋白酶-9(MMP-9)来显示牙髓的炎症状态;采用荧光定量PCR方法检测并比较人正常与疼痛乳恒牙牙髓组织中P2X3受体mRNA的表达水平。结果:恒牙疼痛组与正常组中P2X3受体mRNA的表达水平无明显差异(P>0.05),乳牙疼痛组中P2X3受体的表达较正常组增强(P<0.05),而乳牙正常组与疼痛组中P2X3受体的表达水平均分别高于恒牙正常组和疼痛组(P<0.05)。结论:P2X3受体可能参与乳牙牙髓炎疼痛的发生。     

EMPs对人牙髓干细胞增殖分化影响的实验研究

目的：将人牙髓干细胞（human Dental Pulp Stem Cells,hDPSCs）与釉基质蛋白（Enamel Matrix Proteins,EMPs）按一定浓度结合,测定牙本质涎磷蛋白（dentin sialoprotein,DSPP）、波形蛋白（vimentin）、碱性磷酸酶（alkaline phophatase,ALP）的表达,阐述EMPs对人牙髓干细胞增殖分化的影响.方法：分别将浓度为100 μg/mL、200μg/mL的EMPs加入培养中的人牙髓干细胞中,分别于3d、5d、7d、9d、11d对细胞进行免疫组化染色,检测细胞爬片DSPP、vimentin、ALP的表达.结果：未经EMPs诱导的人牙髓干细胞DSPP少量细胞阳性表达,vimentin表达阴性,ALP表现低活性.经200 μg/mL的EMPs诱导5d后,人牙髓干细胞DSPP、vimentin染色呈阳性表达,ALP活性明显增加.结论：EMPs对人牙髓干细胞增殖及分化具有促进作用,200 μg/mL的浓度效果最为显著.     

MTA复合纤维粘连蛋白盖髓的临床疗效评价

目的 :观察MTA复合纤维粘连蛋白作为活髓保存剂的临床疗效。方法 :选择 10 9名患者 ,分别用MTA、MTA复合纤维粘连蛋白和氢氧化钙盖髓 ,评价盖髓后 4周与 12周时的盖髓成功率。结果 :盖髓 4周时 ,MTA、MTA复合纤维粘连蛋白和氢氧化钙组的盖髓成功率的差别无统计意义 (P >0 .0 5 )。盖髓 12周时 ,3组材料的盖髓成功率的差别有统计意义 (P <0 .0 5 )。结论 :MTA复合纤维粘连蛋白的临床盖髓效果显著 ,优于氢氧化钙组     

Evaluation of two formulations containing mineral trioxide aggregate on delayed tooth replantation: relevance of RANKL/RANK/OPG system

This study aimed to evaluate the effects of White MTA (WMTA) and MTA Fillapex^® on root resorption, when used for root canal filling, in a rat model of delayed tooth replantation, with special focus on the RANKL/RANK/OPG system. Maxillary right central incisors of male rats were extracted (total N = 48), and exposed to dry environment for 30 min. The animals were allocated into four groups: (1) WMTA; (2) MTA Fillapex; (3) Calcium hydroxide; (4) Negative control. After periodontal ligament removal, root canals were filled with the corresponding material and replanted. After 10 and 60 days, qualitative and semi-quantitative histological and immunohistochemical analyses were carried out. Analysis of variance (ANOVA) with Tukey’s post hoc adjustment was used, at 10 and 60 days, to compare the experimental groups in terms of the inflammatory scores and in terms of the changes in OPG, RANK and RANKL. Both WMTA and MTA Fillapex groups displayed inflammatory and replacement resorption, with the presence of dento-alveolar ankylosis, similarly to that observed for calcium hydroxide, in either 10 or 60 days. Notably, a slight increase of the inflammatory process was observed in both MTA groups. Quantitatively, inflammation score analysis showed a significant difference between the calcium hydroxide and the control group at 10 days. On 60 days, dento-alveolar ankylosis was found significantly increased in the MTA Fillapex, in comparison to the control group (p < 0.05). For immunohistochemical analysis, the expression of both RANK and RANKL was reduced in calcium hydroxide and WMTA groups, from 10 to 60 days of evaluation, an effect that was accompanied by increased OPG immunolabelling. Otherwise, the MTA Fillapex group presented a general increase of RANKL immunopositivity, similarly to that observed in the negative control group. Our data showed that none of tested materials was able to fully prevent the root resorption, although the white MTA cement presented an outcome comparable to that seen for calcium hydroxide. MTA cements might present some advantages when considering no need of frequent changes, although the effects of MTA cements in dental avulsion still require further investigation.     

