针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌胰岛素受体底物和葡萄糖转运蛋白4的影响

【目的】观察针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌胰岛素受体底物-1（IRS-1）、胰岛素受体底物-2（IRS-2）和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的影响。【方法】将32只SD大鼠随机分成正常组、正常针刺组、模型组和模型针刺组,采用葡萄糖氧化酶法、酶联免疫吸附法（ELISA）、实时荧光定量PCR等方法,检测并比较各组大鼠空腹血糖(FPG),血浆胰岛素(FINS),胰岛素敏感性指数(ISI),血清C-肽(C-P),骨骼肌IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达。【结果】模型组大鼠的FPG、 FINS、C-P水平较正常组显著升高（P＜0.01), ISI, IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达较正常组显著降低(P＜0.01);模型针刺组的FPG、 FINS、 C-P水平较模型组显著降低（P＜0.05或P＜0.01), ISI, IRS-1、 IRS-2、 GLUT4 mRNA表达较模型组显著升高(P＜0.01)。【结论】针刺可能在基因转录水平对IRS-1、 IRS-2、 GLUT4产生影响,从而改善PI3K通路的信号转导。     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4和胰岛素信号传导蛋白的影响

目的：观察游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）和胰岛素信号传导蛋白Grb2及ERK2的影响。方法：分离、培养新生Sprague-Dawley大鼠骨骼肌细胞,分别与软脂酸（0．25mmol/L)或油酸（0．125mmol/L)孵育12、24、36h,提取蛋白后用Western印迹法检测GLUT4、Grb2和ERK2的蛋白水平;用斑点印迹杂交法检测骨骼肌细胞内GLUT4 RNA含量的变化。结果：经软脂酸和油酸孵育12、24、36h后,大鼠骨骼肌细胞GLUT4的蛋白和RNA水平均显著降低（P＜0．05）;同时,Grb2和ERK2的蛋白水平也明显下降（P＜0．05）。结论：游离脂肪酸可抑制GLUT4的基因及蛋白表达和降低胰岛素信号传导蛋白Grb2和ERK2的蛋白表达水平,这可能会影响胰岛素的信号传导作用和骨骼肌的葡萄糖摄取,引起骨骼肌的胰岛素抑抗。     

胰岛素受体底物1与肝硬化胰岛素抵抗的研究进展

肝硬化与胰岛素抵抗密切相关,临床表现为高糖血症、高胰岛素血症、高脂血症以及各种细胞因子的异常增高,其病理机制目前尚不明确。近来研究发现,肝硬化胰岛素抵抗与胰岛素受体底物有关,而胰岛素受体底物是胰岛素信号传导通路中的关键信号分子,它可通过表达上调或下调、翻译后修饰,以及亚细胞定位来改变胰岛素信号的传导,其中翻译后修饰中的磷酸化/去磷酸化显得尤为重要且较为复杂。再者,不同病因的肝硬化胰岛素受体底物的作用途径并不相同。     

吡格列酮对3T3-L1细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的研究噻唑烷二酮类药物吡格列酮对3T3-L1细胞中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA和蛋白表达的影响。方法将3T3-L1细胞随机分为3组对照组3T3-L1细胞进行正常的诱导分化,实验1组在3T3-L1细胞诱导时加入吡格列酮(0.1mmol/L),实验2组在诱导分化后成熟的3T3-L1脂肪细胞中加入吡格列酮(0.1mmol/L)。提取细胞总RNA和总蛋白做RT-PCR和Western-blot测定GLUT4mRNA和蛋白的表达情况。结果与对照组比较实验组GLUT4mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论吡格列酮促进3T3-L1脂肪细胞GLUT4mRNA和蛋白表达。     

高葡萄糖和高胰岛素对葡萄糖转运子4影响的研究

胰岛素刺激引起的葡萄糖转运主要由葡萄糖转运子(GLUT)4介导。GLUT4的亚细胞分布、基因表达量以及功能活性,都将直接降影响胰岛素作用下葡萄糖的跨膜转运。高葡萄糖和高胰岛素可加强己糖胺途径来抑制GLUT4转位过程、下调胰胰岛素受体底物的蛋白水平和酪氨酸磷酸化、从转录和转录后水平抑制GLUT4的基因表达、直接降低GLUT4内在活性,继而使胰岛素通过GLUT4介导的糖转运下降,引起胰岛素抵抗。     

胰岛素受体底物—1和葡萄糖转运蛋白基因多态性与糖尿病及糖尿 …

目的 探讨胰岛素受体底物－１（ＩＲＳ－１）和葡萄糖转运蛋白（ＧＬＵＴ１）的基因多态性与糖尿病及其糖尿病肾病的关系。方法 应用ＰＣＲ－＝ＲＦＬＰ方法对１３１例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者ＩＲＳ－１和ＧＬＵＴ１基因多态性进行了观察,并结合肾脏病变、体重指数（ＢＭＩ）和胰岛素敏感指数（ＩＳＩ）进行了分析。结果ＩＲＳ＿１基因多态性在ＮＩＤＤＭ和正常人中的分布没有明显差异。ＮＩＤＤＭ患者ＧＬＵＩ１     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体与胰岛素受体底物1的表达和酪氨酸磷酸化的影响

