GDNF基因修饰的神经干细胞抑制脑卒中后大鼠的Caspase-3表达

目的研究胶质源性神经营养因子(glial cell line-derived neural factor,GDNF)基因修饰的神经干细胞(neuralstem cells,NSCs)移植对脑卒中后大鼠缺血侧脑组织内半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific protein-ase-3,caspase-3)表达的影响,探讨GDNF基因修饰的神经干细胞(GDNF/NSCs)移植对大鼠脑卒中的神经保护作用机制。方法取新生大鼠脑组织分离培养NSCs,收集第6代前的NSCs备用。用重组腺病毒GDNF转染神经干细胞,制备GDNF/NSCs。暂时性阻塞大鼠大脑中动脉制备脑卒中模型,3d后,用脑立体定位仪向卒中侧侧脑室分别给予NSCs、GDNF/NSCs和生理盐水。再灌注时间1周、2周、3周、5周、7周后处死大鼠(n=3)。裂解卒中侧脑组织,离心后得到脑组织蛋白样品,通过蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测Caspase-3表达。结果 GDNF/NSCs、NSCs、NS各组caspase-3的表达在1周、2周、3周、5周、7周各时间点均逐渐降低。NSCs组、GDNF/NSCs组显著低于NS组(P<0.01;P<0.001);GDNF/NSCs组明显低于NSCs组(P<0.01)。结论 GDNF/NSCs移植治疗脑卒中的机制可能与抑制caspase-3表达有关。     

神经生长因子诱导神经干细胞分化的作用机制探讨

目的探讨神经生长因子(NGF)对体外培养的小鼠神经干细胞(NSCs)分化为神经元的作用及可能机制。方法以无血清培养法从孕13～14 d的昆明小鼠大脑皮质分离培养获得NSCs,传至3代后,进行NGF处理,并对培养的细胞进行MAP-2免疫细胞化学染色,荧光显微镜下对MAP-2阳性细胞进行计数。同时运用蛋白免疫印迹法(Western blot)考察NGF对TrkA、Akt、Erk磷酸化水平的影响;在研究NGF作用的信号转导通路时,预先给予各种信号通路抑制剂处理,再进行NGF干预,通过MAP-2染色及Western blot考察NGF促进神经干细胞分化为神经元的信号通路。结果 NGF可以显著促使NSCs分化为神经元并可以促进TrkA、Akt和Erk的磷酸化,呈现剂量和时间依赖性;各种通路抑制剂结果显示PI3K/Akt抑制剂可以阻断NGF对Akt的磷酸化作用,同时阻断了NGF对NSCs的促分化作用,MAPK抑制剂处理可以阻断NGF对Erk的磷酸化作用,但未见明显阻断NGF的促分化作用。结论 NGF可以促进NSCs分化为神经元,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

GDNF基因修饰的神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血后GFAP表达的影响

目的探讨胶质源性神经营养因子（glial cell line-derived neural factor,GDNF）基因修饰的神经干细胞（neural stem cells,NSCs）移植对大鼠脑缺血后（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的表达的影响。方法建立大鼠暂时性大脑中动脉梗塞模型（middle cerebral artery occlusion,MCAO）,再灌注3d,并将其随机分为：生理盐水移植组（NS）、神经干细胞移植组（NSCs）和GDNF基因修饰的神经干细胞移植组（GDNF/NSCs）。采用脑立体定位仪将移植入大鼠的右侧脑室。再灌注1、2、3、5、7周的各时间点,处死大鼠,取同侧大脑半球,用Western blotting观察GFAP的表达。结果 GDNF/NSCs组、NSCs组和NS组GFAP蛋白均在2周达到高峰,后逐渐降低。而再灌注1~7周,GDNF/NSCs组的GFAP蛋白显著高于NS组（P〈0.001）;GDNF/NSCs组GFAP蛋白显著高于NSCs组（P〈0.01）。再灌注1~5周,NSCs组GFAP蛋白显著高于NS组（P〈0.001）。结论 GDNF/NSCs移植治疗大鼠缺血再灌注的神经保护作用,其机制可能与促进GFAP的表达有关。     

