高效液相色谱法同时测定金樱子中槲皮素、山萘酚、芹菜素的含量

目的建立金樱子中槲皮素、山萘酚、芹菜素含量测定方法。方法反相高效液相色谱法,色谱柱ZORBAXSB-C18(150mm×4.6mm,5μm);检测波长360nm;甲醇-0.2%磷酸(45:55)为流动相;柱温30℃;流速1.0mL/min。槲皮素、山萘酚、木犀草素、芹菜素理论板数分别大于5000、6000、6000、7000;四种化合物的分离度均大于1.5。结果槲皮素、山萘酚、木犀草素、芹菜素回归曲线分别为Y=1504.412X+9.9756,Y=1991.745X+8.6051,Y=567.591X+2.5397,Y=1811.803X+0.3074,在5.5216×10-2～19.3256×10-2μg/mL、4.608×10-2～16.128×10-2μg/mL、12.5504×10-2～43.9264×10-2μg/mL、6.0288×10-2～21.1008×10-2μg/mL范围内线性关系良好,相关系数r=0.99992～0.99998,槲皮素、山萘酚的加样回收率分别为100.5%、100.6%,RSD分别为3.7%、3.7%。样品分别含槲皮素、山萘酚、木犀草素、芹菜素0.28、0.25、0.0、0.04mg/g.结论本法为金樱子提供了分析黄酮化合物方法,该法简便可行,重复性好,数据及结果可靠。     

植物产品专利

031 用蛇麻草提取物抗肉毒中毒GB 2330076-A经光密度法(OD660nm)测定,蛇麻草提取物浓度在1×10~(-6)、5×10~(-6)、10×10~(-6)、50×10~(-6)和100×10~(-6)时对4株肉毒梭菌和2株艰难梭菌均有显著的抑制作用。该提取物为含β-酸(41%)、α-酸(12%)、脱氧α-酸混合物、蛇麻油和蛇麻蜡(47%)的50%乙醇液。本专利权项要求:1、在食品及饮料中加入≥1×10~(-6)的蛇麻草提取物用于抑制肠胃中艰难梭菌的生长;2、含≥1×10~(-6)的蛇麻草提取物或其成分用于制备预防肉毒梭菌和艰     

"速效退热灵"快治急性白血病

1　病况　　 2 0 0 1- 2 - 1日下午 5时许 ,峨眉山市城区万×× (女 ,2 6岁 )求治时自诉 :春节初一高热二天后住市××医院治疗五天 ,现在体温还是 39 5℃ ,病情越加严重。医院今天抽取静脉血检验后 ,认为有患急性白血病严重嫌疑 ,要求抽取骨髓作进一步的验证。我害怕抽骨髓 ,院方即要我转外地医院治疗。观万×× 2月 1日静脉血检验报告单 :血小板为 77× 10qL ,小于正常值 (10 0～ 30 0× 10qL) ;白细胞 1 3× 10qL ,小于正常值 (4～ 10× 10qL) ,结合患者持续七天高热不退 ,拟定性为早期急性白血病高热导致轻度病态造血。2　治…     

