间充质干细胞治疗慢性移植物抗宿主病研究进展

慢性移植物抗宿主病(cGVHD)是异基因造血干细胞移植长期生存患者的严重并发症和主要死亡原因.深入研究cGVHD的发病机制,寻找高效低毒的治疗方法是目前国内外学者的研究热点,间充质干细胞(MSC)强大的组织修复和免疫调节作用,在组织再生和自身免疫性疾病中均有广泛应用,但cGVHD的应用研究才刚起步.现就cGVHD发病机制以及MSC治疗cGVHD的研究状况作一综述.     

骨髓腔输注间充质干细胞对骨髓移植后造血重建和移植物抗宿主病作用的实验研究

目的比较骨髓腔内（IBM）及静脉内（IV）输注异基因间充质干细胞（MSC）对大鼠骨髓移植（BMT）模型的骨髓造血、MSC重建和移植物抗宿主病（GVHD）的影响，优化MSC输注途径及探讨MSC促进造血的机制。方法①MSC体内动力学示踪。②建立大鼠BMT模型。③实验分组：IBM组[MSC（IBM）＋骨髓有核细胞（IV）]；IV组[MSC（IV）＋骨髓有核细胞（IV）]；骨髓移植（BMT）组；单纯MSC组；照射对照组；空白对照组。④移植后观察受体存活、外周血常规结果及植入证据、骨髓MSC、CFU-Mix恢复及GVHD。结果①IBM途径输注MSC主要分布于骨髓。②MSC与骨髓共移植可以提高大鼠存活率：照射对照组、单纯MSC输注组均在预处理后2周内全部死亡；BMT组2周内存活率为70％；IV存活率为80％；IBM组存活率为100％。③MSC可促进BMT大鼠外周血象恢复：移植后第14天（＋14天）移植组白细胞计数均明显高于BMT组，IBM组又明显高于IV组，＋21天IBM组三系均恢复，IV组＋21天白细胞计数恢复，血红蛋白浓度和血小板计数至＋30天恢复正常；BMT组三系恢复延迟约2周。④MSC促进BMT受体骨髓MSC恢复和造血重建：＋21天和＋30天共移植组CFU-Mix和MSC克隆生长恢复均较BMT组快（P＜0．05）；IBM组优于IV组（P＜0．05）。⑤植入证据的检测：BMT及共移植组存活大鼠外周血均检测到F344大鼠供体抗原RT1A’阳性细胞，比例＞90％。⑥GVHD发生率：BMT组GVHD发生率为42％；共移植组无明显GVHD表现。结论IBM输注MSC优先定位于骨髓、极少丢失于非造血器官；输注MSC可促进BMT后造血恢复及提高受体生存率；MSC促进BMT受体骨髓MSC及造血干细胞恢复，缩短骨髓抑制期，并降低GVHD；IBM输注途径效果优于IV途径。     

人脐带间充质干细胞治疗移植物抗宿主病的临床观察

目的探讨人脐带间充质干细胞(UCMSCs)在急性移植物抗宿主病(aGVHD)中的疗效及安全性。方法40名对激素无效的aGVHD患者分为两组,UCMSCs组:接受他克莫司+甲氨蝶呤(MTX)+UCMSCs抗GVHD治疗,常规治疗组:仅接受他克莫司+MTX治疗。结果 UCMSCs组治愈率及治疗有效率均高于常规治疗组(P0.05)。UCMSCs组治疗组及常规治疗组治疗起效的平均时间分别为(16.15±6.34)d、(20.8±6.94)d,(P0.05);治愈的平均时间分别为(25.5±7.18)d、(30.4±8.07)d,(P0.05)。UCMSCs组无1例因感染死亡。UC-MSCs组在输注UCMSCs过程中没有出现不良反应。UCMSCs及常规治疗组发生aGVHD各2例,无1例本病复发。讨论UCMSCs治疗aGVHD有效、安全。     