地特胰岛素对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞生长的影响研究

目的探讨地特胰岛素对人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞生长的影响及涉及的信号通路。方法地特胰岛素不同浓度、时间作用MCF-7和MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞数目,Western blot法检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(Erk1/2)和蛋白激酶B(Akt)磷酸化程度,流式细胞仪检测细胞周期。结果与正常对照相比,地特胰岛素1 U/L的地特胰岛素作用24 h,抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖不明显,1、10、100、1 000 U/L的地特胰岛素作用48 h和1 U/L的地特胰岛素作用48、72、96 h,促进两种细胞增殖的作用不明显,差异均无统计学意义(P>0.05)。10 U/L地特胰岛素作用MCF-7和MDA-MB-231细胞24 h细胞周期变化,Erk1/2和Akt磷酸化程度较正常对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论地特胰岛素对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖作用不明显,Erk1/2和Akt的磷酸化程度无明显升高。     

肢体远隔缺血期适应联合后适应促进大鼠缺血性脑卒中模型神经发生的作用及机制

目的 探讨肢体远隔缺血期适应(per-conditioning,PerC)联合后适应(post-conditioning,PostC)对缺血性脑卒中后神经再生的作用,并明确PerC联合PostC对脂肪酸β-氧化(fatty acid β-oxidation,FAO)限速酶——肉毒碱棕榈酰转移酶(carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT1A)的影响。方法 对成年雄性SD大鼠进行大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)造模,MCAO模型后30 min进行肢体远隔缺血期适应治疗(PerC),再灌注24 h后重复进行肢体远隔缺血适应(PostC),1次/d,直到取材。再灌注14 d后对大鼠进行神经功能评分,通过免疫组织化学染色检测室管膜下区(subependymal ventricular zone, SVZ)神经再生情况,通过酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测CPT1A的表达。结果 与MCAO组及PerC/PostC组比较,PerC+PostC组大鼠,身体不对称运动行为评分降低,神经干细胞的数量以及向梗死区迁移的细胞数量增加。Pearson相关性分析显示,神经干细胞的数量与神经功能呈负相关(r=-0.917 9, P<0.0001)。然而,迁移到基底节区的神经干细胞的凋亡数量在各组之间差异无统计学意义。机制研究显示,PerC+PostC组CPT1A的蛋白水平显著增加。结论 PerC联合PostC治疗能够通过增加神经干细胞的数量改善神经功能,神经干细胞的脂肪酸氧化可能是其促进神经干细胞迁移的机制之一。     

度洛西汀对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影响及机制

目的 探讨度洛西汀对大鼠心脏缺血再灌注心律失常的影响及机制。方法 30只Sprague Dawley（SD）大鼠随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IR组）和度洛西汀组（Dulo组）。IR组大鼠左前降支结扎30min后再灌注120min,Dulo组大鼠结扎左前降支30min前腹腔注射盐酸度洛西汀40mg/kg,之后处理同IR组,Sham组仅暴露左前降支,未行结扎。二导联心电监测并记录3组心律失常发生情况,应用LabChart8软件分析心电图参数。Triphenyltetrazolium chloride（TTC）染色对比IR组及Dulo组大鼠心肌梗死面积。蛋白免疫印迹试验检测各组心脏组织Akt、细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,Erk）、caspase-3、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）1、SOD2和连接蛋白43（connexin 43,Cx 43）蛋白改变。结果 与IR组比较,缺血期Dulo组大鼠室性期前收缩次数和室性心动过速次数减少（P<0.05）;再灌注期Dulo组的室性心动过速减少（P<0.05）,室性期前收缩次数差异无统计学意义（P>0.05）。度洛西汀抑制缺血和再灌注所致校正后Q-T间期（QTc）的延长（P<0.05）,并减小心肌梗死面积（P<0.05）。度洛西汀抑制Akt和Erk蛋白的磷酸化,减少cleaved caspase-3、cytochrome C蛋白表达并增加SOD1、SOD2和Cx43蛋白表达。结论 度洛西汀降低Akt和Erk蛋白磷酸化,抑制氧化应激及细胞凋亡,减低心脏缺血再灌注损伤过程中室性心律失常发生,减少梗死面积。     

