亚砷酸对角质形成细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究亚砷酸对不同角质形成细胞增殖及凋亡的影响。方法：以体外培养的角质形成细胞株为对象，不同浓度的亚砷酸处理细胞后，用MTT比色分析法反映细胞增殖变化，用光镜和电镜观察细胞形态，流式细胞仪测定细胞周期分布及凋亡峰的出现，Annexin-V染色荧光照相证实凋亡的发生。结果：0.5-10μmol/L亚砷酸对良性角质形成细胞株HaCaT细胞有明显抑制作用，并呈时间和剂量依赖关系，而该浓度砷剂对A431细胞无明显影响。光镜及HE染色后观察均显示随浓度升高、时间延长，凋亡细胞增多。高于上述范围HaCaT细胞变性死亡增多，流式细胞仪检测细胞周期分布变化，G2M期细胞比例及亚G1期凋亡明显升高，Annexin-V法显示有绿色荧光的阳性细胞。而A431细胞无明显形态和细胞周期分布变化。结论：一定浓度的亚砷酸可抑制HaCaT细胞增殖，并具有诱导凋亡作用，对皮肤鳞状细胞癌A431细胞无明显影响，提示良性表皮角质形成细胞株HaCaT对亚砷酸的处理比鳞状细胞癌A431细胞株更敏感。     

体外培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞Smad2和Smad3 mRNA的表达

目的:探讨体外培养的人皮肤鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞的转化生长因子(TGF)β受体活化Smad--Smad2和Smad3 mRNA的表达水平.方法:采用反转录-实时荧光定量聚合酶链反应,分别检测体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞与人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中Smad2和Smad3 mRNA的表达水平.结果:人皮肤鳞癌A431细胞Smad2和Smad3的mRNA表达水平均显著低于对照的角质形成细胞.结论:Smad2和Smad3表达下调不但见于人类皮肤鳞癌的在体形成过程中,还见于能持续传代的体外培养的鳞癌细胞中.Smad2和Smad3表达下调可能代表了鳞癌细胞所固有的TGF-B信号转导通路的异常变化.有助于鳞癌的形成.     

芳维A酸氨丁三醇和阿维A酸对HaCaT细胞维A酸受体表达的影响

目的：研究角质形成细胞维A酸受体的基础表达,及芳维A酸氨丁三醇（FY-10）和阿维A酸（acitretin）对角质形成细胞维A酸受体转录水平的影响。方法：以体外培养的角质形成细胞株Ha-CaT细胞为对象,不同浓度的FY-10或acitretin处理不同时间后,用RT-PCR测定各处理组RARα、RARβ、RARγ mRNA水平。结果：HaCaT细胞中RARγ表达最高,RARβ表达量最低;不同浓度的FY-10及acitretin对HaCaT细胞RARα、RARβ、RARγ转录水平无影响,亦不存在时间依赖性。结论：角质形成细胞HaCaT均表达RARα、RARβ、RARγ,且此三种受体的转录水平不受芳维A酸氨丁三醇及阿维A酸影响。     

来氟米特对HaCaT细胞分泌α-肿瘤坏死因子、白介素-6和8的影响

目的：研究来氟米特活性代谢产物A77l 1726对角质形成细胞分泌α-肿瘤坏死因子（TNF-α），白介素(IL）-6及IL-8的影响。方法：以体外培养的角质形成细胞株HaCaT为对象，以不同浓度A77 l726处理正常及TNF-α刺激后细胞，用生物活性法及ELISA方法测定培养上清中TNF-α、IL-6及IL-8的分泌变化情况。结果：正常情况下，HaCaT细胞可自发分泌TNF-α、IL-6和IL-8；药物作用后分泌水平下降；TNF-α诱导下，HaCaT细胞IL-6及IL-8表达量均增加，加入来氟米特后则表达量均受到抑制。结论：来氟米特可抑制角质形成细胞分泌TNF-α、IL-6及IL-8。     

