地西他滨联合硼替佐米对套细胞淋巴瘤细胞株的增殖抑制作用及其相关机制

目的:观察地西他滨(DAC)联合硼替佐米(BTZ)对套细胞淋巴瘤(MCL)细胞系Jeko-1和Grante519细胞增殖的影响,并探讨其相关作用机制。方法:用不同浓度的DAC、BTZ单药和2药联合在体外对人MCL细胞株Jeko-1、Grante519细胞进行处理,采用CCK8法检测不同处理因素对细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测上述药物对细胞凋亡的影响,RT-PCR和Western blot方法从m RNA和蛋白水平检测上述药物对MCL细胞凋亡和信号传导相关基因PCDH8、NF-κB、Caspas3、BCL-2、CCND1和BAX表达水平的影响。结果:低浓度DAC能明显抑制Jeko-1、Grante519细胞的增殖并诱导其凋亡,效应呈剂量和时间依赖性(r=0.892,r=0.812;r=0.886,r=0.784)。单药DAC处理后,在Jeko-1和Grante519细胞中均可观察到Caspase3、BAX和PCDH8表达水平的升高(均P0.01),BCL-2、CCND1表达水平的降低(均P0.05),但对NF-κB表达水平无显著影响;高浓度BTZ能明显抑制Jeko-1和Grante519细胞的增殖,并诱导其凋亡,效应呈剂量和时间依赖性(r=0.854,r=0.763;r=0.927,r=0.742);单药BTZ能引起Jeko-1和Grante519细胞中Caspase3、BAX表达水平升高(P0.01),NF-κB、BCL-2和CCDN1表达水平的降低(P0.01),但对PCDH8表达水平无明显影响;与单药处理组相比,DAC联合BTZ显著增加了对Jeko-1和Grante519细胞的抑制率和凋亡率(P0.01),并显著提高Jeko-1和Grante519细胞PCDH8、Caspase3、BAX表达水平(P0.01),明显降低NF-κB、BCL-2和CCND1表达水平(P0.01)。结论:DAC与BTZ具有正协同作用,其对MCL细胞的增殖抑制作用可能是2药联合后加强了对NF-κB信号通路的抑制作用,并且下调BCL-2水平,上调BAX水平,从而引起下游的Caspase3蛋白表达水平进一步升高,以达到更高的抗肿瘤作用。     

eIF4E对多发性骨髓瘤CD138~+细胞自噬的影响

目的:探讨真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)对多发性骨髓瘤CD138~+浆细胞自噬的影响。方法:eIF4E抑制剂4EGI处理多发性骨髓瘤CD138~+浆细胞,采用荧光定量PCR和Western blot法检测细胞自噬相关因子LC3-Ⅱ和Beclin1的变化,MTT法检测细胞增殖抑制的变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:荧光定量PCR检测显示,4EGI处理骨髓瘤细胞后,LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA的表达水平具有时间及浓度依赖性,随着4EGI浓度增加和作用时间延长,LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA的表达水平逐渐增加,差异均有统计学意义(48 h:LC3-Ⅱ,r=0. 942,Beclin1,r=0. 952; 80μg/ml:LC3-Ⅱ,r=0. 966,Beclin1,r=0. 998)。Western blot检测显示,随着4EGI浓度增加,LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达逐渐增加(LC3-Ⅱ,r=0. 923; Beclin1,r=0. 977)。CCK-8检测显示,细胞抑制率逐渐增加(r=0. 996); 4EGI处理各组(20、40、80μg/ml组)细胞凋亡率(23. 23±4. 47、7. 59±1. 67、2. 03±0. 19)均明显高于对照组(0. 03±0. 04)(P 0. 05)。结论:抑制eIF4E对多发性骨髓瘤CD138~+浆细胞的自噬有激活作用,并引起骨髓瘤细胞自噬性死亡。     

