基于粪便和肝脏胆汁酸代谢网络分析芪参汤对肝纤维化小鼠的影响

目的检测肝纤维化小鼠粪便和肝组织各胆汁酸含量变化,分析芪参汤抗小鼠肝纤维化潜在机制和靶点。方法 30只C57BL/6JNifdc小鼠随机分为空白组、模型组和芪参汤组,每组10只。采用蛋氨酸-胆碱缺乏饲料喂养诱导小鼠肝纤维化模型,造模期间芪参汤组灌胃芪参汤药液(18.8 g/kg),给药体积1 mL,空白组和模型组予等体积蒸馏水,连续8周。HE染色、油红O染色和天狼猩红染色观察肝组织病理变化;全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;ELISA检测血清白细胞介素(IL)-10、IL-6、转化生长因子-β1(TGF-β1)和CXC趋化因子配体12(CXCL12)含量;高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测小鼠粪便和肝组织22种胆汁酸含量变化。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、肝湿重及肝指数显著降低;肝细胞水肿、脂肪变性明显,纤维结缔组织增生;血清AST、ALT水平显著升高,IL-10含量减少,TGF-β1、CXCL12和IL-6含量增加,差异均有统计学意义(P0.01);粪便胆酸(CA)、牛磺胆酸(TCA)、鹅去氧胆酸(CDCA)、β-鼠胆酸(β-MCA)、牛磺β-鼠胆酸(Tβ-MCA)、牛磺猪胆酸(THCA)含量显著增加,猪胆酸(HCA)、猪去氧胆酸(HDCA)、牛磺猪去氧胆酸(THDCA)、ω-鼠胆酸(ω-MCA)和牛磺ω-鼠胆酸(Tω-MCA)含量明显减少,肝组织TCA和β-MCA含量显著增加,HDCA、石胆酸、ω-MCA和Tω-MCA含量显著减少,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与模型组比较,芪参汤组小鼠体质量、肝湿重及肝指数显著升高,肝组织形态结构、肝细胞脂肪变性、炎性细胞浸润和肝纤维化程度有所改善;血清AST、ALT水平降低,IL-10含量增加,TGF-β1、CXCL12和IL-6含量减少,差异均有统计学意义(P0.01);粪便TCA、CDCA、β-MCA、Tβ-MCA、α-鼠胆酸含量显著减少,HDCA、THDCA、熊去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)、ω-MCA、Tω-MCA和去氢胆酸(DHCA)含量显著增加,肝组织TCA、β-MCA和Tβ-MCA含量显著减少,TUDCA、ω-MCA和Tω-MCA含量显著增加,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论芪参汤可能通过调节粪便和肝组织胆汁酸代谢,改善小鼠肝纤维化水平,调节细胞因子表达,发挥抗肝纤维化作用。     