人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株电压门控钾通道的研究

目的 探讨电压门控钾通道在人皮肤鳞状细胞癌A431细胞和人角质形成细胞HaCaT细胞中的作用.方法 噻唑蓝方法研究加入含有不同浓度四乙胺的培养基对A431细胞和HaCaT细胞的增殖的影响;提取体外培养A431细胞、HaCaT细胞以及人正常表皮组织的蛋白,ELISA方法检测电压门控钾通道蛋白(HERG)在它们中的表达,比较它们的差异.结果 四乙胺对体外培养的A431细胞和HaCaT细胞的增殖抑制效应具有时间依赖与剂量依赖的特点,当四乙胺的浓度≥10 mmol/L且作用时间≥24 h,可以使A431细胞和HaCaT细胞的增殖受到明显的抑制.HERG钾通道蛋白在A431细胞、HaCaT细胞和人正常皮肤表皮组织均有表达,平均浓度分别为(49.7114±3.55696)pg/ml、(35.7471±4.14696)pg/ml、(36.8857±3.47810)pg/ml,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 阻断电压门控钾通道可抑制A431细胞和HaCaT细胞的增殖;电压门控钾通道可能在人皮肤鳞状细胞癌细胞上的表达更显著.

Abstract：

Objective To investigate the role of voltage-gated potassium channel in the human skin squamous cell carcinoma A431 cells and human keratinocyte HaCaT cells. Methods MTT assay was performed to detect the effect of different concentrations of tetraethylammonium (TEA) on the proliferation of cultured A431 cells and HaCaT cells. Besides, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was conducted to detect the expression of HERG channel protein in A431 cells, HaCaT cells and normal human skin tissue.Results TEA inhibited the proliferation of A431 cells and HaCaT cells in a dose- and time-dependent manner.After treated with TEA (≥ 10 mmol/L) for 24 or more hours, the proliferation of A431 cells and HaCaT cells was obviously suppressed. A significant difference was observed in the average concentration of HERG channel protein between A431 cells, HaCaT cells and normal human skin tissue (49.7114 ± 3.55696 pg/ml, 35.7471 ±4.14696 pg/ml, 36.8857 ± 3.47810 pg/ml, all P < 0.05). Conclusions The block of voltage-gated potassium channel could inhibit the proliferation of A431 cells and HaCaT cells, and the expression of voltage-gated potassium channel seems to be higher in human skin squamous cell carcinoma cells.     

桥粒芯糖蛋白1、3在HaCaT细胞、A431细胞及原代角质形成细胞中的表达

【摘要】 目的 测定不同类型角质形成细胞（KC）桥粒芯糖蛋白（DSG）1、DSG3及DSG1 mRNA、DSG3 mRNA表达。 方法 不同KC（HaCaT细胞、A431细胞及原代KC）培养后,直接免疫荧光观察细胞DSG1、DSG3的表达,定量聚合酶链反应（qPCR）测定DSG1 mRNA、DSG3 mRNA相对表达水平。 结果 DSG1与DSG3表达于三种角质形成细胞,荧光强度显示,A431细胞高于HaCaT细胞,HaCaT细胞高于原代KC。三种细胞均表达DSG1、DSG3 mRNA,原代KC DSG1与DSG3 mRNA的相对表达量分别为HaCaT细胞的291.7%及237.4%,差异有统计学意义（P < 0.01）;A431细胞DSG1 mRNA为HaCaT细胞的0.1%、DSG3 mRNA则为HaCaT细胞的18.8%,差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 三种KC均可用于对DSG1、DSG3的相关研究;相对而言,正常培养的A431细胞表面DSG1、DSG3表达较HaCaT细胞及原代KC高;原代KC DSG1、DSG3 mRNA水平较HaCaT细胞及A431细胞高。     

降钙素基因相关肽对HaCaT细胞一氧化氮合酶表达的影响

目的 研究降钙素基因相关肽对体外培养角质形成细胞HaCaT株神经型一氧化氮合酶(NOS)mRNA、蛋白表达和NO释放的调节作用。方法 应用NO试剂盒(酶法)检测培养细胞上清液中NO水平,RT-PCR和免疫组化(SP)方法检测HaCaT细胞神经型NOSmRNA和蛋白的表达水平。结果 体外正常培养的HaCaT细胞表达和释放基础水平的神经型NOS和NO,降钙素基因相关肽上调HaCaT细胞神经型NOS表达和NO释放,降钙素基因相关肽受体抑制剂CGRP-8-37抑制降钙素基因相关肽的作用。结论 降钙素基因相关肽诱导角质形成细胞表达神经型NOS并促进神经型NO释放。     