脐带间充质干细胞治疗激素难治性急性移植物抗宿主病的临床观察

目的探讨脐带间充质干细胞(UCMSCs)治疗儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后激素难治性急性移植物抗宿主病(SR-aGVHD)的疗效、安全性和生存情况。方法回顾性分析2014年2月—2018年12月在本院血液科行allo-HSCT术后发生SR-aGVHD的患儿临床资料59例,根据治疗过程中是否接受UCMSCs治疗分为UCMSCs组(n=33)和常规组(n=26)。结果 UCMSCs组中UCMSCs静脉输注平均细胞数为1.70(0.43-5.78)×10⁶/kg,平均次数为2(1—5)次,均未见输注不良反应。与常规组相比,UCMSCs组在治疗SR-aGVHD的改善中位时间上更短(12 d vs 18 d,P<0.05);2组之间在治疗SR-aGVHD的治愈时间,皮肤、肝脏、胃肠道疗效的总体反应率,单器官和多器官受累的SR-aGVHD疗效的完全缓解率差异均无统计学意义(P>0.05)。UCMSCs组广泛型cGVHD发生率、巨细胞病毒(CMV)感染率低于常规组(P>0.05),EBV感染率及复发率高于常规组(P>0.05)。结合生存...     

基于类器官技术的小鼠急性移植物抗宿主病肠道损伤模型建立与评价策略研究

目的:借助急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型小鼠血清和肠类器官培养技术,建立模拟aGVHD肠道损伤的体外模型并探索类器官水平aGVHD肠道损伤的规律。方法:以20-22 g雌性C57BL/6小鼠和20-22 g雌性BALB/c小鼠分别作为骨髓移植的供鼠和受鼠。受鼠接受致死剂量(8.0 Gy)的γ射线全身照射后的4-6 h内,输注供鼠来源骨髓细胞(1×10⁷/只,n=20)及脾脏有核细胞(5×10⁶/只,n=20)混合液共0.25 ml,建立aGVHD小鼠模型(n=20)。于造模后d 7麻醉aGVHD小鼠,摘取眼球取血,静置离心后收取血清。分离C57小鼠小肠隐窝,在模拟体内肠道干细胞生长增殖的3D培养体系中培养。分别在类器官培养基中加入5%、10%和20%体积比例的aGVHD血清,培养3d,倒置显微镜下观察小肠类器官的形成过程,比较小肠类器官形态。为了进一步评估,收集aGVHD肠道类器官并观察其病理变化。结合HE染色进行肠类器官形态评价;结合Alcian Blue染色,观察aGVHD小肠类器官分泌功能;结合免疫组化技术,分析血清浓度在5%、1...     

脐带间充质干细胞治疗儿童异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病疗效观察

本研究观察人脐带间充质干细胞（MSC）治疗儿童急性移植物抗宿主病的疗效和安全性。用胶原酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞,进行传代培养、扩增,培养至第3-5代用于临床治疗;5例急性白血病患儿经化疗达完全缓解。2例行亲缘HLA3/6位点相合的骨髓造血干细胞移植,1例行同胞HLA全相合骨髓与外周血造血干细胞联合移植,1例行无血缘关系HLA4/6位点相合双份脐血造血干细胞移植,1例行无血缘关系HLA5/6位点相合单份脐血造血干细胞移植。患儿发生Ⅲ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病（aGVHD）,接受二线免疫抑制治疗无效后,行0.5×106/kg受者体重MSC治疗。结果表明,5例急性白血病患儿均获造血重建,并发生皮肤、肝脏和胃肠道Ⅲ-Ⅳ度aGVHD,经二线免疫抑制治疗无效,输注人脐带间充质干细胞治疗后,皮疹消退,肝功能恢复正常,胃肠道症状好转。患儿均未发生输注相关不良反应。目前患儿均无原发病的复发,均处于无病生存状态。结论：异基因造血干细胞移植是治疗儿童急性白血病的有效方法,脐带间充质干细胞治疗儿童急性移植物抗宿主病是安全有效的。     

骨髓间充质干细胞对骨髓移植后移植物抗宿主病和移植排斥的影响

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BM—MSC)具有干细胞特性，体外培养呈贴壁生长，成纤维细胞样形态，不表达造血干细胞(hemaropoietic srem cells，HSC)的标志。它能抑制异基因骨髓移植(Allo—BMT)后移植物抗宿主病(GVHD)的发生，也可抑制器官移植后的排斥。其机理可能与为HSC提供保护、抑制T淋巴细胞的反应性、提供相匹配的HLA—Ⅰ类抗原有关。     