慢性乙型肝炎患者肝肾阴虚证和湿热蕴结证血清胆汁酸谱变化

目的探索血清胆汁酸谱变化在慢性乙型肝炎肝肾阴虚证及湿热蕴结证中的辨识意义。方法临床招募355例慢性乙型肝炎患者,包括肝肾阴虚证74例、湿热内蕴证281例,以355名配对健康人作为对照组。采用超高效液相色谱三重四级杆质谱技术(UPLC-TQ-MS),定量检测血清胆汁酸谱,比较慢性乙型肝炎肝肾阴虚证、湿热蕴结证患者与健康人之间,慢乙肝患者两种证型之间血清胆汁酸谱变化差异。结果与配对的健康人比较,慢性乙型肝炎湿热蕴结证和肝肾阴虚证患者的血清总胆汁酸、甘氨酸结合型胆汁酸、牛磺酸结合型胆汁酸及未结合型胆汁酸含量,血清初级胆汁酸鹅脱氧胆酸(CDCA)、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、胆酸(CA)、甘氨胆酸(GCA)、牛磺胆酸(TCA)含量,血清次级胆汁酸甘氨熊脱氧胆酸(GUDCA)、牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)、脱氧胆酸(DCA)、甘氨脱氧胆酸(GDCA)、牛磺脱氧胆酸(TDCA)、石胆酸(LCA)、甘氨石胆酸(GLCA)、λ鼠胆酸(λ-MCA)、λ甘氨鼠胆酸(Gλ-MCA)、λ牛磺鼠胆酸(Tλ-MCA)、猪脱氧胆酸(HDCA)、甘氨猪脱氧胆酸(GHDCA)、3-酮胆酸(3-KCA)、7-酮脱氧胆酸(7-KDCA)、7-酮石胆酸(7-KLCA)含量显著升高(P0.05)。慢乙肝肝肾阴虚证患者的血清初级胆汁酸CDCA、GCDCA、TCDCA、CA、GCA、TCA及血清次级胆汁酸熊脱氧胆酸(UDCA)、GUDCA、TUDCA、λ-MCA、Tλ-MCA、HDCA、GHDCA、3-KCA、原胆酸(ACA)含量显著高于湿热蕴结证患者(P0.05)。慢乙肝湿热蕴结证患者的血清次级胆汁酸GLCA、牛磺石胆酸(TLCA)含量显著高于肝肾阴虚证患者(P0.05)。结论血清胆汁酸谱有助于判识慢性乙型肝炎肝肾阴虚证及湿热蕴结证。慢乙肝肝肾阴虚证的胆汁酸代谢障碍较湿热蕴结证更为显著。     

山楂饮灌胃联合愈疡生新方灌肠对小鼠UC的治疗作用

目的:观察山楂饮灌胃联合愈疡生新方灌肠对小鼠免疫性溃疡性结肠炎疾病活动指数、体重变化、结肠长度、结肠炎症及溃疡愈合的作用和量效关系,为临床应用提供实验及理论依据。方法:选择100只昆明雄性小鼠,随机分为5组,即正常组、模型组、山楂饮联合愈疡生新方高剂量组(高剂组)、山楂饮联合愈疡生新方低剂量组(低剂组)、柳氮磺胺吡啶(SASP)组。除正常组外,其余各组均制作免疫性溃疡性结肠炎实验模型。于造模后第2 d开始给药,高剂组小鼠给予山楂饮0.01 g.g-1体重灌胃,愈疡生新方0.008 g.g-1体重灌肠,1次/日;低剂量组小鼠给予山楂饮0.005 g.g-1,愈疡生新方0.004 g.g-1体重灌肠,1次/日;柳氮磺胺吡啶组给予1%SASP灌肠和灌胃各0.002 g.g-1体重,1次/日;正常组、模型组给予生理盐水灌肠和灌胃各0.02 mL.g-1体重,1次/日。连续给药治疗21 d后,观察各组小鼠的疾病活动指数与体重变化。处死小鼠,取全段结肠,称结肠湿重,测肠重指数,观察结肠溃疡及炎症反应情况。结果:小鼠疾病活动指数、体重变化、各组小鼠结肠长度情况、各组小鼠结肠溃疡及炎症反应情况高剂组、低剂组、柳氮磺胺吡啶组明显优于模型组,且高剂组明显高于低剂组、柳氮磺胺吡啶组。结论:山楂饮灌胃联合愈疡生新方灌肠能明显降低小鼠免疫性溃疡性结肠炎的疾病活动指数和溃疡及炎症评分,减轻结肠充血、水肿、增厚等炎性症状,显著改善小鼠免疫性溃疡性结肠炎的结肠缩短程度;具有促进小鼠溃疡愈合、改善炎症反应的作用。其疗效与药量呈正相关。     