目的：探讨游离脂肪酸是否通过改变胰岛素信号传导蛋白的表达和功能状态影响骨骼肌细胞的葡萄糖代谢。方法：分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠骨骼肌细胞。软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）与骨骼肌细胞共同孵育６、１２、２４ｈ，提取蛋白后用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测胰岛素受体和胰岛素受体底物１（ＩＲＳ１）的蛋白水平，同时应用免疫沉淀和免疫杂交技术检测胰岛素刺激后胰岛素受体β亚单位和ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化程度。结果：（１）软脂酸或油酸作用后骨骼肌细胞的胰岛素受体蛋白质表达量无改变。（２）骨骼肌细胞与软脂酸或油酸共同孵育１２和２４ｈ后胰岛素受体β亚单位的酪氨酸磷酸化显著降低。（３）骨骼肌细胞在软脂酸或油酸作用后各个时间点的ＩＲＳ１蛋白质量均明显降低。（４）骨骼肌细胞经软脂酸或油酸作用后ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化在各个时间点均显著降低。结论：游离脂肪酸可能通过抑制骨骼肌细胞的ＩＲＳ１蛋白质表达和胰岛素受体的酪氨酸磷酸化以及ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化阻滞胰岛素信号传导，引起骨骼肌胰岛素抵抗     

胰岛素受体底物-1和葡萄糖转运蛋白基因多态性与糖尿病及糖尿病肾病的关系

目的探讨胰岛素受体底物１（ＩＲＳ１）和葡萄糖转运蛋白（ＧＬＵＴ１）基因多态性与糖尿病及其糖尿病肾病的关系。方法应用ＰＣＲＲＦＬＰ方法对１３１例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者ＩＲＳ１和ＧＬＵＴ１基因多态性进行了观察，并结合肾脏病变、体重指数（ＢＭＩ）和胰岛素敏感指数（ＩＳＩ）进行了分析。结果ＩＲＳ１基因多态性在ＮＩＤＤＭ和正常人中的分布没有明显差异。ＮＩＤＤＭ患者ＧＬＵＴ１基因ＸｂａⅠ（＋／－）基因型和ＸｂａⅠ（－）等位基因的发生率明显高于正常人。ＸｂａⅠ（＋／－）基因型和ＸｂａⅠ（－）等位基因在糖尿病肾病（７５％和４４％）的发生频率明显高于不伴肾病者（４４％和２９％）和正常人（３３％和２１％），而ＧＬＵＴ１基因多态性在不伴肾病者与正常人之间无明显差异。ＩＳＩ在ＸｂａⅠ（＋／＋）、ＸｂａⅠ（＋／－）和ＸａｂⅠ（－／－）３种基因，分别为０８２、０７６和０４８；ＧＬＵＴ１基因各基因型患者间ＢＭＩ差异无显著意义。结论ＧＬＵＴ１基因ＸｂａⅠ（－）等位基因不仅与糖尿病肾病的易感性相关，而且可能还与患者胰岛素抵抗的发生有关。     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体与胰岛素受体底物1？…

目的：探讨游离脂肪酸是否通过改变胰岛素信号传导蛋白的表达和功能状态影响骨骼肌细胞的葡萄糖代谢。方法；分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠骨骼肌细胞，软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１）与骨骼肌细胞共同孵育６，１２，２４ｈ，提取蛋白后用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测胰岛素受本和胰岛素受体底物１（ＩＲＳ－１）的蛋白水平，同时应用免疫沉淀和免疫杂交技术检测胰岛素刺激后胰岛素受体０６     

水杨酸钠对胰岛素抵抗大鼠胰岛素受体底物-1的影响

目的 探讨抗炎药水杨酸钠对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性的影响及其作用机制.方法 分别给大鼠静脉输注脂肪乳+肝素,脂肪乳+肝素+水杨酸钠和生理盐水7 h,并在输注的最后2 h,行清醒状态高胰岛素-正血糖钳夹试验,测定血浆葡萄糖、游离脂肪酸(FFA)、胰岛素和C-肽水平,检测肝脏、肌肉中胰岛素受体底物-1(IRS-1)及307位丝氨酸磷酸化的IRS-1表达.结果 输注脂肪乳大鼠葡萄糖输注率(GIR)是输注生理盐水大鼠的45%,水杨酸钠可使GIR提高1.3倍(P<0.01).脂肪乳输注组大鼠肝脏及肌肉中307位丝氨酸磷酸化的IRS-1分别为生理盐水输注组大鼠的3倍和3.8倍(P<0.001),输注水杨酸钠,肝脏、肌肉307位丝氨酸磷酸化的IRS-1下降45%、20%(P<0.05).结论 FFA增高引起肝脏及肌肉中307位丝氨酸磷酸化的IRS.1水平增高.可能是导致胰岛素抵抗发生的机制之一,应用水杨酸钠,大鼠肝脏及肌肉组织中IRS.1丝氨酸磷酸化水平下降,胰岛素抵抗改善.抗炎药物水杨酸钠可能通过抑制FFA引起的IRS-1丝氨酸磷酸化,而发挥改善胰岛素抵抗的作用.     

