链置换扩增(SDA)压电DNA传感器

目的：构建链置换扩增（SDA）压电DNA传感器，研究其响应特性，方法：（1）将SDA与压电DNA传感器结合，建SDA压电DNA传感器结合技术。（2）以结构菌IS6110片段为检测对象，研究SDA压电DNA传感器的响应特性，结果：（1）SDA压电DNA传感器的响应信号达到500Hz左右；（2）SDA压电DNA传感器出现频率下降的时间长度（响应时间）与加入的检测核酸的浓度相关；（3）不同浓度检测核酸（靶核酸）导致的频率下降绝对值差别不大。结论：SDA压电DNA传感器能直接检测基因组DNA；其响应时间与检测物（靶核酸）的加入量相关，可以用作定量依据。     

壳聚糖/明胶/TiO2三元复合膜的制备与功能特性

纳米TiO2用阴离子表面改性剂SDS改性后，以溶液共混法制备了壳聚糖／明胶/TiO2复合膜，用FTIR、XRD、SEM、TEM表征了其结构与形态，并测试了其吸水率、透光率、力学性能和抑菌性能。进而探讨了复合膜中明胶和纳米TiO2含量对壳聚糖膜性能的影响。结果表明：复合膜中，壳聚糖、明胶和TiO2微粒间存在强烈的氢键相互作用，从而使明胶与壳聚糖具有良好的相容性，TiO2与壳聚糖、明胶分子间有很好的界面作用。适量TiO2的加入，可使壳聚糖／明胶共混膜的力学性能得到改善，明胶质量分数为0．30时，掺杂wTiO2为0．01、0．02的复合膜较壳聚糖／明胶共混膜的湿强及干态韧性分别提高了55．9％，40．8％和49．7％，47．9％。此外，复合膜的抑菌性能随明胶的增加而降低，但随TiO2的掺杂比的增加而增强，纳米TiO2的引入拓宽了壳聚糖和明胶两种天然高分子材料的应用范围。     

基于Au_(nano)-PB、AEAPS-Dextran-Fe_3O_4和Au_(nano)修饰的前列腺特异性抗原电流型免疫传感器的研究

目的采用普鲁士兰-纳米金(Au_(nano)-PB)、氨基硅烷化-葡聚糖-四氧化三铁纳米复合物(AEAPS-Dextran-Fe_3O_4)及纳米金(Aunano)共修饰于氧化铟锡(ITO)电极表面固载抗体制得高灵敏前列腺特异性抗原电流型免疫传感器。方法先将ITO电极表面滴加适量Au_(nano)-PB,随后将AEAPS-Dextran-Fe_3O_4滴涂在ITO玻璃电极的Au_(nano)-PB膜上,然后通过静电吸附Au-nano并固定前列腺特异性抗体(anti-PSA),制得电流型免疫传感器。结果在最佳实验条件下,该传感器响应的峰电流值与前列腺特异性抗原(PSA)浓度在该传感器(0.8～20)ng/mL及(20～170)ng/mL的范围内保持良好的线性关系,检测下限为0.6ng/mL。结论成功建立了前列腺特异性抗原免疫传感器,该方法制备简单,操作便捷,检测下限低。     

β—环糊精高聚物对芳香类化合物包络吸附性能研究

选择酚类和芳香胺类化合物作为底物分子，研究了一类新型的β－环糊精高聚物（ＰＳ－ＰＧＭＡ－βＣＤ）对它们的包络吸附性能．结果表明．β－环糊精高聚物依据β－环糊精分子的包络作用，可以选择性地识别位置异构体．吸附容量与β－环糊精固载容量有关．     

