Ca~(2 )/CaM在植物血凝素促淋巴细胞分裂中的分子调节机理 (一)Ca~(2 )对PHA有丝分裂原活性的影响

实验材料为小鼠脾淋巴细胞,应用MTT微量自动比色法判断细胞分裂状况,观察植物血凝素(PHA)的促脾淋巴细胞分裂活性和Ca~(2 )的影响。结果发现,加Ca~(2 )的最大刺激组的吸光度(A)值比对照组(未加Ca~(2 )的PHA组)提高了35.4％(两组A值分别为0.390和0.288),Ca~(2 )的最大刺激浓度为4％葡萄糖酸钙。结果表明Ca~(2 )参与细胞增殖的调节,并有增强PHA的有丝分裂原活性的作用。     

Ca~(2 )/CaM在植物血凝素促淋巴细胞分裂中的分子调节机理——(二)CaM对PHA有丝分裂原活性的影响

应用MTT微量自动定量比色法分析细胞的存活与增殖状况,观察钙调蛋白(CaM)对植物血球凝集素(PHA)促小鼠脾淋巴细胞分裂的影响.结果发现,细胞培养48h后,PHA加CaM的最大刺激组的吸光度(A)值比未加CaM的PHA对照组提高了46.8％(吸光度(A)值分别为0.457和0.311),CaM的最大刺激浓度为30μg/ml.结果提示,CaM参与细胞增殖的调节作用,并能显著提高PHA的促有丝分裂原作用。     

预刺激淋巴细胞的伸瘤运动

目的 对淋巴细胞的伸瘤现象进行描述,并探讨伸瘤的一些影响因素及伸瘤运动与淋巴细胞功能的关系。方法 分离外周血淋巴细胞,用PHA、IL-2、a-CD3、PHA+IL-2预刺激后与口腔上皮癌细胞混合作用。于倒置显微镜下直接观察淋巴细胞的粘(伸)瘤情况;取混合细胞经冷丙酮固定并Gimasa染色后在镜下观察淋巴细胞与瘤细胞作用情况,并于1、2、4、6h,取混合淋巴细胞于扫描电镜下观察伸瘤运动的发生、发展变化。结果 与未预刺激组比较,PHA组能提高粘瘤指数,IL-2、a-CD3、PHA+IL-2均能提高淋巴细胞的粘(伸)瘤指数,以PHA+IL-2对粘(伸)瘤率的提高作用最为显著,电镜下发现在粘(伸)瘤运动过程中,外周血淋巴细胞的形态也发生变化。结论 淋巴细胞预刺激能促进伸瘤运动的发生,伸瘤运动可能是淋巴细胞的一种杀伤方式。     

ConA刺激小鼠T淋巴细胞早期事件研究

本文研究了刀豆蛋白A(ConA)刺激小鼠脾脏T淋巴细胞的早期事件。表明ConA可引起T细胞胞质游离Ca~(2+)浓度的快速显著上升、膜电位的轻微超极化和膜流动性的增大。在膜电位和膜脂流动性的变化中Ca~(2+)均起一定作用,提示Ca~(2+)是ConA刺激T淋巴细胞活化的早期事件中的关键物质。     

PHA激活的人外周血单个核细胞对丝裂原应答反应的特性

我们用植物血凝素(PHA)体外激活正常人外周血单个核细胞(PBMC)作应答细胞,研究丝裂原再刺激时淋巴细胞增生反应和分泌功能的变化。PHA激活3～6d的PBMC对丝裂原再刺激的应答反应与初刺激的应答相比,结果显示:①对PHA再刺激的增生反应强度变化很大,从明显高于到显著低于初次反应,决定于激活的淋巴细胞在体外休止时间的长短;②再次激活的淋巴细胞产生白细胞介素2(IL-2)的量显著高于初次激活的淋巴细胞,尤以体止1d的细胞为最高;③再次激活的淋巴细胞中膜IL-2受体(mIL-2R),又称Tac阳性细胞百分率显著降低和培养上清液中可溶性IL-2受体(sIL-2R)含量明显增高;④美州商陆有丝分裂原(PWM)不能诱导已激活的PBMC分泌IgG。     

妊娠中毒症病人的细胞免疫功能检查

本文报道,通过 PHA 刺激淋巴细胞转化反应和总数 T 细胞 E 玫瑰花试验方法来检测晚期妊娠中毒症病人的细胞免疫功能,以探讨细胞免疫在本病发病中的作用。材料和方法一、PHA 刺激淋巴细胞转化反应(分两组进行)。     