降脂颗粒联合生活方式干预治疗湿热蕴结型非酒精性脂肪性肝病的临床观察

目的 观察降脂颗粒联合生活方式干预治疗湿热蕴结型非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的临床疗效及对胆汁酸代谢的影响。方法 将90例湿热蕴结型NAFLD患者随机分为治疗组和对照组，每组45例。对照组采用单纯生活方式干预，治疗组在对照组治疗措施的基础上加用降脂颗粒治疗，两组疗程均为16周。观察肝脏超声疗效，比较两组体质量、体质量指数（BMI）、中医证候积分、血脂[（总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）]水平，以及血清、尿液胆汁酸代谢相关指标[总胆汁酸（TBA）、胆酸（CA）、甘氨胆酸（GCA）、猪胆酸（HCA）、熊去氧胆酸（UDCA）、甘氨熊去氧胆酸（GUDCA）、甘氨鹅去氧胆酸（GCDCA）、鹅去氧胆酸（CDCA）、α-鼠胆酸（α-MCA）、甘氨猪胆酸（GHCA）、牛磺胆酸（TCA）、脱氧胆酸（DCA）、石胆酸（LCA）、甘氨脱氧胆酸（GDCA）、甘氨石胆酸（GLCA）、牛磺-β-鼠胆酸（T-β-MCA）]水平的变化情况，同时进行安全性评价。结果 (1)最终完成试验者84例，其中治疗组43例、对照组41例。(2)治疗组、对照组...     

清肠温中方对慢性溃疡性结肠炎模型小鼠氧化应激作用的影响

目的:探究清肠温中方对葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导慢性溃疡性结肠炎模型小鼠氧化应激作用的影响。方法:90只雄性BALB/c小鼠随机分为6组,除空白组外,其余均自由饮用3%DSS方法复制慢性UC模型。用蒸馏水、清肠温中方高、中、低剂量和美沙拉秦缓释颗粒灌胃干预14 d,记录体质量,ELISA法检测血清和结肠SOD、GSH-px、MDA和结肠MPO,HE染色观察结肠病理,免疫组化染色检测结肠黏膜occludin蛋白表达。结果:模型组小鼠体质量、血清和结肠中SOD、GSH-px含量、结肠黏膜occludin表达水平均明显低于空白组(P0.05或P0.01),而MDA和结肠MPO含量、病理评分均高于空白组(P0.01)。清肠温中方中剂量组和美沙拉秦组小鼠体质量、血清和结肠SOD、GSH-px含量、结肠黏膜occludin表达水平均高于模型组(P0.05),而MDA和结肠MPO含量、病理评分均低于模型组(P0.05)。结论:对于DSS诱导的慢性UC模型小鼠,清肠温中方可以促进机体抗氧化、抑制氧化作用,减轻氧化应激反应从而起到治疗作用。     

丁氏溃结灌肠液对溃疡性结肠炎模型大鼠黏膜组织炎症介质和PPAR-γ的影响研究

目的:研究丁氏溃结灌肠液对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织髓过氧化酶(MPO)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱生型一氧化氮合酶(i NOS)m RNA、脂质过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)的影响,探讨其可能的作用机制。方法:SD大鼠通过DSS诱导建立急性期溃疡性结肠炎模型,造模成功的大鼠随机分为5组,分别为模型组、美沙拉秦灌肠液组(简称美沙拉秦组)和溃结灌肠液低、中、高剂量组,分别给予相应药物或生理盐水灌肠14d,另取正常大鼠作为空白组,空白组自由喂养。14d后处死全部大鼠,腹主动脉取血,取结肠标本观察肠黏膜变化情况,评估疾病活动指数(DAI),测定结肠组织MPO含量,酶联免疫吸附(ELISA)测定大鼠结肠组织IL-6、TNF-α含量,实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测大鼠结肠组织i NOS mRNA的表达水平,免疫组化检测大鼠结肠组织PPAR-γ的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠DAI、结肠黏膜评分以及结肠组织MPO、IL-6、TNF-α含量,iNOS m RNA表达水平显著增加(P0.05,P0.01),PPAR-γ的表达水平显著减少(P0.01)。与模型组比较,丁氏溃结灌肠液各剂量组和美沙拉秦组上述指标明显改善(P0.05,P0.01)。在对大鼠结肠黏膜组织inos基因、PPAR-γ蛋白表达的改善方面,丁氏溃结灌肠液高剂量组明显优于低剂量组(P0.01)。结论:丁氏溃结灌肠液可以上调UC模型大鼠PPAR-γ水平,减少脂质氧化产物MPO的产生,抑制炎症介质TNF-α、IL-6和炎症蛋白诱导型一氧化氮合酶的表达,从而减轻结肠炎症反应。     

