二硫化二砷联合伊曲康唑对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的作用及Hedgehog信号通路的影响

目的:探讨二硫化二砷联合伊曲康唑对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的作用以及Hedgehog信号通路的影响。方法:将不同浓度的二硫化二砷和伊曲康唑与弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株OCI-LY3共培养。采用CCK-8方法检测细胞增殖情况; AnnexinⅤ-PI方法检测细胞凋亡率; Western blot检测BCL-2、BAX、SM0、Glil蛋白的表达水平。结果:伊曲康唑与弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株OCI-LY3共培养24、48和72 h后,细胞活力随作用时间的延长明显下降。随着伊曲康唑浓度的增加,OCI-LY3细胞活力较对照组明显降低(r=-0.690,r=-0.639,r=-0.833,r=-0.808,r=-0.578)。联合用药与单药组相比,OCI-LY3细胞增殖抑制作用更明显,且OCI-LY3细胞凋亡率明显升高(P0.05)。经二硫化二砷和伊曲康唑作用后,SMO和Glil蛋白表达水平明显下调(P0.01),与单药组相比,联合用药组SMO和Gli1蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:伊曲康唑能以时间和剂量依赖的方式抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞OCI-LY3生长;二硫化二砷和伊曲康唑联用具有协同作用,能显著下调Hedgehog信号通路中SMO和Glil蛋白表达。     

三氧化二砷联合伊曲康唑对KG1a细胞的协同杀伤作用

目的:探讨三氧化二砷联合伊曲康唑对急性髓系白血病KG1a细胞株的增殖与凋亡的影响及其可能的机制。方法:用瑞氏姬姆沙染色法观察细胞形态;CCK-8检测细胞抑制率;甲基纤维素集落形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期阻滞变化;Western blot检测细胞BCL-2、caspase-3、BAX、SMO、Gli1、Gli2蛋白表达。结果:三氧化二砷和伊曲康唑单用对KG1a细胞均具有增殖抑制作用,且呈时间剂量依赖性。联合用药与单药对比,前者细胞存活率、集落形成数均明显减少(P0.05),而细胞凋亡率增高。联合用药能够增加细胞的Caspase-3和BAX两种蛋白的表达、下调BCL-2、SMO、Gli1、Gli2的表达。结论:三氧化二砷联合伊曲康唑能抑制KG1a细胞增殖及诱导其凋亡,其机制可能与Hh信号通路受抑制,Caspase-3和BAX蛋白表达上调有关。对难治性AML进行三氧化二砷与伊曲康唑联合实验性治疗提供实验数据。     

乳康饮抑制乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖和诱导凋亡的作用研究

目的 探讨复方中药乳康饮对体外培养的人乳腺癌MDA-MB-435S 细胞增殖及诱导凋亡的作用.方法 乳康饮不同浓度(1.125、2.25、4.5、9.0 和18.0 mg/ml)处理MDA-MB-435S 细胞至对数生长期.MTT 法筛选最佳药物处理浓度和时间的组合,计算抑制率.流式细胞技术检测MDA-MB-435S 细胞的凋亡.结果 乳康饮对MDA-MB-435S 细胞增殖的抑制率随浓度的增加而增高(P ＜0.01),同时可以阻滞细胞周期于G2 ～M 期,而且随剂量的增大,作用时间的延长,阻滞作用也增强.乳康饮诱导MDA-MB-435S 细胞凋亡率较对照组显著增加(P ＜0.01).结论 乳康饮可抑制乳腺癌MDA-MB-435S 细胞增殖,促进细胞凋亡.     

姜黄素影响Caspase 8和Caspase 9诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡的研究

姜黄素（curcumin）是中药姜黄的主要成分，能选择性地抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡，本研究旨在探讨姜黄素抗癌作用的分子机制。选择淋巴瘤细胞系Raji为研究对象，用正常健康人静脉血作为对照，应用淋巴细胞分层法分离获得外周血单个核细胞（PBMNC）并进行培养。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测姜黄素不同浓度、不同时间作用于Rajj细胞、PBMNC后细胞的抑制率，并进行比较。用Western blot检测25μmol／L（IC50）姜黄素作用24小时Raji细胞胱冬蛋白酶Caspase 8和9的表达。结果表明：姜黄素可呈时间及剂量依赖性抑制Raji细胞增殖，可显著促进Raji细胞凋亡（P〈0．01），且呈浓度依赖性及时间选择性；一定浓度范围内的姜黄素对PBMNC无显著抑制作用，提示姜黄素抑制增殖具有选择性作用。Raji细胞胱冬蛋白酶8和9的表达明显增高（P〈0．05）。结论：胱冬蛋白酶8和9在Raji细胞增殖和凋亡中起重要的作用，姜黄素在不同浓度、不同时间条件下抑制Raji细胞增殖并促进其凋亡．     

姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨姜黄素对人类绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法将人类绒毛膜癌细胞JEG-3细胞株随机分为对照组和姜黄素干预组。姜黄素干预组加入100μl不同浓度的姜黄素与细胞孵育24 h;对照组只加入PRMI 1640培养液与等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT检测检测细胞抑制率。姜黄素干预组加入100μl姜黄素(终浓度为40μmol/L)与细胞孵育24 h后,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki-67和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达,以及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达。结果与对照组相比,姜黄素干预组JEG-3细胞培养24 h后吸光度显著下降(P 0. 05);姜黄素对JEG-3细胞抑制作用呈药物浓度依赖性,半抑制浓度(IC50)为(39. 33±1. 02)μmol/L;与对照组相比,JEG-3细胞的凋亡率明显升高,增殖相关蛋白Ki-67和Cyclin D1的表达显著降低(P 0. 05),凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的蛋白表达量显著升高(P 0. 05),Bcl-2的表达量显著降低(P 0. 05)。结论姜黄素可以下调人类绒毛膜癌细胞增殖相关蛋白的表达,上调凋亡相关蛋白的表达,调控其增殖和凋亡。     

大黄素抑制肺癌Anip973细胞增殖作用的量效关系

目的:大黄素是酪氨酸激酶抑制剂,有诱导癌细胞凋亡作用,应用流式细胞仪检测大黄素剂量对人肺腺癌细胞株Anip973增殖抑制作用的量效关系。方法:实验于2004-05/11在哈尔滨医科大学附属第二医院科研试验中心完成。采用四甲基偶氮唑盐比色试验和生长曲线测定活细胞数来比较不同剂量大黄素在不同作用时间内对体外培养的Anip973细胞增殖的影响,并用流式细胞术检测该细胞DNA相对含量来观察细胞增殖周期变化及其凋亡率。结果:①在一定范围内,大黄素的剂量越大、作用时间越长对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高,给予大黄素干预72h后,通过流式细胞仪可以观察到肿瘤细胞出现凋亡,0,10,20,40,60μmol/L大黄素干预肿瘤细胞凋亡率分别为1.09%,9.40%,17.21%,27.85%,40.71%,这些数据显示细胞凋亡作用,随着大黄素的剂量增加而增强(P<0.01)。②在大黄素干预条件下,DNA合成前期Anip973细胞比例仍然增加,DNA合成期大黄素可使Anip973细胞比例减少,DNA合成前期阻滞作用随大黄素剂量增加而加强,60μmol/L时其阻滞作用最强(76.18±1.51,F=150.69,P<0.01)。结论:大黄素可明显抑制Anip973细胞的增殖,其抑制作用具有量效关系。对细胞周期阻滞发生在DNA合成前期,从而产生了对肿瘤细胞增殖的抑制。     

伊曲康唑与心血管系统药物

伊曲康唑 (依他康唑 )为三氮唑类广谱抗真菌药 ,临床主要用于深部真菌所引起的系统感染 ,也可用于念珠菌病和曲菌病。作为细胞色素Ｐ4 50 -3Ａ4酶抑制剂 ,伊曲康唑可竞争性抑制许多经由Ｐ4 50 -3Ａ4酶催化的药物代谢 ,改变其药动学参数 ,使其血药浓度增高 ,作用时间延长 ,不良反应增加。以下仅举与心血管系统药物相互作用 2例。伊曲康唑与拜新同控释片处方 1　 拜新同控释片　 30ｍｇ× 2 1　 30ｍｇ　ｑｄ　ｐｏ伊曲康唑 1 0 0ｍｇ× 2 0　2 0 0ｍｇ　ｑｄ　ｐｏ分析　本方为一长期服用拜新同控释片的高血压患者因趾甲癣服用伊曲康唑 ,在服…     