胶质细胞源性神经营养因子对局灶性脑缺血后海马齿状回脑电活动的影响

目的：观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对局灶性脑缺血大鼠在体海马齿状回脑电活动的影响。方法：制作右侧局灶性脑缺血模型,右侧脑室注射GDNF,通过神经电生理学方法,记录正常组、脑缺血模型组、生理盐水组和GDNF组大鼠局灶性脑缺血90 min后再灌注14 d海马齿状回的脑电活动,分析脑电频谱。结果：免疫组化检测显示,GDNF组各时间点BrdU阳性细胞较脑缺血模型组和生理盐水组增多。大鼠脑电图显示,GDNF组较脑缺血模型组和生理盐水组脑电活动恢复明显,组间比较有显著性差异（均P〈0.05）。结论：GDNF可改善局灶性脑缺血后的脑损伤,促进激活内源性神经干细胞增殖、分化,改善脑缺血后的行为和脑功能。     

PI3K/Akt通路介导Apelin后处理减轻离体大鼠心脏缺血再灌注损伤

【目的】 探讨Apelin后处理对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响及其信号机制.【方法】 32只SD大鼠随机分为4组,每组8只:缺血再灌注对照组、Apelin后处理组、Apelin后处理加渥曼青霉素(磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂)处理组、渥曼青霉素处理对照组,观察Apelin后处理对大鼠离体缺血再灌注心脏左心室收缩压、心率、冠状动脉流量、肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶释放以及左室心肌蛋白激酶B(Akt)磷酸化的影响.【结果】 与缺血再灌注对照组相比,Apelin后处理组心脏左心室收缩压、心率和冠状动脉流量得到改善,释放到冠状动脉循环流出液中的肌酸磷酸激酶,乳酸脱氢酶量减少,同时左室心肌磷酸化Akt(Ser473)水平增高;而渥曼青霉素抑制了Apelin后处理所致的Akt磷酸化,并完全消除了Apelin后处理的心脏保护作用.【结论】 Apelin后处理能够减轻离体大鼠心脏缺血再灌注损伤,PI3K/Akt信号通路参与介导Apelin后处理的心脏保护作用.     

补阳还五汤对去势脑缺血雌性大鼠海马神经干细胞增殖及ERK/CREB信号通路的影响

目的：探讨补阳还五汤对去势脑缺血雌性大鼠海马神经干细胞（neural stem cells, NSCs）增殖及ERK/CREB信号通路的影响。方法采用双侧卵巢切除术(OVX)结合大脑中动脉阻塞（MCAO)法复制去势雌性大鼠脑缺血复合模型,将造模后的36只大鼠随机分为双假手术组、复合模型组、雌激素组、雌激素+G15组、补阳还五汤组及补阳还五汤+G15组6组,每组6只,术后24 h给予相应药物灌胃连续干预14 d,同时每天腹腔注射BrdU、G15分别标记增殖细胞和阻断GPER-1。采用免疫荧光BrdU/ Nestin双标法检测各组大鼠缺血侧海马齿状回NSCs增殖情况,免疫组化SP法检测ERK1/2、CREB1磷酸化蛋白表达水平。结果补阳还五汤组和雌激素组缺血侧海马DG区BrdU/Nestin双标阳性细胞及pERK1/2、pCREB1阳性细胞表达均增加,与复合模型组比较有显著性差异(P<0.05）,但补阳还五汤组要多于雌激素组(P<0.05)。与补阳还五汤组比较,补阳还五汤+G15组缺血侧海马DG区BrdU/Nestin双标阳性细胞及及pERK1/2、pCREB1阳性细胞表达均减少（P<0.05）。结论补阳还五汤可以促进去势脑缺血雌性大鼠缺血侧海马 DG 区神经干细胞增殖,激活ERK/CREB信号通路,可能是其发挥类雌激素作用、促进内源性神经再生作用机制之一。     

