抗ProGRP(31-98)单克隆抗体D-D3的131I标记及其体内生物学分布研究

目的 探讨抗胃泌素释放肽前体(ProGRP)(31-98)单克隆抗体D-D3的131I标记方法 及其在健康昆明小鼠体内的生物学分布规律与特点.方法 采用氯胺-T法用131I标记单克隆抗体D-D3,利用纸层析法测定其标记率、放化纯度和稳定性.取健康昆明小鼠50只,随机分为10组,每组5只,自昆明小鼠尾静脉注射131I-D...     

金属螯合四肽的化学合成及单克隆抗体的制备

为了合成金属螯合四肽并制备其单克隆抗体。从初始原料起，采用液相接肽等方法。合成三乙撑四胺钴（Ⅲ）Ｎ－（α－羧基－苯乙基）－β－Ａｌａ－ＧｌｙＯＨ半抗原，并将其偶联到载体蛋白ＢＳＡ上制成抗原，免疫小鼠，采用杂交瘤方法制备单克隆抗体。成功地合成了该金属螯合四肽，获得了８株单克隆抗休杂交瘤细胞系，并对这８株ＭｃＡｂ类与亚类等特性了。可根据需要化学合成一些分子量很小的肽，并制备其单克隆抗体。     

抗EphA4多肽单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备抗EphA4羧基端多肽的单克隆抗体，研究其免疫学特性。方法:体外合成EphA4羧基端多肽免疫小鼠，运用杂交瘤技术建立抗EphA4多肽单克隆抗体细胞株。通过免疫化学方法分析单抗的免疫学特性。结果:获得1株抗EphA4单克隆细胞，所分泌的抗体具有EphA4特异性，能识别人类、鸡与小鼠EphA4；可用于EphA4的ELISA、免疫沉淀、免疫印迹与免疫组织化学染色。结论:抗EphA4多肽单抗具备优良的免疫学特性，适用于多种免疫化学技术，是EphA4及其配体研究的重要工具。     

抗氯霉素单克隆抗体4D10的特性鉴定

目的对抗氯霉素单克隆抗体4D10进行纯化与特性鉴定,以获得可用于检测氯霉素残留试剂盒的单克隆抗体。方法用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体,用间接酶联免疫吸附试验、竞争ELISA等方法测定抗体效价、特异性、敏感性与亲和性以及抗体与其它氯霉素结构类似物的交叉反应率。结果纯化后抗体的纯度高达95%;对抗体进行相关性质的鉴定得出：4D10效价为1∶2.56×105,其亲和力常数可达2×108M-1,该抗体与CAP-BSA,CAP-OVA有反应,与BSA、OVA无反应;与氯霉素琥珀酸钠、氯霉素反应,而与其它氯霉素结构类似物无交叉反应。结论抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、特异性强、亲和力高,可利用该抗体制备检测氯霉素残留的ELISA试剂盒。     

抗人SOCS3单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的 制备高效价的抗人SOCS3单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定.方法 以重组GST-SOCS3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA及Western blot鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、Ig亚类及相对亲和力.结果 筛选到一株可稳定分泌抗人SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株.Western blotting显示在相对分子质量为6.3×104处出现特异性反应带.杂交瘤细胞培养上清效价为1:640,腹水效价为1:25600,Ig亚类为IgG2a,相对亲和力达4.84×106 L/mol.结论 成功制备能特异性识别人SOCS3的单克隆抗体,为进一步研究人体细胞因子信号传导的负反馈调节及SOCS3在微生物感染中的免疫调节作用奠定了基础.     

羊布鲁菌BCSP31蛋白表达纯化及其单克隆抗体的制备

目的：表达并纯化羊布鲁菌BCSP31蛋白,制备其单克隆抗体（mAb）．方法：采用GST亲和层析纯化的方法纯化BCSP31蛋白．用纯化的BCSP31蛋白免疫小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤Sp2／0细胞融合,ELISA间接法筛选阳性克隆,3次克隆化后建立杂交瘤细胞系．采用小鼠腹腔接种杂交瘤细胞制备腹水,正辛酸-硫酸铵法纯化mAb．采用Western Blot和ELISA等方法鉴定mAb特性．结果：GST—BCSP31融合蛋白在25℃诱导时为可溶性表达,经亲和层析纯化,获得BCSP31纯化蛋白0．5g／L;Western Blot检测结果显示所获蛋白可与兔抗布鲁菌阳性血清特异性反应．获得2株mAb,分别命名为1F1,1E5．结论：BCSP31蛋白的纯化及其mAb的制备为布鲁菌病的诊断与防治奠定了一定的物质基础．     

