虾青素对幽门螺杆菌感染AGS细胞自噬及凋亡的抑制作用

目的探讨虾青素对幽门螺杆菌(Hp)感染AGS细胞自噬和凋亡的影响。方法选取胃上皮细胞株AGS细胞进行Hp感染,根据虾青素的浓度分为对照组[二甲基亚砜(DMSO)处理]、10μmol/L组、20μmol/L组、50μmol/L组。分组处理96 h后,采用免疫荧光标记检测细胞Hp外膜蛋白(OMP)表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测相关基因微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、LC3-Ⅰ、Beclin1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA表达,Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果 Hp在AGS细胞质中弥散分布,Hp感染AGS细胞成功。虾青素可抑制Hp的增殖,10、20、50μmol/L组细胞凋亡率均低于对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。Beclin1、LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)、Bax蛋白及mRNA的表达随着虾青素浓度的增高而逐渐降低,Bcl-2蛋白及mRNA表达随着虾青素浓度的增高而逐渐升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P 0.01)。虾青素10、20、50μmol/L组白细胞介素-17(IL-17)含量均低于对照组,差异有统计学意义(P 0.05),且随着虾青素浓度的增高,IL-17含量逐渐下降。结论随着虾青素浓度的增高,Hp感染的AGS细胞的自噬及凋亡能力减弱。     

活性氧在GDC-0152诱导NB4细胞凋亡和自噬中的作用

目的:探讨活性氧(Reactive oxygen species, ROS)在GDC-0152诱导急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡和自噬过程中的作用。方法:不同浓度GDC-0152联合Z-VAD-FMK作用于NB4细胞,采用CCK8法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞自噬及ROS水平;Cyto-ID染色荧光显微镜观察细胞自噬及流式细胞术检测荧光表达;Western blot检测自噬相关蛋白LC3B的表达。结果:GDC-0152处理NB4细胞后细胞增殖抑制率和细胞凋亡率增加(P0.05);GDC-0152可诱导NB4细胞ROS水平升高;Cyto-ID染色后应用荧光显微镜观察和流式细胞术检测发现,GDC-0152可以增加NB4细胞自噬(P0.05);Western blot结果显示,GDC-0152可增加NB4细胞LC3B表达,且促进LC3BⅠ向LC3BⅡ转化;与GDC-0152(100 ng/ml)相比,GDC-0152(100 ng/ml)联合ROS抑制剂YCG063(10μmol/L)后细胞凋亡率降低且自噬减少(P0.05)。结论:GDC-0152通过诱导NB4细胞凋亡及自噬抑制细胞增殖。ROS能促进GDC-0152诱导的NB4细胞凋亡和自噬。     

β-榄香烯注射液联合甲磺酸阿帕替尼 对乳腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的探究β-榄香烯注射液(ELE)联合甲磺酸阿帕替尼(APA)对乳腺癌细胞生长的抑制作用。方法正常培养乳腺癌细胞MB-468作空白对照组,用0. 05 mg/ml ELE单独或联合1μmol/L APA处理MB-468细胞,分别作ELE组、APA组和ELE+APA组。采用MTT法检测各组细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、Bax、Bcl-2、Beclin1、p62、LC3的表达;用自噬抑制剂3-MA处理MB-468细胞,并进行ELE单独或联合APA干预,细胞分组为:对照组,3-MA组,ELE+APA组和3-MA+ELE+APA组,采用Western blot检测LC3的表达。结果与对照组相比,ELE组、APA组和ELE+APA组细胞增殖活性、Ki67、PCNA、p62的表达显著下调,凋亡率、Caspase-3、Bax/Bcl-2、Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著上调;加入自噬抑制剂3-MA后,3-MA+ELE+APA组Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著下调,p62的表达显著上调。结论 ELE联合APA对乳腺癌细胞MB-468生长有明显的抑制作用,可能与降低MB-468细胞增殖活性、促进其凋亡和自噬有关。     