白屈菜红碱对小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用

目的:研究白屈菜红碱对小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及可能的作用机制。方法:选取60只KM小鼠采用乙酸灌肠建立小鼠溃疡性结肠炎模型,随机分为模型组,阳性药组,白屈菜红碱低、中、高剂量组(25,50,100 mg·kg-1),并设立正常组,每组10只。灌胃给药,正常组、模型组给予生理盐水;阳性药组给予20 mg·kg-1美沙拉嗪。连续给药7 d后,观察白屈菜红碱对小鼠一般情况、结肠黏膜组织损伤的影响;试剂盒测结肠和血清中髓过氧化物酶(MPO)的活性和一氧化氮(NO)的含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测结肠和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化。结果:与正常组相比,模型组结肠组织损伤严重,MPO,NO,TNF-α的水平明显降低(P<0.01);与模型组相比,阳性药组和白屈菜红碱组结肠组织损伤情况明显减轻,美沙拉嗪与白屈菜红碱可改善升高MPO,NO,TNF-α水平(P<0.05,P<0.01)。结论:白屈菜红碱对乙酸诱导的小鼠溃疡性结肠炎有治疗作用,作用机制可能与其炎症因子NO,TNF-α的产生有关。     

芦丁对溃疡性结肠炎小鼠的干预作用及NLRP3炎症小体的影响

目的观察芦丁对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的干预作用。探讨其对NLRP3炎症小体信号分子活化的影响。方法将60只SPF级C57BL/6J小鼠随机分为6组,每组10只。除空白组外,其余组均采用葡聚糖硫酸钠诱导建立溃疡性结肠炎模型,美沙拉嗪组同时给予美沙拉嗪缓释颗粒灌胃,芦丁高、中、低剂量组分别给予100 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、25 mg/(kg·d)芦丁溶液灌胃,空白组、模型组以等体积l%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,均连续5 d。灌胃结束后,比较各组疾病活动度(DAI)评分、组织学评分,采用酶联免疫吸附法测定小鼠血清和结肠组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平,采用qRT-PCR法检测结肠组织中NLRP3、IL-1βmRNA表达量,采用Western blot法检测结肠组织中NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠DAI评分、组织学评分,血清及结肠组织中IL-1β和IL-18水平,结肠组织中NLRP3 mRNA表达量、IL-1βmRNA表达量和NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,芦丁高、中剂量组和美沙拉嗪组上述指标均明显降低(P均<0.05),且芦丁高剂量组血清及结肠组织中IL-1β和IL-18水平,结肠组织中NLRP3 mRNA表达量、IL-1βmRNA表达量和NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平均明显低于美沙拉嗪组(P均<0.05)。结论芦丁可明显改善溃疡性结肠炎小鼠临床症状,抑制黏膜炎症损伤,其作用机制可能与抑制NLRP3炎症小体的活化有关。     

五味子甲素对小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用

目的:考察五味子甲素对小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用。方法:以三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠制备溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型,溃疡性结肠炎小鼠随机分为模型组、阳性对照组及五味子甲素高、中、低剂量组(80、40、20 mg/kg),同时设立正常对照组,每组10只。灌胃给药,正常组、模型组分别给予等体积蒸馏水,阳性对照组给予500 mg/kg柳氮磺吡啶(SASP),连续给药14 d。观察五味子甲素对溃疡性结肠炎小鼠临床症状的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)检测溃疡性结肠炎小鼠结肠中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-6(IL-6)水平;用试剂盒检测结肠中髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)及一氧化氮合成酶(TNOS)的活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量。取结肠后HE染色观察组织形态学变化。结果:五味子甲素可改善三硝基苯磺酸诱导的溃疡性结肠炎小鼠临床症状,延长溃疡性结肠炎小鼠结肠转运时间,可显著降低MPO、TNOS活性,升高SOD活性,并降低MDA、NO、IL-6及TNF-α水平。组织病理学检查可见,给予五味子甲素后,溃疡性结肠炎小鼠病变严重程度减轻,动物结肠组织损伤范围明显减少,炎性细胞浸润程度减轻。结论:五味子甲素对三硝基苯磺酸诱导的小鼠溃疡性结肠炎有治疗作用,作用机制可能与其抑制炎症因子NO、IL-6及TNF-α的产生有关。     

