NAF1基因对舌鳞状细胞癌细胞增殖转移能力的影响

目的使用小干扰RNA（si RNA）干扰舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中营养缺乏自噬因子1（NAF1）的表达,观察对NAF1基因的沉默效果,并测定沉默后Tca8113细胞生长增殖侵袭能力的变化。方法建立小干扰RNA（si-NAF1）组、阴性对照（si-NC）组、对照（vector）组。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和Western blotting法检测NAF1、细胞周期素D1（cyclin D1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达。MTT实验检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法观察各组细胞侵袭能力变化。结果与vector组相比,NAF1-si RNA干预Tca8113细胞后,si-NAF1组NAF1的m RNA和蛋白表达水平都明显降低（χ^2=25.65,t=-17.1,P〈0.05）,cyclin D1、MMP-2蛋白表达水平降低（tcyclin D1=-14.7,tMMP -2=-9.6,P〈0.05）,细胞增殖能力明显降低（t=-36.77,P〈0.05）,克隆形成能力明显减弱（t=-12.33,P〈0.05）,侵袭能力明显降低,si-NAF1组穿过Transwell膜的细胞少于vector组。结论通过si RNA技术降低NAF1表达可能通过降低cyclin D1水平抑制舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖能力,通过影响MMP-2蛋白表达水平,抑制Tca8113细胞的侵袭能力。     

微小RNA-30a靶向Beclin1抑制舌鳞状细胞癌细胞自噬活性的研究

目的研究微小RNA(mi RNA)-30a转染对舌鳞状细胞癌细胞自噬相关基因Beclin1表达及其自噬活性的影响,探讨舌鳞状细胞癌细胞自噬活性调控的相关机制。方法利用脂质体转染技术,将内源性mi RNA-30a模拟物和抑制物分别转染至舌鳞状细胞癌UM1、UM2和SCC25细胞。实验设mi RNA-30a mimic组、mi RNA-30a inhibitor组和对照组;通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测转染前后Beclin1基因m RNA表达变化,通过Western blot检测Beclin1、LC3的蛋白表达变化。结果在mi RNA-30a mimic组中,Beclin1和自噬标记蛋白LC3-Ⅱ表达量与对照组相比均明显下降(P<0.05);在mi RNA-30a inhibitor组中,Beclin1和LC3-Ⅱ表达量较对照组均明显上升(P<0.05)。结论 mi RNA-30a负调控Beclin1表达,并抑制舌鳞状细胞癌细胞的自噬水平。     

雷帕霉素诱导自噬抑制舌鳞癌细胞增殖和迁移

目的探讨自噬诱导对舌鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法应用雷帕霉素(Rap)诱导上调舌鳞癌Tca8113细胞自噬活性,Western blot检测诱导后Tca8113细胞自噬标记蛋白Beclin1和LC3的表达变化;MTT法检测自噬诱导对细胞增殖的影响;Wound-healing检测诱导后细胞迁移能力改变;SPSS 19.0统计软件进行数据分析。结果 Rap诱导6h即可上调舌鳞癌Tca8113细胞自噬标记蛋白LC3-Ⅱ表达,24h时LC3-Ⅱ表达最强,自噬活性最高(P<0.05)。与对照组相比,Rap诱导后细胞生长明显抑制(P<0.05),迁移速率减慢。结论上调舌鳞癌细胞自噬活性可以抑制其增殖和迁移。     

低氧增强自噬促进舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭

目的探讨低氧条件下对舌鳞状细胞癌（TSCC）自噬活性和迁移能力的影响。 方法应用含1% O₂的低氧培养箱培养TSCC UM1细胞,Western blot检测低氧诱导3、6、9、12、24 h后低氧诱导因子1α（HIF-1α）和自噬标记蛋白Beclin-1、自噬相关蛋白5（ATG5）和微管相关蛋白轻链3（LC3）的表达变化;细胞划痕实验检测低氧诱导后细胞迁移能力的改变;Transwell侵袭小室实验检测低氧诱导后细胞的侵袭能力;SPSS 13.0统计软件进行数据分析。 结果低氧条件下,与对照组（0.527 ± 0.055）相比,TSCC UM1细胞自噬体双层膜标记蛋白LC3Ⅱ的表达（1.206 ± 0.053）增加（t= 12.96,P<0.001）,同时自噬相关蛋白Beclin-1表达量（1.151 ± 0.078）较对照组（0.775 ± 0.062）明显提高（t= 6.736,P= 0.001）,ATG5的表达（1.231 ± 0.06）较对照组（0.711 ± 0.052）也明显上升（t= 7.834,P= 0.001）。与对照组相比,低氧诱导后细胞迁移能力（0.349 ± 0.024）较对照组（0.788 ± 0.037）明显增加（t= 9.918,P= 0.001）,细胞侵袭能力（23 ± 2）较对照组（71 ± 4）明显增强（t= 9.528,P= 0.001）。 结论低氧条件下可以增强TSCC细胞自噬活性,促进其迁移和侵袭。     