骨髓间充质干细胞对骨髓移植后移植物抗宿主病和移植排斥的影响

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSC)具有干细胞特性,体外培养呈贴壁生长,成纤维细胞样形态,不表达造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)的标志。它能抑制异基因骨髓移植(Allo-BMT)后移植物抗宿主病(GVHD)的发生,也可抑制器官移植后的排斥。其机理可能与为HSC提供保护、抑制T淋巴细胞的反应性、提供相匹配的HLA-Ⅰ类抗原有关。     

急性移植物抗宿主病的防治

急性移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植中的一个主要并发症。本文就其预防和治疗作一综述。     

间充质干细胞治疗激素耐药重度急性移植物抗宿主病

目的:探讨体外扩增骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)治疗激素耐药重度急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease, aGVHD)的临床疗效和安全性.方法:4例恶性血液病患者经HLA匹配同胞外周血干细胞联合骨髓移植后,诊断为激素耐药重度aGVHD,在原有免疫抑制治疗的基础上给予MSCs 0.5 × 106/kg受者体重.结果:4例患者经静脉输注体外扩增MSCs共9例次,未发现输注相关不良反应.所有患者均显示不同程度的治疗反应,总有效率达100%.4例发生消化道aGVHD,完全缓解2例,显著缓解1例,部分缓解1例.2例合并肝脏aGVHD患者中1例获完全缓解,1例获部分缓解.初始显效和充分显效的中位时间分别为3 d(2 ～ 5 d)和23 d(10 ～ 72 d).MSCs输注后,病情缓解者外周血CD8+CD28- T细胞比例明显上升,而CD8+CD28+ T细胞比例下降.结论:MSCs可快速缓解激素耐药重度aGVHD病情,其可能通过对CD8+CD28-/CD8+CD28+ T细胞比例的调控发挥抗aGVHD的作用.     

间充质干细胞治疗急慢性移植物抗宿主病的研究进展

间充质干细胞（MSCs）是具有自我更新和多向分化潜能的非造血成体干细胞,具有组织修复、支持造血、免疫调节等多种功能。实验及临床研究显示,在异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）中,应用MSCs预防和治疗移植物抗宿主病（GVHD）效果显著,安全可靠。本文就MSCs在治疗急、慢性GVHD方面的研究进展作一综述。     

小鼠移植物抗宿主病模型的建立

背景：小鼠移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植的主要并发症,表现为多系统损害（皮肤、食管、胃肠、肝脏等）的全身性疾病,是造成异基因造血干细胞移植后死亡的重要原因之一。目的：探讨建立小鼠移植物抗宿主病模型的方法,为实验性研究药物防治移植物抗宿主病提供有效的动物模型。方法：选择C57BL/6（H-2b）→BALB/C（H-2d）作为完全异基因移植供、受体。通过注射移植供鼠脾脏淋巴细胞及骨髓细胞数以建立移植物抗宿主病模型。根据临床表现、病理检查等判断移植物抗宿主病模型是否建立。结果与结论：给予5×106个以上的供鼠脾细胞的小鼠都发生了急性移植物抗宿主病,但小鼠移植物抗宿主病出现的时间、存活期不同。提示,输入5×106个供鼠脾细胞可有效建立移植物抗宿主病模型,小鼠异基因骨髓移植动物模型是可靠的,可用于移植物抗宿主病防治的实验性研究。     

