急性高眼压后大鼠视网膜谷氨酰胺合成酶的表达变化

为了探索谷氨酰胺合成酶在青光眼视网膜中的表达变化及其可能作用,本实验用急性高眼压模型,结合免疫组织化学染色和Western blot检测了急性高眼压后大鼠视网膜中谷氨酰胺合成酶的表达。结果显示:正常视网膜中,谷氨酰胺合成酶免疫组织化学染色主要见于Muller细胞胞体;0 d组中,Muller细胞胞体染色稍淡,而内网层中表达增加,且呈明显的点状分布; 1d组、3 d组中Muller细胞胞体染色进一步变淡,但内网层中呈现弥散染色。至再灌第7 d、14 d,Muller细胞胞体又出现浓的染色。平均灰度值显示:与正常组相比,0 d组中谷氨酰胺合成酶表达有增加但差异无显著性;1 d组中表达显著增加,3 d组、7 d组表达逐渐减少,至第14 d时基本恢复正常。Western blot显示谷氨酰胺合成酶为一分子量约为45 kD的单一蛋白带,与其它组相比,1 d组中表达显著增加。提示:急性高眼压导致的视网膜缺血再灌早期,Muller细胞中谷氨酰胺合成酶的快速重新分布和表达上调可能加速了胞外谷氨酸的代谢,对缺血再灌条件下的视网膜特别是节细胞起到保护作用。     

大鼠脊髓内囊泡膜谷氨酸转运体1和囊泡膜谷氨酸转运体2阳性纤维和终末在生后发育中的分布和表达变化

目的 探讨囊泡膜谷氨酸转运体1（VGLUT1）和VGLUT2阳性纤维和终末在生后第0天（P0）至第22天（P22）大鼠脊髓内的分布情况和表达变化。 方法 对生后发育P0～P22大鼠的颈膨大和腰膨大部位,进行VGLUT1和VGLUT2免疫组织化学染色。 结果 P0～P22大鼠颈膨大和腰膨大脊髓内均可观察到VGLUT1和VGLUT2阳性纤维和终末,但未观察到胞体样结构。VGLUT1和VGLUT2阳性纤维和终末的分布呈现明显的互补分布,尤其是以脊髓后角更加明显。其中,VGLUT1阳性纤维和终末在P0主要见于颈膨大和腰膨大脊髓后角Ⅲ～Ⅴ层,中间部和前角很微弱。脊髓发育至P3,不仅Ⅲ~Ⅴ层VGLUT1的表达进一步增强,且向外侧部扩展,并在后角基底部Ⅵ层和前角的外侧部（Ⅸ层）也可观察到较强的VGLUT1阳性纤维,呈现一条明显由背内向腹外的带状分布趋势。P7时此带状分布更加明显,并随着发育逐渐向内、外扩展,至P22时已广泛分布于除Ⅱ层之外的整个脊髓。而VGLUT2阳性纤维和终末在P0时即密集出现于脊髓后角Ⅰ～Ⅱ层以及前角的外侧边缘区域;之后随着发育,VGLUT2阳性纤维和终末的分布模式并未发生明显改变,但其密度逐渐有所增加,特别是Ⅰ～Ⅱ层内VGLUT2阳性产物的表达尤为明显。另外,在脊髓白质后索内可见VGLUT1阳性皮质脊髓后束纤维由颈髓（P3）逐渐下降至腰髓（P7）的发育过程。 结论 VGLUT1和VGLUT2阳性纤维和终末在脊髓发育过程中呈现明显不同,且表现出互补分布的特点,这对于进一步理解VGLUT1和VGLUT2在脊髓生后发育过程中不同功能特点可能有意义。     

