海风藤醇B对PAF诱导的兔血小板钙内流和胞内游离钙浓度升高的抑制作用

应用４５Ｃａ２＋和钙荧光指示剂Ｑｕｉｎ－２／ＡＭ进行实验，发现海风藤醇Ｂ（１０、１００μｍｏｌ·Ｌ－１）无论对血小板激活因子（ＰＡＦ）引起的兔洗涤血小板Ｃａ２＋内流还是胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）升高均有抑制作用，且呈良好的剂量相关，最大抑制率分别为３７．２％和５０．８％；但对Ａ２３１８７引起的胞内［Ｃａ２＋］ｉ升高无显著抑制作用。结果表明：海风藤醇Ｂ能选择性拮抗ＰＡＦ诱导的钙内流和［Ｃａ２＋］ｉ的升高。     

海风藤醇B对PAF越膜代谢和生物合成的影响

研究海风藤醇Ｂ地抗血小板激活作用与其影响兔血小板中血小板激活因子的越膜代谢和生物合成间的关系。采用放射性薄层层析法和ＰＡＦ生物测定法研究海风藤醇Ｂ对ＰＡＦ越膜代谢和生物合成的影响。海风藤醇Ｂ，银杏内醌Ｂ可抑制兔血小板」＾３Ｈ「－ＰＡＦ的越膜代谢，ＩＣ５０分别为８４．８，３４．９μｍｏｌ．Ｌ＾－１。     

海风藤酚、甲基海风藤酚、海风藤醇A和海风藤醇B对兔血小板聚集的影响

海风藤酚、甲基海风藤酚、海风藤醇Ａ和海风藤醇Ｂ均有抑制血小板激活因子（ＰＡＦ）诱导的兔血小板聚集作用，ＩＣ_（５０）分别为１７．９、９．２、１４２．０、１４．０μｍｏｌ·Ｌ~（－１）。经阿司匹林（ＡＳＡ）、磷酸肌酸／磷酸肌酸激酶（ＣＰ／ＣＰＫ）预处理的兔洗涤血小板，甲基海风藤酚和海风藤醇Ｂ仍能抑制ＰＡＦ诱导的兔血小板聚集，ＩＣ_（５０）为９．０、１６．５μｍｏｌ·Ｌ~（－１）。同时，４种成分对于二磷酸腺苷（ＡＤＰ），花生四烯酸（ＡＡ）诱导的血小板聚集抑制作用较弱，海风藤Ｂ能使ＰＡＦ诱导血小板聚集量－效曲线平行右移，ＥＣ_（５０）由１．５９ｎｍｏｌ·Ｌ~（－１）升为２０．６ｎｍｏｌ·Ｌ~（－１）。结果表明：４种成分能选择性拮抗ＰＡＦ对兔血小板的聚集作用。     

海风藤酚,甲基海风藤酚,海风藤醇A和海风藤醇B对兔血小板…

海风藤酚、甲基海风藤酚、海风藤醇Ａ和海风藤醇Ｂ均有抑制血小板激活因子（ＰＡＦ）诱导的兔血小板聚集作用，ＩＣ５０分别为１７．９、９．２、１４２．０、１４．０μｍｏｌ·Ｌ＾－１。经阿司匹林（ＡＳＡ）、磷酸肌酸／磷酸肌酸激酶（ＣＰ／ＣＰＫ）预处理的兔洗涤血小板，甲基海风藤酚和海风藤醇Ｂ仍能抑制ＰＡＦ诱导的兔血小板聚集，ＩＣ５０为９．０、１６．５μｍｏｌ·Ｌ＾－１。同时，４种成分对于二磷酸腺苷由１．５９ｎ     

Quin2测定兔血小板胞浆内游离钙浓度

大量实验证明、细胞内钙离子作为第二信使,在调节细胞机能代谢及细胞激活过程中起着极为重要的作用。因此,为深入探讨细胞激活的奥秘,首先要进行细胞浆内游离钙浓度[Ca~(2 )]i测定方法研究。但在文献中对兔血小板胞浆内游离钙测定的报道少见。本文参考文献介绍,结合本实验室的具体条件以及兔血小板的特殊性,初步建立了兔血小板[Ca~(2 )i的Quin2荧光测定方法。     