FTC-CD133纳米微粒抑制肝癌干细胞耐药性的研究

目的 制备包裹乳腺癌耐药蛋白（BCRP/ABCG2）多药转运体的特异抑制剂FTC且连接CD133抗体的纳米微粒,并评价其特性和治疗作用。方法 运用复乳蒸发法制备以聚乳酸-聚乙醇酸（PLGA）为载体的包封FTC的载药纳米微粒,通过碳化二亚胺法在其表面连接CD133抗体,得到纳米微粒FTC-PLGA-NP-C;分析制备得到的纳米微粒的粒径分布、FTC包封率、载药量和纳米微粒的抗体连接效率;CD+133免疫磁珠法分选出CD+133 SP细胞,MTT法检测CD+133 SP细胞的增殖能力,Western blotting检测SP细胞中ABCG2的表达;荧光显微镜下观察FTC-PLGA-NP-C与CD+133 SP细胞的结合效率;将CD+133 SP细胞加入不同浓度的FTC-PLGA-NP-C纳米微粒,Western blotting检测其ABCG2的表达;以同体积PBS为对照,在CD+133 SP细胞中加入FTC-PLGA-NP-C纳米微粒,同时加入阿霉素,HPLC检测孵育不同时间后细胞内阿霉素的浓度。裸鼠腋下荷瘤,成瘤后尾静脉注射FTC-PLGA-NP-C或者0.9%氯化钠溶液,48 h后再由尾静脉注射阿霉素,测量瘤体直径,并采用高效液相色谱法检测裸鼠肿瘤组织中阿霉素的浓度。结果 FTC-PLGA-NP-C呈规则球形,粒径分布为60～120 nm,载药量为11.27%,包封率为37.18%,与CD+133 SP细胞有较好的结合能力;Western blotting检测显示ABCG2在CD+133 SP细胞中表达,且随着FTC-PLGA-NP-C纳米微粒剂量的增加,ABCG2的表达量逐渐降低,到4 mg/ml FTC-PLGA-NP-C时已几乎检测不到ABCG2的表达。从24 h开始,PBS中CD+133 SP细胞内阿霉素浓度很快下降至1 μg/ml及以下;而FTC-PLGA-NP-C中CD+133 SP细胞内阿霉素浓度一直维持在2～3 μg/ml。生理盐水组小鼠瘤体直径为（1.845±0.076）cm,高于FTC-PLGA-NP-C组的（1.238±0.072）cm（t=5.802,P＜0.001）;生理盐水组瘤内阿霉素浓度为（2.005±0.154）μg/ml,低于FTC-PLGA-NP-C组的（3.853±0.261）μg/ml（t=6.088,P＜0.001）。结论 制备的载药纳米微粒FTC-PLGA-NP-C可较好地靶向肝癌干细胞,并抑制其耐药蛋白ABCG2的表达,降低肿瘤细胞对常规治疗药物的耐药性,提高化疗药物的治疗效果。     

基于碳纳米管-硫堇/苝四甲酸二酐衍生物膜/纳米金的新型癌胚抗原电流型免疫传感器的研究

目的探讨采用碳纳米管-硫堇(CNTs-THi)/苝四甲酸二酐衍生物膜(PTC-NH2)/纳米金(nano-Au)构建的新型的高灵敏癌胚抗原(CEA)免疫传感器的性能。方法以氧化铟锡(ITO)电极为基底,在其表面首先电沉积一层纳米金,然后依次修饰CNTs-Thi、PTC-NH2、nano-Au,固载癌胚抗原特异性抗体(anti-CEA)制得新型高灵敏癌胚抗原(CEA)免疫传感器。通过循环伏安法考察电极修饰过程的电化学特性。结果该免疫电极的峰电流响应与癌胚抗原的浓度在1.0～75.0 ng/mL的范围内保持良好的线性关系,相关系数为0.991 5,检测下限为0.5 ng/mL。结论利用该方法制备的免疫传感器具有灵敏度高、线性范围宽、检测下限低等优点。     

纳米TiO2对丝素蛋白膜构象转变的影响

采用溶胶-凝胶法制备纳米TiO2复合丝素膜,并用原子力显微镜、一维红外光谱、二维红外相关光谱对纯丝素膜及复合丝素膜进行了研究。结果表明:纳米TiO2均匀地分散在丝素膜中;纳米粒子与丝素形成了分子间氢键,导致丝素分子的重排;丝素分子链的构象发生了转变,变化顺序是无规线团先于β-折叠、α-螺旋的形成。     