土贝母制剂诱导Jurkat细胞凋亡及其对细胞周期的影响

目的探讨土贝母制剂对Jurkat(人T细胞白血病细胞株)细胞增殖抑制率及对细胞凋亡,细胞周期各时相的变化。方法应用MTT比色法和流式细胞仪检测经士贝母制剂对Jurkat细胞增殖抑制率的时间效应和浓度效应及凋亡率的变化。结果土贝母制剂对Jurkat细胞有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性,流式细胞仪分析,G1期细胞增高,S期细胞减少,G2/M期细胞增多,凋亡率上升。结论土贝母制剂能够抑制Jurkat细胞增殖,抑制G1期细胞向S期转化的进程,促进Jurkat细胞凋亡。     

黄酮联合阿霉素协同诱导HL60/ADR细胞凋亡机制的研究

目的:探究黄酮在体外对多药耐药细胞系HL60/ADR的影响及联合阿霉素后对细胞生长抑制和凋亡的作用机制,探讨中药在白血病化疗中扶正、增效的可能性。方法:用CCK-8法检测黄酮和阿霉素对HL60/ADR细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡率,并在光镜下观察细胞形态变化;蛋白印迹法检测药物作用后凋亡信号通路蛋白表达的情况;流式细胞仪检测药物作用后HL60/ADR线粒体跨膜电位的变化。结果:黄酮能显著抑制HL60/ADR细胞的增殖,且其抑制细胞增殖效应呈现浓度-时间依赖性;不同浓度的黄酮及联合阿霉素1.5μg/mL(20%抑制浓度即IC20值)后对细胞的抑制作用更明显,具有协同和相加作用。75μg/mL和100μg/mL黄酮能促进HL60/ADR细胞凋亡,而黄酮联合阿霉素的促凋亡作用更显著。蛋白信号通路研究显示,单药黄酮及两药联合能使HL60/ADR细胞线粒体膜电位下降,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL表达明显下调,促凋亡蛋白Bim、Bad、Bax明显增加,激活caspase途径;同时磷酸化的P-JNK蛋白表达水平升高,而P-ERK明显下降。结论:黄酮联合阿霉素可通过线粒体跨膜电位的下降,依赖caspase活化调控Bcl-2家族中Bim、Bad和Bax蛋白表达,下调ERK细胞保护通路并上调JNK应激相关通路,最终协同抑制HL60/ADR细胞增殖并诱导其凋亡。     

静脉输注伊曲康唑注射液的体会

伊曲康唑(Itracnazole,商品名Sporanox,斯皮仁诺)是一种第2代三唑类合成的广谱抗真菌药,在治疗各种真菌感染时有较好的疗效[1]。1临床资料病人,男,52岁,乙型肝炎并肝硬化(失代偿期),合并真菌性肺炎(曲霉菌)。静脉输注伊曲康唑注射液每天1次,每次200mg,时间为30d。后改为口服伊曲康唑胶囊200mg,每日2次。2护理因伊曲康唑易与其他药液发生反应,在使用此药过程中,若仅输注此种液体时,按伊曲康唑注射液说明书配制,每支250mg,用普通输液器连接此液体自带的延长管直接输注,注意用此药自带的稀释液稀释,用外包装袋避光输注,滴速1mL/min,输入200mg…     

不同封管方法预防PICC输注伊曲康唑引起堵管的效果观察

[目的]观察不同封管方法预防经外周穿刺中心静脉置管(PICC)输注伊曲康唑引起堵管的效果。[方法]将84例输注伊曲康唑的病人分为观察组和对照组,对照组按常规方法,观察组采用常规方法+伊曲康唑原包装的特配生理盐水冲管,比较两组导管的堵管情况。[结果]观察组导管堵管率低于对照组(P0.05)。[结论]使用伊曲康唑原包装的特配生理盐水冲管可有效降低经PICC输注伊曲康唑引起堵管的发生率。     