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-13,IL-23及COX-2,CREB表达的影响

目的:观察参苓白术散对脾虚湿困型溃疡型结肠炎大鼠结肠组织白细胞介素(IL)-13,IL-23及环氧合酶-2(COX-2),c AMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响,探究其对溃疡性结肠炎作用机制。方法:将48只SPF级Wistar大鼠随机分为6组,分别是空白组、模型组、参苓白术散高、中、低剂量组和美沙拉秦组,每组8只,雌雄各半。除空白组,其余各组采用病证结合法复制脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠模型,即饮食、环境干预等措施联合2,4-二硝基苯磺酸灌肠。造模成功后,参苓白术散高、中、低剂量组分别按照24,12,6 g·kg-1·d-1,美沙拉秦组0.2 g·kg-1·d-1进行灌胃。连续灌胃21 d后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠结肠组织IL-13,IL-23含量;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测结肠组织IL-13,IL-23,COX-2,CREB mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织COX-2,CREB蛋白表达量。结果:与空白组比较,模型组大鼠结肠IL-13含量和IL-13 mRNA表达水平明显降低(P0.05),IL-23含量和IL-23 mRNA升高(P0.05),COX-2,CREB mRNA及蛋白相对表达量升高(P0.05)。与模型组比较,参苓白术散(高、中、低剂量)组大鼠结肠IL-13含量和IL-13 mRNA表达均升高,尤以参苓白术散高剂量组最显著(P0.05),IL-23含量和IL-23 mRNA降低(P0.05),COX-2,CREB mRNA表达及蛋白相对表达量降低(P0.05)。结论:参苓白术散可能调节脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-13,IL-23及COX-2,CREB的表达,减少结肠的炎症反应。     

大黄酸对DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及机制探讨

目的:探讨大黄酸对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及其相关的作用机制。方法:C57BL/6雄性小鼠,随机分为6组,分别为正常组,模型组,美沙拉秦组(0.8 g·kg~(-1))与大黄酸低、中、高剂量组(6.25,12.5,25 mg·kg~(-1)),每组10只。除正常组给予蒸馏水外,其余各组均采用3%DSS溶液自由饮用7 d诱导溃疡性结肠炎模型。造模第1天开始灌胃给药,正常组与模型组给予等量的蒸馏水,连续给药14 d。每天观察小鼠体重、粪便性状、隐血便血情况,评分并计算疾病活动指数(DAI);取结肠,测量长度,制作结肠石蜡切片,苏木素-伊红(HE)染色后显微镜下观察其病理变化;取外周血,收集血清,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测小鼠血清中鞭毛蛋白抗体含量;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测小鼠结肠组织Toll样受体5(TLR5),核因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠DAI分显著升高(P0.01);结肠明显缩短(P0.01);黏膜上皮、肠腺等结构消失,黏膜下层大量淋巴细胞浸润,血管扩张。给予美沙拉秦与各剂量的大黄酸后,上述症状均得到缓解(P0.05,P0.01)。与正常组比较,模型组血清中鞭毛蛋白抗体含量升高(P0.01);结肠组织TLR5,NF-κBp65蛋白表达明显增加(P0.01),美沙拉秦组与各剂量大黄酸组均减少(P0.05,P0.01)。结论:大黄酸具有治疗DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的作用,其机制可能与影响TLR5/NF-κB信号通路有关。     

黄芩汤对溃疡性结肠炎模型小鼠NLRP3/Caspase-1通路的影响

探讨黄芩汤(HQT)对硫酸葡聚糖钠盐(dextran sulfate, DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)模型小鼠NLRP3/Caspase-1信号通路的影响。将C57BL/6J小鼠随机分为空白组，模型组(DSS组),黄芩汤低(HQT-L组)、中(HQT-M组)、高(HQT-H组)剂量组，西药美沙拉嗪组(西药组),建立小鼠UC模型。造模成功后，HQT-L组、HQT-M组、HQT-H组和西药组分别给予低、中、高剂量的黄芩汤和美沙拉嗪混悬液灌胃，空白组和DSS组分别给予等体积的蒸馏水灌胃，给药10 d后，测定各组小鼠体质量、疾病活动指数(DAI)评分、结肠组织病理学评分，采用ELISA法测定血清白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量，实时荧光定量PCR(quantitative real-time, RT-qPCR)法测定结肠组织NLRP...     