二氢杨梅素通过STAT3/Bcl-2信号通路促进HNSCC细胞自噬和凋亡

目的:探讨二氢杨梅素(DHM)对人头颈鳞癌(HNSCC)细胞增殖及凋亡的影响。方法:分别用不同浓度(12.5、25、50 μmol/L)DHM处理人HNSCC SCC-25细胞6、12、24 h,用流式细胞仪检测SCC-25细胞凋亡情况;用细胞免疫荧光法观察SCC-25细胞中自噬小体产生情况;Western印迹法检测SCC-25凋亡和自噬标志物的表达。结果:12.5、25、50 μmol/L的DHM处理24 h后,SCC-25细胞凋亡逐渐增加;细胞中凋亡标志物CL-PARP、Bax、CL-casp3逐渐增加,Bcl-2逐渐减少(P0.05)。12.5、25、50μmol/L的DHM处理24 h后,SCC-25细胞自噬逐渐增强;自噬标志指标p-STAT3表达上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值逐渐加大,Beclin 1增加,p62逐渐减少(P0.05)。抑制自噬能促进DHM诱导的SCC-25细胞凋亡,细胞凋亡标志物CL-PARP、Bax增加,Bcl-2减少(P0.05)。结论:DHM能诱导HNSCC细胞凋亡及自噬,其机制与STAT3相关信号通路有关;抑制自噬能促进DHM诱导的HNSCC细胞凋亡。     

冬凌草甲素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1的作用研究

目的探讨冬凌草甲素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1的抗白血病效应及其作用机制。方法以急性单核细胞白血病细胞株THP-1为研究对象,应用改良四甲基偶氮唑盐法测定4、6、8μmol/L浓度冬凌草甲素处理72 h后THP-1细胞的增殖抑制率,以及计算2、4、6、8、10μmol/L冬凌草甲素处理24、72、120 h后的细胞生存率并绘制生长曲线;显微镜下观察4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理24 h后THP-1细胞的形态学变化;采用流式细胞术检测0、4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理24 h后THP-1细胞凋亡率;采用Western blot法检测6μmol/L冬凌草甲素处理THP-1细胞0、12、24 h后Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK细胞信号转导通路的变化,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果 14、6、8μmol/L冬凌草甲素处理72 h后细胞增殖抑制率分别为(20.02±11.15)%、(45.99±12.76)%、(86.39±9.18)%,与4μmol/L冬凌草甲素比较,6、8μmol/L冬凌草甲素处理后细胞增殖抑制率均升高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);冬凌草甲素处理72 h后细胞半抑制浓度为(6.12±1.48)μmol/L;细胞生长曲线显示,冬凌草甲素对THP-1细胞的生长抑制作用呈时间和浓度依赖性。2冬凌草甲素处理24 h后,THP-1细胞出现凋亡,形成凋亡小体,浓度越高细胞凋亡小体形成越多。30、4、6、8μmol/L冬凌草甲素(分别设为对照组及4、6、8μmol/L组)处理24 h后,THP-1细胞凋亡率分别为(3.7±1.1)%、(16.2±3.3)%、(30.1±4.3)%、(49.5±6.7)%,对照组与各浓度组凋亡率比较差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);与4μmol/L组比较,6、8μmol/L组凋亡率均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。4经Western blot法检测6μmol/L冬凌草甲素处理THP-1细胞24 h后可抑制细胞内Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK信号转导通路的活化,并下调Bcl-2、上调Bax的表达。结论冬凌草甲素通过抑制Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK信号转导通路的活化,以及调节凋亡调节蛋白Bax和Bcl-2的表达而发挥抗白血病效应。     