雷公藤内酯醇抑制脂多糖诱导的PC-12细胞COX-2的表达

 目的　了解雷公藤内酯醇(TP)对PC-12细胞增殖和表达环氧化酶-2(COX-2)及合成前列腺素E₂ (PGE₂ )的影响 ,探讨TP应用于痴呆治疗的可能机制。方法　采用神经生长因子 (NGF)诱导培养PC-12细胞 ,用不同浓度的TP(0,0.28×10^-6,2.8×10^-6,2.8×10^-6mol·L^-1)预处理后 ,加或不加脂多糖(LPS),分别用氚-胸腺嘧啶核苷(³H-TdR)掺入法、竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)、半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法、细胞酶联免疫法及蛋白免疫印迹 (Western-blot)法检测PC-12细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE² 的水平、细胞COX-2mRNA及蛋白表达水平。同时提取各组细胞蛋白 ,测定其核转录因子 (NF-κB)活性。结果　TP对LPS诱导的PC-12细胞的COX-2mRNA ,蛋白表达 [空白对照与不同浓度下分别为[(0.34±0.12 )×10^-6,(1.92±0.26)×10^-6,(1.78±0.32)×10^-6,(1.14±0.22)×10^-6,(0.48±0.14 )×10^-6mol·L^-1,P <0.01]及PGE₂ 的合成 [分别为(2.28±0.32)×10^-6,(32.86±6.23)×10^-6,(31.28±5.44)×10^-6,(18.43±3.92)×10^-6,(4.18±1.79)×10^-6mol·L^-1,P<0.01]具有不同程度的抑制作用,与TP浓度(0～28×10^-6mol·L^-1)呈明显正相关性(分别为r=0.94和r=0.92),且对LPS激活的PC-12细胞的核转录因子NF-κB活性有明显的抑制作用[分别为(0.16±0.08)×10^-6,(1.39±0.18)×10^-6,(1.09±0.14)×10^-6,(0.52±0.15)×10^-6,(0.28±0.09)×10^-6mol·L^-1,P<1.01]。实验未观察到TP对PC-12细胞增殖的影响。结论TP可显著抑制LPS诱导的PC-12细胞COX-2细胞COX-2的表达及其产物PGE₂的合成,这种作用可能通过TP抑制PC-12细胞核转录因子NF-κB活性而实现。     

抑制酶活性的中药有效成分的研究

本文报道以抑制磷酸二酯酶(PDE)作为指标,筛选中药的有效成分。其方法如下:~3H-cAMP(5×18~8M,2×10~4dpm)、MgCl_2(10~(-3)M)、Tris-HCl缓冲液(5×10~(-2)M,pH7.5)、牛血清(250微克)、PDE(牛心,25微克)、中药提取物(0.1毫升、10~(-4)～10~(-5)克/毫升),加水到0.5毫     

龙葵碱对HepG2细胞NAT1酶活性及动力学影响的研究

 目的 探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的芳香胺N-乙酰化转移酶（NAT1的影响。方法 采用高效液相色谱法(HPLC,以对氨基苯甲酸(PABA为底物,以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA的量反应NAT1酶的活性。观察不同浓度、不同时间龙葵碱对完整HepG2细胞NAT1酶活性的影响;龙葵碱对HepG2细胞细胞质中NAT1酶活性的影响;通过改变底物PABA浓度,采用双倒数作图法,以底物PABA浓度的倒数(1/S对NAT1反应速率的倒数(1/V作直线,得出回归方程,计算K_m和V_max。结果 在NAT1酶活性测定中,龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT1的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT1的活性;随着作用时间的增加Ac-PABA生成的量逐渐增加,但在相同作用时间段龙葵碱能显著降低Ac-PABA生成的量。动力学研究表明,以PABA为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的K_m和V_max分别为(1.04×10-3±8.36×10-5mmol·L -1、(1.64×10-4±9.57×10-6 nmol·106 cells-1,龙葵碱组的K_m和V_max分别为(1.06×10-3±6.97×10-5 mmol·L-1和(1.48×10-4±4.28×10-6 nmol·106 cells-1·h-1。对于HepG2细胞质,阴性对照组的K_m和V_max分别为(3.32×10-1±2.35×10-4mmol·L -1、(2.60×10-3±6.79×10-6 nmol·h-1·mg pro-1,龙葵碱组的K_m和V_max分别为(3.35×10-1±1.66×10-4 mmol·L-1和(2.22×10-3±8.12×10-6 nmol·h-1·mg（Pro-1,经统计学处理表明,对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的K_m没有差异,而V_max差异显著。结论 龙葵碱是HepG2细胞NAT1酶的非竞争性抑制剂。龙葵碱通过作用于NAT1与PABA结合位点以外的其他位点抑制NAT1酶的活性而诱导HepG2细胞凋亡。     