沉默RohA基因对舌鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的 通过RNA干扰技术沉默RhoA基因从而探讨RhoA对舌癌细胞增殖和生长的影响及其作用机制。方法体外培养舌鳞状细胞癌SCC-4细胞,以小分子干扰RNA转染沉默RhoA基因的表达。实验分为3组：实验组（又分为实验1组和实验2组,脂质体分别转染对应序列1的RhoA-siRNA和序列2的RhoA-siRNA）、阴性对照组（脂质体转染NC-siRNA）和空白对照组（不转染siRNA）。采用实时定量聚合酶链反应技术检测SCC-4细胞转染后RhoA mRNA的表达,Western blot检测RhoA、Cyclin D1、p21和p27蛋白的表达,四唑盐比色法检测舌癌细胞生长水平和倍增时间。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,实验组舌癌细胞的RhoA基因及蛋白表达降低,p21、p27蛋白表达升高,Cyclin D1蛋白表达降低,细胞倍增时间延长,增殖能力降低（P<0.05）。结论 沉默RhoA基因可以抑制舌癌细胞的增殖和生长,RhoA基因通过调控细胞周期信号转导途径影响舌癌细胞的增殖,RhoA基因可以成为舌癌基因治疗的靶点。     

Beclin1介导的自噬在牙周炎相关肝损伤中的作用研究

目的:观察牙周炎大鼠肝组织中自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及选择性自噬接头蛋白1(SQSTM1/p62)的表达情况,探讨Beclin1介导的自噬在牙周炎相关肝损伤中的作用。方法:随机选取12只雄性Wistar大鼠(8周龄)分为2组,即牙周炎组和对照组(n=6)。牙周炎组采用结扎法建立牙周炎模型,对照组不做处理。8周后检查并记录各组大鼠上颌第一磨牙牙周临床指标,包括龈沟出血指数(SBI)、牙周探诊深度(PD)和牙齿松动度(TM);检测血清中肝功能指标,包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、高密度脂蛋白(HDL)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL);采用苏木精-伊红(HE)染色和油红O染色检测肝组织、牙周组织病理情况及肝组织脂肪性变;实时荧光定量PCR和Western blot检测肝组织中Beclin1、LC3及p62的基因和蛋白表达水平。结果:较对照组,牙周炎组的牙周临床指标(SBI、PD、TM)及HE染色均显示有明显炎症反应;肝功能指标ALT、AST、TC、TG、LDL升高,HDL降低;肝组织HE染色和...     

自噬相关基因Beclin1和MAP1LC3在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:通过检测自噬相关基因Beclin1和MAP1LC3在口腔鳞状细胞癌中的表达,探讨自噬在口腔鳞状细胞癌发生中的作用。方法:采用免疫组织化学方法,观察自噬相关基因Beclin1和MAP1LC3在47例口腔鳞状细胞癌和16例癌旁组织中的表达情况。结果:Beclin1在口腔鳞状细胞癌组织和癌旁组织中的表达率分别为40.43%和75%;MAP1LC3在口腔鳞状细胞癌组织和癌旁组织中的表达率分别为29.79%和62.5%,Beclin1和MAP1LC3在癌组织中的表达率明显低于癌旁组织,2组间均有显著差异(P<0.05)。Beclin1在高分化鳞状细胞癌组织中的表达率为42.31%,在中低分化鳞癌中的表达率为38.1%;MAP1LC3在高分化鳞状细胞癌组织中的表达率为30.77%,在中低分化鳞癌中的表达率为28.57%,Beclin1和MAP1LC3这2组之间的差异均无显著性差异。Beclin1在有淋巴结转移的癌组织和无淋巴结转移的癌组织中的表达率分别为9.09%和50%;MAP1LC3在有淋巴结转移的癌组织和无淋巴结转移的癌组织中的表达率分别为0%和38.89%,这2组均有显著性差异(P<0.05)。结论:Beclin1和MAP1LC3在口腔鳞状细胞癌中表达明显低于癌旁组织,在有淋巴结转移的口腔鳞状细胞癌组织中的表达明显低于无淋巴结转移组织。     