脑源性神经营养因子对急性高眼压后大鼠视网膜Mueller细胞的影响

目的：检测脑源性神经营养因子（BDNF）干预急性高眼压后大鼠视网膜Mueller细胞谷氨酰胺合成酶（GS）和谷氨酸／天冬氨酸转运体（GLAST）表达的变化，探讨BDNF保护节细胞（RGCs）的可能机制。方法：成年大鼠分为3个BDNF干预组和3个溶媒对照组并进行玻璃体内注射。2d后将预处理动物左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压且维持缺血60min。实验动物分别存活1、3或7d后通过免疫组织化学检测大鼠视网膜GS和GLAST的表达变化。结果：与正常对照组比较，溶媒对照组GS和GLAST在存活1d和3d时表达上调，7d时下降；BDNF干预组未出现表达明显变化。结论：BDNF可能不是通过Mueller细胞上调GS和GLAST，降低胞外Glu来保护RGCs。     

急性脑缺血损伤大鼠海马神经元谷氨酸转运体的表达

目的：研究急性脑缺血损伤大鼠海马神经元谷氨酸转运体（EAAC1）的表达变化。 方法： 采用EAAC1反义寡核苷酸脑内注射，用插线法建立大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO)。运用Western blot法和TTC染色观察缺血区EAAC1表达和梗塞体积；采用RT-PCR 和Western blot法，测定海马EAAC1 mRNA和蛋白在缺血1 h、6 h、24 h的变化。结果： 注射EAAC1反义寡核苷酸组大鼠梗塞体积［(105.67±8.70) mm3］显著小于正义组。缺血1 h大鼠海马EAAC1 mRNA表达（0.963±0.117）与假手术组（0.907±0.113）无明显差异，缺血6h、24h持续高于缺血1 h（分别为1.116±0.104和1.428±0.078）。而海马EAAC1蛋白表达（0.640±0.027）在缺血24 h高于假手术组，缺血1 h和6h EAAC1表达与假手术组比较无显著差异（分别为0.330±0.018、0.330±0.015）。结论： EAAC1可促进缺血脑损伤,在急性脑缺血病理过程中表达增加。     

脑源性神经营养因子对急性高眼压后大鼠视网膜Müller细胞的影响

目的：检测脑源性神经营养因子(BDNF)干预急性高眼压后大鼠视网膜 Müller 细胞谷氨酰胺合成酶(GS) 和谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)表达的变化,探讨 BDNF 保护节细胞(RGCs)的可能机制。方法：成年大鼠分为3个 BDNF 干预组和3个溶媒对照组并进行玻璃体内注射。2 d 后将预处理动物左眼眼压升高至闪光视网膜电图 b 波消失的临界眼压且维持缺血60 min。实验动物分别存活1、3或7 d 后通过免疫组织化学检测大鼠视网膜 GS 和 GLAST 的表达变化。结果：与正常对照组比较,溶媒对照组 GS 和 GLAST 在存活1 d 和3 d 时表达上调,7d 时下降;BDNF 干预组未出现表达明显变化。结论：BDNF 可能不是通过 Müller 细胞上调 GS 和 GLAST,降低胞外 Glu 来保护 RGCs。     

大鼠囊泡膜谷氨酸转运体样和谷氨酸脱羧酶样阳性终末与表达GABAA受体α3亚单位的三叉神经中脑核神经元之间的联系

目的 观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)内囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1和DNPI)样和谷氨酸脱羧酶(GAD)样阳性终末与GABAA受体α3亚单位(GABAARα3)样阳性神经元之间的联系。方法 免疫荧光组织化学三重染色技术，在激光共聚焦显微镜下观察。结果 在Vme吻尾方向上，有大量的神经元胞体呈GABAARα3样免疫阳性，这些神经元多为大的假单极神经元(直径为25—50μm)。VGluT1样、DNPI样和GAD样免疫阳性终末密集分布于Vme内，一些VGluT1／DNPI样和GAD样阳性终末包绕在GABAARα3样阳性Vme神经元胞体周围，并与之形成密切接触。结论 Vme神经元在介导口面部本体感觉信息的传递过程中，可能同时接受中枢其他来源的谷氨酸能和GABA能终末的调控，其中GABA能终末的作用可能是通过GABAA受体实现的。     