MTA用于年轻恒前牙直接盖髓术的临床效果观察

目的 观察三氧化矿物聚合体(mineral trioxide aggregate,MTA)应用于年轻恒前牙意外露髓时直接盖髓术的临床效果,分析影响疗效的因素.方法 上、下颌恒前牙意外露髓病例64例,68颗患牙,随机分为试验组和对照组,分别用MTA和氢氧化钙进行直接盖髓,术后定期复查,观察24个月,对盖髓术后活髓保存成功率进行统计学分析.结果 试验组成功率为91.4%,对照组成功率为60.6%,2组比较差异具有统计学意义(P<0.05);性别、颌位、露髓原因、穿孔部位、直径等因素对疗效无影响(P>0.05).结论 MTA是较理想的直接盖髓材料.     

The Effect of SIRT6 on the Odontoblastic Potential of Human Dental Pulp Cells

Introduction

The aim of this study was to investigate whether SIRT6 is expressed in human dental pulp as well as the effect of SIRT6 on proliferation and odontoblastic differentiation of human dental pulp cells (HDPCs).

Methods

Immunohistochemical and immunocytochemical assays were used to detect the expression of SIRT6 in human dental pulp tissue and HDPCs. To determine the effect of SIRT6 on odontoblast differentiation, HDPCs with loss (HDPCs SIRT6 knockdown) and gain (HDPCs SIRT6 overexpression) of SIRT6 function were developed, and their proliferation ability was examined. Odontogenic differentiation of HDPCs was determined by alkaline phosphatase (ALP) activity, ALP-positive cell staining, alizarin red staining, and von Kossa staining. Mineralization-related genes, including ALP, dentin sialophosphoprotein (DSPP), and dentin matrix acidic phosphoprotein 1, were determined by real-time quantitative polymerase chain reaction. Western blot analysis was performed to detect the expression of DSPP protein.

Results

SIRT6 was found in the dental pulp tissue and HDPCs. SIRT6 knockdown decreased ALP activity in HDPCs; calcium nodule formation ability; and the expression of mineralization-related genes such as ALP, DSPP, and DMP1, whereas these were increased with the overexpression of SIRT6.

Conclusions

SIRT6 is expressed in human dental pulp and participates in the odontoblast differentiation of HDPCs.     

重组人结缔组织生长因子对牙髓细胞增殖与成牙本质分化的影响

目的：研究重组人结缔组织生长因子（recombinant connective tissue growth factor, rCTGF）对牙髓细胞（human dental pulp cells,hDPCs）增殖及分化的影响。方法：利用不同浓度（0、1、10、100 ng/mL）rCTGF分别处理牙髓细胞,CCK8法检测牙髓细胞增殖情况;茜素红染色和半定量试验检测细胞矿化结节的形成变化,qRT-PCR测定成牙本质分化相关基因DMP-1、DSPP和OC的表达情况,Western 免疫印迹法测定rCTGF刺激牙髓细胞后,ERK1/2信号通路的磷酸化水平。采用SAS 9.3软件包对数据进行统计学分析。结果：高浓度的rCTGF（100 ng/mL）可以促进牙髓细胞增殖;经矿化诱导后,10 ng/mL rCTGF促进牙髓细胞矿化结节形成的效果最好,钙盐沉积量最明显（P<0.05）,成牙本质分化相关基因DMP-1、DSPP的表达显著上调（P<0.05）。Western 免疫印迹结果显示,10 ng/mL rCTGF刺激牙髓细胞后,p-ERK1/2蛋白的表达升高。结论：rCTGF可能通过激活ERK1/2信号通路,促进牙髓细胞的增殖与分化。     

MTA直接盖髓的动物实验研究

目的 比较MTA（mineraltrioxideaggregate）及氢氧化钙犬牙直接盖髓后牙髓的反应。方法 将三只健康雄性杂种犬共72颗牙齿机械开髓，然后用MTA和氩氧化钙分别盖髓。窝洞用玻璃离子水门汀充填。在5，7，9个月后。对实验牙齿进行组织切片制备，借助计算机图文处理系统对所形成的修复性牙本质宽度进行测量，对成牙本质细胞、牙髓细胞及毛细血管进行计数、分析。结果 5个月后，MTA及氢氧化钙盖髓效果相似。在7，9个月后。MTA组牙髓较氢氧化钙组可见更明显的修复性牙本质形成，更多的成牙本质细胞和牙髓细胞。结论 MTA具有临床活髓保存治疗应用价值。