miR-181a-5p介导虎杖苷体外诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制研究

【目的】探讨虎杖苷体外干预对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响。【方法】以不同浓度(0、2、4、6、8、16μmol/L)的虎杖苷处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT方法检测细胞增殖变化。乳腺癌MDA-MB-231细胞分成对照组(常规培养)、虎杖苷组(6μmol/L虎杖苷处理)、虎杖苷+Anti-NC组(转染inhibitor control,6μmol/L虎杖苷处理)、虎杖苷+Anti-miR-181a-5组(转染miR-181a-5 inhibitor,6μmol/L虎杖苷处理)。流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡情况,Western blot检测MDA-MB-231细胞Bax和c-caspase-3、caspase-3蛋白表达水平,Realtime PCR方法测定MDA-MB-231细胞miR-181a-5p表达水平。【结果】与对照组比较,2、4、6、8、16μmol/L的虎杖苷处理后的细胞吸光值显著降低(均P<0.05)。与虎杖苷+Anti-NC组比较,虎杖苷+Anti-miR-181a-5组乳腺癌细胞中miR-181a-5p水平降低,吸光值升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax、c-caspase-3、caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。与对照组比较,虎杖苷组乳腺癌细胞凋亡率升高,细胞中凋亡蛋白Bax、c-caspase-3、caspase-3水平升高,miR-181a-5p表达水平升高(P<0.05)。【结论】虎杖苷通过上调miR-181a-5p抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

硼替佐米联合三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡及相关机制的研究

本研究旨在探索硼替佐米(bortezomib)联合三氧化二砷(As2O3)诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的凋亡及相关调控机制。用流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡;Hoechst染色法观察凋亡细胞形态;Western blot检测caspase-3,caspase-9的活化以及NOXA蛋白的表达;以小干扰RNA(siRNA)技术特异性"沉默"NOXA基因;用脂质体Lipofectamine2000转染pEGFP-Noxa质粒和空载体pEGFP。结果表明,bortezomib(10 nmol/L)联合As2O3(0.5μmol/L)诱导NB4细胞凋亡率较单药As2O3(0.5μmol/L)诱导时增加,相应的caspase-3,-9的活化明显加强。单药As2O3诱导的NB4细胞中Noxa蛋白水平未发生改变,bortezomib和As2O3联合诱导的NB4中NOXA蛋白水平上调。特异性"沉默"NOXA基因后bortezomib和As2O3联合诱导的NB4细胞中caspase-3的活化程度降低,细胞凋亡率也明显下降。通过转染质粒高表达NOXA蛋白,单药As2O3诱导的NB4细胞中caspase-3的活化程度增加。结论:bortezomib可以增加NB4细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性,这可能和促凋亡蛋白NOXA的表达上调有关。     

吴茱萸碱抑制Wnt通路诱导人胰腺癌细胞凋亡和自噬的作用研究

目的探讨吴茱萸碱诱导人胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1凋亡和自噬的作用机制。方法不同浓度吴茱萸碱干预胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1后,用甲基三氯硅烷（MTS）法检测吴茱萸碱对胰腺癌细胞增殖的影响,并用流式细胞术检测细胞凋亡情况。用蛋白质印记试验（Western blot）检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、自噬相关蛋白胞浆型（LC3-Ⅰ）和膜型（LC3-Ⅱ）,以及Wnt通路下游靶分子c-Myc、细胞周期素D1（Cyclin D1）的表达水平。结果 MTS实验结果显示2μmol/L的吴茱萸碱干预48 h后的胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1的存活率分别为（68.13±0.79）％和（57.19±1.47）％,明显低于未干预的胰腺癌细胞株,差异均有统计学意义（t分别=31.45、21.65,P均＜0.05）。4μmol/L的吴茱萸碱干预48 h后的胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1的存活率分别为（55.07±1.97）％和（50.32±0.86）％,也低于2μmol/L吴茱萸碱干预的胰腺癌细胞株,差异均有统计学意义（t分别=6.13、4.02,P均＜0.05）。2μmol/L吴茱萸碱干预的BxPC-3和PANC-1胰腺癌细胞株凋亡率分别为（11.37±0.36）％和（11.36±0.32）％,明显高于未干预的胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1凋亡率（4.60±0.90）％和（4.00±0.86）％,两组之间,差异有统计学意义（t分别=8.27、10.14,P均＜0.05）。2μmol/L吴茱萸碱干预的BxPC-3和PANC-1胰腺癌细胞株较未干预的胰腺癌细胞株凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降, Bax表达明显增加;LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ比值分别为对照组的2.5倍和6.4倍;Wnt通路下游靶分子c-Myc和Cyclin D1的表达均明显降低。结论吴茱萸碱能够通过抑制Wnt通路的活性诱导胰腺癌细胞凋亡和自噬。     