Fura－2荷载血小板胞内游离钙浓度的连续测定

以Ｃａ２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２荷载血小板，连续测定血小板胞内游离Ｃａ２＋（［Ｃａ２＋］ｉ）浓度动态变化。在生理胞外Ｃａ２＋浓度时。正常成人血小板［Ｃａ２＋］ｉ静息水平为１０８．３±３．６ｎｍｏｌ／Ｌ（－ｘ±ｓ－ｘｎ＝１５，下同），以凝血酶０．２Ｕ／ｍｌ作诱导，［Ｃａ２＋］ｉ迅速升至峰值７７０．３±２７．３ｎｍｏｌ／Ｌ，其下降幅度在４ｍｉｎ时为４０．９％±１．８％；以ＴＭＢ８４００μｍｏｌ／Ｌ阻滞胞内Ｃａ２＋释放，［Ｃａ２＋］ｉ的峰值（４４３．７±２７．７ｎｍｏｌ／Ｌ）明显下降（Ｐ＜０．００１），而４ｍｉｎ的下降幅度（４７．７％±３．８％）则无明显差异（Ｐ＞０．０５）。在胞外Ｃａ２＋＜１０－８ｍｏｌ／Ｌ时，［Ｃａ２＋］ｉ静息水平７０．２±７．５ｎｍｏｌ／Ｌ，作同样的诱导，［Ｃａ２＋］ｉ的峰值（３２１．２±１７．８ｎｍｏｌ／Ｌ）及下降幅度（９９．２％±３．６％）均有显著变化（ｐ＜０．００１）。结果表明，本文所建立的方法能连续测定血小板［Ｃａ２＋］ｉ的动态变化。     

海风藤酮对小鼠抗着床作用的细胞化学和电镜观察

目的 观察海风藤酮对小鼠的抗着床作用及其细胞化学和超微结构的变化。方法 向妊娠第２天小鼠子宫角内注射不同剂量的海风藤酮，于妊娠第８天和１０天观察其对滋养层细胞的刀豆凝集素受体和麦胚凝集素（ＷＧＡ）受体表达，以及对滋养层细胞和子宫脱腊细胞超微结构的影响。结果 随着海风藤酮剂量增大，滋养层细胞的ＷＧＡ和ＣｏｎＡ受体的阳性反应减弱，以ＷＧＡ受体的改变更明显。电镜所见，实验组绒毛浅层滋养层细胞胞浆电子密度     

ADP和CPA诱导的高血压病人血小板胞浆游离钙的变化

[目的]探讨高血压病人血小板胞浆游离钙浓度(cytoplasmicfreeCa2 concentration,[Ca2 ]i)的变化.[方法]采用Fura-2/Am荧光双波长测定[Ca2 ]i技术,动态观察激动剂二磷酸腺苷(adenosinediphosphate,ADP)和环匹阿尼酸(cyclopiazonicacid,CPA)对高血压病人血小板[Ca2 ]i的影响.[结果]高血压病人静息血小板[Ca2 ]i与正常人比较明显增高(P<0.05);ADP和CPA激动的高血压病人的血小板平台钙与静息钙比较有统计学意义(P<0.05);峰位钙-平台钙的差(既钙释放)与正常人比较明显增高(P分别<0.05和<0.01);平台钙-静息钙的差(既钙内流)与正常人比较无明显差异(P>0.05).[结论]高血压病人静息血小板[Ca2 ]i增高,平台钙水平明显增高,血小板呈高反应状态;高血压病人的血小板被ADP和CPA激活不能恢复至静息动状态;ADP和CPA激动的高血压病人的血小板钙释放增多,钙内流正常.     

