6株抗rhlL－8单克隆抗体识别表位的鉴定及双单克隆抗体夹心法ELISA检测IL－8方法的建立

采用酶标抗体竞争结合试验对６株抗ＩＬ－８单克隆抗体识别的表位进行了鉴定。按识别表位的不同可将６株单克隆抗体分为两组，一组包括２Ｇ２、４Ｃ３和４Ｅ１，识别相同或相近的表位；另一组包括４Ｄ７、５Ｃ９和５Ａ４，识别相同或相近的表位。在表位鉴定的基础上，选择识别不同表位的单克隆抗体用于建立双单克隆抗体夹心法ＥＬＩＳＡ检测ＩＬ－８，其中以４Ｄ７为包被抗体，４Ｃ３为酶标抗体的组合可获得最高的敏感性，对单核细胞源性ｒｈＩＬ－８（ＭＩＬ－８）及内皮细胞源性ｒｈＩＬ－８（ＥＩＬ－８）检测的敏感性可分别达到１５６ｐｇ／ｍｌ及３１２ｐｇ／ｍｌ。     

以ABTS为底物的双抗体夹心间接ELISA法的建立及应用

以多-单克隆抗体与正常鼠腹水平行包被固相载体,并用一种新的底物——ABTS作指示系统,建立了EHFV的双抗体间接夹心ELISA法。结果表明:1)ABTS与酶的反应平稳,不需加终止剂终止酶的反应,结果易于肉眼观察;2)对EHFV的定量测定较IFA客观、准确;3)对EHFV抗原的检出范围为351.65±122.82～2091.87±31.27ng/ml;4)对EHFV感染组织和细胞内EHFV的检出率为100％。以上结果说明该法敏感、特异、快速、简便、实用。并指出ABTS作为辣根过氧化物酶的底物的换代产品,应用前景广泛。     

McAb ELISA间接夹心法检测HFRS病人血凝抑制抗体的研究

本文介绍一种采用抗HFRSV血凝素McAb和粗制血凝素抗原的ELISA间接夹心法。该法检测了33份临床诊断为HFRS病人血清中的血凝抑制抗体,并平行地与血凝抑制试验(HIT)进行了比较。结果表明,本法特异性好,敏感性高,简便快速,判定结果客观,在临床诊断,流行病学监测中,有实用价值,并有可能取代HIT.     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心法和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS病人血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清,102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的确是HFRS病毒特异性抗体。对ELISA的某些试验条件作了讨论,并认为,McAb-ELISA在帮助临床早期诊断及血清流行病学调查等方面均有实用价值。     

双抗体夹心ELISA法检测相思子毒素

目的：建立相思子毒素（abrin）的酶联免疫检测方法, 为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据.方法：采用双抗体夹心ELISA法来检测微量abrin.结果：该法检测abrin线性范围为0.25 ～125 μg/L, 线性回归方程为Y=0.51015X＋0.4153（r=0.9880, n=10,P＜0.0001）, 检测下限为0.25 μg/L.不同浓度蓖麻毒素（ricin）、葡萄球菌肠毒素B（SEB）对检测结果基本无干扰.该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析, 相对标准差为3.52% ～4.86%, 具有较好的重现性.结论：成功地建立了双抗体夹心ELISA法检测abrin, 将多克隆抗体的强富集能力和单克隆抗体（mAb）的特异性结合起来, 提高检测的灵敏度和特异性, 可适用于各种微量abrin样品的分析.     

应用双抗体夹心ELISA检测人血清中Clq含量

本文采用抗人Clq单克隆抗体和多克隆抗体建立双抗体夹心ELISA,检测人血清中Clq含量。244份正常人血清标本检查结果,Clq正常值为287±56μg/ml。检测28份SLE患者血清有4份Clq呈明显下降.26份SLE病人血清同时用CH50试验检测总补体含量,发现二者呈正相关。因此,该技术有可能作为有关疾病如SLE等的临床诊断及疗效监测的辅助方法。     

微量酶联夹心杂交法定量检测hIL-8 mRNA PCR扩增产物

目的:建立一种灵敏度高、特异性强、定量、精确、操作简便的微孔板酶联夹心杂交技术,定量检测人IL-8 mR-NA。方法:针对人IL-8 mRNA逆转录聚合酶链反应产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针,其中一条为捕获探针,5′端用活性氨基修饰,与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合,“竖直”地包被在微孔板内;另一条检测探针的3′端标记生物素,和辣根过氧化物酶结合。提取人外周血单个核细胞总RNA,进行RT-PCR扩增IL-8 mRNA,双链DNA产物经热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交,加入检测探针与已杂交的产物结合,经亲和素-辣根过氧化物酶系统检测杂交信号。结果:该法灵敏度为检出16个循环的PCR产物、5×103个PBMCs中的IL-8 mRNA、检测PCR终产物的最高稀释倍数为1∶256阳性;特异性试验非目的扩增片段酶联杂交检测未检出阳性杂交信号;精密度试验CV为5.2%。结论:该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点,适合IL-8 mRNA PCR扩增产物的定量检测。     