艾纳香二氢黄酮对脂质过氧化损伤大鼠原代培养肝细胞的保护作用

研究 5种艾纳香二氢黄酮类化合物对过氧化损伤的原代培养肝细胞的保护作用。胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞。以 CCl4或 Fe SO4 Cys损伤原代培养肝细胞 ,1× 10 - 4 和 1× 10 - 5 mol/ L 的 5种艾纳香二氢黄酮均能明显抑制受损伤细胞的转氨酶逸出、MDA产生及 GSH耗竭。其中以 2 ,5 -二羟基艾纳香二氢黄酮的作用最强 ,在 CCl4所致肝细胞损伤实验中 ,其抑制 MDA产生的 ED5 0 约为 2 .6× 10 - 6 mol/ L ,保护 GSH的 ED5 0 约为 1.0 8× 10 - 5 mol/ L ,抑制 AL T逸出细胞的 ED5 0 约为 9.39× 10 - 6 mol/ L     

金丝桃甙对坐骨神经钙含量的影响

目的:研究金丝桃甙(Hyp)对神经组织Ca~（2+）含量的影响。方法:游离的蛙坐骨神经Ca~（2+）含量用原予分光光度仪测定。结果;Hypl×l0~(-5),1×10~(-6)和1×10~(-7)mol.L~(-1)显著并呈浓度依赖性抑制50mmol,L~(-1)K~+诱导Ca~(2+)含量增加,1×10~(-4)mol.L~(-1)Hyp显著抑制10~(-5)mo1.L~(-1)NE诱导的Ca~(2+)含量增加。结论:Hyp对神经组织Ca~(2+)内流有阻滞作用。     

问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg2+-ATPase,Ca2+-ATPase抑制作用的动力学研究

问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg²⁺-ATPase,Ca²⁺-ATPase有显著的抑制作用,对Mg²⁺-ATPase的抑制机制分别为竞争性抑制(Mg²⁺,Ki=4.93×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=1.06×10^-4mol/L),对Ca²⁺-ATPase的抑制机制分别为混合型抑制(Ca²⁺,Ki=5.07×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=3.27×10-4mol/L)。     

不同浓度地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞的实验研究

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向诱导分化为成骨细胞所需的地塞米松的最佳浓度。方法抽取兔骨髓,采用全骨髓贴壁培养法体外培养,贴壁细胞进行传代。取第3代细胞,随机分为5组,在培养基中添加成骨分化诱导剂β-甘油磷酸钠、L-抗坏血酸,5组添加的地塞米松的浓度分别为1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L、1×10-10mol/L。培养10 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,计算细胞浓度,采用5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)底物显色试剂检测碱性磷酸酶(ALP),茜素红染色检测钙结节。结果较高浓度(1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L)的地塞米松相对于较低浓度(1×10-9mol/L、1×10-10mol/L)的地塞米松可显著增加ALP表达(P均<0.05),并可增加钙结节的形成;1×10-9mol/L及其以下浓度的地塞米松对细胞增殖无明显影响(P均>0.05),1×10-7mol/L以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖(P<0.01)。结论地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞,最佳的浓度为1×10-8mol/L。     

利用Caco-2细胞单层模型预测柯楠碱、育亨宾、 阿马碱、萝芙木碱的人肠吸收

目的：研究中药化学成分柯楠碱(corynanthine, COR)、育亨宾(yohimbine, YOH)、阿马碱(ajmalicine, AMC)和萝芙木碱(ajmaline, AML)在人肠Caco-2细胞单层模型的转运吸收。方法：利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究COR，YOH，AMC和AML由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)，BL侧到AP侧两个方向的转运吸收过程。应用高效液相色谱法分离、紫外检测法检测对上述4个生物碱进行定量分析，计算转运参数和表观渗透系数(Papp)，并与在Caco-2细胞单层模型上呈易吸收的阳性对照药普萘洛尔和难吸收的阳性对照药阿替洛尔的进行比较。用药物的ADMET预测软件，考察4个化合物的Papp值与其log D值之间的关系。结果：COR，YOH，AMC和AML由AP侧到BL侧的Papp值分别为(1.863±0.055)×10-5，(1.540±0.082)×10-5，(2.522±0.246)×10-5，(1.155±0.099)×10-5 cm·s-1；由BL侧到AP侧的Papp值分别为(2.390±0.017)×10-5，(1.987±0.154)×10-5，(1.374±0.260)×10-5，(2.418±0.124)×10-5 cm·s-1，与普萘洛尔的Papp A→B值［(2.23±0.10)×10-5 cm·s-1］基本一致。COR，YOH，AMC和AML的Papp B→A/Papp A→B分别为1.28，1.29，0.54和2.09；AML外流是摄取的2.09倍。结论：COR，YOH，AMC和AML能够通过Caco-2细胞单层被动吸收，属于良好吸收的化合物。其中，AML在Caco-2细胞单层模型的转运可能存在外流机制。在4个生物碱的转运吸收过程中，油/水分配系数起着关键性的作用。     