FTY720诱导多发性骨髓瘤细胞株U266自噬与凋亡的研究

目的 探讨新型免疫抑制剂FTY720对多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡及自噬的影响,并探讨相关的作用机制.方法 0、2.5、5.0、10.0及20.0μmol/L FTY720处理U266细胞24h后,应用CCK-8方法检测不同浓度FTY720对U266细胞生存率的影响;20.0μmol/L FTY720分别处理细胞0、2、6及24h,通过CCK-8方法检测FTY720作用不同时间对U266细胞生存率的影响.同时应用流式细胞术Annexin Ⅴ-FITC/PI染色检测相应的细胞凋亡率.不同浓度FTY720处理U266细胞后,应用Western blot法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)B的表达,明确应用FTY720后是否引起细胞发生自噬.FTY720单用或联合应用自噬抑制剂Bafilomycin A1处理U266细胞24h,检测细胞生存率及凋亡率,并检测其对抗凋亡因子survivin表达的影响.结果 应用FTY720后,U266细胞生存明显受抑制,可引起细胞发生凋亡,作用呈浓度及时间依赖性.LC3B-Ⅱ表达明显增加,呈浓度依赖性,表明FTY720可引起细胞发生自噬.应用自噬抑制剂Bafilomycin A1后,可解救FTY720引起的细胞生存抑制及凋亡,同时可解救FTY720引起的survivin表达下降.结论 FTY720可引起U266细胞发生凋亡及自噬,自噬对凋亡具有促进作用.其机制可能为通过自噬在溶酶体降解了survivin等抗凋亡因子或其上游调控因子,从而促进细胞凋亡.     

β-catenin特异性抑制剂XAV939对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖抑制的实验研究

目的:通过短发夹RNA(shRNA)干扰β-catenin基因的表达及使用β-catenin特异性抑制剂XAV939作用于套细胞淋巴瘤(MCL)Jeko-1细胞株,了解特异性抑制β-catenin活性对Jeko-1细胞增殖及细胞凋亡的影响。方法:将构建β-catenin shRNA真核表达载体转染Jeko-1细胞,应用RT-PCR和Western blot的方法鉴定干扰效果,用不同浓度XAV939处理MCL细胞株Jeko-1;应用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyclin D1、C-MYC、caspase-3表达水平的变化。结果:shRNA转染48 h后,RTPCR、Western blot检测发现,Jeko-1细胞的β-catenin的mRNA、蛋白表达下降;无论使用shRNA或抑制剂处理,均可抑制Jeko-1细胞增殖,促进其凋亡;Western blot检测显示,凋亡相关蛋白BCL-2、Cyclin D1、C-MYC的表达下降,而BAX、caspase-3表达上升。结论:特异性抑制β-catenin活性能有效地抑制Jeko-1细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

卡非佐米对套细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨卡非佐米或硼替佐米对套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的治疗作用。方法:用卡非佐米分别处理MCL细胞株Jeko-1及来源于MCL患者的原代淋巴瘤细胞24、48和72h后,应用CCK-8法检测抑制率。以正常人来源细胞为对照,以硼替佐米和环磷酰胺(CTX)作为药物对照,同时应用流式细胞术检测不同药物处理后的细胞凋亡情况。结果:卡非佐米对Jeko-1细胞、MCL原代细胞的抑制作用具有时间和浓度依赖性(P0.01,r_(J、时间)=0.393, r_(原、时间)=0.650, r_(J、浓度)=0.473, r_(原、浓度)=0.417),对正常人单个核细胞的抑制作用仅有时间依赖性(P0.01,r=0.928);在相同浓度下卡非佐米对Jeko-1细胞的抑制作用明显高于硼替佐米(P0.01),但2种药物对MCL和正常人细胞的抑制作用无明显差异(P0.05)。在各自不同的临床推荐使用浓度下,卡非佐米对原代MCL细胞的抑制作用明显高于硼替佐米(P0.01)。凋亡实验显示,相对于硼替佐米,在同一浓度下卡非佐米促进细胞凋亡的能力更强(P0.05)。结论:卡非佐米可抑制MCL细胞的生长,其作用效果明显高于硼替佐米。     