氚化胸腺嘧啶核苷掺入法测定 人外周血淋巴细胞转化的影响因素

用氚化胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)掺入法测定有丝分裂原PHA刺激人外周血淋巴细胞转化反应。观察到在PHA浓度为50μg/ml时,5×10~5单个核细胞/ml的转化刺激指数最高。当细胞数继续增加,其刺激指数增加不明显。用自然沉降与密度梯度离心两种方法分离的淋巴细胞对PHA 刺激的反应不同。在无PHA刺激的情况下,自然沉降淋巴细胞的自然转化较密度梯度离心法分离者为高。     

影响淋巴细胞共刺激作用的体外实验研究

目的　观察CD3单抗、CD2 8单抗、PHA和低剂量辐射对淋巴细胞增殖的影响 ,探讨影响T淋巴细胞信号转导的因素。方法　分别以CD3单抗、CD2 8单抗、PHA和低剂量辐射作为作用因素 ,用3H TdR掺入法观察在这些因素作用下 ,淋巴细胞增殖反应情况。结果　CD3单抗和CD2 8单抗联合刺激、PHA和低剂量辐射单独或联合处理 ,均可使淋巴细胞明显增殖。但CD3单抗和CD2 8单抗单独刺激 ,淋巴细胞增殖不明显。结论　CD3单抗和CD2 8单抗联合作用可使淋巴细胞有效增殖 ,PHA和低剂量辐射具有相似作用 ,对细胞免疫调节有重要意义     

氘标记胸腺嘧啶核苷释放微量细胞毒法测定肝癌病人细胞免疫功能

引言用植物血凝素(PHA)作皮肤试验可诱发迟发性超敏反应,无需致敏。尽管其机理还不十分清楚,但癌症病人的PHA反应情况与其预后有关,一般是阳性反应的预后较好,反之较差[1]。在体外PHA是一种致淋巴细胞转化的因子,特别是T淋巴细胞比较敏感。用PHA刺激的体外淋巴细胞转化可作为一个测定T细胞功能的指标[2]。肿瘤病人淋巴细胞的转化率低于对照组的转化率。上述PHA激发的都只是淋巴细胞一般的反应,表明淋巴细胞功能的一个方面,而直接对肿瘤细胞的杀伤作用则更有理论和实际的意义。本实验用微量细胞毒试验来测定肝癌病人和正常人的淋巴细胞在PHA作用下对体外传代的人肝癌细胞系的杀伤力。     

用不含有丝分裂原的白细胞间素2(LF-IL_2)分离、扩增和克隆小鼠特异性抗肿瘤细胞

过去在过继治疗中,遇到的最大阻障是如何获得足够的同源特异性抗肿瘤细胞。70年代中期,Morgan和Gillis等人发现用有丝分裂原(PHA或ConA)等刺激淋巴细胞所产生的白细胞间素2(IL2),能支持淋巴细胞在体外长期增殖,并保留原有免疫功能。     

血小板衍生生长因子对肝细胞游离钙浓度影响

目的观察血小板衍生生长因子（PDGF）对SD大鼠肝细胞内游离钙浓度（[Ca2 ]i）的影响,同时观察钙拮抗剂（Ca－A）对PDGF作用的影响。方法应用Fura－2／AM荧光示踪法检测肝细胞（n=15）内[Ca2 ]i的变化;及PDGF存在下和PDGF、Ca－A同时存在下细胞内[Ca2 ]i变化。结果PDGF可明显升高细胞内[Ca2 ]i,Ca－A具有抑制PDGF的增钙作用。结论PDGF参与SD大鼠肝细胞内Ca2 浓度的转运,Ca－A对肝细胞具有保护作用。     

心衰大鼠心肌SR Ca~(2+)泵活性和Ca~(2+)释放通道密度的变化及培哚普利干预的影响

目的　探讨ACEI干预慢性心衰对心肌肌浆网 (SR)Ca2 + 泵活性和Ca2 + 释放通道 (RyR2 )密度的影响及意义。方法　通过结扎大鼠左冠脉建立慢性心衰模型 ,以培哚普利进行干预 ,对照观察血流动力学、左室心肌SRCa2 + 泵活性、[3 H]-ryanodine与RyR2 最大结合量 (Bmax)、Kd 值。结果　与对照组 (C组 )相比 ,心衰组 (F组 )LVEDP显著升高 (P <0 0 1) ,+dp/dtmax、-dp/dtmax显著降低 (P <0 0 1) ,培哚普利组 (P组 )LVEDP显著低于F组 (P <0 0 1) ,+dp/dtmax、-dp/dtmax显著高于F组 (P <0 0 1)。F组心肌SRCa2 + 泵活性、[3 H]-ryanodine与RyR2 最大结合量Bmax显著低于C组 (P <0 0 1) ,也显著低于P组 (P <0 0 1) ,三组Kd 值无显著差异 (P >0 0 5 )。心肌SRCa2 + 泵活性与 +dp/dtmax、-dp/dtmax显著正相关 (r=0 5 16 1、0 6 172 ,P <0 0 1)。结论　培哚普利长期干预慢性心衰 ,能够改善心肌SRCa2 + 泵活性 ,增加RyR2 密度 ,可能与其改善心肌舒缩功能及心肌保护作用有关。     