外源性脑源性神经营养因子对急性高眼压后大鼠视网膜谷氨酸转运体1表达的影响

目的:检测外源性脑源性神经营养因子(BDNF)对急性高眼压后大鼠视网膜谷氨酸转运体1(GLT-1)表达的影响。方法:72只SD大鼠随机分成急性高眼压组、溶媒预处理急性高眼压组和BDNF预处理急性高眼压组,每组动物左眼制作急性高眼压模型,右眼为正常对照,每组动物分别存活1、3、7或14d。用免疫组织化学方法检测外源性BDNF对视网膜GLT-1表达的影响。结果:溶媒预处理急性高眼压组中GLT-1的表达与急性高眼压组相同。与正常视网膜比,急性高眼压组GLT-1的表达在再灌1d时上调,3d时达到高峰,7、14d时表达下调,但仍高于正常对照组。在BDNF预处理急性高眼压组,再灌1d时GLT-1表达明显高于急性高眼压组,3、7、14d时GLT-1表达与急性高眼压组无明显差别。结论:外源性BDNF对急性高眼压后大鼠视网膜的保护作用可能与再灌早期提前上调GLT-1的表达有关。     

癫痫大鼠海马谷氨酰胺合成酶的变化

目的观察戊四氮点燃慢性癫痫模型海马星形胶质细胞谷氨酰胺合成酶的变化,探讨谷氨酰胺合成酶在癫痫发生中的作用。方法通过免疫组织化学染色法和酶活性测定法,研究海马内谷氨酰胺合成酶表达细胞差异以及酶活性改变。结果慢性癫痫大鼠海马星形胶质细胞被激活,细胞体积增大,突起粗大,谷氨酰胺合成酶的表达阳性,但较正常组明显减少,而GFAP表达增高;慢性癫痫大鼠海马谷氨酰胺合成酶的活性明显降低。结论谷氨酰胺合成酶缺乏可能是癫痫发生的一个分子基础。     

局灶性脑梗死引起谷氨酸转运体在星形胶质细胞的表达

目的探讨急性局灶性脑梗死可塑性变化的星形胶质细胞在脑缺血损伤中的作用。方法免疫组织化学和免疫荧光双标记技术。结果胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性星形胶质细胞在脑梗塞灶的周围发生肥大和增生性可塑改变,其突起的变化尤为显著。粗大的突起呈纤维状,并相互交织呈密集的网,其末端向脑梗塞灶的中央延伸。在缺血周边的半影区可见谷氨酸转运体(EAAT1)阳性表达,呈斑点和纤维状;共聚焦扫描显微镜下可见EAAT1与GFAP双标记的星形胶质细胞。结论急性局灶性脑梗死后发生可塑性变化的星形胶质细胞通过增强EAAT1的功能参与脑梗死的修复过程。     

小鼠脊髓神经元内脑啡肽与1型囊泡膜谷氨酸转运体的共存

目的:以PPE-GFP转基因小鼠为研究工具,观察绿色荧光蛋白(GFP)阳性的脑啡肽(ENK)能神经元与1型囊泡膜谷氨酸转运体(VGLUT1)在脊髓的分布及共存情况。方法:利用免疫组织化学和原位杂交双标染色的方法。结果:GFP标记的ENK能神经元主要位于脊髓背角,在I-ⅡI层最为密集,背角深层内侧部及中央管周围呈中等密度分布,散在分布于前角。VGLUT1 mRNA阳性细胞广泛分布在脊髓各层。GFP/VGLUT1双标细胞主要分布在脊髓背角,I-ⅡI层双标细胞占GFP阳性细胞的22.95±1.10%,占VGLUT1阳性细胞的27.91±2.42%;IV-VI层中21.49±4.99%GFP阳性细胞表达VGLUT1,10.35±2.81%VGLUT1阳性细胞表达GFP;前角双标细胞占VGLUT1阳性细胞的1.07±0.37%,占GFP阳性细胞的32.08±13.15%。结论:双标结果表明脊髓内部分ENK能神经元表达1型囊泡膜谷氨酸转运体,推测ENK能神经元可能通过调控谷氨酸的释放发挥感觉信息调控作用。     