舌鳞状细胞癌侵袭和转移的研究进展

舌鳞状细胞癌是头颈鳞状细胞癌中最常见的恶性肿瘤,尽管医疗技术水平已经取得较大进步,但舌鳞状细胞癌患者的预后仍不理想,局部或区域性复发及颈部淋巴结转移仍为临床治疗的巨大挑战。文章介绍了与舌鳞状细胞癌侵袭和转移相关的一系列蛋白和基因、micro RNA、上皮间质转化和肿瘤干细胞行为的研究进展。随着对舌鳞状细胞癌侵袭和转移机制研究的不断深入,舌鳞状细胞癌侵袭和转移的生物学行为难题将有望被攻克。     

小分子RNA干扰沉默Tiam1基因对舌鳞状细胞癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨小分子RNA干扰(siRNA)沉默Tiam1基因对舌鳞状细胞癌细胞生物学特性的影响。方法:培养人舌癌细胞SCC-4,随机分为siRNA-Tiam1组、siRNA-对照序列组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术和Western blot法检测不同转染组细胞中Tiam1基因和蛋白表达,MTT法检测不同转染组细胞增殖情况,利用流式细胞术检测不同转染组细胞凋亡情况,Transwell法检测不同转染组细胞迁移和侵袭能力。结果:siRNA-Tiam1组细胞中Tiam1基因和蛋白相对表达量均低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);MTT实验结果显示,与siRNA-对照序列组和空白对照组相比,siRNA-Tiam1组细胞24 h、48 h、72 h和96 h时A值均降低(P<0.05);流式细胞检测结果显示,siRNA-Tiam1组细胞凋亡率显著高于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-Tiam1组迁移细胞数和侵袭细胞数均低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05)。结论:特异性沉默Tiam1基因可有效抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖能力,加速细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力。     

p53和自噬相关基因Beclin1在唾液腺多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤中的表达及意义

目的: 探讨p53、自噬相关基因Beclin1的表达及与唾液腺多形性腺瘤之间的关系。方法: 应用免疫组化方法检测108例唾液腺多形性腺瘤、20例癌在多形性腺瘤中的p53及自噬相关基因Beclin1的表达, 并结合临床病理因素进行分析。采用SPSS20.0软件包对数据进行统计分析。结果: p53在多形性腺瘤中的阳性率(9%)显著低于癌在多形性腺瘤中(14%)(P<0.001);Beclin1在多形性腺瘤中的阳性率(91%)则显著高于癌在多形性腺瘤中(11%)(P<0.001), 但2种基因的表达与患者的性别、年龄、生长时间、肿瘤大小、位置和复发等(P>0.05)无显著相关性。p53与Beclin1 在多形性腺瘤中的表达呈负相关 (r=-0.330, P<0.05)。结论: p53与Beclin1蛋白表达水平与多形性腺瘤发生、发展关系密切。肿瘤发生过程中, 细胞自噬作用降低和抗凋亡作用增强同时并存, 提高自噬能力将成为肿瘤治疗的又一途径。     

Bmi1对舌鳞癌侧群细胞迁移、侵袭和增殖能力的调控作用及机制探讨

目的: 探讨Bmi1如何调控舌鳞癌侧群细胞的迁移、侵袭和增殖能力。 方法: 首先采用Hoechst33342法,利用流式细胞仪分选舌鳞癌细胞株UM1（高转移株）中的侧群细胞（side population cell, SP）和非侧群细胞（non-side population cell, Non-SP）。Transwell 实验检测沉默Bmi1后SP细胞的迁移、侵袭能力。球囊形成和平板克隆实验检测沉默Bmi1后SP细胞的球囊和克隆形成率;CCK8 实验检测沉默Bmi1后SP细胞的增殖能力。Western免疫印迹检测沉默Bmi1后SP细胞中侵袭、转移相关基因（SOD2、Slug）及干细胞标志物（ABCG2、Nanog）的表达水平。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。 结果: 转染Bmi1 siRNA使SP细胞中Bmi1表达水平下调后,SP细胞的迁移和侵袭能力显著下降;球囊形成率和克隆形成率也显著低于对照组;增殖能力受到抑制;SOD2、Slug和干细胞标志物ABCG2和Nanog的表达水平显著下降。 结论: 沉默Bmi1可调控舌鳞癌侧群细胞的迁移、侵袭和增殖。     