神经肽Y对大鼠心肌细胞胞浆钙及钙瞬变的影响

目的观察神经肽Y（neuropeptideY，NPY）对静息状态下心肌细胞胞浆钙含量及兴奋-收缩耦联过程中心肌细胞钙瞬变的影响。方法用NPY（100nmol／L）刺激Sprague—Dawley乳鼠心肌细胞24h，用荧光染料Fluo 4-AM负载胞浆钙，记录静息状态下心肌细胞胞浆钙浓度，并用场刺激诱发胞浆钙瞬变。所有钙影像均由LeicaSP2激光共聚焦显微镜记录。结果NPY组心肌细胞胞浆钙含量明显高于对照组（P〈0.05）；场刺激诱导下NPY组心肌细胞胞浆钙瞬变幅度明显高于对照组（P〈0.01），NPY组钙瞬变恢复时间明显缩短（P〈0．01），钙瞬变上升时阍则无显著差别。结论长时间的NPY刺激可显著影响兴奋-收缩耦联过程中钙的动态活动，并导致胞浆内钙含量增加。     

1-(2, 6-二甲基苯氧基)-2-(3, 4-二甲氧基苯乙氨基) 丙烷盐酸盐对培养的乳鼠心肌细胞[Ca2+]i的影响

采用 Fura- 2 / AM显微荧光测钙技术 ,检测培养新生大鼠单个心肌细胞内游离钙的浓度 ,并观察 1- (2 ,6 -二甲基苯氧基 ) - 2 - (3,4-二甲氧基苯乙氨基 )丙烷盐酸盐 (DDPH)对不同刺激〔去氧肾上腺素 ,高 K ,血管紧张素 (Ang II)〕所致心肌细胞钙超载的影响。结果表明 :1在含钙、无钙标准台氏液 ,DDPH 10 - 4 m ol· L- 1 对去氧肾上腺素(Phe) 10 - 4 mol· L- 1 所致钙增高有显著抑制作用。 2 DDPH 10 - 4 m ol· L- 1 对高 K 5 0 m mol· L- 1 引起的 [Ca2 ]i增高有一定抑制作用 ,对 Ang 10 - 4 mol· L- 1 引起的 [Ca2 ]i增高有部分拮抗作用。提示 :DDPH可拮抗 α1 受体调控的 Ca2 通道 ,对钙库钙释放也有抑制作用 ,对电压依赖性钙通道有一定调控作用     

急性胰腺炎大鼠细胞钙—镁ATP酶的变化及维生素E的影响

目的：研究急性胰腺炎（AP）大鼠细胞钙－镁ATP酶的变化及维生素E对其的影响，以进一步探讨维生素E在AP治疗中的作用机制。方法：将56只SD大鼠分为正常组、AP组及AP后维生素E治疗组3组，后两组在制备AP动物模型后分别于1、5、10h活体取材胰、肝组织，通过钙－镁ATP酶的酶组织化学染色检测其活性；同时通过逆转录聚合酶链反应（RT－PCR），测定其组织钙-镁ATP酶的表达。结果：实验大鼠胰、肝组织细胞钙－镁ATP酶酶组织化学染色阳性率AP组低于正常组（P＜0．05），且AP组5h的阳性率低于1h；维生素E治疗组的阳性率高于AP组（P＜0．05）且5h的高于1h。RT－PCR结果显示：胰腺组织钙－镁ATP酶的表达AP组最低，且AP组5h的表达低于1h；维生素E治疗组的钙－镁ATP酶表达高于AP组，且5h的表达高于1h；肝组织钙－镁ATP酶的表达各组均为阳性，各组间无显著性差异。结论：AP时细胞钙-镁ATP酶活性降低，可参与AP时细胞钙超载的发生和发展，由引引起细胞正常结构与功能的破坏，加重AP的病理变化。维生素E通过其抗氧化作用在治疗AP的过程中，提高细胞钙－镁ATP酶活性，减轻细胞钙超载，这可能是其作用机制之一。     

7-氯苄基四氢巴马汀对大鼠心肌肥厚及左心室肌原纤维Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATP酶活力的影响

目的观察 7-氯苄基四氢巴马汀 ( 7-chlor -BTHP)对大鼠心肌肥厚和心室肌原纤维质膜Ca2 -Mg2 -ATP酶活力的影响。方法用L -甲状腺素诱发大鼠心肌肥厚 ,然后观察 7-chlor -BTHP对大鼠心肌肥厚及左心室肌原纤维Ca2 -Mg2 -ATPase的影响 ,以普萘洛尔 (Pro)作为阳性对照。结果经过 7-chlor-BTHP治疗 3天后 ,心肌肥厚明显改善 ,Ca2 -Mg2 -ATPase活力明显降低。结论 7-chlor-BTHP能明显消退L -甲状腺素诱发的大鼠心肌肥厚 ,并能显著降低心室肌原纤维膜Ca2 -Mg2 -ATPase酶活力。     