Sirt1在银屑病皮损中的表达及对连接蛋白表达的影响

目的 研究Sirt1和连接蛋白在银屑病皮损中的表达,以及Sirt1的异常表达与活化对体外培养的人永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)连接蛋白表达水平的影响.方法 ①利用免疫组化技术检测银屑病皮损中Sirt1、紧密连接蛋白(ZO-1、occludin)、黏着连接蛋白(E-cadherin)的表达与定位.②体外培养皮肤H...     

罗格列酮对HaCaT细胞增殖及β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨罗格列酮对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖的影响.方法 用不同浓度的罗格列酮处理HaCaT细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HaCaT细胞增殖活性;蛋白免疫印迹法测定HaCaT细胞β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达水平.结果 不同浓度的罗格列酮对HaCaT细胞体外增殖均具有抑制作用,药物作用48 h后对HaCaT细胞体外增殖的抑制率分别为18.9％、23.7％、35.1％、44.6％,与溶媒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).罗格列酮处理HaCaT细胞后,β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达明显下调.结论 罗格列酮抑制HaCaT细胞的体外增殖的机制可能与β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1的表达下调有关.     

佛波酯对HaCaT细胞环氧合酶-2表达水平的影响

目的 研究佛波酯对培养的人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞环氧合酶-2（COX-2）表达水平的影响，探讨佛波酯的皮肤细胞毒性机制。方法 以体外培养的HaCaT细胞为对象，采用RT－PCR和Western印迹方法，检测HaCaT 细胞经0.1，1.0，10 mg/L佛波酯处理24 h后COX-2 mRNA和蛋白表达情况。结果 对照组HaCaT 细胞COX-2 mRNA和蛋白微弱表达或不表达，1.0，10.0 mg/L佛波酯组COX-2 mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组和0.1 mg/L佛波酯组（P值均 < 0.01），而且10.0 mg/L佛波酯组均高于1.0 mg/L佛波酯组，差异均有统计学意义（P < 0.01）。结论 佛波酯可能通过上调HaCaT细胞表达COX-2，促进前列腺素的合成释放，参与皮肤角质形成细胞恶性肿瘤的发生。     

CXCR7在常见皮肤恶性肿瘤及其细胞株中的表达及意义

目的 探讨趋化因子受体CXCR7在皮肤鳞状细胞癌、基底细胞癌、侵袭性皮肤黑素瘤及其细胞株中的表达及其意义。方法 收集30例皮肤鳞状细胞癌、25例基底细胞癌、30例皮肤黑素瘤的癌组织,采用免疫组织化学方法,检测CXCR7蛋白表达水平。采用RT-PCR、细胞免疫组化方法检测CXCR7在A375、M14、A431、HaCaT细胞株中mRNA及蛋白水平。结果 CXCR7在侵袭性皮肤黑素瘤中表达明显,高表达率为80%（24/30）,皮肤鳞状细胞癌及基底细胞癌分别为26.67%（8/30）、8%（2/25）;皮肤黑素瘤CXCR7高表达率与鳞状细胞癌、基底细胞癌比较,差异均有统计学意义（χ2值分别为17.16和28.36,P值均 < 0.05）。CXCR7 mRNA在A375、M14、A431细胞株中均可检出,其中A375表达最强,而HaCaT细胞不表达;细胞免疫组化显示,仅在A375细胞见棕黄色颗粒着色。结论 皮肤黑素瘤及其细胞株A375高表达CXCR7,其可能参与了其恶性侵袭与转移。     

Increased expression of the histamine H4 receptor following differentiation and mediation of the H4 receptor on interleukin‐8 mRNA expression in HaCaT keratinocytes

Recent in vivo studies have demonstrated involvement of the histamine H4 receptor in pruritus and skin inflammation. We previously reported that an H4 receptor antagonist attenuated scratching behaviour and improved skin lesions in an experimental model of atopic dermatitis. We also reported the expression of the H4 receptor in human epidermal tissues. In this study, we investigated the expression of H4 receptor mRNA and the function of the receptor in a culture system that mimics in vivo inflammation on the HaCaT human keratinocyte cell line. Increased expression of the H4 receptor was observed in HaCaT cells following differentiation. Treatment of HaCaT cells with histamine and TNFα enhanced the mRNA expression of interleukin (IL)‐8. These increases in expression were significantly inhibited by the H4 receptor antagonist JNJ7777120. Our results indicate that IL‐8 mRNA expression might be enhanced by histamine and TNFα via H4 receptor stimulation in keratinocytes.     