4-乙酰氨基-3-（3-戊氧基）苯甲酸的合成

目的改进可能具有抗流感病毒活性的化合物4-乙酰氨基-3-（3-戊氧基）苯甲酸的合成方法。方法以间羟基苯甲酸为原料,经酯化、硝化、催化氢化、烷基化、酰化及水解6步反应制备4-乙酰氨基-3-（3-戊氧基）苯甲酸。结果甲酯化收率86.9%;硝化反应采用硝酸/乙酸酐混酸作硝化试剂,收率23.5%;硝基还原用质量分数5%钯-碳作催化剂催化氢化,收率95.8%;烷基化反应中先使酚羟基与氢化钠成盐,然后再与3-溴戊烷反应,收率44.4%;酰化反应用DMAP作催化剂,采用向碎冰上倾倒反应液使产物析出的后处理方法,收率82.8%;酯水解中改用丙酮做溶剂,反应时间由15h缩短至4h,收率86.8%。各中间体和目标化合物结构经1H-NMR确证。结论改进的反应条件缩短了反应时间,简化了后处理步骤,为今后该类流感药物的研发奠定了基础。     

胃泌素释放肽前体及其单克隆抗体对肺癌细胞株增殖的影响

目的 探讨胃泌素释放肽前体(Pro-GRP)和Pro-GRP单克隆抗体(McAb)对人肺癌细胞株(A549)增殖的影响. 方法 将浓度为1×10-6-1×10-3mol/L的Pro-GRP和效价为1:80-1:10的Pro-GRP McAb及浓度为1×10-5 mol/L的Pro-GRP与效价为1:80-1:10的Pro-GRP McAb作用于人肺癌细胞株,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖水平. 结果 Pro-GRP在1×10-6-1×10-3 mol/L浓度范围内A549细胞密度逐渐增加;用效价为1:80-1:10的Pro-GRP McAb处理A549细胞密度逐渐减少,而且使预先用1×10-5mol/LPro-GRP处理过的A549细胞逐渐减少. 结论 Pro-GRP能促进人肺癌细胞株的增殖;Pro-GRP McAb可抑制人肺癌细胞株的增殖,且能阻断Pro-GRP对细胞的促增殖作用.     

~(99)Tc~m标记VEGFR-3高亲和融合多肽在荷人卵巢癌裸鼠体内的分布和显像研究

目的 研究~(99)Tc~m标记VEGFR-3高亲和融合肽(phage-SHSWHWLPNLRHYAS)在荷人卵巢癌裸鼠体内分布和放射免疫定位显像.方法 用NHS-MAG3为双功能鳌合剂,固相法合成多肽.~(99)Tc~m预亚锡直接标记法进行标记,纸层析法测定标记率.经尾静脉注射于荷瘤鼠体内,取不同时相进行SPECT显像,测定标记物在体内的分布情况并进行分析.结果 融合多肽的~(99)Tc~m标记率为95.27%,放射化学纯度为96%,放射性浓度24.6 MBq/ml.经鼠尾静脉注射后1 h,植瘤部位开始出现放射性浓集,肾脏、肝脏及膀胱组织也可见显像;注射后3 h肿瘤显像最清晰,每克组织注射百分剂量率(%ID/g)为(30.20±6.89).其余大部分脏器的T/NT值均达最高,最高为肌肉(13.13);注射后4 h肿瘤部位显像逐渐消退.对照组裸鼠的肿瘤部位始终未见显像.结论 筛选获得的VEGFR-3高亲和融合肽能够靶向荷瘤鼠体内肿瘤组织,实现肿瘤的靶向受体显像.     

重组人3型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗人3型腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体并对单抗进行鉴定.方法 用纯化的重组六邻体蛋白免疫BALB/c小鼠.取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合.经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得单抗.使用ELISA、Western blot和中和实验等方法鉴定单抗的敏感性、特异性以及中和活性.结果 ELISA和免疫印迹结果表明这4株单抗与腺病毒六邻体蛋白可以特异性结合.而且,4C6株单抗具有中和活性.结论 获得了4个单抗为腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体,可用于3型腺病毒的早期诊断和药物治疗的研究.     