5-Aza诱导胃癌细胞株GC-7901凋亡及自噬的相关性研究

目的研究5‐氮‐2‐脱氧胞苷（5‐aza‐2‐deoxycytidine ,5‐Aza）对胃癌细胞株GC‐7901自噬、凋亡及胰岛素相关信号通路轴的影响。方法选择不同浓度（5μmol／L、10μmol／L、20μmol／L ）的5‐Aza干预胃癌细胞株GC‐7901,72 h后用免疫印记检测自噬相关蛋白LC3‐Ⅱ和LC3‐Ⅰ的表达。选择5‐Aza最佳浓度10μmol／L干预GC‐7901,免疫印记检测空白组和对照组中胰岛素样生长因子‐1受体（IGF‐1R）、磷酸化胰岛素样生长因子‐1受体（p‐IGF‐1R）及下游信号通路相关蛋白磷脂酰肌醇3‐激酶（PI3K ）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,磷酸化磷脂酰肌醇3‐激酶（p‐PI3K）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p‐mTOR）的表达;流式细胞技术检测细胞凋亡情况。结果不同浓度的5‐Aza均可增加胃癌细胞的自噬表达,并呈计量依赖性,10μmol／L 5‐Aza干预后胃癌细胞的状态最佳。10μmol／L 5‐Aza可诱导胃癌细胞株GC‐7901凋亡增加,5‐Aza组与空白对照组相比较差异具有显著性（ P ＜0．01）;10μmol／L 5‐Aza可抑制p‐IGF‐1R、p‐PI3K、p‐mTOR的表达,空白组与5‐Aza组相比较差异具有显著性（ P ＜0．01）。但对总蛋白IGF‐1R、PI3K、mTOR无影响（ P＞0．05）。结论5‐Aza可以诱导胃癌细胞凋亡,增加细胞自噬,可能与抑制IGF‐1R磷酸化表达有关。     

肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的影响

目的探讨肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1(hepatocyte growth factor activator inhibitor-1, HAI-1)基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的机制。方法对数生长期HeLa细胞分为转染组和对照组,转染组转染HAI-1质粒,对照组细胞正常培养。采用实时荧光定量PCR法检测2组细胞HAI-1 mRNA表达情况,采用AO染色和流式细胞术检测2组细胞自噬情况,采用ELISA检测2组细胞自噬相关因子LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和Beclin-1蛋白水平,应用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率,采用Western blot法检测细胞Bax和Bcl-2蛋白相对表达量。结果转染组细胞HAI-1 mRNA相对表达量(1.57±0.26)、AO细胞荧光强度(52.14±3.88)、LC3-Ⅱ蛋白[(3.42±0.85)μg/L]、Beclin-1蛋白[(14.69±1.96)μg/L]水平、细胞凋亡率[(86.75±6.42)%]、Bax蛋白相对表达量(1.24±0.13)和Bax/Bcl-2(7.75±0.83)高于对照组[0.48±0.09、5.47±0.32、(1.10±0.22)μg/L、(10.12±0.53)μg/L、(12.64±1.33)%、0.25±0.06、0.17±0.05)](P0.05),LC3-Ⅰ蛋白水平[(0.59±0.11)μg/L]、Bcl-2蛋白相对表达量(0.16±0.04)低于对照组[(3.26±0.82)μg/L、1.47±0.15](P0.05)。结论 HAI-1转染通过增加HeLa细胞中LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达,降低LC3-Ⅰ蛋白表达,提高Bax/Bcl-2来调节宫颈癌细胞的自噬和凋亡。     