自噬抑制剂ROC-325抗多发性骨髓瘤作用的研究

目的:探讨自噬抑制剂ROC-325对人多发性骨髓瘤细胞株增殖、凋亡、自噬的影响及其与硼替佐米联合用药的细胞学效应。方法:不同浓度的ROC-325作用于骨髓瘤细胞,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的作用,用Caspase-3/7、Caspase-9活性测定法检测药物对细胞凋亡的影响,用单丹磺酰戊二胺染色观察自噬小体数量,Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白(PARP和Caspase-3)和自噬相关蛋白(P62、Beclin-1和LC3A/B)的表达情况,用CCK-8法检测ROC-325联合硼替佐米对硼替佐米耐药细胞株的抑制作用。结果:ROC-325可呈剂量依赖性抑制RPMI 8226、RPMI 8226-BTZ100、U266和IM9细胞增殖(r=-0.8275,r=-0.9079,r=-0.9422,r=-0.9305),72 h IC50分别为2.795、4.020、5.432和4.755μmol/L。Caspase-3/7、Caspase-9活性结果显示,随着药物浓度的增加,Caspase-3/7和Caspase-9相对活性逐渐升高(r=0.9648,r=0.9377,r=0.9318;r=0.9087,r=0.9431,r=0.8914)。单丹磺酰戊二胺染色结果显示,细胞内自噬泡数量随着ROC-325浓度的提高逐渐增多(r=0.9565,r=0.9373,r=0.9233)。Western blot结果显示,ROC-325可诱导凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3表达上调以及自噬相关蛋白P62、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达上调,Beclin-1表达下调。ROC-325联合硼替佐米的CCK-8法检测结果显示,ROC-325与硼替佐米对耐药细胞株RPMI 8226-BTZ100的抑制具有协同作用。结论:ROC-325可以抑制骨髓瘤细胞增殖,通过线粒体途径诱导骨髓瘤细胞的凋亡,通过影响自噬体和溶酶体的融合抑制骨髓瘤细胞的自噬,ROC-325联合硼替佐米后可以克服硼替佐米耐药。     

miR-101和EZH2在套细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-101和EZH2在套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)中的表达及其临床意义。方法:应用RQ-PCR、免疫组织化学S-P法检测MCL患者淋巴结病理组织中miR-101和EZH2蛋白表达水平。比较miR-101、EZH2不同表达水平的MCL患者的生存情况。应用CCK-8检测miR-101 minics对MCL的Jeko-1、Mino细胞增殖的影响,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测miR-101 minics对Jeko-1、Mino细胞凋亡的影响,Western blot检测miR-101minics对Jeko-1、Mino细胞EZH2蛋白的表达水平的作用。结果:与对照组相比,MCL组miR-101低表达,而EZH2蛋白高表达,差异均有统计学意义(P 0. 01)。Spearman等级相关分析显示,miR-101与EZH2蛋白表达水平存在负相关(r=-0. 638,P 0. 05)。miR-101、EZH2表达水平与MCL患者B症状、IPI评分、Ann-Arbor临床分期存在相关性(P 0. 05)。miR-101低表达组患者生存率显著低于高表达患者(P=0. 0014),而EHZ2高表达组患者生存率显著低于低表达患者(P=0. 0093)。转染miR-100 minics后,Jeko-1、Mino细胞的EZH2蛋白表达下降,Jeko-1、Mino细胞增殖率降低,而细胞凋亡率增加。结论:miR-101和EZH2在不同临床分期和预后的MCL患者淋巴组织中表达存在差异,miR-101靶向EZH2基因表达能抑制MCL细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

ROS在FTY720诱导U266细胞死亡中的作用机制研究

本研究探讨活性氧（ROS）在FTY720诱导多发性骨髓瘤U266细胞株凋亡及自噬中的作用。不同浓度FTY720处理U266细胞24 h后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot检测LC3B的表达。结果显示：应用FTY720可引起U266细胞发生凋亡及自噬,自噬的发生可促进细胞死亡。自噬抑制剂Bafilomycin A1可降低FTY720导致的细胞生存率下降。应用ROS抑制剂NAC或Tiron后,FTY720引起的细胞凋亡减轻,联合应用NAC或Tiron和FTY720后LC3B-Ⅱ表达较单用FTY720明显下降。结论：FTY720可诱导U266细胞发生凋亡及自噬,ROS是FTY720引起的多发性骨髓瘤细胞凋亡及自噬的共同调节剂。     