槲皮素对血小板聚集和胞浆游离钙的影响

研究槲皮素对凝血酶诱导的血小板聚集和胞浆游离钙浓度的影响及钙对槲皮素的血小板聚集制剂效应的作用。本实验荧光钙离子指示剂观察槲皮素对血小权胞浆游离钙的影响。表明，槲皮素明显抑制凝血酶诱因小板聚集和游离钙的升高。ＩＣ５０和９５％可信区间分别为１４６．２（９２．４－２３１．３）和７８．５（４９．５－１２４．４）μｍｏｌ．Ｌ＾－１，槲皮素对凝血酶诱导的钙释放无影响，抑制钙内流是槲皮素抑制血波板聚集和「Ｃdi     

苯海索对凝血酶诱导的人血小板聚集和胞浆游离钙浓度的影响

目的:观察苯海索体外对人血小板聚集和胞浆游离钙的影响。方法:用比浊度法及钙离子荧光指示剂Fura2AM测定法,分别体外测定苯海索对凝血酶诱导的人血小板聚集及胞浆游离钙浓度的影响。结果:苯海索0.001～1.000mmol·L-1浓度可明显抑制凝血酶诱导的血小板聚集(P<0.05)和胞浆游离钙的升高(P<0.01),均呈剂量依赖性(r=-0.9230,P<0.01;r=-0.9348,P<0.01),其抑制作用可以被钙减弱,而被依他酸增强。苯海索对凝血酶诱导的钙释放无明显影响(P>0.05)。结论:苯海索可抑制人血小板聚集和[Ca2+]i升高,其主要机制可能是抑制细胞外钙离子的内流。     

马钱子碱抗血小板聚集及其对凝血酶诱导血小板内游离钙的变化

①以Born和O′Brien法进行血小板聚集实验,可见马钱子碱(Brucine,B)和士的宁(Strychnine,S)各10~(-5)～10~(-3)mol/L明显抑制ADP、Epi和Thrombin诱导的人血小板聚集作用,呈剂量依赖性。②用Fura-2/AM检测B对Thrombin诱导人血小板内游离钙[Ca~(2+)]i的变化。结果:静息[Ca~(2+)]i值为111.14±11.71nmol/L(n=12)。Thrombin诱导的[Ca~(2+)]i峰值为1015±36.38nmol/L。B10~(-4)、10~(-3)mol/L分别使Thrombin诱导的[Ca~(2+)]i值下降至328.68±17.81和94.17±4.9nmol/L。在EGTA螯合血小板外钙[Ca~(2+)]o情况下,Thrombin诱导的[Ca~(2+)]i峰值为218.55±56.2nmol/L与静息[Ca~(2+)]i相比具有非常显著差异(P<0.01),提示Thrombin促血小板内钙释放;B10~(-4)、10~(-3)mol/L分别使其[Ca~(2+)]i值下降至89.93±6.31和75.49±4.37nmol/L,上述结果提示:B抑制Thrombin的促外钙内流及内钙释放,呈剂量依赖性。     

普鲁卡因胺对胶原和血小板激活因子诱导血小板聚集的影响

普鲁卡因腹对血小板聚集诱导剂ADP、花生四烯酸、凝血酶、CaCl2和α－受体激动剂可乐定等诱导的血小板聚集有明显的抑制作用，同时抑制花生四烯酸诱导血小板聚集后产生的TXB。。普鲁卡因腹也能降低血小板粘附，还能改善小鼠肺栓塞和降低MDA的产生。胶原和PAF是比较强的血小板聚集诱导剂。作者观察了普普卡因胺封胶原和PAF诱导兔血小板聚集的影响。1材料和方法普鲁卡因胺由北京制药厂生产。胶原和血小板激活困子（PAF）购自Sigma。新西兰免由第一军医大学实验动物中心提供。BS631型血小板聚集仪由北京生化仪器厂生产。胶原诱导血小…     