1,25-二羟维生素D_3对人结肠癌细胞凋亡和自噬的影响及机制研究

目的观察1, 25-二羟维生素D_3[1, 25-(OH)_2D_3]对人结肠癌HCT-116细胞凋亡和自噬的影响并初步探讨其机制。方法体外培养人结肠癌细胞HCT-116,分成对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和联合组[1, 25-(OH)_2D_3高剂量联合腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂]共5组,观察并比较各组细胞凋亡和自噬情况。结果低剂量组、中剂量组、高剂量组的HCT-116细胞凋亡程度、自噬程度及cleaved Caspase3、cleaved Caspase8、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、p-AMPK蛋白表达水平高于对照组, p-mTOR蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。联合组的HCT-116细胞凋亡程度、自噬程度及cleaved Caspase3、cleaved Caspase8、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、p-AMPK蛋白表达水平低于高剂量组, p-mTOR蛋白表达水平高于高剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 1, 25-(OH)_2D_3可通过调控AMPK/mTOR信号通路增强结肠癌细胞凋亡和自噬,发挥抗肿瘤作用。     

鼠尾草酸对NB4细胞生长及凋亡、分化作用的体外研究

目的 观察鼠尾草酸（Carnosic acid,CA）对NB4细胞生长及凋亡、分化的诱导作用.方法 通过四氮唑蓝比色（MTT）,细胞形态,流式细胞仪测定细胞周期、凋亡率及CD14的表达,观察鼠尾草酸对NB4细胞的影响.结果 NB4细胞经2.5μmol/L以上浓度的鼠尾草酸作用后增殖受到抑制,2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L CA 作用72h后,细胞形态呈现凋亡细胞的特征.2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L CA 作用于NB4细胞72h凋亡率分别为7.216%、11.131 %、20.336%,与对照组相比差异显著,G0/G1期细胞阻滞.CD14的表达与对照组相比无差异性.结论 CA对NB4细胞有生长抑制作用,能诱导NB4细胞发生凋亡,具有一定的量效和时效关系,单独使用CA的分化作用不显著.     

