Bm-12促C6胶质瘤细胞生长及凋亡作用的研究

目的探讨Bm-12促C6胶质瘤细胞生长及凋亡的作用。方法显微镜观察不同浓度Bm-12对C6胶质瘤细胞生长的影响,用PBS溶液作为对照组。并用流式细胞仪检测不同浓度Bm-12对C6胶质瘤细胞凋亡的影响。结果不同浓度Bm-12加入C6胶质瘤细胞培养液后,C6胶质瘤细胞生长明显受抑制,细胞形态及数量明显发生变化,且凋亡率均较对照组显著增加(P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 Bm-12可以抑制C6胶质瘤细胞生长,并诱导其凋亡。     

Lactacystin对体外C6胶质瘤细胞超微结构影响的研究

目的 探讨蛋白酶体抑制剂Lactacystin 对体外C6胶质瘤细胞超微结构的影响.方法 Lactacystin处理体外培养的G6胶质瘤细胞,HE染色后光镜观察细胞的死亡情况,锇铀铅染色后透射电镜观察细胞超微结构变化.结果 Lactacystin处理体外C6胶质瘤细胞24 h后,光镜下见胞浆浓缩深染,胞核染色质致密浓缩,透射电镜下见细胞表面微绒毛消失,核皱缩,染色质致密浓缩、边集.结论 蛋白酶体抑制剂Lactacystin可以诱导体外G6胶质瘤细胞凋亡.     

SD大鼠C6脑胶质瘤伽玛刀干预前后VEGF的表达变化

目的通过对C6大鼠脑胶质瘤的伽玛刀治疗,检测伽玛刀治疗前后VEGF的变化,探讨伽玛刀治疗胶质瘤作用机制。方法 50只SD大鼠,采用立体定向法对40只SD大鼠进行动物造模,10只作为正常对照组,14 d后对其中20只进行伽玛刀治疗作为治疗组,20只作为肿瘤对照组。伽玛刀治疗后7 d,对所有大鼠处死并应用免疫组化法检测VEGF并进行统计学分析。结果 VEGF在正常大鼠基本没有表达,在肿瘤对照组大鼠中表达增强,伽玛刀照射组VEGF的表达降低。结论伽玛射线可降低大鼠C6脑胶质瘤VEGF表达。     

海洛因对大鼠C6胶质瘤细胞的双向电泳图谱比较

目的 比较海洛因对大鼠C6胶质瘤细胞的双向电泳图谱差异,从蛋白质水平初步探索阿片类毒物-海洛因的作用机制。方法 提取对照组与海洛因组C6胶质瘤细胞的蛋白质,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行2-DE。以图像分析软件ImageMaster V 5.0分析电泳图谱。结果 将对照组与海洛因组C6胶质瘤细胞的2-DE图谱匹配后,检测到570个蛋白点,差异大于1.5倍的斑点有29个,其中20个下调,9个上调。结论 初步建立了大鼠C6胶质瘤细胞的蛋白质组学分析方法;差异点的发现为深入理解海洛因的分子机制提供了线索。     

苯乙酸对胶质瘤细胞C6的C-myc基因蛋白水平表达的抑制作用及意义

目的 观察诱导分化剂苯乙酸对胶质瘤细胞Ｃ６的增殖分化过程中癌基因Ｃ－ｍｙｃ的蛋白水平变化。方法 〖＾３Ｈ〗ＴｄＲ掺入法测细胞增殖率,免疫组化ＳＰ法检测Ｃ－ｍｙｃ基因蛋白水平的表达。结果 应用苯乙酸后,细胞ＣＰＭ降低;Ｃ－ｍｙｃ基因胞浆阳性表达显著下降。结论 苯乙酸对胶质瘤细胞存在剂量依赖性抑制作用机制可能为直接抑制胞浆中ＲＮＡ合成。这些作用与苯乙酸抑制Ｃ－ｍｙｃ基因对细胞恶性增殖的转录调节作用有关     