阿维A对人表皮鳞状细胞癌A431细胞株生长及凋亡的影响

目的 研究阿维A对上皮鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生长的影响及其诱导凋亡作用。方法 以体外培养的人表皮鳞癌细胞A431细胞和角质形成细胞HaCaT细胞为研究对象,用MTT法观察阿维A对A431细胞和HaCaT细胞的生长抑制作用,用光镜和电镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰的出现,Annexin-V染色证实凋亡的发生。结果 随着阿维A作用时间的延长及剂量的增加,对A431细胞增殖的抑制作用增加。同样浓度和同样作用时间的阿维A对A431细胞增殖的抑制率高于对HaCaT细胞的抑制率。光镜和电镜观察显示随阿维A作用时间延长,A431凋亡细胞增多。流式细胞仪检测显示随阿维A作用时间的延长,亚G1期凋亡峰明显增加,Annexin-V染色阳性细胞数增多。结论 阿维A具有抗上皮鳞癌细胞生长及诱导上皮鳞癌细胞凋亡作用。     

Transient receptor potential vanilloid-1 mediates heat-shock-induced matrix metalloproteinase-1 expression in human epidermal keratinocytes

Transient receptor potential vanilloid-1 (TRPV1), a heat-gated channel, was recently found on human keratinocytes and the activation of epidermal TRPV1 was known to induce release of proinflammatory mediators. However, the functional consequences of TRPV1 activation in cutaneous physiology and pathology have not been elucidated clearly. In this study, we investigated the role of TRPV1 on the matrix metalloproteinase (MMP)-1 expression induced by heat shock in human epidermal keratinocytes. Heat shock induced the expression of MMP-1 mRNA and protein in a temperature-dependent manner in an immortalized human keratinocyte cell line (HaCaT) and normal human epidermal keratinocytes (NHK). Heat-shock-induced MMP-1 expression was decreased by treatment of the TRPV1 inhibitors (capsazepine and ruthenium red) or knockdown of TRPV1 using RNA interference in HaCaT cells. Overexpression of TRPV1 greatly increased heat-shock-induced MMP-1 promoter activity in HEK 293 cells. Furthermore, direct activation of TRPV1 by capsaicin, a TRPV1 agonist, increased MMP-1 expression. We found that heat shock induced calcium influx through TRPV1 and that extracellular calcium was necessary for heat-shock-induced MMP-1 expression in HaCaT cells. Taken together, our results suggest that heat-shock-induced MMP-1 expression is mediated by activation of TRPV1 and is dependent on a calcium-dependent signaling process in human epidermal keratinocytes.     

结合珠蛋白在正常人表皮细胞及HaCaT细胞中的表达

目的 检测正常人表皮细胞及HaCaT细胞中结合珠蛋白(Hp)mRNA及蛋白的表达。方法 用原位杂交及RT-PCR法检测正常人表皮细胞及HacaT细胞中Hp mRNA的表达，用免疫组化法检测正常人表皮中Hp的表达；用免疫组化法及蛋白质免疫印迹法检测HaCaT细胞中Hp的表达。结果 在正常人表皮角质形成细胞(KC)及HaCaT细胞中Hp mRNA表达阳性；正常人表皮朗格汉斯细胞(LC)中Hp mRNA表达阴性；正常人表皮内可见Hp阳性的树突状细胞。用免疫组化法在每个HaCaT细胞胞质中未见明显Hp染色，但用蛋白质免疫印迹法在HacaT细胞中检测到Hp蛋白。结论 正常人KC及HaCaT细胞有合成Hp能力，正常人表皮LC无合成Hp的能力，在HaCaT细胞中有少量Hp表达。