shRNA沉默LASP-1对舌鳞状细胞癌SCC9细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨LASP?1在人舌鳞状细胞癌细胞中的表达,并应用shRNA沉默人舌鳞状细胞癌细胞SCC9中LASP?1基因,研究LASP?1对SCC9细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建携带绿色荧光蛋白的LASP?1 shRNA质粒及阴性对照组质粒LASP?1 shNC,通过脂质体转染SCC9细胞,采用MTT法检测细胞增殖;RT?PCR法检测细胞LASP?1 mRNA表达;Western blot检测细胞LASP?1蛋白的表达;运用Transwell小室实验检测细胞迁移能力。结果 LASP?1在舌鳞状细胞癌细胞中高表达;实验组和阴性对照组分别转染相应质粒48 h后细胞均有绿色荧光蛋白表达,表明质粒转染成功;实验组SCC9细胞LASP?1 mRNA和LASP?1蛋白表达明显降低;与空白对照组相比,实验组细胞培养48 h和72 h细胞存活率分别降低了（51.23±1.47）%和（50.07±2.11）%;Transwell实验结果显示, LASP?1基因被沉默后细胞迁移能力明显下降,比对照组降低约43%。结论 LASP?1在舌鳞状细胞癌细胞中高表达,下调LASP?1基因表达可抑制SCC9细胞的增殖和迁移。     

RAC1对人舌鳞癌CAL27细胞迁移、侵袭的影响

目的: 构建RAC1基因小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）,探讨RAC1对人舌鳞癌CAL27细胞侵袭、迁移的影响及其分子机制。 方法: 针对人RAC1基因设计并合成3条siRNA,通过脂质体介导转染进3组人舌鳞癌细胞CAL27中,以抑制RAC1的表达;同时设置阴性对照组（转染无关核苷酸序列）和空白对照组（未转染）,采用实时荧光定量PCR检测细胞中RAC1 mRNA的表达, Western 免疫印迹实验检测RAC1、PAK1、LIMK1蛋白的表达,通过划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。 结果: 细胞转染48 h后,与阴性对照组和空白对照组相比,RAC1干扰组细胞RAC1 mRNA和蛋白表达均显著下降（P<0.05）,PAK1、LIMK1蛋白表达显著下降（P<0.05）,细胞迁移和侵袭能力显著降低（P<0.05）。 结论: 沉默RAC1基因可抑制舌鳞癌CAL27细胞的侵袭和转移,其机制可能与细胞内PAK1、LIMK1的表达下调有关。     

小干扰RNA沉默Dicer酶对人舌鳞癌细胞Tca-8113的增殖和细胞周期的影响

目的研究沉默Dicer酶的表达对人舌鳞癌细胞Tea-8113的增殖和细胞周期的影响。方法实验组转染靶向Dicer酶的siRNA序列;时照组转染尤义序列siRNA;空白组细胞未做转染？采用RNA于扰技术沉默Tea-8113中Dicer酶的表达,通过荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法及免疫组织化学技术,检测Tea-8113转染小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）后Dicer酶的mRNA和蛋白质水平的表达情况;应用噻唑蓝比色法及流式细胞术榆测细胞增殖及细胞周期的变化。结果Tea-8113细胞转染siRNA24h后,实验组Dicer酶mRNA表达量是空白组的0．39倍．表达水平下降,实验组与空白组或对照组比较,表达水平都有所下降,差异有统计学意义（P〈0．05）、转染48h后实验组蛋白质表达较空白组下调53．67％。Dicer酶表达下凋后,Tca-8113细胞增殖加速,G1期细胞百分率减少,S期和G2期细胞百分率增多。结论沉默Dicer酶的表达可加快细胞周期从G1期向S期和G2期进展．促进Tea-8113细胞的生长。     

舌鳞癌侵润和转移的相关病理因素分析及临床意义

为研究舌鳞癌侵润和颈淋巴结转移因素对肿瘤预后的影响，作者对９２例舌鳞癌诸多病理因素经ＳＰＳＳ／ＰＣ＋数据分析软件处理，结果显示：单因素分析，肿瘤侵润方式（ＭＩ）、癌周侵润淋巴细胞密度（ＰＬＩＤ）、Ｔ分期和病理分级与颈淋巴结转移差异有极显著性（Ｐ＜０．００１）。多因素分析只有ＭＩ和ＰＬＩＤ差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。在与侵润方式相关的因素分析中，单因素分析、Ｔ分期、病理分级和ＰＬＩＤ与ＭＩ差异有显著性，多因素分析仅Ｔ分期Ｐ＝０．０４５。ＭＩ和ＰＬＩＤ是与颈淋巴结转移相关的重要因素，Ｔ分期与ＭＩ相关。     