羟氯喹促进ERK1/2磷酸化减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的: 探讨羟氯喹（hydroxychloroquine,HCQ）对大鼠脑缺血再灌注损伤（ischemia/reperfusion,I/R）的影响。方法: 采用随机数字表法将健康雄性SD大鼠72只分为6组：对照组、缺血再灌注组（I/R组）、低剂量羟氯喹预处理组（HCQ250组）、中剂量羟氯喹预处理组（HCQ500组）、高剂量羟氯喹预处理组（HCQ1000组）和细胞外信号调节激酶1/2（extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2）抑制剂U0126预处理组（U0126组）,每组均为12只。采用线栓法行短暂性大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）建立大鼠缺血性脑卒中模型。I/R组行MCAO后2 h再灌注,HCQ250组、HCQ500组、HCQ1000组和U0126组分别在MCAO前72 h、48 h和24 h经侧脑室注射8 μL 250、500、1 000和1 000 μmol/L HCQ,其中U0126组在每次注射1 000 μmol/L HCQ后12 h再经侧脑室注射8 μL 1 000 μmol/L U0126;对照组不栓塞大脑中动脉,其余处理同I/R组。再灌注6 h时将每组一半大鼠断头取脑,采用蛋白质印迹法检测缺血半暗带脑组织ERK1/2、p ERK1/2、抗凋亡因子Bcl 2和促凋亡因子cleaved caspase 3、环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）、磷酸化CREB（p CREB）、蛋白激酶B（Akt）和磷酸化Akt（p Akt）的表达;再灌注24 h时采用神经功能缺陷评分量表检测剩余大鼠的神经功能,再断头取脑后采用2% TTC染色测量脑梗死体积。结果： 与对照组比较,其余5组神经功能缺陷评分显著降低,脑梗死体积明显增大,p ERK1/2、cleaved caspase 3、p CREB和p Akt表达显著增高,Bcl 2表达降明显低（P均<0.05）;与I/R组比较,HCQ250组、HCQ500组、HCQ1000组神经功能缺陷评分明显升高,脑梗死体积显著减少,p ERK1/2、Bcl 2、p CREB、p Akt表达明显增高,cleaved caspase 3表达降低明显（P均<0.05）;与HCQ1000组比较,U0126组神经功能缺陷评分明显降低,脑梗死体积显著增大,p ERK1/2、Bcl 2、p CREB和p Akt表达降低显著,cleaved caspase 3表达明显增高（P均<0.05）。 结论： 羟氯喹可能通过CREB/Akt信号通路促进p ERK1/2表达,参与大鼠脑缺血再灌注损伤时的内源性保护机制。     

内吗啡肽-1后处理的心肌保护作用及其对Erk1/2信号通路的影响

目的 探讨在大鼠心肌缺血再灌注过程中,内吗啡肽-1后处理的心肌保护作用对细胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)信号转导通路的影响.方法 构建在体大鼠心肌缺血再灌注模型,分假手术组、缺血再灌注组、内吗啡肽-1后处理组(EM50组)、PD98059后处理组(PD组)、内吗啡肽-1+PD98059后处理组(EM50+PD组).实时记录各组大鼠血流动力学指标,采集复灌结束后大鼠血清,检测超氧化物歧化酶、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白等心肌酶学及生化指标,大鼠心肌组织HE病理染色,TTC双染色法测定心肌梗死面积,Western-blot检测各组心肌组织中P-Erk1/2及凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3的变化.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组心率和血压降低(P<0.05);与缺血再灌注组比较,EM50组心率和血压有所增高(P<0.05),血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α活性或含量下降;超氧化物歧化酶活性增加(P<0.05);心肌梗死面积减少(P<0.05);P-Erk1/2表达增加(P<0.05);Cleaved Caspase-3表达降低(P<0.05).与EM50组比较,EM50+PD组心率和血压降低(P<0.05),血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α活性或含量增加,超氧化物歧化酶活性降低(P<0.05);心肌梗死面积增加(P<0.05);P-Erk1/2表达降低(P<0.05);Cleaved Caspase-3表达增加.结论 内吗啡肽-1后处理可能通过改善心功能、抑制炎症反应、抑制氧化应激发挥保护作用;内吗啡肽-1改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程中,存在Erk1/2信号通路的激活.     