抗人蛋白酶激活受体3单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备并鉴定抗人蛋白酶激活受体3(PAR3)单克隆抗体(mAb).方法:以人PAR3为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR3 mAb.采用捕获ELISA法鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜技术、免疫组织化学染色法、斑点杂交技术鉴定mAb的特异性.结果:获得2株可稳定分泌抗人PAR3 mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM.斑点杂交技术分析表明,其mAb能与PAR3抗原有效结合.免疫组织化学染色表明,mAb与肺组织中的巨噬细胞、结肠组织中的淋巴细胞及疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织中的淋巴细胞的反应呈阳性.流式细胞仪分析及激光共聚焦显微镜观察显示,2株mAb与人肺腺癌A549细胞胞内及膜上的PAR3均呈阳性反应.结论:成功地制备抗PAR3 mAb,为变态反应性和炎症性疾病的研究提供了有用的试剂.     

抗猪囊尾蚴KD26抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株建立和特性鉴定

目的: 建立针对猪囊尾蚴KD26抗原的单克隆杂交瘤细胞株,生产相应的单克隆抗体,用于囊虫病免疫保护机制的基础研究和囊虫病临床免疫诊断的应用。方法: 用SDS-PAG E电泳,分离纯化制备猪囊尾蚴KD26抗原免疫6周龄BALB/C小鼠3次,无菌取出脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O(比率10:1),在50% PEG (4 000MW)作用下进行细胞融合,随后在HT培养液中进行选择性培养、筛选和克隆;常规的中期染色体法分析染色体,单克隆抗体鉴定采用免疫双扩散法测定其免疫球蛋白亚类,采用ELISA法测定单抗效价并作特异性鉴定。结果: 用常规的有限稀释法对杂交瘤细胞进行了3次筛选和克隆化后,获得了1株杂交瘤XH,染色体数为96,能稳定分泌抗猪囊尾蚴KD26单抗,单抗类型为IgG1,抗体滴度为1:1 000,其与血吸虫、弓形虫、细粒棘球绦虫抗原均不发生交叉反应。结论: 应用杂交瘤技术获得了1株能稳定分泌高滴度抗猪囊尾蚴KD26抗原的单克隆抗体细胞株。     

~（99m）Tc－ccM_4（鼠／人嵌合抗体）胃癌放射免疫显像的研究

采用￣（９９ｍ）Ｔｃ－ｃｃＭ４ＭｃＡｂ对１０例胃癌病人、４例非胄癌病人进行放射免疫显像（ＲＩＳ）研究，观察了血清ＴＡＧ－７２抗原量、抗体注入量对ＲＩＳ阳性检出率的影响。结果表明注入￣（９９ｍ）Ｔｃ－ｃｃＭ４后，胃癌阳性检出率６０％，肝转移阳性检出率５０％，全部良性病变显示阴性结果。注入抗体８ｈ后为最佳显像时间，给予一定量抗体后，增加抗体用量并不提高ＲＩＳ的阳性检出率。血清ＴＡＧ－７２抗原含量与ＲＩＳ肿瘤阳性检出率明显相关。     

N-（噻唑-2-基）-[1-（4-氯苄基）吲哚-3-基]草酰胺的合成及抗肿瘤活性

【目的】研究N-（噻唑-2-基）-[1-（4-氯苄基）吲哚-3-基]草酰胺的合成方法,探讨抗肿瘤活性。【方法】以吲哚为原料,经3步反应合成了新的吲哚草酰胺化合物,结构经质谱及核磁共振谱证实。用MM法评价它的体外抗肿瘤活性。【结果】合成了N-（噻唑-2-基）-[1-（4-氯苄基）吲哚-3-基]草酰胺及其衍生物。前者对HeLa的半数抑制率IC50为1-20μmol,SKOV3为6．55μmol;其衍生物对HeLa的半数抑制率IC50为3．65μmol,SKOV3为4．87μmol。【结论】N-（噻唑-2-基）．[1-（4-氯苄基）吲哚-3-基]草酰胺及其衍生物均具有强效的抗肿瘤活性。     