骨髓间充质干细胞对小鼠急性移植物抗宿主病的预防及治疗作用

目的 观测小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)对急性移植物抗宿主病(aGVHD)的预防及治疗作用,并探讨其干预机制.方法 建立以C57BL/6小鼠为供体、致死剂量照射的BALB/c小鼠为受体的aGVHD动物模型.将小鼠分成6组:PBS组(单纯放射组)、BM组(单纯输注骨髓)、GVHD组(输注骨髓+脾细胞)、MSC-A组(输注骨髓+脾细胞,并于移植当天输注1×10~5 MSC)、MSC-B组(输注骨髓+脾细胞,并于移植当天输注5×10~5 MSC)、MSC-C组(输注骨髓+脾细胞,并于+7 d输注1×10~5 MSC),观测各组的生存状态;绿色荧光蛋白基因(Ad-EGFP)转染MSC,输入aGVHD模型小鼠,观察MSC在靶器官组织中的分布.结果①供体MSC可显著控制小鼠的GVHD症状,延长aGVHD小鼠的平均生存时间:PBS组为(13.5±2.6)d、GVHD组为(11.1±4.0)d,MSC-A组为(26.4±7.7)d、MSC-B组为(22.7±9.2)d,MSC-C组为(22.9±8.2)d,MSC各组与GVHD组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),但MSC各组之间无明显差异(P=0.28).病理评估显示MSC可明显减少小肠及脾脏组织中淋巴细胞的浸润,减轻损害.②MSC可明显减少aGVHD环境中Th1类炎性因子的分泌:GVHD、MSC.A、MSC-B、MSC-C各组+14 d外周血上清中IFN-γ的水平分别为(607.9±157.1)、(143.6±37.5)、(117.0±77.8)、(131.4±63.4)ng/L,各组TNF-α的水平分别为(52.31±17.95)、(6.02±3.99)、(5.21±0.28)、(22.39±18.21)ng/L;MSC不影响aGVHD环境中异基因T淋巴细胞的增殖,但促进其凋亡:GVHD、MSC-A、MSC-B、MSC-C各组的CD3+ Annexin V+ PI-细胞率分别为(10.3±6.6)%、(13.5±13.8)%、(19.7±6.0)%、(16.6±7.3)%,其中MSC-B组与GVHD组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).③Ad-EGFP成功高效转染MSC,输注入aGVHD模型鼠6 d后,共聚焦显微镜下发现MSC可大量分布至肺及小肠,而肝、脾及肾脏有少量分布.结论 MSC可促进异基因T淋巴细胞凋亡、抑制其二次活化功能、减少Th1类炎症因子的分泌表达、参与修复aGVHD靶器官组织,可有效防治aGVHD.     

间充质干细胞治疗急慢性移植物抗宿主病的究进展

间充质干细胞( MSCs)是具有自我更新和多向分化潜能的非造血成体干细胞,具有组织修复、支持造血、免疫调节等多种功能。实验及临床研究显示,在异基因造血干细胞移植(allo- HSCT)中,应用MSCs预防和治疗移植物抗宿主病(GVHD)效果显著,安全可靠。本文就MSCs在治疗急、慢性GVHD方面的研究进展作一综述。     

间充质干细胞用于治疗移植物抗宿主病的研究进展

同种异体造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stemcell transplantation,alloHSCT)是治疗血液系统恶性疾病及一些代谢性疾病和自身免疫性疾病的重要手段。然而,移植物抗宿主病(GVHD)仍是接受alloHSCT治疗的患者最易发生、最     

小鼠移植物抗宿主病模型的建立

背景:小鼠移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植的主要并发症,表现为多系统损害(皮肤、食管、胃肠、肝脏等)的全身性疾病,是造成异基因造血干细胞移植后死亡的重要原因之一。目的:探讨建立小鼠移植物抗宿主病模型的方法,为实验性研究药物防治移植物抗宿主病提供有效的动物模型。方法:选择C57BL/6(H-2b)→BALB/C(H-2d)作为完全异基因移植供、受体。通过注射移植供鼠脾脏淋巴细胞及骨髓细胞数以建立移植物抗宿主病模型。根据临床表现、病理检查等判断移植物抗宿主病模型是否建立。结果与结论:给予5×106个以上的供鼠脾细胞的小鼠都发生了急性移植物抗宿主病,但小鼠移植物抗宿主病出现的时间、存活期不同。提示,输入5×106个供鼠脾细胞可有效建立移植物抗宿主病模型,小鼠异基因骨髓移植动物模型是可靠的,可用于移植物抗宿主病防治的实验性研究。     

间充质干细胞治疗移植物抗宿主病的免疫机制研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是具有多向分化潜能的非造血干细胞.MSC具有低免疫原性及免疫调节能力,其中MSC的免疫调节性显得尤为重要,主要表现为:MSC能抑制T、B琳巴细胞、NK细胞、树突状细胞(DC)的活化和增殖;同时,MSC具有重建人类造血微环境的功能、提高造血干细胞移植的成功率.移植物抗宿主病(GVHD)是造血干细胞移植后相关死亡的主要原因.基于以上性质,MSC正应用于治疗自身免疫性疾病和GVHD.因此,深入研究MSC治疗GVHD的细胞免疫机制就显得尤为重要.本文将重点对MSC治疗GVHD的免疫机制相关方面的研究进展和临床研究状况进行阐述.     