猪牛羊胆汁HPLC指纹图谱研究

为有效控制猪、牛和羊胆汁质量,采用高效液相色谱法(HPLC),以AcclaimTMRSLC 120 C18色谱柱(3.0 mm×100mm,2.2μm,120);在柱温35℃下,以乙腈-1%高氯酸为流动相体系,0.5 m L·min-1流速梯度洗脱,200 nm波长检测,以中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)生成指纹图谱。以对照品归属各共有指纹峰,并采用蒸发光散射检测器(ELSD)和液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)验证。结果显示,猪、牛、羊胆汁色谱图分别有14,9,8个共有指纹峰,各相似度均大于0.92。以甘氨猪脱氧胆酸(GHDCA)、牛磺胆酸(TCA)分别作为猪胆汁和牛、羊胆汁HPLC指纹图谱的参照物,方法学考察结果符合指纹图谱建立要求,各共有指纹峰相对保留时间RSD小于1.5%,相对峰面积RSD均小于5.0%。归属猪胆汁共有指纹峰有牛磺猪脱氧胆酸(THDCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、甘氨猪脱氧胆酸(GHDCA)和甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA),牛、羊胆汁共有指纹峰有牛磺胆酸(TCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、甘氨胆酸(GCA)、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)和甘氨脱氧胆酸(GDCA)。研究结果表明,猪牛羊胆汁主要成分为结合型胆汁酸,猪胆汁与牛羊胆汁中的胆汁酸类成分存在显著性差异;三者的HPLC指纹图谱,特征性强、重复性好,可用于鉴别猪牛羊胆汁,控制胆汁质量。以快速液相色谱柱建立指纹图谱,可在HPLC系统分析,简便快速,具有可操作性。     

萸连丸对结肠炎小鼠脾脏Treg细胞PD-1/PD-L1表达的调节作用

目的 探明萸连丸对溃疡性结肠炎小鼠脾脏Treg细胞PD-1/PD-L1表达的调节作用。方法 采用经典的DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠模型。雄性SPF级BALB/c共40只，随机平均分为正常组、模型组、模型+萸连丸组、模型+美沙拉嗪组，除正常组外都给予DSS复制溃疡性结肠炎模型。造模后，模型+萸连丸组给予0.5g/kg萸连丸溶液灌胃，模型+美沙拉嗪组给予0.3g/kg美沙拉嗪溶液灌胃，正常组与模型组给予相同容积的生理盐水灌胃。记录小鼠体重、粪便粘稠度、便血情况；分离结肠并测量其结肠长度和重量，计算肠重指数；ELISA法检测结肠组织中IL-2、IL-17A的表达水平；分离脾脏，流式细胞术检测各组小鼠脾脏Treg细胞及其PD-1/PD-L1的表达水平；Western blot法检测Raptor、TSC1、TSC2的表达水平。结果 与模型组相比，模型+萸连丸组小鼠体重明显增加(P<0.05)、结肠长度显著恢复(P<0.01)、结肠重量以及肠重指数明显减轻(P<0.05);结肠组织炎性细胞浸润减少，黏膜损伤恢复；IL-2、IL-17A表达水平显著降低(P<0.01);脾脏中C...     

UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS法同时测定牛黄上清片中18种胆汁酸的含量

目的 建立超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)法同时测定牛黄上清片中牛磺胆酸、7-酮-3α,12-α-羟基胆烷酸、甘氨猪去氧胆酸、12-脱氢胆酸、甘氨胆酸、3-酮-7α,12α-二羟基-5β-胆烷酸、牛磺鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、猪胆酸、牛磺脱氧胆酸钠、猪去氧胆酸、胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺石胆酸钠、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸的含量。方法 分析采用Thermo Fisher Scientfic Bremen HYPERSIL GOLD色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.9μm);流动相0.1%甲酸-甲醇,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;柱温40℃;加热电喷雾离子源;负离子扫描;平行反应监测模式。再进行化学模式识别。结果 18种胆汁酸在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率96.73%～104.07%,RSD 2.10%～4.07%。不同厂家样品中各胆汁酸在种类和含量上存在一定差异。结论 该方法灵敏可靠,专属性好,可用于牛黄上清片的质量控制。     