维奈克拉增强MDS 细胞系对地西他滨化疗敏感性机制的实验研究

目的 研究维奈克拉（venetoclax,VCX）对骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS) 细胞系地西他滨（decitabine,DAC）化疗敏感性的可能作用机制。方法 CCK-8 法检测不同浓度VCX 对MDS 细胞（SKM-1 和MUTZ-1 细胞系）增殖活力的影响;将MUTZ-1 细胞根据不同处理分为4 组:对照组、VCX 组、DAC 组和VCX+DAC组;Annexin V-FITC/PI 法检测各组细胞凋亡率;Western blotting 检测细胞中凋亡相关蛋白[ 细胞色素C（cytochromeC）,裂解型半胱天冬酶3（cleaved Caspase-3）表达水平],B 细胞白血病/ 淋巴瘤2(B cell leukemia/lymphoma-2,Bcl-2) 与Bcl-2 相关蛋白X（Bax）比值;JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒检测各组SKM-1 和MUTZ-1 细胞的线粒体膜电位;H2DCF-DA 荧光探针法检测细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量;Western blotting 检测细胞中自噬相关蛋白Beclin1,P62 和LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ比值。结果 随VCX 浓度升高,MUTZ-1 细胞增殖活性明显降低,且呈浓度依赖性（F=0.003,P=0.001）。与对照组（4.28%±1.66%）相比,VCX 组（13.75%±3.02%）,DAC 组（12.39%±4.16%）和VCX+DAC组（18.10%±3.50%）细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义（F=45.782,P<0.05）。与对照组（1.01±0.02,1.04±0.02,1.01±0.04） 相比,VCX 组（1.67±0.05,2.23±0.10,0.43±0.05）,DAC 组（1.62±0.08,1.85±0.06,0.49±0.07） 和VCX+DAC 组（3.24±0.10,3.81±0.19,0.13±0.01） 细胞中凋亡相关蛋白cytochrome C,cleavedCaspase-3 蛋白表达及Bcl-2/Bax 比值明显升高,差异均有统计学意义（F=116.384,282.069,248.035,均P<0.05）。与对照组（2.05±0.34,8.78±1.37）相比,VCX 组（8.72±1.26,14.02±1.45）,DAC 组（8.44±2.13,13.20±2.41）和VCX+DAC 组（15.66±2.90,26.45±1.53）细胞线粒体膜电位及ROS 含量明显升高,差异具有统计学意义（F=66.782,69.071,均P<0.05）。与对照组（1.05±0.04,1.02±0.08,1.01±0.07）相比,VCX组（1.62±0.15,2.60±0.19,0.56±0.15）,DAC 组（1.67±0.17,2.45±0.20,0.54±0.14）和VCX+DAC 组（3.72±0.21,3.58±0.27,0.13±0.09）自噬相关蛋白Beclin1,LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ表达明显升高,而P62 蛋白表达则明显降低,差异均有统计学意义（F=118.257,209.422,236.92,均P<0.05）。与DAC 组比较,VCX+DAC 组细胞凋亡率、cytochrome C,cleaved Caspase-3,Beclin1 蛋白表达水平,LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ比值和ROS 含量均明显降低（t=2.473,28.564,17.291,16.115,7.021,9.319）;线粒体膜电位、Bcl-2/Bax 比值和P62 蛋白表达均明显升高（t=4.621,9.244,4.278）,差异具有统计学意义（均P ＜ 0.05）。DAC 组和VCX 组细胞中上述检测指标差异均无统计学意义（均P ＞ 0.05）。结论 VCX 可能通过调节细胞凋亡、自噬和氧化应激来促进MDS 细胞对DAC 的化疗敏感性。     

细胞自噬对高三尖杉酯碱作用K562细胞的影响

目的:探讨高三尖杉酯碱(HHT)单用或与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联用对K562细胞凋亡及自噬的影响。方法:K562细胞在HHT(10 ng/ml)作用下1-8 d,采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用RT-PCR法、Western blot法和透射电子显微镜检测细胞自噬。结果:在HHT作用前期K562细胞凋亡率逐渐升高,而在后期则下降。HHT作用后,K562细胞的Beclin1表达及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值先下降后升高。HHT单用时,激活型caspase-3蛋白表达前期逐渐上升,而在后期下降。与自噬抑制剂3-MA联用组的K562细胞的Beclin1表达和LC3Ⅱ/Ⅰ的比值持续下降,而激活型caspase-3蛋白表达则逐渐升高。结论:HHT可诱导K562细胞凋亡,但HHT持续作用可诱导K562细胞发生自噬,与3-MA联用则增强HHT的细胞毒作用。     