氯喹在血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠血管重塑中的作用

目的:探讨氯喹(chloroquine,CQ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导的小鼠血管重塑的作用及可能机制。方法:将32只8周龄雄性C57 BL/6小鼠随机分为4组,分别为对照组、Ang Ⅱ处理组、Ang Ⅱ+CQ低剂量组及Ang Ⅱ+CQ高剂量组,每组8只。对照组不做任何处理,Ang Ⅱ组通过皮下埋置微渗透泵持续给予Ang Ⅱ,剂量为490 ng/(kg·min)。Ang Ⅱ+CQ低剂量及高剂量组小鼠在接受Ang Ⅱ基础上,按10mg/(kg·d)及50mg/(kg·d)剂量每天腹腔注射CQ。各组处理时间均为28d。分别在第0,3,7,14,21及28天用尾套法测定各组小鼠血压及心率。在第28天时处死小鼠,取主动脉,采用HE染色及Masson染色评价主动脉血管重塑情况。采用Western印迹检测主动脉I型、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅰ/Ⅲ)及自噬通路分子(LC3B-Ⅱ与P62)表达。结果:与对照组相比,Ang Ⅱ处理组小鼠血压升高,主动脉管壁增厚,主动脉发生明显纤维化,collagen Ⅰ/Ⅲ表达增加,自噬发生标志LC3B-Ⅱ表达增加,自噬底物P62表达降低。与Ang Ⅱ处理组相比,CQ低剂量及高剂量处理组小鼠血压降低,主动脉管壁变薄,纤维化减轻,collagen Ⅰ/Ⅲ表达减少,LC3B-Ⅱ及P62表达均增加;并且CQ高剂量组较低剂量组上述各指标的改变程度更大。结论:CQ可剂量依赖性地抑制Ang Ⅱ诱导的小鼠主动脉重塑,其机制可能与抑制自噬过度激活有关。     

氯喹在诱导肝癌细胞死亡中的作用机制研究

目的:研究自噬抑制药物氯喹(chloroquine,CQ)诱导肝癌细胞死亡的作用机制,探索自噬相关药物可能的临床应用价值。方法:选取3种肝癌细胞系,给予不同浓度CQ干预24 h,采用MTT法检测细胞的增殖情况,采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞死亡,采用Hochest33342染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色、Western blotting(caspase-9)法检测凋亡。采用GFP-LC3转染、Western blotting(LC3)及细胞电镜技术检测细胞自噬功能。结果:MTT检测显示,CQ作用24 h能够显著抑制肝癌细胞增殖。CQ(≥20μmol/L)干预后,PI染色阳性细胞明显增多,Hochest33342核染色显示核浓聚、核碎裂,TUNEL染色阳性细胞明显增多,caspase-9活化;而CQ(5、10μmol/L)干预后PI染色阳性细胞数目无明显变化。CQ处理细胞后,GFP-LC3阳性细胞明显增多,LC3-Ⅱ蛋白表达明显增高。同时用caspase抑制剂Z-VAD-FMK和3-MA或沉默Atg5的表达预处理,可显著抑制40μmol/L CQ诱导的MHCC97-L细胞的死亡。结论:CQ可以抑制肝癌细胞自噬降解,导致自噬小泡及自噬标志性蛋白积聚。大剂量CQ直接诱导肝癌细胞死亡,其死亡形式既具有凋亡的特征又具有自噬样死亡的特征。     

丙戊酸联合替西罗莫司抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞生长的机制研究

本研究探讨联合应用短链脂肪酸类去乙酰化酶（HDAC）抑制剂丙戊酸（VPA）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂替西罗莫司（TEM）抑制弥漫大B淋巴瘤细胞生长的机制。应用MTr法检测细胞增殖抑制率,瑞氏染色检测细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡、周期及自噬相关蛋白,透射电子显微镜检测细胞超微结构变化,蛋白质印迹法检测相关蛋白水平。结果表明,单用VPA和TEM均可抑制淋巴瘤细胞增殖,两药合用抑制作用更为显著;流式细胞术检测结果显示,两药联合后可阻断细胞周期,引起自噬相关蛋白LC3表达增高;电子显微镜检测进一步证实,经VPA及TEM处理后的细胞出现自噬体和自噬溶酶体,两药合用时自噬现象更为显著;蛋白质免疫印迹证实,自噬通路相关蛋白的表达发生改变;经VPA处理后HDACl和HDAC3表达下调,组蛋白乙酰化水平升高,表明VPA可通过表观遗传学调控影响淋巴瘤细胞增殖、促进其自噬。结论：VPA和TEM在阻断淋巴瘤细胞增殖、促进细胞自噬方面具有协同效应,为药物联合治疗提供了新的理论基础,具有良好的临床应用前景。     