头孢呋辛钠致严重皮疹1例

患者男 ,6 6岁。因右股股沟可复性肿物于 1999年 10月2 6日入院 ,诊断为右股股沟斜疝。入院查体 ,Ｔ 36℃ ,Ｐ 76次/ｍｉｎ ,Ｂｐ 15 0 / 97.5ｍｍＨｇ(2 0 / 13ＫＰａ)。术前检查 :胸透未见病变 ,心电图显示为窦性心律 ,ＳＴ Ｔ改变。实验室检查 :ＨＧＢ10 8ｇ·Ｌ-1,ＲＢＣ 3.77× 10 12 ·Ｌ-1,ＰＬＴ179× 10 9·Ｌ-1,ＷＢＣ 7.2×10 9·Ｌ-1,ＡＬＴ 7ｕ·Ｌ-1,γ ＧＴ 10ｕ·Ｌ-1,ＡＫＰ 1.75 μｍｏｌ·ｓ-1·Ｌ-1,ＣＨＥ 32 6 6ｕ·Ｌ-1,Ａ/Ｇ为 42 / 2 4。否认药物过敏史。头孢呋辛钠皮试阴性。于 1999年 11月 2日在连续硬膜外麻醉…     

芍药汤配伍槟榔作用的实验研究

芍药汤由芍药、当归、黄芩、黄连、大黄、肉桂、槟榔、木香、炙甘草九味药组成。功能调气和血,清热解毒;治湿热痢。实验比较芍药汤和去槟榔芍药汤的药理作用。结果,急性毒性试验,芍药汤组小鼠死亡11/12只;去槟榔芍药汤组无死亡,两组差异非常显著(p<0.001),死亡小鼠肛门部见潮湿,似“拉稀”样。对兔离体肠管活动影响,在剂量为4×10~(-2)、2×10~(-2)、1×10~(-2)时,芍药汤能使肠管活     

三氧化二砷的抗癌作用及临床应用

三氧化二砷(As2O3)是中药砒霜的主要有效成分,长期以来,一直被人们认为是剧毒物质,具有致癌、致畸作用。1971年,哈尔滨医科大学率先应用As2O3治疗急性早幼粒细胞白血病(APL),效果显著,且毒副作用小,为肿瘤治疗提供了新途径。为了解释As2O3致癌和抑癌的双重作用,Meng[1]研究了砷对人外周血淋巴细胞DNA合成的影响,发现其影响呈双向性,即在低浓度时(0.5×10-4～0.5×10-3mmol/L)促进DNA合成,在高浓度时(0.5×10-3～0.5×10-2mmol/L)抑制DNA合成。据此推测,在低浓度砷作用下,某些始发致癌因素导致的突变或损伤的DNA复制增多,可促进肿…     

甘草次酸衍生物对大鼠肝11β-和3α-羟类固醇脱氢酶的抑制作用

甘草次酸(GA)系甘草甜素的一种糖甙配基,是11β-和3α-羟类固醇脱氢酶的强抑制剂。GA,3-脱氧GA,3-酮GA,3-表GA和11-脱氧GA均能明显抑制大鼠肝微粒体11β-羟类固醇脱氢酶的活性。I_(50)在2×10~(-7)～4×10~(-1)M之间。而且GA,3-脱氧GA和11-脱氧GA的18α-立体异构体(I_(50)=3×10~(-8)～7×10~(-8)M)。对酶的抑制活性比对应     