急性高眼压后大鼠视网膜葡萄糖转运因子-1的表达

目的:观察急性高眼压后大鼠视网膜葡萄糖转运因子-1(GLUT-1)的表达变化及其对视网膜损伤的影响.方法:利用急性高眼压大鼠模型,通过免疫组织化学和免疫印迹检测急性高眼压后大鼠视网膜GLUT-1蛋白的表达变化;Nissl染色观察视网膜神经细胞层次改变及节细胞数的变化.结果:正常视网膜血管内皮细胞有GLUT-1表达,急性高眼压后3h开始下调,6h达最低值,之后1d、3d、7d逐渐恢复至正常水平.Nissl染色结果显示急性高眼压后3h、6h和12 h视网膜节细胞数减少不明显,到1、3d,视网膜层次紊乱、变薄,节细胞数明显减少.结论:急性高眼压后早期大鼠视网膜GLUT-1表达下调,影响了视网膜葡萄糖的转运,这可能是视网膜结构紊乱,节细胞丢失的重要原因.     

外源性脑源性神经营养因子对急性高眼压后大鼠视网膜磷酸化TrkB表达的影响

目的:检测脑源性神经营养因子(BDNF)干预对急性高眼压后大鼠视网膜磷酸化TrkB(p-TrkB)表达变化的影响。方法:成年大鼠随机分为单纯高眼压组、BDNF预处理高眼压组和溶媒预处理高眼压组,BDNF预处理高眼压组和溶媒预处理高眼压组动物左眼于加压前2d分别给予BDNF预处理或溶媒,右眼设为正常对照。各组动物左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压并维持60min,动物分别存活1、3、7、14d后处死,冷冻切片行p-TrkB的免疫组织化学显色。结果:单纯高眼压组急性高眼压后p-TrkB的表达显著下调;溶媒预处理高眼压组实验结果与单纯急性高眼压组相似;BDNF预处理高眼压组p-TrkB的表达随再灌时间的延长进行性下调,但在各时间点的表达均显著高于单纯高眼压组。结论:外源性BDNF干预部分缓解了急性高眼压后视网膜p-TrkB表达的下调,对急性高眼压后的大鼠视网膜起到一定的保护作用。     

脑源性神经营养因子预处理后急性高眼压下大鼠视网膜TrkB的表达变化

目的：检测脑源性神经营养因子(BDNF)干预后大鼠视网膜TrkB的表达变化。为受损后视网膜节细胞的保护及外源性BDNF的应用提供一定的理论基础。方法：大鼠左眼分为急性眼高压及BDNF预处理组。使左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压并维持60 min,分别存活1～14 d后处死,冰冻切片行尼氏染色及TrkB的免疫组织化学。结果：急性高眼压组各时间点节细胞层细胞数目均显著少于BDNF预处理组;1、3 d时TrkB的表达明显增加,7、14 d时则明显减少;BDNF预处理组在存活1、3 d时TrkB的表达明显增加,7 d时则下降至正常对照组水平,14 d时再次明显增加。结论：急性高眼压后大鼠视网膜内TrkB的表达存在时空变化,TrkB表达的上调提示视网膜对BDNF的需求增加。     