烟曲霉的微管蛋白基因鉴定及唑类抗真菌药物的耐药性研究

目的建立烟曲霉临床分离菌株的微管蛋白基因鉴定方法,并分析烟曲霉对唑类抗真菌药物的耐药性。方法对表型鉴定为烟曲霉的菌株,采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)方法提取烟曲霉菌株DNA,并采用对微管蛋白基因进行PCR扩增和测序的方法对烟曲霉菌株进行分子生物学鉴定,采用琼脂稀释法检测烟曲霉菌株对伊曲康唑和伏立康唑的耐药性。结果 91株临床分离株表型鉴定为烟曲霉,这些菌株在35℃和48℃生长。其中88株(96.70%)经微管蛋白基因鉴定为烟曲霉。87株烟曲霉菌株对4μg/mL伊曲康唑和1μg/mL伏立康唑敏感,检出1株对4μg/mL伊曲康唑和1μg/mL伏立康唑耐药菌株。结论微管蛋白基因鉴定方法可以对烟曲霉进行准确鉴定。     

TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化

【目的】探讨转化生长因子（TGF-β1）诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化。【方法】用不同浓度的TGF-131处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测Smads蛋白。【结果ITGF-β1对HL-60细胞有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性,10．4ng／mL TGF-β1增殖抑制作用较为明显;在细胞凋亡过程中,Smad3、Smad7表达呈逐渐升高趋势（P〈0．05）,而Smad2、Smad4则无明显变化。【结论】TGF-β1可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性;Smad3、Smad7可能参与TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡过程,其变化与HL-60细胞凋亡密切相关。     

一氧化氮对鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨外源性NO对CNE-2细胞增殖与凋亡的影响。方法:分别用不同浓度NO供体药物硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)干预CNE-2细胞,观察细胞形态学变化、检测细胞的抑制率及细胞的凋亡和坏死率。结果:SNP以浓度依赖性方式抑制CNE-2细胞增殖,SNP 100,200,400,600,800,1 600,3 200μmol/L各组细胞抑制率与药物浓度呈正相关;SNP以浓度依赖性方式促进CNE-2细胞凋亡,SNP(1 000μmol/L)组细胞凋亡率较SNP(600μmol/L)组显著增高(P0.05)。结论:外源性NO能抑制CNE-2的增殖,促进CNE-2的凋亡,其抑制效应与NO浓度呈正相关。     

清解扶正颗粒对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨清解扶正颗粒(Qingjiefuzheng Granules,QFG)对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养人大肠癌细胞HCT-116和HCT-8,用不同浓度的QFG干预,采用MTT法检测细胞活力,计算QFG对癌细胞增殖的抑制率;倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞周期(PI染色分析)和细胞凋亡(Annexin V/PI染色分析)。结果:MTT实验结果显示QFG对大肠癌细胞增殖的抑制率随时间及浓度的增加而增大;细胞周期分析结果显示QFG使大肠癌细胞增殖周期停滞在G0/G1;Annexin V/PI染色实验显示QFG能促进大肠癌细胞凋亡。结论:QFG具有抑制大肠癌细胞增殖和诱导大肠癌细胞凋亡的作用。     

20(S)-人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的作用

目的 观察20（S）-人参皂苷Rg3（SPG-Rg3）对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的作用及其可能作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察SPG-Rg3对Hela细胞的杀伤作用,并计算其半抑制浓度（IC50）.采用流式细胞术检测SPG-Rg3作用后Hela细胞的细胞周期及细胞凋亡情况.结果 SPG-Rg3浓度为20～400 μg/mL时,SPG-Rg3对细胞增殖的抑制率随其浓度的增高而增大,作用强度呈浓度依赖性,二者呈正相关（r=0.922 5,P〈0.05）.SPG-Rg3对Hela细胞的IC50为85.1 μg/mL.经SPG-Rg3作用48 h后,SPG-Rg3实验组Hela细胞处于S期的细胞数与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;SPG-Rg3实验组处于G2/M期的细胞数明显少于对照组（P〈0.01）.SPG-Rg3实验组Hela细胞于G1期峰前出现显著的凋亡峰,且凋亡细胞数与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 SPG-Rg3能杀伤体外生长的Hela细胞,并诱导其凋亡.     