纳米金颗粒质量放大压电DNA传感器频移信号的研究

目的探讨纳米金颗粒质量放大压电DNA传感器频移信号的可行性,以进一步提高检测灵敏度。方法将巯基化的单链DNA探针固定于压电DNA传感器石英晶体金膜表面,封闭后加入合成的生物素化的互补靶DNA与之进行杂交反应,最后用5nm粒径的链亲和素标记的胶体金追加标记于杂交后的生物素化的靶DNA上,以增加石英晶振金膜表面的质量负载,从而降低石英晶振的响应频率,进一步放大频移信号。结果检测终浓度为10-8mol/L的阳性靶序列时杂交反应前后频移为(12.7±5.5)Hz,加入终浓度为9%的纳米金颗粒放大后总频移为(126±2.6)Hz,后者显著高于前者(P<0.01)。另外,对不同终浓度的阳性靶序列检测后发现,频移与其终浓度的lg值之间具有显著的线性关系,相关系数为0.974,而且最低检出限达到了10-12mol/L。结论实验结果表明该方法可以显著放大压电DNA传感器的频移信号,从而进一步提高压电DNA传感器检测的灵敏度。     

三氧化二砷纳米微粒的制备及体外释药特性

目的 对聚乳酸载药纳米微粒的表面形貌、粒径分布、微粒结构、表面元素、体外释放等微粒性能进行考察与评价.方法 以可溶性乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体,三氧化二砷(As2O3)为模型药物,采用超声乳化法制备PLGA载As2O3纳米微粒(As2O3-NPS),通过电子显微镜观测纳米粒外形结构,用紫外分光光度计测得载纳米粒载药量包封率并测定体外释放量,用光电能谱仪测定纳米微粒表面元素.结果 As2O3-NPS呈规则球形,平均粒径(210±23)nm,测得载药量为29.6%,包封率为82.1%.体外释放实验表明纳米微粒具有缓释特性.结论 以As2O3-NPS作为As2O3载体,可改变As2O3在体内的药代动力学行为,具有缓释作用,可制备为静脉用药,延长药物在体内的循环时间,发挥更好的抗肿瘤效应.     

基于三维刚性DNA桥式纳米探针的DNA甲基化光电化学传感器的制备和效果评价

目的 构建一种基于三维刚性DNA桥式纳米探针(3D-TPN)的光电化学(photoelectro-chemistry,PEC)传感器,用于DNA甲基化位点分析研究.方法 将二氧化钛(TiO2)悬浮液滴加到ITO电极表面,形成薄膜,通过电位溶出法在TiO2纳米膜表面沉积金纳米粒子(AuNPs),进一步通过Au-S将三维刚...     

适配子型压电石英晶体传感器探针固定方法的研究

目的 比较金膜表面两种探针固定法的优劣,选择适配子型压电传感器探针固定的最佳方法.方法 用巯基固定法及生物素-亲和素固定法将针对人IgE的适配子探针固定在压电传感器的金膜表面,对不同浓度IgE引起的频率变化进行检测.结果 与巯基法相比,生物素-亲和素法固定探针压电传感器频率下降更为明显,检出限低,线性范围宽,0.1～2.5 mg/L浓度范围内IgE浓度与频率变化呈明显的线性相关,相关系数0.994 5.结论 在压电基因传感器探针固定中效果良好的巯基法在适配子探针固定中并不适用,生物素-亲和素法在适配子压电传感器探针固定中有明显优势.     

压电石英晶体生物传感器的血浆凝血因子检测系统的效能研究

目的研究用压电石英晶体传感器进行凝血因子检测的系统,介绍血浆凝血因子检测系统的工作原理.方法利用压电石英晶体的逆压电反应,基于模糊和解耦控制技术,采用单片机进行恒温恒湿控制和频率计数,测得血浆凝集时间,来确定凝血因子的活性和含量.结果本检测系统提高了凝血因子检测的方便性、精度和一致性.结论压电石英晶体传感器用于凝血因子检测具有精度高和成本低等优点,有广阔的临床应用和推广前景.     