Regional distributions of brain glutamate and glutamine in normal subjects

Glutamate (Glu) and glutamine (Gln) play an important role in neuronal regulation and are of value as MRS‐observable diagnostic biomarkers. In this study the relative concentrations of these metabolites have been measured in multiple regions in the normal brain using a short‐T_E whole‐brain MRSI measurement at 3 T combined with a modified data analysis approach that used spatial averaging to obtain high‐SNR spectra from atlas‐registered anatomic regions or interest. By spectral fitting of high‐SNR spectra this approach yielded reliable measurements across a wide volume of the brain. Spectral averaging also demonstrated increased SNR and improved fitting accuracy for the sum of Glu and Gln (Glx) compared with individual voxel fitting. Results in 26 healthy controls showed relatively constant Glu/Cr and Gln/Cr throughout the cerebrum, although with increased values in the anterior cingulum and paracentral lobule, and increased Gln/Cr in the superior motor area. The deep gray‐matter regions of thalamus, putamen, and pallidum show lower Glu/Cr compared with cortical white‐matter regions. Lobar measurements demonstrated reduced Glu/Cr and Gln/Cr in the cerebellum as compared with the cerebrum, where white‐matter regions show significantly lower Glu/Cr and Gln/Cr as compared with gray‐matter regions across multiple brain lobes. Regression analysis showed no significant effect of gender on Glu/Cr or Gln/Cr measurement; however, Glx/Cr ratio was found to be significantly negatively correlated with age in some lobar brain regions. In summary, this methodology provides the spectral quality necessary for reliable separation of Glu and Gln at 3 T from a single MRSI acquisition enabling generation of regional distributions of metabolites over a large volume of the brain, including cortical regions. Copyright © 2016 John Wiley & Sons, Ltd.     

Vesicular glutamate transporter 1 and vesicular glutamate transporter 2 synapses on cholinergic neurons in the sublenticular gray of the rat basal forebrain: a double-label electron microscopic study

The basal forebrain (BF) comprises morphologically and functionally heterogeneous cell populations, including cholinergic and non-cholinergic corticopetal neurons that are implicated in sleep–wake modulation, learning, memory and attention. Several studies suggest that glutamate may be among inputs affecting cholinergic corticopetal neurons but such inputs have not been demonstrated unequivocally. We examined glutamatergic axon terminals in the sublenticular substantia innominata in rats using double-immunolabeling for vesicular glutamate transporters (Vglut1 and Vglut2) and choline acetyltransferase (ChAT) at the electron microscopic level. In a total surface area of 30,000 μm², we classified the pre- and postsynaptic elements of 813 synaptic boutons. Vglut1 and Vglut2 boutons synapsed with cholinergic dendrites, and occasionally Vglut2 axon terminals also synapsed with cholinergic cell bodies. Vglut1 terminals formed synapses with unlabeled dendrites and spines with equal frequency, while Vglut2 boutons were mainly in synaptic contact with unlabeled dendritic shafts and occasionally with unlabeled spines. In general, Vglut1 boutons contacted more distal dendritic compartments than Vglut2 boutons. About 21% of all synaptic boutons (n=347) detected in tissue that was stained for Vglut1 and ChAT were positive for Vglut1, and 14% of the Vglut1 synapses were made on cholinergic profiles. From separate cases stained for Vglut2 and ChAT, 35% of all synaptic boutons (n=466) were positive for Vglut2, and 23% of the Vglut2 synapses were made on cholinergic profiles. On average, Vglut1 boutons were significantly smaller than Vglut2 synaptic boutons. The Vglut2 boutons that synapsed cholinergic profiles tended to be larger than the Vglut2 boutons that contacted unlabeled, non-cholinergic postsynaptic profiles. The presence of two different subtypes of Vgluts, the size differences of the Vglut synaptic boutons, and their preference for different postsynaptic targets suggest that the action of glutamate on BF neurons is complex and may arise from multiple afferent sources.     

急性大鼠眼高压诱导的不同缺血/再灌内层视网膜的变化

目的：探讨急性眼高压诱导的不同缺血／再灌条件下内层视网膜形态与功能的变化。方法：成年大鼠,根据不同加压与再灌时间分组。左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压且维持缺血30～90min。实验动物分别再灌1、3、7或14d复测b波,尼氏染色检测节细胞(RGCs)密度、内层视网膜厚度。结果：缺血60或90min组RGCs密度和内层视网膜厚度显著下降,且下降的程度随再灌时间的延长而加重。缺血30或45min组复测b波部分恢复;而缺血60min或更长时间组则b波未恢复。结论：缺血60min或更长时间导致内层视网膜严重损伤,而不同的眼高压维持时间和再灌时间都是影响视网膜损伤程度的重要因素。