胰岛素对1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的嗜铬细胞瘤细胞损伤的保护

目的 观察胰岛素处理是否减轻1-甲基4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡,探讨可能的机制.方法 测定不同处理后PC12细胞的存活和细胞凋亡情况,观察胰岛素处理对细胞内信号蛋白激酶B(Akt)、糖元合成酶激酶3β(GSK3β)和微管相关蛋白tau磷酸化的影响.结果 胰岛素处理能保护细胞,增加撤除血清后细胞的活力(P＜0.01);增强PC12细胞对100μmol/L MPP+毒性的耐受(P＜0.05),这一作用可以被Akt抑制剂--LY294002阻断.Hoechest染色和流式细胞检测显示,胰岛素干预减少细胞凋亡.100 nmol/L胰岛素处理细胞,Akt ser-473磷酸化程度升高(P＜0.01);GSK3βser-9磷酸化增强(P＜0.01).胰岛素干预,减少tau pS199过磷酸化,而不改变tan pT231的磷酸化.结论 胰岛素通过其细胞内信号通路,调节Akt/GSK3β的磷酸化,减轻MPP+诱导的PC12细胞凋亡.     

罗格列酮对油酸诱导的慢性胰腺炎大鼠肝脏细胞IR及IRS-1表达的调节

目的:观察肝脏胰岛素受体(IR)和胰岛素受体底物-1(IRS-1)表达的改变,探讨罗格列酮防治继发性糖尿病的可能机制。方法:用油酸经胰胆管插管灌注的方法诱导CP,将成模大鼠随机分成模型组、治疗组、对照组,以罗格列酮治疗7d,Westernblots法测定各组大鼠肝细胞IR和IRS-1表达的改变。结果:模型组IR和IRS-1表达较对照组都有明显降低(P<0.05);治疗组IR和IRS-1表达较对照组有不同程度的上调(P<0.05)。结论:胰岛素信号转导异常可能参与了CP继发胰源性糖尿病机制;罗格列酮在防治继发性胰源性糖尿病动物模型方面具有一定治疗作用。     

高脂饮食对西藏小型猪胰岛素抵抗及肝胰岛素受体底物1、2表达的影响

目的 探讨高脂饮食对西藏小型猪胰岛素抵抗（IR）及肝胰岛素受体底物（IRS）1、2表达的影响。方法 将10只西藏小型猪随机分为正常对照组（Ctr）5只饲喂普通饲料、IR模型（IR model）组5只饲喂高脂饲料,连续造模12周。造模12周后,称重并测量体长,计算体质量指数（BMI）,空腹取前腔静脉血测定总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）、空腹血糖（FBG）和胰岛素（insulin）,计算胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment-estimated insulin resistance,HOMA-IR）;同时进行糖耐量试验,并计算糖耐量曲线下面积（AUC）;取肝组织检测IRS-1和IRS-2基因和蛋白表达,并行油红O、PAS和HE染色,分别观察肝脂质沉积、糖原及组织病理变化。结果 与正常对照组比,IR模型组体重、BMI指数、TC、LDL-C、HDL-C、FFA、FBG、insulin和HOMA-IR指数均显著升高（P<0.05,P<0.01）;糖耐量试验显示血糖和胰岛素水平曲线下降延缓,而AUC_血糖和AUC_胰岛素均明显升高（P<0.05,P<0.01）;肝组织中出现脂质沉积、糖原增加和局部肝细胞浊肿、部分胞核消失或被挤向一端,偶见淋巴细胞浸润;同时肝组织中IRS-1和IRS-2 mRNA和蛋白表达均显著降低（P<0.05,P<0.01）。结论 高脂饮食可引起西藏小型猪胰岛素抵抗,肝组织IRS-1和IRS-2表达降低是高脂饮食影响西藏小型猪胰岛素敏感性的分子机制之一。     