压电C肽免疫传感器的实验研究

目的：构建一种新型压电C肽免疫传感器，方法：AT切向，基频10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定形成检测池，抗人C肽单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜，构成压电C肽免疫传感器。结果：构建的压电C肽免疫传感器C肽的响应特性良好，其线性检测范围为0．375－12．0ng/ml，胰岛素，胰岛素原对C肽的检测基本无干扰，传感器可再生后重复使用5次，58例临床标本检测结果与放射免疫检测法符合（P＞0．05），两种方法的相关系数为0．94。结论：研制的压电C肽免疫传感器具有灵敏度高，特异性好，不需标记，操作简单，省时，能实时在线检测和重复使用等优点，对比实验表明其检测结果准确，能用于临床实验诊断，具有临床推广价值。     

压电石英晶体传感器检测血浆纤维蛋白原方法的研究及应用

目的建立一种压电石英晶体传感器检测血浆纤维蛋白原(Fib)的方法.方法采用AT切向、基频10MHz的银膜石英晶体作为压电元件;观察血浆凝集过程中晶体振荡频率的变化,确定血浆凝集反应的起点和终点.结果 (1)检测池加入凝血酶原待频率稳定后,血浆标本加入反应体系后,晶体振荡快速下降,由于反应中形成的纤维蛋白原凝块的质量、体积与晶体接触的面积以及血清产生的量不同,造成频率瞬时的上升、下降,或频率稳定,直至反应结束频率平稳,加样后频率下降的起点为血浆凝集反应的起点,频率上升、下降,稳定的起始点为反应的终点,计算两点的时间即为反应时间,查标准曲线得纤维蛋白原的含量.(2)该方法的检测结果与STAGO磁珠检测法的相关性好(r＝0.957).结论压电石英晶体传感器检测血浆纤维蛋白原是一种实时在线检测的方法,在线观测凝集反应的终点,反应的起点和终点的判别方便、可靠、准确.且操作简单,快速,成本低廉,是一种敏感性高、重复性好的方法,并可用于临床检测.     

基因传感器表面两种探针固定法的比较

目的：比较基因传感器表面两种探针固定法的优劣。方法：分别用巯基固定法及生物素－亲和素固定法将人类乳头瘤病毒（Human Papilloma Virus,HPV)的探针固定在基因传感器的金膜表面，比较不同探针浓度，不同靶序列浓度下反应所引起的频率的变化以及所用的时间。结果：两种固定方法检测靶序列的灵敏度相当，生物素－亲和素法反应所需的时间较短，且具有放大效应，能结合上更多的探针并检测到更多的靶序列，但操作较为繁琐，巯基法操作较为简单，但所需的反应时间较长，结论：两种探针固定法各有利弊，实际操作中应根据不同的需要选择合适的固定方法。     

压电基因传感器芯片技术在快速检测人乳头瘤病毒中的应用

目的　快速检出尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒（HPV）并分型.方法　利用基因芯片（Gene chip）与压电传感器（Piezoelectric biosensor）相结合的技术,通过HPV6、11、16、18四种型特异寡核苷酸探针建立一种快速检测HPV并分型的方法.并与常规的PCR和斑点杂交方法比较.结果　取复发型尖锐湿疣及相应的原发病例组织标本各22份,用压电基因传感器芯片技术检测结果为：原发型组织标本全部为阳性结果,其中 HPV6: 17(77.3%), HPV11: 3(13.6%), HPV16: 2(9.1%), HPV18:未检出；复发型组织标本中除第18例标本为阴性结果外,其余21份为阳性结果,其中HPV6: 15（68.2%）,HPV11: 2(9.1%), HPV16: 4(18.2%), HPV18:未检出.用PCR方法检测结果全部阳性,PCR扩增的产物经斑点杂交分型结果与其基本一致.结论　压电基因传感器芯片技术具有准确、快速、灵敏的优点.     