人羊膜间充质干细胞移植对荷瘤鼠C6胶质瘤生长的抑制

背景:实验室前期课题成果显示,脐血或羊膜间充质干细胞具有亲肿瘤及抑瘤特性。目的:探讨人羊膜间充质干细胞对C6胶质瘤细胞生长的抑制作用。设计、时间及地点:细胞学体内对照观察,于2008-06/09在郑州大学微生物与免疫教研室完成。材料:胎盘来源于郑州大学一附院妇产科健康剖宫产产妇,C6胶质瘤细胞株由北京神经外科研究所惠赠,10只BALR/c裸鼠由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。方法:无菌条件下取胎盘,分离部分羊膜,体外分离培养人羊膜间充质干细胞,传至第3代用于实验。10只裸鼠背部双侧皮下注射含3×106个C6胶质瘤细胞的DMEM/F12培养基,建立双侧荷瘤鼠模型。成功造模后,模型对照组于裸鼠左侧皮下注射DMEM/F12培养基50μL,细胞移植组于同一裸鼠右侧皮下注射含2×106个羊膜间充质干细胞的等量DMEM/F12培养基。主要观察指标:肿瘤生长情况,周围组织浸润及新生血管形成等病理学观察,免疫组化法检测肿瘤中细胞周期素D1的表达。结果:细胞移植后14,21d,细胞移植组肿块体积明显小于模型对照组(F=54.127,P<0.05)。模型对照组瘤体呈结节状,部分肿瘤组织中心有坏死现象,内部有新生血管形成,肌层及皮肤浸润较明显,已达腹膜;细胞移植组瘤体分叶较少,无新生血管形成,仅有局部的皮肤浸润,未见肌层浸润。模型对照组细胞周期素D1蛋白呈阳性表达,而细胞移植组表达阳性率较低。结论:人羊膜间充质干细胞可明显抑制荷瘤鼠C6胶质瘤细胞的生长,同时可抑制细胞周期素D1蛋白的异常表达。     

大鼠脑胶质瘤模型构建

目的 探索建立切实可行的SD大鼠脑胶质瘤模型的方法。方法 实验于2005—03／05在泰山医学院基础研究所及天津神经外科研究所动物实验室完成。选择成年SD雄性大鼠20只，应用立体定向技术，于大鼠头部正中矢状线旁3mm，前囟前1mm处，利用微量注射器将100万个C6细胞（10μL）注入硬脑膜下5mm处。注射时间为5min，留针3min。术后1，2周对存活的大鼠行MRI检查。对术后2周检查肿瘤阳性的大鼠取脑组织做病理切片，对瘤组织进行苏木精-伊红染色观察。结果 17只大鼠进入结果分析。①17只大鼠2次MRI检查见肿瘤所在部位一致，但第二次检查时肿瘤体积更大。双侧长有肿瘤的大鼠有15只，单侧长有肿瘤的2只，总的肿瘤阳性率为100％。②经病理检查证实17只大鼠脑内肿瘤均为胶质瘤。结论 大鼠硬脑膜下注入100万个C6细胞能成功建立脑胶质瘤模型，成功率100％。     

脂质体法pcDNA3-TK质粒转染胶质瘤细胞C6

目的:构建含有tk基因的真核表达载体,并转染C6细胞株建立其表达系统,为探索胶质瘤的基因治疗奠定实验基础.方法:通过酶切pSNAV2.0-TK和pcDNA3分别获得目的基因tk片段及pcDNA3片段,将目的基因插入载体相应的酶切位点,构建pcDNA3-TK质粒.酶切鉴定后采用脂质体法瞬时转染C6细胞,RT-PCR检测tk基因在细胞中的表达.结果:pcDNA3-TK质粒构建成功并顺利导入C6细胞中.结论:构建的pcDNA3-TK质粒能够在转染的C6细胞中稳定、持续和高效地表达.     

金丝桃素对C6胶质瘤细胞周期变化的研究

目的 探讨光活化的金丝桃素对Wistar大鼠胶质瘤株C6的分化诱导作用。方法 应用流式细胞术(FCM)、MIT法和3H—TdR掺入法观察光活化的金丝桃素对C6胶质瘤细胞株的细胞周期动力学变化的影响。结果 光活化的金丝桃素对C6胶质瘤细胞株的细胞呈剂量依赖性抑制，细胞周期的G0／G1期升高，S期、G22／M期相对下降，表明光活化的金丝桃素可抑制C6胶质瘤细胞株增殖，细胞的增殖周期阻滞在G1期。结论 提示光活化的金丝桃素通过诱导C6胶质瘤细胞凋亡而治疗脑胶质瘤具有可期待前景。     

大鼠脑胶质瘤模型构建

目的探索建立切实可行的SD大鼠脑胶质瘤模型的方法。方法实验于2005-03/05在泰山医学院基础研究所及天津神经外科研究所动物实验室完成。选择成年SD雄性大鼠20只,应用立体定向技术,于大鼠头部正中矢状线旁3mm,前囟前1mm处,利用微量注射器将100万个C6细胞(10μL)注入硬脑膜下5mm处。注射时间为5min,留针3min。术后1,2周对存活的大鼠行MRI检查。对术后2周检查肿瘤阳性的大鼠取脑组织做病理切片,对瘤组织进行苏木精-伊红染色观察。结果17只大鼠进入结果分析。①17只大鼠2次MRI检查见肿瘤所在部位一致,但第二次检查时肿瘤体积更大。双侧长有肿瘤的大鼠有15只,单侧长有肿瘤的2只,总的肿瘤阳性率为100%。②经病理检查证实17只大鼠脑内肿瘤均为胶质瘤。结论大鼠硬脑膜下注入100万个C6细胞能成功建立脑胶质瘤模型,成功率100%。     