苯丁酸氮芥抗套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1作用机制的研究

目的:探讨苯丁酸氮芥抗套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1作用机制。方法:应用MTT法检测苯丁酸氮芥对Jeko-1细胞增殖的影响,Hoechst染色及Annexin V-FITC双染检测苯丁酸氮芥对Jeko-1细胞凋亡的影响,Western blot检测苯丁酸氮芥对Jeko-1细胞凋亡相关蛋白BAX,BCL-2,procaspase 3,procaspase 8,procaspase 9表达水平及PI3K/AKT信号通路的激活情况。结果:苯丁酸氮芥0、5、10和20μmol/L作用Jeko-1细胞24、48、72 h后,细胞增殖受到抑制,并呈时间及剂量依赖性(r=0.873,r=0.932)。0,5,10,20μmol/L苯丁酸氮芥作用Jeko-1细胞72 h后,细胞凋亡率显著提高,BAX,procaspase 3,procaspase 8及procaspase 9蛋白表达水平显著上调,BCL-2表达水平显著下调,PI3K蛋白及AKT磷酸化水平显著降低。结论:苯丁酸氮芥能显著诱导套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1凋亡,其作用机制与调节PI3K/AKT信号通路有关。     

1,25-二羟维生素D_3对人结肠癌细胞凋亡和自噬的影响及机制研究

目的观察1, 25-二羟维生素D_3[1, 25-(OH)_2D_3]对人结肠癌HCT-116细胞凋亡和自噬的影响并初步探讨其机制。方法体外培养人结肠癌细胞HCT-116,分成对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和联合组[1, 25-(OH)_2D_3高剂量联合腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂]共5组,观察并比较各组细胞凋亡和自噬情况。结果低剂量组、中剂量组、高剂量组的HCT-116细胞凋亡程度、自噬程度及cleaved Caspase3、cleaved Caspase8、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、p-AMPK蛋白表达水平高于对照组, p-mTOR蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。联合组的HCT-116细胞凋亡程度、自噬程度及cleaved Caspase3、cleaved Caspase8、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、p-AMPK蛋白表达水平低于高剂量组, p-mTOR蛋白表达水平高于高剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 1, 25-(OH)_2D_3可通过调控AMPK/mTOR信号通路增强结肠癌细胞凋亡和自噬,发挥抗肿瘤作用。     

神经酰胺通过JNK/c-Jun信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡

目的探讨神经酰胺对胶质瘤细胞87-MG和U251自噬性死亡的作用及机制。方法采用MTT和流式细胞的方法检测不同浓度神经酰胺刺激87-MG和U251细胞后细胞存活和凋亡的改变;电镜和Western blotting技术检测自噬和JNK/c-Jun信号通路的改变,JNK药理性抑制剂SP600125特异性抑制JNK通路,观察其对神经酰胺诱导自噬死亡的影响。结果神经酰胺刺激24 h后,87-MG和U251存活呈现时间依赖性下降(P0.05);相应的细胞死亡数目剂量依赖性升高(P0.05),但凋亡性死亡比例较低;神经酰胺刺激后镜下观察到的自噬小体计数,LC3B/LC3A和Beclin-1的表达以及JNK/c-Jun的磷酸化程度都增加(P0.05)。提前给予SP600125抑制JNK信号通路的活性后,可以阻断神经酰胺诱导的细胞自噬性死亡(P0.05)。结论神经酰胺可诱导胶质瘤细胞87-MG和U251出现自噬性死亡,机制可能与JNK信号通路的活化有关。     