石英谐振传感器液相稳定平台构建及检测HCMV的实验研究

目的 建立石英谐振压电基因传感器检测系统液相稳定平台并应用该检测系统实时检测链置换扩增(Strand displacement amplification，SDA)反应。方法 ①观察以金属夹具式和粘胶式两种检测池连接方式构成的传感器在液相中的频率稳定性；②以巨细胞病毒(Human cytomegalovirus，HCMV)为检测对象，建立SDA反应系统；③传感器检测系统对HCMVSDA反应进行实时检测。结果 ①新型金属夹具式可调节及可换式传感器检测池可实现传感器在液相中的频率稳定性；②SDA反应可引起压电基因传感器的频率持续下降；③在一定范围内核酸杂交所引起的频率下降幅度随加入的靶序列浓度提高而增大。结论 成功构建压电基因传感器液相检测稳定平台并实现对SDA反应的实时检测；该系统可直接检测基因组DNA并可广泛应用于病原微生物的临床检测。     

压电基因传感器芯片技术在快速检测人乳头瘤病毒中的应用

目的：快速检出尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒（HPV）并分型。方法：利用基因芯片（Gene chip）与压电传感器（Piezoelectric biosensor）相结合的技术，通过HPV6、11、16、18四种型特异寡核苷酸探针建立一种快速检测HPV并分型的方法。并与常规的PCR和斑点杂交方法比较。结果：取复发型尖锐湿疣及相应的原发病例组织标本各22份，用压电基因传感器芯片技术检测结果为：原发型组织标本全部为阳性结果，其中HPV6：17（77.3％），HPV11：3（13.6％），HPV16：2（9.1％），HPV18：未检出；复发型组织标本中除第18例标本为阴性结果外，其余21份为阳性结果，其中HPV6：15（68.2％），HPV11：2（9.1％），HPV16：4（18.2％），HPV18：未检出。用PCR方法检测结果全部阳性，PCR扩增的产物经斑点杂交分型结果与其基本一致。结论：压电基因传感器芯片技术具有准确、快速、灵敏的优点。     

Multichannel piezoelectric genesensor for the detection of human papilloma virus

Ｗｉｔｈｉｎｔｈｅｐａｓｔｔｅｎｙｅａｒｓ,ｔｈｅｒｅｈａｓｂｅｅｎｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓｕｓｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｗｈｉｃｈｄｏｎｏｔｒｅｑｕｉｒｅｔｈｅｕｓｅｏｆｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓ ,ｅｎｚｙｍｅｓｏｒｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅｓ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓｙｓｔｅｍｓｂａｓｅｄｏｎｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｎｏｔｏｎｌｙｅｌｉｍｉｎａｔｅｔｈｅｎｅｅｄｆｏｒｓｕｃｈｌａｂｅｌｓｂｕｔａｌｓｏｏｆｆｅｒｔｈｅｐｏｔｅｎ…     

核酸外切酶-压电石英DNA传感器检测金黄色葡萄球菌的实验研究

目的 构建一种用于检测金黄色葡萄球菌的核酸外切酶-压电石英DNA传感器新方法,同时对其重要影响因素进行探讨.方法 采用λ核酸外切酶处理金黄色葡萄球菌PCR产物,EB染色、电泳后于紫外灯下进行观察,对杂交温度、杂交时间和杂交响应性能等因素进行实验研究,进一步将构建的核酸外切酶-压电石英DNA传感器法用于金黄色葡萄球菌检测,并对其灵敏度和特异性进行研究.结果 λ核酸外切酶-压电石英DNA传感器法最适杂交温度为35℃,最适杂交时间为60 min,响应性能显著大于普通压电DNA传感器(P＜0.01),可以检测到1.0×104CFU/ml的金黄色葡萄球菌,特异性好.结论 利用核酸外切酶-压电石英DNA传感器检测金黄色葡萄球菌,具有杂交效率高、技术难度低、频率响应性能高等优点,有较好的应用前景.