小剂量亚硒酸钠和全反式维甲酸联合使用诱导NB4细胞的凋亡及分化

目的 研究小剂量亚硒酸钠（2－5μmol/L）与全反式维甲酸（ATRA）联合使用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡及分化的影响。方法 采用膜联蛋白V（Annexin-V)荧光标记试剂盒检测细胞的磷脂酰丝氨酸（PS）外翻率和DNA片段化的琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡，通过流式细胞术检测粒系分化细胞表面特异抗原CD11b表达，NBT还原实验检测细胞分化。结果 阴性对照组细胞术检测粒系分化细胞表达特异抗原CD11b表达，NBT还原实验检测细胞分化。结果 阴性对照组细胞PS外翻率为1．2％，5μmol/L亚硒酸钠处理NB4细胞48h后PS外翻率为0.8%,0.1μmol/L ATRA诱导48h后PS外翻率为2．0％，与对照组相比，差异均无显著性,而两者联合作用NB4细胞24，36，48h后的PS外翻率分别达到18.3%,25.9%,50.0%,DNA电泳呈典型的梯形带。小剂量（2μmol/L）亚硒酸钠没有诱导NB4细胞分化的能力，但其与0．1μmol/L的ATRA联合使用同单独使用0．1μmol/L的ATRA钠没有诱导NB4细胞分化的能力，但其与0．1μmol/L的ATRA联合使用单独使用0．1μmol/L的ARTA相比，CD11b表达阳性细胞率进一步增加，NBT还原能力也进一步增强。结论 小剂量的亚硒酸钠与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化。     

整合素β3在异丙肾上腺素诱导的心肌细胞损伤与凋亡中的作用

目的:探讨整合素β3(integrin β3,ITGB3)在β-肾上腺素受体(β-adrenergic receptor,β-AR)激动剂异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的心肌细胞损伤与凋亡中的作用及其机制。方法:心肌细胞随机分为对照组(Con组)、siRNA-ITGB3处理组(Con+si-ITGB3组)、ISO组、ISO+siRNA-ITGB3处理组(ISO+si-ITGB3组)。采用CCK-8检测细胞活性,TUNEL染色检测细胞凋亡,GFP-LC3腺病毒检测细胞自噬流强度,RT-PCR检测ITGB3 mRNA的表达;蛋白质印迹法检测细胞蛋白质水平。结果:在10μmol/L的ISO刺激后,心肌细胞活力下降、且随刺激时间的延长,细胞活力下降程度增加。siRNA-ITGB3干扰能够下调ISO诱导的ITGB3表达,抑制ISO所致的细胞活力下降。siRNAITGB3干扰能够抑制ISO诱导细胞凋亡,抑制促凋亡蛋白cleaved-caspase-3和Bax蛋白表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达;siRNA-ITGB3干扰能够增强GFP-LC3表达、促进自噬蛋白Beclin1,LC3-I/LC3-II积累,降低p62水平,抑制ISO所致的细胞自噬水平的下降。结论:ITGB3表达下调能激活细胞自噬,抑制ISO诱导的心肌细胞损伤与凋亡。     

环氧化酶2抑制剂塞来昔布诱导 NB4细胞凋亡的研究

目的：研究环氧化酶2（COX-2）选择性抑制剂塞来昔布对髓性白血病细胞株 NB4凋亡的影响,探讨塞来昔布诱导细胞凋亡的机制。方法RT-PCR 检测不同细胞系中 COX-2 mRNA 表达,MTT 法检测 NB4细胞增殖抑制,DNA Ladder 试验分析NB4细胞 DNA 片段化,流式细胞术检测 NB4细胞 Bcl-2蛋白的表达。结果与未加药处理组相比,不同浓度塞来昔布作用后DNA Ladder 片段随浓度的增加而更为明显。不同用药组25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L 塞来昔布组 Bcl-2蛋白表达率分别为（71．69±1．65）％、（34．51±2．53）％和（29．28±2．38）％,与空白对照组 Bcl-2蛋白表达率为85．34±2．89％相比,50μmol/L、100μmol/L 塞来昔布组 Bcl-2蛋白明显下降（P ＜0．05）。结论COX-2选择性抑制剂塞来昔布通过下调 NB4细胞 Bcl-2蛋白表达致诱导其凋亡。     