引起不良理化变化的药物相互作用(二)

处方 3　　　　泰胃美与伊曲康唑泰胃美　　　　 0 4× 4 0 0 4ｂｉｄｐｏ伊曲康唑　　　　 0 1× 6 0 2ｑｄｐｏ分析 :本方为一胃溃疡患者服用泰胃美 (西咪替丁缓释片 )期间患念珠菌性阴道炎 ,服伊曲康唑后抗真菌疗效不够满意。伊曲康唑为三唑类抗真菌药 ,在酸性环境中较易吸收 ,而泰胃美为组胺Ｈ2 受体拮抗剂 ,抑制胃酸分泌作用较强 ,使胃液ｐＨ值升高 ,伊曲康唑的吸收降低 ,从而影响疗效。另外 ,抗酸剂如氢氧化铝等也能干扰伊曲康唑的吸收。处理方法 :服用伊曲康唑至少 2小时后再服用泰胃美 ,或将伊曲康唑与可乐饮料同服。处方 4　　…     

丹参酮ⅡA对肺腺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对肺癌细胞株NCI-H460的增殖抑制作用与促凋亡的影响。方法:分别以不同浓度的丹参酮ⅡA干预肺腺癌H460细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖抑制,应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对NCI-H460肺腺癌细胞的促凋亡作用。结果:丹参酮ⅡA可显著抑制肺腺癌NCI-H460细胞的生长,抑制程度与作用时间和药物浓度成正相关,流式细胞仪结果显示:用0.3125μg/mL的丹参酮ⅡA作用NCI-H460细胞24、48、72h后,细胞凋亡率分别为3.69%、6.67%、12.01%,成时间依赖性。结论:丹参酮ⅡA对NCI-H460细胞的增殖具有明显的抑制以及诱导凋亡的作用。     

重组人血管内皮抑素抗白血病作用的初步研究

目的 探索重组人血管内皮抑素(rhES,商品名恩度)体外对急性白血病细胞生长的抑制作用.方法 应用锥虫蓝拒染法、MTT法、透射电子显微镜(电镜)及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术等方法 检测rhES体外对正常人及急性白血病患者骨髓原代细胞增殖和凋亡的影响.结果 50、100和200μg/ml rhEs作用HL-60细胞72 h,细胞增殖抑制率分别为11.6%、30.4%和33.5%;100和200μg/ml rhES作用NB4细胞72 h,细胞增殖抑制率分别为12.4%和16.4%,其抑制急性白血病细胞株增殖作用呈浓度及时间依赖性;rhES体外浓度0～400μg/ml对正常人骨髓单个核细胞的生长活性无明显抑制作用;50～200 μg/ml rhES对急性白血病患者原代细胞有抑制生长活性的作用,并且其抑制作用呈浓度及时间依赖性.rhES在体外浓度为100 μg/ml时,与HL-60和NB4细胞作用72 h,透射电镜观察可见典型的细胞凋亡的表现,流式细胞术检测凋亡率分别为19.6%和20.8%.结论 rhES在体外有抑制急性白血病细胞增殖和诱导凋亡的作用,是治疗急性白血病潜在的有效药物.     

穿膜肽-凋亡蛋白融合蛋白导入人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌Anip973细胞的生物学特性

目的:在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白,观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性,并了解其是否有剂量依赖性。方法:实验于2005-08/2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni2 亲和层析纯化。②细胞增殖抑制实验:取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中,培养12h后加入终浓度分别为0,10,20,30,40,50mg/L融合蛋白培养48h,弃上清,每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液穴5g/L雪20μL,继续孵育4h,检测吸光度,计算肿瘤生长抑制率。③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞,每种细胞分成两组:给药组加入终浓度为30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白,对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液,继续培养48h。苏木精-伊红染色,光镜下观察细胞形态;溴乙啶/丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率。结果:①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50mg/L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用,对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用,半数抑制浓度为27mg/L。②30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白作用48h后,人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变,对照组和给药组的凋亡率分别为穴2.9±0.4雪%和穴3.1±0.6雪%,没有显著差异(P>0.05);Anip973细胞可见到细胞皱缩,染色质浓缩和出现凋亡小体等凋亡特征性形态变化,给药组和对照组凋亡率分别为穴36.8±1.7雪%和穴6.7±0.5雪%,差异显著(P<0.01)。结论:穿膜肽-凋亡蛋白能诱导肿瘤细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖性,而对正常细胞没有毒性作用。