平溃灌肠剂对溃疡性结肠炎模型大鼠疗效及作用机制研究

目的:研究平溃灌肠剂对溃疡性结肠炎大鼠模型的治疗作用,并对其作用机制进行探讨。方法:选取SPF级SD大鼠60只,随机抽取8只作为正常组,剩余52只采用三硝基苯磺酸+乙醇制备溃疡性结肠炎大鼠模型。造模成功后剩余50只大鼠随机分为模型组、柳氮磺吡啶组(0.32g/kg)及平溃灌肠剂高(17.25g/kg)、中(8.64g/kg)、低(4.32 g/kg)剂量组,每组10只。给予相应药物进行治疗,连续给药10 d。观察大鼠病变活动指数(DAI)变化,进行损伤程度评分、病理组织学评分,检测血清D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)水平及脱氧胆酸(UDCA)、牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)、甘氨熊脱氧胆酸(GUDCA)水平。结果:各给药组大鼠体质量均显著高于模型组(P0.05);各给药组DAI、结肠黏膜组织损伤程度评分、病理组织学评分均显著低于模型组(P0.05);各给药组与模型组比较,表现为D-LA、DAO和DCA降低,UDCA、TUDCA和GUDCA升高,其中柳氮磺吡啶组、平溃灌肠剂高剂量组各指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:平溃灌肠剂可能通过促进溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜损伤修复,降低D-LA、DAO和DCA,升高UDCA、TUDCA和GUDCA水平发挥其治疗作用。     

基于PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路探讨化浊解毒消痈方对溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜的保护作用

目的 基于PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路探讨化浊解毒消痈方对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用。方法 将48只小鼠随机分成正常组、模型组、美沙拉嗪组(阳性药，0.45 g/kg)和化浊解毒消痈方高、中、低剂量组(28.68、14.34、7.17 g/kg),每组8只。除正常组外，其余各组小鼠均采用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用7 d建立溃疡性结肠炎模型，造模后各组灌胃给予相应剂量药物。给药7 d后，分析小鼠疾病活动指数(DAI)评分，HE染色观察结肠组织病理学改变，RT-qPCR和Western blot法检测结肠组织PERK、eIF2α、ATF4、CHOP mRNA和蛋白表达。结果 与模型组比较，化浊解毒消痈方各剂量组和美沙拉嗪组小鼠DAI评分降低(P<0.05),结肠组织病理形态得到改善，结肠组织PERK、eIF2α、ATF4、CHOP mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),其中高剂量组作用与美沙拉嗪组相当。结论 化浊解毒消痈方能抑制结肠上皮细胞的过度凋亡，对UC小鼠结肠损伤具有保护作用，其作用机制可能与抑制PERK/eIF2α/ATF4/CHO...     

祛瘀生新方联合美沙拉秦治疗轻中度溃疡性结肠炎的临床研究

目的观察祛瘀生新方联合美沙拉秦治疗轻中度溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效。方法将72例轻中度溃疡性结肠炎患者随机分为治疗组与对照组,每组36例。治疗组予祛瘀生新方联合美沙拉秦治疗,对照组仅予美沙拉秦治疗。两组疗程均为1个月,观察临床疗效,比较改良Mayo评分、UC生活质量评分及相关生化指标C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)的变化情况。结果①试验期间,治疗组脱落1例(因失访),最终完成试验者对照组36例、治疗组35例。②治疗组、对照组临床总有效率分别为88.57%、75.00%;组间临床疗效比较,治疗组明显优于对照组(P0.05)。③治疗前后组内比较,两组改良Mayo评分差异均有统计学意义,均明显下降(P0.05)。组间治疗前后差值比较,治疗组评分改变明显多于对照组(P0.05)。④组间治疗后比较,UC生活质量评分(肠道症状、全身症状)差异有统计学意义,治疗组明显高于对照组(P0.05)。⑤组间治疗后比较,CRP、ESR水平差异有统计学意义,治疗组明显低于对照组(P0.05)。结论祛瘀生新方联合美沙拉秦治疗轻中度溃疡性结肠炎,可明显改善活动期临床症状,抑制体内炎症反应,提高患者生活质量。     