银杏内酯B衍生物(XQ)对PAF、ADP等诱导血小板聚集的抑制作用

目的探索银杏内酯B衍生物(XQ)抗血小板聚集的作用及其机制。方法体内外2种途径给药,以曲克芦丁、银杏内酯B为阳性对照物,观察XQ对PAF、ADP、AA、COL诱导家兔血小板聚集的抑制作用。结果XQ体外给药对PAF、ADP、AA、COL诱导的家兔血小板聚集均有抑制作用,IC50分别为1.49×10-1、7.20×105、1.78×102、4.69×103μg/mL。XQ体内给药(剂量为0.225、0.45、1.8 mg/kg)对上述各诱导剂也均有抑制作用,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05、0.01)。银杏内酯B体外给药对PAF、ADP、AA、COL诱导的家兔血小板聚集均有抑制作用,IC50分别为8.59×10-1、8.43×103、5.30×102、1.03×102μg/mL。曲克芦丁在体外对PAF诱导剂无作用,而体内给药(24 mg/kg)则具有抑制作用。结论XQ对PAF、ADP、AA、COL诱导的血小板聚集有抑制作用,其中对PAF诱导剂的作用强于银杏内酯B,其作用机制可能与拮抗PAF受体有关。      

蜂毒素对大鼠血小板内钙浓度的影响

应用Ｆｕｒａ－２作为荧光试剂，测定大鼠血小板细胞内Ｃａ＾２＋浓度变化，蜂毒素１．５ｍｇ／Ｌ使血小板细胞内Ｃａ＾２＋浓度增加，悬液中加入ＣａＣｌ２１ｍｍｏｌ／Ｌ，血小板细胞内Ｃａ＾２＋继续增加，维拉帕米３．１２５ｍｇ／Ｌ作用５ｍｉｎ后，蜂毒素仍可使血小板Ｃａ＾２＋增加，但加入ＣａＣｌ２血小板Ｃａ＾２＋的浓度不再增加。提示蜂毒素促进大鼠血小板细胞内Ｃａ＾２＋的释放和细胞外Ｃａ＾２＋进入细胞内。     

三七皂甙单体2A-1-1对高血压患者血小板钙内流的影响

目的　观察三七皂甙单体2A - 1 - 1对高血压患者血小板钙内流的影响,并探讨其对血小板受体操纵性钙通道(ROC)的作用。方法　采用Fura - 2 Am荧光探针双波长测定细胞胞浆游离钙离子浓度( [Ca2 + ]i)技术,以Nifedipine为对照观察2A - 1 - 1体外对环匹阿尼酸(CPA)介导的高血压患者血小板钙内流变化。结果　高血压患者血小板静息钙和钙内流均高于正常人(P <0 .0 5 ) ;2A - 1 - 1 ( 5、1 0、2 0 μmol L)可抑制CPA介导的高血压患者血小板钙内流(P <0 .0 5或0 .0 1 ) ;Nifedipine( 2 0 μmol L)不能抑制CPA介导的高血压患者或正常人血小板钙内流(P >0 .0 5 )。结论　2A - 1 - 1可能通过抑制高血压患者血小板ROC ,减少钙内流,从而降低其血小板活性。     

雷公藤氯内酯醇对人外周血淋巴细胞内钙离子浓度的影响

近年来，有关雷公藤抑制免疫机制的研究取得不少进展，但其胞内作用机制仍不清楚。研究表明有丝分裂原激活Ｔ淋巴细胞的过程有赖于胞内钙信号系统。本研究采用Ｆｕｒａ２／Ａｍ荧光法观察不同浓度雷公藤氯内酯醇（Ｔ４）对人外周血Ｔ淋巴细胞内钙离子浓度影响，以期进一步探讨Ｔ４作用的细胞内机制。方法　（１）分离人外周血淋巴细胞，在淋巴细胞悬液中，加入５μｍｏｌ／ＬＦｕｒａ２／Ａｍ，于３７℃５％ＣＯ２孵育４０ｍｉｎ；（２）采用Ｆ２０００荧光分光光度计分别检测非负载淋巴细胞内自发荧光强度、负载后淋巴细胞静息时以及…