BDNF基因转染神经干细胞移植脑损伤大鼠移植细胞存活率和Trkβ、Erk1/2、Ras及Trx的表达

目的：探讨脑源性神经营养因子基因修饰神经干细胞（ BDNF／NSCs）移植大鼠创伤性脑损伤（ TBI）模型后,对移植细胞存活数量的影响及其机制。方法采用Feeney法制备TBI模型,于造模后72 h,随机分为两组：BDNFN／SCs 移植组及NSCs移植组,将3μL（1×108／mL）BDNF／NSCs或NSCs直接移植于脑损伤区。分别于移植后1、2、3和4周取脑组织,冻存或制备冰冻切片。在荧光显微镜下计数移植细胞存活数量,并采用免疫组织化学技术检测p－Erk1／2、Ras蛋白的表达;通过RT－PCR技术检测脑损伤区及周围组织中Trx、Trkβ基因的表达。结果 BDNF／NSCs组和NSCs 组细胞存活数随移植时间延长而减少,在移植后的不同时间点,BD-NF／NSCs组移植细胞存活率均明显高于NSCs 组（P＜0．05）;BDNF／NSCs组在移植后不同时间点移植细胞的p－Erk1／2、Ras蛋白表达强度均明显高于NSCs组（P＜0．05）;与NSCs组比较,BDNF／NSCs组损伤灶及周围脑组织中Trx、Trkβ基因的表达水平均明显增强（ P＜0．05）。结论 BDNF基因转染NSCs移植大鼠TBI后,能够明显提高移植细胞的存活率,上调Trkβ、p－Erk1／2、Ras及Trx的表达。 BDNF与其受体Trkβ结合后,可能通过Ras／Raf／Erk途径激活其下游的Trx基因从而激活细胞的抗氧化作用,进而减少移植细胞的氧化损伤,提高移植细胞在脑组织损伤区的存活率。     

雷帕霉素抑制人神经母细胞瘤细胞株生长及诱导凋亡的机制研究

目的研究雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生长抑制和诱导凋亡作用,以及对靶向信号通路磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（P13K／AkCmTOR）的影响。方敞用不同浓度的雷帕霉素（10、15、20μmol／L）处理SH-SY5Y细胞（雷帕霉素干预组）,以加入相同体积二甲基亚砜（DMSO）的SH-SY5Y细胞作为阴性对照组,设立空白对照组。CCK．8法测定细胞生长率;采用流式细胞仪检测细胞周期,通过AnnexinV-FITC／PI双染法检测细胞凋亡率;Westernblotting检测easpase-3剪切体及P13K／Akt/mTOR信号通路上下游分子PDKp85、Akt、mTOR、4E-BPl表达及其磷酸化水平的变化。结果与阴性对照组和空白对照组比较,雷帕霉素干预组细胞生长率显著降低（P〈0．05或P〈0．01）;G。／G,期细胞百分比显著增高（P〈0．05）;细胞凋亡率显著升高（P〈0．01）。Westernblotting检测结果显示：与阴性对照组和空白对照组比较,雷帕霉素干预组easpase-3剪切体表达水平较高;P13K／Akt/mTOR信号通路上下游分子的活性均被抑制,P13Kp85、Akt、mTOR、4E-BP1的磷酸化水平均明显降低。结论雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y具有抑制生长和诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制P13K／Akt/mTOR信号通路有关。     