湖南省1999年晋升中医副主任医师考试试题及答案(二)

试题部分二、医疗文书改错 (10分 ,各专业都必须做 )住院病历姓名 :李某某　　　　　　性别 :男　住院号 :××年龄 :2 7岁　　　　　　　婚况 :未婚职业 :工人　　　　　　　出生地 :长沙民族 :汉　　　　　　　　国籍 :中国家庭住址 :×市×街×号　邮政编码 :××××××入院时间 :1999年×月×日×时×分病史采集时间 :1999年×月×日×时×分病史陈述者 :患者本人。　　可靠程度 :可靠发病节气 :春分前 3天问诊 :主诉 :发热、恶寒、咳嗽 2天。现病史 :1999年×月×日 ,因外出衣着不慎而始感喷嚏 ,鼻塞流涕 ,微有咳嗽 ,恶寒发热 ,无汗…     

应用高效液相色谱-质谱法监测蛇胆陈皮片原料药的投料分析研究

目的 应用高效液相色谱-质谱法(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS/MS)全面监测蛇胆陈皮片中原料药蛇胆汁和陈皮的投料情况,并可同时检测其中牛磺胆酸钠和橙皮苷的含量.方法 采用ZORBAX Eclipse Plus C18柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温40℃,流动相以乙腈-10mmol/L乙酸钠溶液,使用梯度洗脱程序,以HPLC分离有效成分、采用电喷雾离子源负离子模式检测,选择多反应离子监测方式进行原料药投料情况的定性监测及有效成分的定量分析.结果 牛磺胆酸钠和橙皮苷分别在0.242×10-2~1.45×10-2μg(r=0.9960),0.688×10-2~10.30×10-2μg(r=0.9992)范围内线性关系良好;精密度试验RSD分别为0.78%、1.56%;回收率分别为100.07%~108.7%,92.78%~99.32%;结论 高效液相色谱-质谱法快速简便、准确可靠、灵敏度高,适用于全面监测蛇胆陈皮片中蛇胆汁和陈皮的投料情况及质量.     

止泻退热分散片体内外抑菌实验研究

目的:评价止泻退热分散片的抑菌作用,为其临床应用提供实验数据支持。方法:体外采用最小抑菌浓度测定方法,体内采用感染致病菌的动物模型,观察止泻退热分散片的抑菌作用。结果:止泻退热分散片对体外金黄色葡萄球菌、志贺痢疾杆菌、产毒性大肠杆菌和致泻性大肠杆菌的最低抑菌药物浓度分别是1.03×10-3g/ml、9.26×10-3g/ml、3.09×10-3g/ml、2.78×10-2g/ml。给与高、中、低不同剂量止泻退热分散片后感染痢疾杆菌和产毒大肠杆菌小鼠的死亡率与模型组相比减少,差异有显著性意义。结论:止泻退热分散片具有体外和体内抑制多种肠道感染性细菌的作用。     

亚急性肝坏死一例治验

房××,男,44岁,农民,1979-03-2日初诊.该患者十天前见食少,腹胀,且有里急后重,并伴有周身发热.俟后数日,即见两目     

HPLC同时测定丹参水溶性及脂溶性5种成分的含量

目的: 建立同时测定丹参中2种水溶性和3种脂溶性成分的HPLC方法。 方法: 采用C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱:0~27 min,20%~25%A;27~55 min,25%~80%A;55~65 min,80%~80%A;检测波长为270 nm和286 nm,柱温30 ℃。 结果: 迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_A分别在1.92×10^-2~0.96 μg,7.29×10^-2~3.64 μg,3.05×10^-3~0.15 μg,1.71×10^-3~8.55×10^-2 μg,5.80×10^-3~0.29 μg呈良好的线性关系。加样回收率分别为99.88%,104.75%,101.08%,101.41%,102.41%。 结论: 该含量测定方法准确、稳定、简便,分离效果好,能同时测定丹参中迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_A 5种有效成分的含量。