宫内生长迟缓大鼠成年期发生胰岛素抵抗的机制

目的:探讨宫内生长迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)的雄性大鼠肝胰岛素受体(insulin recep-tor,IR)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)、胰岛素受体底物-2(insulin receptor substrate-2,IRS-2)、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase,P13K)等胰岛素信号传导蛋白及胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)的表达及与其发生胰岛素抵抗的关系.方法:用雌性大鼠妊娠期半定量饥饿法建它IUGR大鼠模型.RT-PCR法检测出生后12周龄雄性大鼠肝IR,IRS-1,IRS-2,PDK和IGF-1 mRNA的表达,免疫组织化学法检测肝IR,IQRS-1和IRS-2蛋白的表达.结果:12周龄IUGR雄性大鼠肝IR mRNA表达(0.41±0.06)较对照组(0.62±0.11)下降(P<0.05),而蛋白的表达(6.21±0.57)较对照组(6.69±0.47)无明显降低(P>0.05);IRS-1 mRNA(0.77±0.20)较对照组(1.32±0.42),IRS-2 mRNA(1.05±0.280)较对照组(1.48±0.40),IRS-1蛋白(2.15±0.23)较对照组(5.96±0.38),IRS-2蛋白(4.33±0.29)较对照组(7.08±0.35)的表达均受到抑制(P<0.05);PDK mRNA(1.12±0.19)的表达与对照组(1.18±0.24)差异无统计学意义(P>0.05);肝IGF-1mRNA的表达(0.55±0.12)较对照组(1.22±0.34)明显降低(P<0.05);相关分析显示IGF-1 mRNA在肝的表达降低与IRS-1 mRNA(r=0.821,P<0.05)和IRS-2 mRNA(r=0.643,P<0.05)的表达减少有关.结论:IUGR雄性大鼠成年期肝胰岛素受体信号传导蛋白IRS-1和IRS-2的表达受剑明显抑制,并导致肝IGF-1表达降低,可能与其生后的牛长迟缓及胰岛素抵抗有关;肝IR和PDK的表达与IUGR大鼠胰岛素抵抗的发生无明显关系.     

α-亚麻酸对大鼠骨骼肌细胞胰岛素信号转导蛋白和葡萄糖转运蛋白4的影响

目的:从胰岛素信号转导方面研究α-亚麻酸对胰岛素抵抗的作用及可能的机制,为富含α-亚麻酸的植物油应用于糖尿病的防治提供实验依据。方法:原代培养大鼠骨骼肌细胞,应用免疫印迹法检测α-亚麻酸对大鼠骨骼肌细胞蛋白激酶B(PKB)信号转导通路及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响。结果:在0.125-1.0μmol/L的浓度范围,α-亚麻酸对骨骼肌细胞PKB的磷酸化及GLUT4蛋白的水平呈剂量一效应关系及时间-效应关系,对PKB的表达水平未见影响;采用P13K抑制剂LY294002(15μmol/L)抑制P13K/PKB信号通路后,GLUT4蛋白水平、PKB磷酸化同空白对照相比较均无显著性差别(P>0.05)。结论:α-亚麻酸通过作用于肌细胞胰岛素的P13K/PKB信号通路,进而调节GLUT4的蛋白表达水平,增加骨骼肌对胰岛素的敏感性,减轻或避免骨骼肌胰岛素抵抗和糖代谢障碍。     

胰岛素受体底物-1与骨代谢

胰岛素受体底物（insulinreceptorsubstrate,IRS）是胰岛素信号传导通路中受体后水平的重要信号蛋白。IRS-1对骨骼生长、骨转换以及骨折愈合等均具有重要作用,为代谢性骨病和骨质疏松的防治提供了新思路。     

葡萄糖和胰岛素对4T1肿瘤细胞VEGF mRNA表达的影响

目的研究不同浓度的葡萄糖和胰岛素对4T1肿瘤细胞血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达的影响。方法体外常规培养4T1肿瘤细胞,根据细胞培养液RPMI1640培养基中所含葡萄糖和胰岛素浓度的不同将4T1肿瘤细胞分为15组。每组设双复孔,置于37℃、5％C02的细胞培养箱培养,48h后收集细胞,提取总RNA,RT—PCR同时扩增目的片段VEGF和内参照B—actin,琼脂糖凝胶电泳,扩增产物在凝胶成像系统上扫描分析,计算VEGFmRNA相对表达量。整个实验过程重复3次。结果培养液中含有不同浓度葡萄糖的B、c、D、E组VEGFmRNA的表达与A组相比变化不明显（P〉0．05）。F组、G组和J组VEGFmRNA的表达与A组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）;在含有高浓度胰岛素的H组、I组VEGFmRNA的表达水平与A组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。L组和M组的VEGFmRNA的表达水平与A组相比差异有统计学意义（P〈0．05）;而K组、N组和O组与A组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论高浓度的胰岛素能够使4T1肿瘤细胞VEGFmRNA的表达上调,葡萄糖浓度的变化对4T1肿瘤细胞VEGFmRNA的表达无明显影响。