细胞自噬对高三尖杉酯碱作用K562细胞的影响

目的:探讨高三尖杉酯碱(HHT)单用或与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联用对K562细胞凋亡及自噬的影响。方法:K562细胞在HHT(10 ng/ml)作用下1-8 d,采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用RT-PCR法、Western blot法和透射电子显微镜检测细胞自噬。结果:在HHT作用前期K562细胞凋亡率逐渐升高,而在后期则下降。HHT作用后,K562细胞的Beclin1表达及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值先下降后升高。HHT单用时,激活型caspase-3蛋白表达前期逐渐上升,而在后期下降。与自噬抑制剂3-MA联用组的K562细胞的Beclin1表达和LC3Ⅱ/Ⅰ的比值持续下降,而激活型caspase-3蛋白表达则逐渐升高。结论:HHT可诱导K562细胞凋亡,但HHT持续作用可诱导K562细胞发生自噬,与3-MA联用则增强HHT的细胞毒作用。     

自噬调节药物对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的:探讨自噬调节药物包括自噬激活剂(雷帕霉素)、自噬抑制剂(羟氯喹和3-甲基腺嘌呤)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖、凋亡和自噬的影响。方法:采用不同浓度雷帕霉素(RAPA)、羟氯喹(HCQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理RPMI 8226细胞,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术检测药物作用24 h后细胞凋亡率,应用单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬小体数量,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC-3b和凋亡相关蛋白(caspase-3、PARP和BCL-2)的表达情况。结果:RAPA和HCQ可呈时间及剂量依赖性抑制RPMI8226细胞的增殖,并增加细胞的凋亡,而3-MA无明显抑制细胞增殖作用,也无诱导凋亡作用。MDC染色结果显示,细胞内自噬泡数量随着RAPA浓度的提高逐渐增多,而随着HCQ和3-MA浓度升高自噬泡数量却逐渐减少。Western blot结果显示,RAPA可诱导自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和凋亡蛋白caspase-3及PARP表达上调,但抑制抗凋亡蛋白BCL-2表达;HCQ抑制LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和BCL-2表达,但可上调caspase-3和PARP表达;3-MA可下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达,但对caspase-3、PARP及BCL-2表达均未显示明显影响。结论:RAPA能抑制RPMI8226细胞增殖,诱导RPMI8226细胞凋亡和自噬,HCQ则在抑制自噬和增殖的同时也可诱导凋亡,3-MA可抑制细胞自噬但对细胞增殖和凋亡影响不大。     

姜黄素诱导细胞自噬对人乳头瘤病毒复制的抑制研究

目的：研究姜黄素诱导细胞产生自噬对人乳头瘤病毒（HPV）复制的影响。方法用姜黄素处理人宫颈癌细胞 SiHa 12 h ,荧光酶标仪观察自噬小体形成,免疫印迹试验检测 SiHa 细胞自噬标志蛋白 LC3‐Ⅱ／LC3‐Ⅰ的表达水平;实时定量聚合酶链反应和免疫印迹试验分别检测 HPV E6基因 mRNA 表达和蛋白水平。加入自噬抑制剂3‐甲基腺嘌呤（3‐MA）,实时定量聚合酶链反应和免疫印迹试验分别检测自噬抑制后 HPV E6基因表达情况。结果姜黄素诱导后,与对照组相比,SiHa 细胞中自噬小体的荧光强度明显增高,LC3‐Ⅱ／LC3‐Ⅰ比值明显上升（P＜0．05）;细胞诱导自噬后 HPV E6 mRNA 和蛋白水平明显降低,而加入自噬抑制剂3‐MA 后,HPV E6 mRNA 和蛋白水平均明显增高。结论姜黄素可能通过诱导细胞自噬抑制 HPV 的复制。     