胞外钙及胞内钙库钙在膀胱ICCs细胞自发性钙瞬变中的作用

目的 观察离体活膀胱肌条铺片中卡哈尔间质细胞(interstitial cells of cajal,ICCs)自发性钙瞬变,并检测胞外钙及胞内钙库钙对ICCs细胞自发性钙瞬变的影响,探讨ICCs细胞自发性钙瞬,变产生的机制.方法 制作离体膀胱肌条铺片,生理液灌流保持肌条铺片活性.待肌条自发性收缩活动出现后,Fluo-4负载肌条铺片,激光共聚焦显微镜观察其中ICCs细胞自发性钙瞬变,随后观察尼莫地平(Nimodipine)、2-氨基乙基二苯硼酸盐(2-aminoethoxydip henylborate,2-APB)、雷诺丁(Ryanodine)、毒胡萝卜素(Thapsigargin)及无钙、高钙生理液对ICCs细胞自发性钙瞬变的影响,探讨ICCs细胞自发性钙瞬变产生的机制.结果 可见离体活膀胱肌条铺片中平滑肌细胞和ICCs细胞均产生节律性A发性钙瞬变,平滑肌细胞钙瞬变频率较快,而ICCs细胞钙瞬变频率相对较慢.尼莫地平能完全抑制平滑肌细胞的自发性钙瞬变,但对ICCs细胞的自发性钙瞬变无显著影响.2-APB、雷诺丁、毒胡萝卜素及无钙生理液均可完全抑制ICCs细胞的自发性钙瞬变,高钙生理液可显著增加ICCs细胞自发性钙瞬变的频率.结论 细胞外钙离子通过非L型钙离子通道入胞及细胞内钙库放钙均参与ICCs细胞自发性钙瞬变的产生.     

培哚普利对慢性心功能不全大鼠心肌肌浆网Ca^2＋泵功能？…

目的 探讨血管紧张素转移酶抑制剂（ＡＣＥＩ）干预慢性心功能不全对心肌肌浆网（ＳＲ）Ｃａ＾２＋泵活性和Ｃａ＾２＋摄取功能的影响及意义。方法 ８０只大鼠分为心功能不全组（Ｆ组）,培哚普利组（Ｐ组）,对照组（Ｃ组）。通过结扎大鼠左冠脉建立慢性心功能不全模型,以培哚普利进行干预,对照观察血流动力学,左室心肌ＳＲ Ｃａ＾２＋泵活性,ＳＲ Ｃａ＾２＋摄取Ｖｍａｘ、Ｋｄ值和最大摄取量。结果 Ｆ组左室舒张末压（Ｌ     

骨骼肌卫星细胞移植对残存心肌细胞游离Ca~(2 )的影响

目的研究骨骼肌卫星细胞移植对梗塞心肌残存心肌细胞游离Ca2 分布及Ca2 波的恢复作用。方法自犬臀部取骨骼肌 ,提取、培养、扩增骨骼肌卫星细胞 ,4’ ,6-diamidino -2 -phenylindone(DAPI)荧光标记 ,经结扎的左冠状动脉前降支远端灌注移植入自体急性心肌梗塞区域 ,2、4、8周后处死动物 ,取心肌标本行组织形态学、心肌细胞游离Ca2 分布及Ca2 波检测。　结果梗塞区观察到带荧光的细胞核及肌纤维 ,部分已分化成横纹肌并以闰盘相连。梗塞区残存心肌细胞游离Ca2 增加 ,Ca2 波峰出现明显晚于正常区域心肌细胞 ,且峰值低于正常心肌细胞。骨骼肌卫星细胞移植 8周后 ,梗塞区残存心肌细胞游离Ca2 分布及Ca2 波峰恢复正常。　结论经冠状动脉灌注移植骨骼肌卫星细胞使梗塞心肌残存心肌细胞游离Ca2 分布及Ca2 波恢复 ,利于心肌收缩力的恢复。     

人红细胞的Ca~(2+)和Cd~(2+)运输

用人红细胞膜、翻膜小囊和完整红细胞研究了Cd~(2+)对Cd~(2+)运输的影响与Cd~(2+)-ATP酶活性的关系,以及细胞对Cd~(2+)的摄取和影响摄取的因素。Cd~(2+)抑制Cd~(2+)运输,与抑制Cd~(2+)-ATP酶具有相关性。Cd~(2+)极易进入细胞,一旦进入,难于排出。进入细胞的Cd~(2+)主要与胞浆和膜蛋白相结合。