检测可溶型CD226双mAb夹心ELISA的建立及初步应用

目的 :建立一种检测可溶型CD2 2 6 (sCD2 2 6 )的双mAb夹心ELISA ,并用于临床标本的检测。方法 :确定包被mAbLeoA1和HRP mAbFMU3的最佳工作浓度及最佳稀释液后 ,建立双mAb夹心ELISA ,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。再以建立的方法检测临床标本。结果 :包被mAbLeoA1的最佳工作浓度为 2 .5mg/L ,HRP mAbFMU3的最佳工作浓度 1∶4 0 0 ,标准品及HRP mAb的最佳稀释液分别为 1g/LBSA 1mL/LTween2 0 PBS和 30 g/LPEG PBS .建立的双mAb夹心ELISA ,其特异性 (与人IgG无交叉反应 ,阻断实验中阻断效应呈剂量依赖性 )、敏感性 (检出下限为 110ng/L标准品CD2 2 6 /Fc融合蛋白 )及稳定性 (CV <10 .2 % )均较良好。对部分临床标本的检测中 ,发现 6例类风湿关节炎(RA)患者血清sCD2 2 6的水平升高 ,与正常人血清sCD2 2 6水平相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :建立一种特异性高、重复性好、较敏感的检测sCD2 2 6的双mAb夹心ELISA ,初步证明可用于临床标本的检测     

McAb夹心法ELISA检测血清单纯疱疹病毒2型糖蛋白gC型特异性抗体

建立了检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gC型特异性抗体的方法。用本法同免疫荧光血清分型,抗原竞争ELISA和微量中和实验(MNT)进行了比较,检测HSV-2抗体的感度均优于后3种方法。实验结果表明:本法特异、敏感、简便。不仅可用于区分人群中HSV感染型别的流行病学调查,也适用于HSV-2糖蛋白gC的特异性研究。     

氯霉素乙酰基转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的 建立氯霉素乙酰基转移酶（chloramphenicol acetyltransferase,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法。方法 从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列，插入到原核表达质粒pGEX-2T中，在大肠埃希菌DH5α中诱导表达；以纯化的融合蛋白GST-CAT为抗原免疫实验用兔，得到的CAT抗血清进行生物素标记，并在此基础上利用生物素链和亲和素放大系统建立双抗体夹心ELISA法，构建不同YY1结合位点突变的HPV16LCRCAT报道质粒，体外瞬时转染真核细胞，提取胞质蛋白，以建立的方法进行CAT表达检测。结果 SDS-PAGE显示表达的GST-CAT融合蛋白相对分子质量约为54000；制备的CAT抗血清可有效地识别原核及哺乳动物细胞表达的CAT蛋白；在不同启动子及调节序列的控制下，利用建立的CAT检测技术证明在瞬时转染的细胞中可诱导2-8倍的CAT表达增强。结论 建立的双抗体夹心ELISA方法可敏感地反映上游序列的启动子活性，以及启动子调节序列变化对启动子活性的影响，使CAT作为报道基因的研究更为简单化。     

检测金属硫蛋白夹心法ELISA的建立和初步应用

采用两种能识别兔杆金属硫蛋白Ⅱ分子上不同抗原决定簇的单克隆抗体建立了夹心法ＥＬＩＳＡ。鉴定表明，该法测定兔ＭＴ的灵敏度为２０ｎｇ／ｍｌ批内和批间变异系数分别为１２．２％和９．３％，用于测定人体ＭＴ也有较好的灵敏性和可靠性。     

间接ELISA法检测轮状病毒

本文报道检测急性小儿腹泻患者粪便中轮状病毒的间接 ELISA 法。分别用兔抗 SA_(11)轮状病毒血清和正常兔血清的粗提 IgG 包板,检测抗体为豚鼠抗 SA_(11)抗体。酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗豚鼠 IgG 抗体。根据正常人标本结果为阴性,阻断试验成立,以及阳性标本用正常豚鼠血清检测为阴性,说明本试验具特异性。分析比较50份标本的电镜检查结果和间接 ELISA 试验结果,说明本试验的敏感性好。初步比较了抗牛轮状病毒(NCDV)抗体和抗 SA_(11)抗体检测的结果,两者基本一致。用硫酸铵粗提的 IgG 代替兔全血清,可减少非特异性显色。     

Development and Application of a Pig IL-8 ELISA Detection System

Abstract

Interleukin 8 (IL-8) is a chemotactic and activating chemokine, especially for neutrophils, which plays an important role in inflammatory process. A pig IL-8 specific enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed to measure IL-8 concentrations in cell culture supernatants and biological fluids. A streptavidin-biotin amplified sandwich method uses mouse capture mAb IZ8.03 and detection biotinylated mouse mAb IZ8.04 against recombinant pig IL-8. The assay specifically and reproducibly recognizes both recombinant and natural pig IL-8. A working range of the assay is 16–1000 pg/mL and takes a mere 3.5 h of incubation time. This pig IL-8 ELISA is a suitable alternative way of measurement of IL-8 concentrations to time consuming and laborious IL-8 bioassays.     