辛伐他汀对高糖高脂诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景：研究表明,他汀类药物能够促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附能力,抑制高糖高脂培养下骨髓间充质干细胞的凋亡。目的：观察辛伐他汀对高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法：将0.001,0.01,0.1,1.0μmol/L辛伐他汀分别与高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞培养48h,以正常培养骨髓间充质干细胞及高糖高脂诱导条件下培养的骨髓间充质干细胞为对照。倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法比较不同浓度辛伐他汀对高糖高脂环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡,加入PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002后辛伐他汀对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。结果与结论：与高糖高脂诱导组比较,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组骨髓间充质干细胞存活率均升高（P〈0.01）,其中辛伐他汀浓度在0.1μmol/L时骨髓间充质干细胞存活率升高最显著（P〈0.01）;同时流式细胞仪检测结果显示,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组细胞凋亡率下降（P〈0.01）,其中0.1μmol/L组凋亡率下降最显著（P〈0.01）。0.1μmol/L辛伐他汀对骨髓间充质干细胞的影响可被LY294002阻断。说明辛伐他汀能抑制高糖高脂诱导条件下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号途径有关。     

槲皮素减轻高糖条件下人肾小球内皮细胞损伤的实验研究

目的研究槲皮素减轻高糖条件下人肾小球内皮细胞(HRGEC)损伤的作用及其机制。方法培养HRGEC并分为对照组、高糖组、10μmol/L槲皮素组、100μmol/L槲皮素组,后3组进行高糖处理,10μmol/L及100μmol/L槲皮素组分别给予10μmol/L及100μmol/L槲皮素处理。检测细胞活力、细胞凋亡、凋亡基因mRNA表达量、氧化应激指标含量、PI3K/AKT通路分子蛋白表达量。结果与对照组比较,高糖组的细胞活力、Bcl-2的mRNA表达量、SOD及GPx的含量、p-PI3K及p-AKT的蛋白表达量降低,细胞凋亡率、Bax及Caspase-3的mRNA表达量、MDA的含量增加(P<0.05);与高糖组比较,10μmol/L及100μmol/L槲皮素组的细胞活力、Bcl-2的mRNA表达量、SOD及GPx的含量、p-PI3K及p-AKT的蛋白表达量增加,细胞凋亡率、Bax及Caspase-3的mRNA表达量、MDA的含量降低(P<0.05)且100μmol/L槲皮素组的上述变化较10μmol/L槲皮素组更为显著(P<0.05)。结论槲皮素能够减轻高糖条件下HRGEC的损伤,且这一作用与激活PI3K/AKT通路有关。     

甲基莲心碱对胰岛素抵抗的HepG2细胞降糖的影响

目的 研究甲基莲心碱对胰岛素抵抗的Hep G2细胞降糖的影响。方法 用CCK-8法进行细胞毒性实验筛选出合适的甲基莲心碱浓度;取对数生长期的Hep G2细胞,胰岛素10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L 5个浓度干预12 h、24 h、36 h、48 h探索最佳的胰岛素浓度和作用时间;实验分为正常组、模型组、实验组(甲基莲心碱组),正常组不做处理,模型组用10-7mol/L胰岛素干预36 h,实验组胰岛素干预后给与甲基莲心碱处理。用葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶-过氧化酶法)检测各组细胞的耗糖量; Western blot法检测各组细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR、p-m TOR)、自噬微管相关蛋白轻链(LC3)、泛素结合蛋白(p-P62)蛋白的表达。结果 给药后培养12 h,当甲基莲心碱的浓度为88. 02μmol/L时,Hep G2细胞致死率为5%;胰岛素10-7mol/L干预36 h可成功建立胰岛素抵抗模型;实验组中不同浓度的甲基莲心碱均可促进胰岛素抵抗Hep G2细胞葡萄糖消耗量(P 0. 05)。与正常组相比,模型组m TOR、p-m TOR、LC3蛋白表达显著升高,P62蛋白表达显著降低(P 0. 01)。与模型组比较,实验组的m TOR、p-m TOR、LC3表达不同程度地降低,P62蛋白表达不同程度地升高(P 0. 05)。结论 甲基莲心碱可增加胰岛素抵抗的Hep G2细胞的葡萄糖消耗量,减轻胰岛素抵抗。其可能是通过减少细胞自噬来发挥作用的。