Neonatal Exposure to Propofol Interferes with the Proliferation and Differentiation of Hippocampal Neural Stem Cells and the Neurocognitive Function of Rats in Adulthood via the Akt/p27 Signaling Pathway

Objective Neonatal exposure to propofol has been reported to cause neurotoxicity and neurocognitive decline in adulthood; however, the underlying mechanism has not been established.Methods SD rats were exposed to propofol on postnatal day 7(PND-7). Double-immunofluorescence staining was used to assess neurogenesis in the hippocampal dentate gyrus(DG). The expression of pAkt and p27 were measured by western blotting. The Morris water maze, novel object recognition test,and object location test we...     

PI3K抑制剂Wortmannin 对小鼠肾缺血再灌注损伤后肾功能及p27和PCNA表达的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt信号转导途径在小鼠肾缺血再灌注损伤中作用及其机制.方法 BALB/C小鼠随机分为3组.假手术组,共6只;对照组:采用双肾蒂阻断,缺血时间为35 min,再灌注30 min、90 min、24 h、48 h,每时点6只小鼠;Wortmannin药物组:缺血前4 h腹腔注射Wortmannin,其余同对照组.观察缺血后肾功能和肾脏组织学改变,采用免疫组化技术检测p27和PCNA蛋白的表达.结果 PI3K抑制剂Wortmannin可加重小鼠肾缺血再灌注损伤后血肌酐和尿素氮的水平升高,加重肾小管的损伤程度;小鼠肾缺血再灌注损伤后细胞周期抑制蛋白p27水平降低,增殖细胞核抗原PCNA表达增加;Wortmannin可抑制p27水平和肾小管细胞增殖.结论 Wortmannin可加重小鼠肾缺血再灌注损伤后肾功能和肾组织的损伤,抑制肾小管细胞增殖,提示PI3K/Akt信号通路在肾脏缺血再灌注损伤中起非常重要的调控作用.     

L-瓜氨酸预处理对大鼠缺血／再灌注损伤肾的功能及蛋白表达影响

目的研究L-瓜氨酸对大鼠缺血／再灌注（ischemia—reperfusion,I／R）损伤肾组织的保护作用机制。方法18只雄性SD大鼠分为假手术组（Sham组）、模型组（I／R组）和L-瓜氨酸组（L—Cit组）,每组6只。采用夹闭双肾动脉45min后再灌注制备肾L／R损伤模型。L—Cit组于造模前连续7天灌胃给予L-瓜氨酸600mg／kg。于再灌注3h活体摘取双肾,并行腹主动脉穿刺抽血2ml。检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮,Western blot检测肾组织ERK1／2、p38MAPK和Akt的磷酸化表达。结果与Sham组相比,I／R组大鼠血清肌酐、尿素氮水平升高,肾组织ERK1／2和Akt的磷酸化表达明显降低,p38MAPK的磷酸化表达明显增高;L—Cit组与I／R组相比,ERK1／2和Akt的磷酸化表达明显增高,而p38MAPK的磷酸化表达明显降低,血清尿素氮、肌酐水平明显降低。结论L-瓜氨酸可能通过激活ERK1／2和Akt信号通路、抑制p38MAPK信号来保护大鼠肾缺血／再灌注损伤。     