清热化湿祛瘀方对溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:观察清热化湿祛瘀方对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠黏膜氧化应激和细胞凋亡的影响。方法:将40只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组和中药组。采用3%DSS诱导UC模型,于造模开始后的第3天开始给药干预,正常组和模型组分别给予0.9%氯化钠溶液灌胃,中药组和美沙拉嗪组分别给予中药水煎剂和美沙拉嗪混悬液灌胃。计算小鼠的疾病活动指数,测量结肠长度,通过HE染色进行病理观察,采用DHE染色检测组织ROS表达情况,采用MDA、SOD测定盒检测组织MDA、SOD表达水平,并采用TUNEL染色法检测组织细胞凋亡水平变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠DAI评分显著升高(P<0.01),结肠长度显著缩短(P<0.05),结肠组织病理学评分显著升高(P<0.05),ROS、MDA以及细胞凋亡水平显著升高(P<0.05),SOD表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,美沙拉嗪组及中药组小鼠第8、9天DAI评分显著降低(P<0.01),结肠长度显著延长(P<0.05),结肠组织病理评分显著降低(P<0.05),ROS、MDA以及细胞凋亡水平显著降低(P<0.05),SOD表达显著升高(P<0.05);中药组细胞凋亡百分率显著低于美沙拉嗪组(P<0.05)。结论:清热化湿祛瘀方对UC具有一定的改善作用,其作用机制可能与调节氧化应激、改善结肠上皮细胞凋亡有关。     

黄连解毒汤对UC小鼠的抗炎作用、入血成分测定及其作用靶点的虚拟筛选

考察黄连解毒汤(HLJD)对小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用,测定入血成分以及虚拟筛选入血成分的作用靶点,分析作用机制。将60只Balb/c小鼠随机分成空白组、模型组、美沙拉秦组(0.3 g·kg^-1)以及HLJD高、中、低剂量组(24.66,12.33,6.17 g·kg^-1)。除空白组外,各组小鼠自由饮用2.5%葡聚糖硫酸钠溶液诱导UC,同时HLJD组和美沙拉秦组小鼠灌胃给予相应药物,连续7 d。每日观察小鼠,进行疾病活动指数(DAI)评分。实验末,HE染色观察小鼠结肠病理变化,ELISA测定结肠组织中IL-1β,IL-6和TNF-α含量,UPLC-Q-TOF-MS测定入血成分。通过PharmMapper反向对接筛选入血成分的作用靶点,通过TTD,OMIM,GeneCards数据库检索UC疾病靶点,选取成分靶点和疾病靶点的交集作为HLJD治疗UC的作用靶点。利用STRING数据库进行GO和KEGG富集分析。利用Discovery Studio将入血成分与排名靠前的作用靶点进行分子对接。结果显示,与空白组相比,模型组小鼠DAI显著上升(P<0.05),镜下可见炎症细胞数量和浸润程度明显增加。与模型组相比,HLJD组小鼠DAI显著降低(P<0.05),炎症细胞数量和浸润程度减轻。模型组IL-1β,IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.01),HLJD组炎症因子水平显著降低(P<0.05)。经UPLC-Q-TOF-MS鉴定10个入血成分。网络药理学分析结果显示,作用靶点主要富集在对有机物、化学物质、含氧化合物的反应等129条生物过程,以及IL-17,TNF,hepatitis B等16条信号通路。分子对接结果显示,黄柏内酯、巴马汀和小檗碱可通过氢键等形式与CASP3和MMP9靶点结合。综上所述,HLJD可减轻DSS诱导的UC小鼠结肠黏膜炎症浸润和黏膜损伤,其作用机制可能与黄柏内酯、巴马汀和小檗碱等入血成分作用于CASP3,MMP9等靶点,进而调控IL-17,TNF等信号通路有关,最终可降低结肠组织IL-1β,IL-6和TNF-α水平发挥抗炎作用。