急性移植物抗宿主病的防治

急性移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植中的一个主要并发症。本文就其预防和治疗作一综述。     

间充质干细胞输注对移植物抗宿主病中不同受损器官的治疗效果

背景：间充质干细胞的免疫学特性为其作为临床治疗移植物抗宿主病提供了可能。目的：分析骨髓间充质干细胞输注的安全性以及对移植物抗宿主病中不同受损器官的治疗效果。方法：8例恶性血液病患者在异基因造血干细胞移植后出现激素耐药重度急性移植物抗宿主病,在原有免疫抑制治疗的基础上给予输注间充质干细胞1×10^6/kg,分别输注1-4次。结果与结论：8例患者中6例经间充质干细胞治疗有效（2例完全缓解,4例部分缓解）,2例无效。5例皮肤病变中4例得到改善,1例无效;3例口腔病变中2例得到完全缓解,1例部分缓解。2例肝脏病变以及2例胃肠道病变均获得完全缓解。3例眼睛病变、1例闭塞性支气管炎以及1例泌尿系统移植物抗宿主病无效。在随访中位时间28（7-62）个月期间,8例患者中3例在输注间充质干细胞后3个月内出现移植后淋巴增殖性疾病。结果表明间充质干细胞输注对皮肤、肝脏、胃肠道、口腔移植物抗宿主病有一定的疗效,对眼睛、肺部以及泌尿系统的移植物抗宿主病无效果。间充质干细胞输注过程安全,间充质干细胞的使用是否与移植后淋巴增殖性疾病的发生有关需要更多病例资料的证实。     

间充质干细胞对H-2半相合骨髓移植小鼠免疫功能的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSC）对半相合骨髓移植小鼠免疫功能的影响及机制。方法经8Gy^60Coγ射线照射后，BALB／c（H-2^d）雌性小鼠分为两组：MSC组，尾静脉输注经cm—DiI膜染剂标记的CB6F1（H-2^bd）雌性小鼠的MSC和CB6F1雄性小鼠的骨髓及脾的单个核细胞；对照组，单独输注CB6F1骨髓及脾的单个核细胞。观察两组移植后不同时间外周血中的淋巴细胞亚群，ConA和LPs刺激的T、B淋巴细胞增殖，供受者及第三者混合淋巴细胞反应（MLR），供者骨髓及脾细胞在受者胸腺、骨髓和脾脏的植入率，供者MSC在受者体内分布，急、慢性GVHD的发生率和生存分析。结果移植后90天（＋90天）内，MSC组CD3阳性细胞高于对照组（P〈0．05），＋30天MSC组CD3CD4双阳性细胞百分比和CD4／CD8值高于对照组（P〈0．05）。两组T细胞增殖活性差异无统计学意义。MSC组＋14天后B细胞增殖功能开始恢复，＋30天达到正常值，而对照组＋60天才恢复到正常值。供受者的MLR中MSC组的RR值始终低于对照组；第三者MLR中MSC组与对照组差异无统计学意义。＋30天MSC组受者骨髓和脾中的sry基因多于对照组。移植后MSC主要集中在胸腺、骨髓、肝、小肠，并且大量扩增。对照组急性GVHD发生率高于MSC组（P〈0．05），＋90天对照组出现不同程度的慢性GVHD，MSC组＋120天后出现慢性GVHD，程度轻于对照组。MSC组存活率高于对照组（P〈0.05）。结论MSC促进骨髓干细胞植入，加快C1M淋巴细胞恢复，促进体液免疫恢复，减少GVHD发生率，并且在受者胸腺、骨髓、肝、肠和心内膜下大量扩增，起到修复损伤作用，提高半相合骨髓移植动物生存率。