活性氧在GDC-0152诱导NB4细胞凋亡和自噬中的作用

目的:探讨活性氧(Reactive oxygen species, ROS)在GDC-0152诱导急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡和自噬过程中的作用。方法:不同浓度GDC-0152联合Z-VAD-FMK作用于NB4细胞,采用CCK8法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞自噬及ROS水平;Cyto-ID染色荧光显微镜观察细胞自噬及流式细胞术检测荧光表达;Western blot检测自噬相关蛋白LC3B的表达。结果:GDC-0152处理NB4细胞后细胞增殖抑制率和细胞凋亡率增加(P0.05);GDC-0152可诱导NB4细胞ROS水平升高;Cyto-ID染色后应用荧光显微镜观察和流式细胞术检测发现,GDC-0152可以增加NB4细胞自噬(P0.05);Western blot结果显示,GDC-0152可增加NB4细胞LC3B表达,且促进LC3BⅠ向LC3BⅡ转化;与GDC-0152(100 ng/ml)相比,GDC-0152(100 ng/ml)联合ROS抑制剂YCG063(10μmol/L)后细胞凋亡率降低且自噬减少(P0.05)。结论:GDC-0152通过诱导NB4细胞凋亡及自噬抑制细胞增殖。ROS能促进GDC-0152诱导的NB4细胞凋亡和自噬。     

自噬在硼替佐米诱导的肾癌细胞凋亡中作用的研究

目的探讨自噬在硼替佐米诱导的肾癌细胞凋亡中的作用。方法采用MTT检测硼替佐米对人肾癌ACHN细胞增值率的影响;通过Western Blotting检测硼替佐米对人肾癌ACHN细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及自噬相关蛋白LC3表达水平的影响;联用自噬抑制剂3-MA后,MTT检测细胞增殖率,Western Blotting检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达水平。结果硼替佐米对肾癌ACHN细胞的增殖有抑制作用,并且增加人肾癌ACHN细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达水平及自噬相关蛋白LC3表达水平,呈一定的浓度依赖性;联用3-MA可增加硼替佐米诱导的肾癌ACHN细胞的增殖抑制作用,并可增加硼替佐米诱导的肾癌ACHN细胞cleaved caspase-3表达水平。结论硼替佐米可诱导肾癌细胞凋亡并诱导肾癌细胞发生自噬,抑制自噬可以明显增强硼替佐米的肾癌细胞毒作用。     

ADMA可以通过自噬引起内皮细胞死亡

目的探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)在体外培养的条件下,是否可以通过自噬引起脐静脉内皮细胞死亡。方法首先,将细胞分为阴性对照组,ADMA(25μmol/L),ADMA(50μmol/L),ADMA(100μmol/L)及阳性对照组雷帕霉素(RAPA,自噬的激动剂,20 nmol/L)刺激人脐静脉内皮细胞24 h。然后应用ADMA(100μmol/L)分别刺激人脐静脉内皮细胞0 h,12 h,24 h,36 h,48 h。最后引入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol/L),分为阴性对照组,ADMA(100μmol/L),3-MA(5 mmol/L)和ADMA+3-MA(100μmol/L ADMA+5 mmol/L 3-MA)。免疫印迹方法检测微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3Ⅱ/Ⅰ)和酵母自噬相关基因Atg6的哺乳动物同源基因beclin-1的表达水平;实时荧光定量方法检测beclin-1的mRNA表达水平;应用流式细胞仪检测细胞死亡。结果随着ADMA浓度的增加,脐静脉内皮细胞内的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和beclin-1的表达增加(P0.05),细胞死亡的百分比也逐渐增加(P0.05)。在ADMA浓度为100μmol/L时,随着时间的延长,脐静脉内皮细胞内的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和beclin-1的表达增加(P0.05),细胞死亡的百分比也逐渐增加(P0.05)。在ADMA(100μmol/L)的基础上应用自噬抑制剂3-MA后,脐静脉内皮细胞内的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和beclin-1的表达较ADMA组减低(P0.05),同时加入3-MA后细胞死亡的百分比较ADMA组减低(P0.05)。结论 ADMA可以引起人脐静脉内皮细胞发生自噬,自噬的强度具有浓度及时间的依赖性,并可以通过自噬引起人脐静脉内皮细胞的死亡,当应用自噬抑制剂后可以减少这种由于ADMA所致细胞自噬引起的细胞死亡,这说明ADMA可以通过自噬引起内皮细胞死亡,从而引起内皮损伤,这可能是引起内皮功能不全的机制之一。