柯萨奇B3病毒抗体与心肌细胞结合的发病作用

目的 研究柯萨奇B3病毒单克隆抗体（CVB3－mAb0与心肌细胞结合，以探讨CVB3－mAb对心肌细胞的致病作用。方法 采用细胞副合技术制备CVB3-mAb，并应用各细胞株分泌的mAb与人、牛、大鼠心肌细胞进行免疫组化分析,比较各株分泌的CVB3－mAb与不同种动物心肌细胞间结合的差异。结果 利用细胞融合技术制备出26种CVB3-mAb。其部分CVB3－mAb可与心肌细胞膜或心肌细胞内的肌原纤维结合，呈棕黄色环状重叠或横纹，CVB3－mAb 2A4，2D4，1G6，1H9，1H10，1H11与人、牛、大鼠心肌细胞均呈阳性反应；CVB3－mAb 2A2仅与人的心肌细胞结合；CVB3－mAb 2B2，2H4，1C10，1G4与人及大鼠心肌细胞结合；CVB3－mAb 2A3与牛和大鼠心肌细胞结合；CVB3－mAb 2G12仅与大鼠心肌细胞结合；CVB3-mAb 1E8仅与牛的心肌细胞结合，且CVB3－mAb 2D4与人心肌的结合为心肌细胞膜，而与牛及大鼠心肌的结合为心肌细胞内的肌原纤维。结论 各CVB3－mAb与不同动物心肌细胞间的结合及结合形式不同；且同一动物的心肌细胞与CVB3－mAb结合有差异。部分柯萨奇B3病毒抗体与动物心肌细胞结合，可引起心肌炎。     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的快速、高效制备的方法研究

目的探讨制备和鉴定SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体(mAb)快速免疫方法。方法用基因重组SARS冠状病毒N蛋白和足垫免疫2周的BALB/c小鼠制备mAb,并采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定。结果筛选出4株抗SARS冠状病毒N蛋白mAb杂交瘤细胞株,ELISA间接法和免疫荧光证实这组单克隆抗体仅与SARS冠状病毒特异性反应,而与其他病原体无交叉反应,IgG亚类鉴定2株为IgG1,另2株分别IgG2a和IgG2b。2株抗体亲和常数分别为4.14×10-9 M和3.19×10-9 M。结论获得特异性针对SARS冠状病毒的单克隆抗体,为SARS的早期诊断、蛋白组学和发病机制的研究奠定了基础。     

肠道腺病毒41型(F亚群)单克隆抗体制备及其鉴定

为了建立一种简便快速的检测肠道腺病毒41型（Ad41）ELISA方法，利用纯化Ad41抗原免疫BALB／c小鼠．将该小鼠脾细胞和SP2／0细胞融合，通过对阳性克隆株进行筛选、检测和克隆化等，成功地合成了4株Ad41杂交瘤，并对该杂交瘤进行了一系列鉴定。在特异性方面，该杂交瘤株产生的抗体与Ad41发生阳性反应，与Ad40发生部分交叉反应，与对照组的轮状病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒3、7、21型等病毒无反应。     

抗L3T4单克隆抗体对小鼠自身免疫性心肌病免疫干预的研究

目的探讨抗L3T4单克隆抗体(单抗)对自身免疫性心肌病的免疫治疗作用。方法以线粒体ADP/ATP载体肽免疫小鼠建立自身免疫性心肌病模型(心肌病组,6只);早期治疗组小鼠(6只)在给予肽免疫的前1d、当天和后1d,同时接受尾静脉注射抗L3T4单抗;中期治疗组小鼠(6只)在给予肽免疫的第3个月接受抗L3T4单抗的治疗;以不含肽的空白免疫液免疫小鼠为对照组(6只)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清抗线粒体ADP/ATP载体抗体动态变化,以流式细胞术检测小鼠T细胞中细胞因子干扰素(IFN)-γ和白细胞介素4(IL-4)的表达,观察小鼠心肌组织在光镜和电镜下的病理改变,计算组织中的胶原纤维容积分数。试验期半年。结果早期治疗组与对照组小鼠抗线粒体ADP/ATP载体抗体检测均为阴性,心肌组织无病理变化;而中期治疗组与心肌病组抗体均为阳性,心脏出现类扩张型心肌病样改变,但前者抗体水平有短暂性下降,且心肌病变较后者稍轻。早期治疗组T细胞中IFN-γ/IL-4百分含量(6·56%±0·21%/2·54%±0·20%)与对照组(5·87%±0·19%/2·16%±0·10%)相比,差异均无统计学意义;而中期治疗组(8·91%±0·33%/5·15%±0·13%)与心肌病组(7·85%±1·42%/9·45%±1·70%)均高于对照组,二者与前两组相比,差异均有统计学意义。结论抗L3T4单抗对线粒体ADP/ATP载体肽诱导的小鼠自身免疫性心肌病有治疗作用,且早期疗效更为明显。