蛋白酪氨酸激酶的酶联免疫吸附测定方法

通过对多种影响因素的摸索，建立了蛋白酪氨酸激酶（ＰＴＫ）的固相ＥＬＩＳＡ测定方法，并对该方法进行了改进和标准化处理。研究表明ＥＬＩＳＡ法具有较好的可重复性、特异性与灵敏度，操作简便安全，是一种切实可行的好方法。     

白细胞介素-8研究进展

白细胞介素-8（IL-8）在趋化性细胞因子家族中属于C-X-C亚家族，IL-8是一个多种细胞来源的趋化性细胞因子，而且不同类型的细胞对不同的诱导剂的反应也不相同，因为由不同的实验室从不同的来源得到该因子，所以对于IL-8的许多不同的描述术语，对于IL-8的生理生化特性，目前已基本清楚，对于IL-8基因表达的调节，现认为主要是在转录水平的调控，并且发现其基因5′-侧翼区的AP-1，NF-кB及NF-IL-6结合位点是调节IL-8启动子功能的主要顺式作用元件，IL-8基因的表达需要这些元件之间高度的协同以达到有效的转录，IL-8受体则是一个由59KDa和67KDa亚单位组成的二聚体糖蛋白，存在于多种类型的细胞上，甚至包括一些不表达IL-8的细胞，IL-8的生物学活性并不表现出种族的特异性，IL-8可激活中性粒细胞，对T-淋巴细胞有趋化性并能刺激嗜碱性粒细胞，内皮细胞IL-8基因的表达除了受化学因子的调节外还受力学因素的影响，流体切应力诱导内皮细胞表达IL-8，可能在急性炎症和动脉粥样硬化的发生，发展过程中具有重要作用。     

THE DEVELOPMENT OF AN ELISA FOR CHICKEN APOLIPOPROTEIN II QUANTITATION

ABSTRACT

Polyclonal antibodies raised against chicken apoII was characterised for its use in Western blotting and ELISA detection systems of apoII in chicken plasma. The antibody has a high avidity and specificity for apolipoprotein II (apoII). Western blots show that the antibody reacts with a single band at 15 kDa. The antibody was used for setting up both direct and indirect ELISA assays for apoII. The indirect ELISA has a broader detection range (10–1600 U/mL) than the direct ELISA (10–100 U/mL). It was found that both ELISA systems discriminate very well between vitellogenic (laying hen) and non-vitellogenic (rooster) plasma. The indirect ELISA, due to its broad detection range, can potentially be used for monitoring female reproductive cycles, accidental and environmental exposure of males to estrogen, and for apoII secretion by cultured hepatocytes and hepatomas.     

A SPECIFIC AND ULTRASENSITIVE CHEMILUMINESCENT SANDWICH ELISA TEST FOR THE DETECTION AND QUANTITATION OF PNEUMOLYSIN

A chemiluminescent sandwich ELISA test has been developed for the detection and quantitation of pneumolysin. The test is based on a mouse monoclonal as the capture antibody and on rabbit polyclonal IgGs as detection antibodies, in combination with an anti-rabbit IgG alkaline phosphatase conjugate. The estimated detection limit of the purified recombinant toxin in phosphate-buffered saline with 0.05% Triton X-100 is around 5 pg ml^?1, with averaged intra- and inter-assay variation coefficients of 7% and 13.5%, respectively.

The assay has been applied to the quantitation of pneumolysin in pneumococcal isolates, providing, for the first time, a direct measurement of the amount of the toxin produced by different strains; a variation has been found in their pneumolysin content. The test is highly specific as no other purified toxins or human pneumonia- or meningitis-associated bacteria yielded false-positive results. This specific and highly sensitive method could help in the diagnosis of human infections.     

眼肌结合抗体的ELISA检测及应用

自猪和牛眼肌提取眼肌抗原，建立了检测人血清中眼肌结合抗体（ＥＭ－Ａｂ）的ＥＬＩＳＡ法。检测４０例甲亢患者阳性率为３０．０％，２３例ＳＬＥ患者阳性率为２６．９％，与正常对照组比较有显著差别（Ｐ〈０．０１）。ＥＭ－Ａｂ与甲状腺疾病的一些自身抗体无显著相关性，提示此是与眼病自身免疫反应有关的一种自身抗体。     

大鼠主动脉血管内皮细胞受刺激后IL-8的产生

为了研究内毒素及炎症因子对血管内皮细胞分泌IL - 8的影响 ,分别用内毒素、IL - 1、TNFα刺激体外培养的Wister大鼠主动脉内皮细胞 ,并用放射免疫分析检测IL - 8的含量。经内毒素、IL- 1、TNFα刺激后 ,内皮细胞体外培养液内IL - 8的分泌量分别为 :3.1± 0 .6,6.8± 1.2 ,5.8± 1.6;空白对照为 0 .6± 0 .3,单位为ng/mL。内毒素、IL - 1、TNFα能促进内皮细胞分泌IL - 8,内皮细胞在机体炎症过程中起重要作用。