糖尿病大鼠生存信号改变对缺血再灌注损伤及心肌细胞凋亡的影响

 【目的】测定不同周期STZ诱导糖尿病生存信号改变对心肌缺血，再灌注（I/R）损伤及心肌细胞凋亡的影响。【方法】阻断和开放左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌I／R模型，用TTC染色，测定大鼠心肌I/R后梗死面积，用免疫印迹法定量分析代表心肌凋亡水平的caspase-3及代表细胞生存信号的磷酸化蛋白激酶B（P-Akt）的表达，用槽式电泳法测定硝基酪氨酸。【结果】在STZ处理后2周，糖尿病组（2WD）心肌梗死面积比相应周期对照组（2WC）明显缩小，STZ处理后16周（16WD），梗死面积比相应对照组（16WC）增加；P-Akt，在心肌的表达在2WD比2WC组增加35％，在16WD比16WC明显减少；超氧亚硝酸根离子（ONOO^-）生成的标志性产物硝基酪氨酸（NT）在2WD组中较2WC组低约49％，但在16WD组中较16WC组显著增加；在缺血再灌注后，Caspase-3，在2WD组较2WC组中减少，而16WD组caspase-3较16WC组增加。【结论】STZ诱导糖尿病早期、晚期对心肌I／R损伤和细胞凋亡呈现相反的作用，这可能是由于早、晚期糖尿病相反的细胞生存信号改变而引起的。     

尼克酰胺抑制PKC-βⅡ活性改善高糖导致的心肌微血管内皮细胞血管形成障碍

目的探讨尼克酰胺对高糖导致的微血管生成障碍的影响及可能机制。方法将原代心肌微血管内皮细胞分为正常糖组（NG,5.6 mmol/L）、高糖组（HG,33.3 mmol/L）、高糖＋尼克酰胺组（HG＋N,33.3 mmol/L＋20 mmol）和高糖＋蛋白激酶C-βⅡ（PKC-βⅡ）抑制剂LY333531组（HG＋LY,33.3 mmol/L＋20 nmol）,培养24 h后分别观察细胞的管腔形成、迁移及增殖情况。Western blotting检测不同组细胞PKC-βⅡ、Akt和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达情况。结果与NG组相比,HG组细胞的管腔形成、迁移和增殖能力明显降低（P〈0.05）;而HG＋N组和HG＋LY组细胞的管腔形成、迁移和增殖能力得到明显改善。Western blotting结果显示：与NG组相比,HG组PKC-βⅡ磷酸化程度上调,且伴随Aktser473及eNOSser1117表达水平的降低（P〈0.05）。尼克酰胺不仅抑制了高糖导致的PKC-βⅡ磷酸化程度上调,并且恢复Akt、eNOS磷酸化至NG组水平（P〈0.05）。结论高糖导致了PKC-βⅡ的激活,进而抑制Akt/eNOS通路的活性,从而阻碍了微血管细胞的血管形成。尼克酰胺抑制了高糖条件下PKC-βⅡ的磷酸化,上调Akt/eNOS通路活性,从而改善微血管形成障碍。     

Astragali and Angelica protect the kidney against ischemia and reperfus ion injury and accelerate recovery

Objective To investigate the role of Astragali and Angelica (A&amp;A) of Chinese herbs in acut e renal ischemia/reperfusion injury, and the related intracellular signal transd uction mechanism.Methods Acute ischemic renal injury in rats was induced by clamping in renal pedicel for 45 minutes. Rats in therapy group were given a single dose （2 ml/day） of A&amp; A for 3 days before clamping, and then continued for another 3 days. Forty-fiv e minutes after clamping and at different reperfusion time, serum creatinine (Scr) and renal pathological changes were taken and compared in both groups. The p roliferating cell nuclear antigen (PCNA) positive cells were detected by immunoh istochemistry. Extracelluar regulating kinase (ERK) and c-Jun N-terminal kina se (JNK) activity was assayed by specific substrate phosphorylation with immunop recipitation. Results At the 24th hour of reperfusion, Scr was lower in A&amp;A group than that in the con trol. Much less necrotic tubular cells, casts, and more PCNA-positive cells were found in A&amp;A group. ERK activity decreased after clamping, and recovered a t 5 minutes of reperfusion. There was no difference between the two groups. JN K activity did not change after ischemia, but increased at 5 minutes and peaked at 20 minutes of reperfusion. JNK activity was significantly higher in A&amp;A group than that in the control group. Conclusion A&amp;A protected kidney against ischemic insult and accelerated both functional and histological recovery after acute renal ischemia/reperfusion injury, which may associate with the change of JNK signaling pathway.