体外沉默法尼基转移酶对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的 通过RNA干扰沉默法尼基转移酶（FTase）,探讨沉默FTase对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响及其相关机制。方法 针对FTase设计并构建3条小干扰RNA（siRNA）,转染人舌鳞状细胞癌CAL27和SCC-4细胞（实验组）,同时设置阴性对照组（转染NC-siRNA）和空白对照组（不转染siRNA）。应用实时荧光定量PCR检测各组细胞FTase、HRAS的mRNA表达,根据FTase mRNA的表达量,选取沉默效率最高的FTase-siRNA转染组作为进一步研究的实验组。蛋白质免疫印迹法检测各组细胞FTase、HRAS、p65、p-p65(S536)、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,实验组FTase的mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）,HRAS的mRNA和蛋白表达无明显变化（P>0.05）,p-p65(S536)、MMP-9、HIF-1α、VEGF蛋白表达下降（P<0.05）,p65蛋白表达无明显变化（P>0.05）;实验组的细胞侵袭和迁移能力降低（P<0.05）。结论 体外沉默舌鳞状细胞癌细胞FTase,可以抑制细胞体外迁移和侵袭能力,为FTase可能作为舌癌治疗的分子靶点提供了一定的理论和实验依据。     

RhoE在舌鳞状细胞癌中的表达及其对细胞迁移和侵袭的影响

目的初步探讨RhoE在舌鳞状细胞癌(TSCC)中的表达水平,及其对TSCC细胞迁移和侵袭的影响及相关机制。方法选取在青岛大学附属青岛市市立医院口腔医学中心颌面外科2017—2019年手术切除的TSCC原发灶48例,采用免疫组织化学法检测标本(TSCC组织、癌旁组织)中RhoE的表达水平,并提取标本的RhoE mRNA和蛋白进一步检测RhoE的表达水平。选取TSCC SCC-4和CAL-27细胞系进行体外实验,采用瞬时转染法过表达RhoE,并应用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)及蛋白质免疫印记法检测过表达效率;细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验分别检测TSCC细胞的迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印记法检测相关蛋白Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1 (ROCK1)、基质金属蛋白酶2 (MMP-2)、基质金属蛋白酶9 (MMP-9)的表达水平;采用GraphPad Prism 8.2.1软件对实验数据进行统计学分析。结果 TSCC组织中RhoE的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);在体外实验中,与空白对照组和阴性对照组相比,过表达实验组TSCC细胞的迁移和侵袭能力显著...     

自噬相关蛋白PTEN、MAP1LC3在舌癌中的表达与意义

目的 探讨自噬相关蛋白人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and ten-sinhomology deleted on chromosome ten,PTEN)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1LC3)在舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)、癌前病变及癌旁组织中的表达及相关性,探讨其与TSCC发生、发展及转移的关系.方法 采用免疫组化SP法检测46例TSCC手术标本及13例癌前病变、13例癌旁组织标本中PTEN、MAP1LC3的蛋白表达,分析其与临床病理特征间的关系.结果 PTEN(X2=9.905,P=0.007)、MAP1LC3(X2=9.577,P=0.008)在TSCC组织、癌前病变、癌旁组织中的蛋白表达差异有统计学意义.在TSCC中,PTEN蛋白的阳性表达率(34.78%)明显低于癌旁组织(69.23%,X2=4.926,P=0.026)及癌前病变组织(76.92%,X2=7.302,P=0.007);MAP1LC3蛋白的阳性表达率(28.26%)明显低于癌旁组织(61.53%,X2=4.896,P=0.027)及癌前病变组织(69.23%,X2=7.275,P=0.007),差异均有统计学意义.PTEN与MAP1LC3蛋白表达与患者年龄、性别、吸烟、饮酒、细胞分化无关(P>0.05).颈淋巴结从无转移到转移以及临床分期越晚,PTEN蛋白及MAP1LC3蛋白的阳性表达率降低,差异有统计学意义(P<0.05).PTEN和MAP1LC3两种蛋白在复发组中阳性表达率皆较低,复发组与非复发组PTEN的蛋白表达差异有统计学意义(X2=4.269,P=0.039),而复发组与非复发组MAP1LC3的蛋白表达差异尚无统计学意义(X2=0.343,P=0.453).PTEN与MAP1LC3蛋白阳性表达呈正相关.结论 自噬相关蛋白PTEN与MAP1LC3的低表达与TSCC的临床病理特征相关,对TSCC的诊断与预后有一定参考价值.