裸鼠皮下脑胶质瘤模型的复制与生长特性的观察

目的 建立裸鼠皮下C6脑胶质瘤模型,了解其生长特性.方法 将C6脑胶质细胞的培养悬液注射于裸鼠左侧腋下区皮下.观察接种区皮下肿瘤的生长状况,测量肿瘤直径并计算肿瘤体积,绘制肿瘤体积-时间生长曲线.HE染色和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色观察肿瘤细胞的生长及转移状况.结果 瘤细胞接种后第7天,裸鼠腋下区开始出现肿瘤,并呈加速生长.20 d后,皮下肿瘤呈快速的近指数生长.裸鼠生存期为22~48 d.光镜下见瘤体边界清晰,瘤内血管丰富,存在大量GFAP阳性细胞.结论 将体外培养的C6脑胶质瘤细胞植入裸鼠皮下,可建立重复性好的脑胶质瘤动物模型.     

Ferritin Enhances SPIO Tracking of C6 Rat Glioma Cells by MRI

Purpose

To investigate the effect of ferritin protein overexpression on superparamagnetic iron oxide (SPIO) particle labeling of C6 rat glioma cells, and track the labeled cells in vivo using magnetic resonance imaging (MRI).

Materials and Methods

A plasmid of H-chain of murine ferritin gene was constructed and transfected into C6 cells. The parental and the transfected C6 cells labeled with SPIO were bilaterally inoculated subcutaneously into nude mice. The mice were imaged by multiple T2-weighted MR scans after C6 cell inoculation. The mice were killed 2 weeks later, and the concentration of iron in the tumor tissue was measured by inductively coupled plasma.

Results

The iron concentration in xenografts derived from SPIO-labeled C6 cells that were transfected with ferritin plasmid was significantly higher than that in xenografts from parental C6 cells that were labeled with SPIO but not transfected (p?=?0.034, N?=?5). Ferritin-transfected C6 cells showed an improved T₂ contrast in vivo compared with parental cells labeled with SPIO but not transfected.

Conclusion

Coordinating ferritin with SPIO can lead to a longer MRI cellular tracking period.     

平瘤康方剂对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨中药方剂平瘤康含药血清对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响。方法2.5%、5%、10%和20%平瘤康含药血清处理体外培养的C6胶质瘤细胞24h、48h和72h后,应用MTT比色法检测C6胶质瘤细胞增殖;PI染色后,应用流式细胞仪观测细胞周期时相。结果10%和20%的含药血清能抑制C6胶质瘤细胞的增殖;10%和20%的含药血清处理C6细胞48h、72h后,S期细胞百分率下降,呈剂量依赖性。结论平瘤康含药血清可能通过阻滞细胞周期而抑制胶质瘤细胞增殖。     

BCNU-loaded PEG-PLLA ultrafine fibers and their in vitro antitumor activity against Glioma C6 cells.

The purpose of the present study was to develop implantable BCNU-loaded poly(ethylene glycol)-poly(L-lactic acid) (PEG-PLLA) diblock copolymer fibers for the controlled release of 1,3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea (BCNU). BCNU was well incorporated and dispersed uniformly in biodegradable PEG-PLLA fibers by using electrospinning method. Environmental Scanning Electron Microscope (ESEM) images indicated that the BCNU-loaded PEG-PLLA fibers looked uniform and their surfaces were reasonably smooth. Their average diameters were below 1500 nm. The release rate of BCNU from the fiber mats increased with the increase of BCNU loading amount. In vitro cytotoxicity assay showed that the PEG-PLLA fibers themselves did not affect the growth of rat Glioma C6 cells. Antitumor activity of the BCNU-loaded fibers against the cells was kept over the whole experiment process, while that of pristine BCNU disappeared within 48 h. These results strongly suggest that the BCNU/PEG-PLLA fibers have an effect of controlled release of BCNU and are suitable for postoperative chemotherapy of cancers.     

体外血管内皮生长因子单克隆抗体对C6胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移力的影响

目的:在体外观察血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体对C6胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移力的影响。方法:采用氯化钴(Co Cl2)模拟缺氧环境,予以0、0.1、1、10μg/m L的VEGF抗体,对常氧或缺氧条件下对C6胶质瘤细胞进行处理。通过MTT实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力,Western blotting检测HIF-1α蛋白、FAK/Pyk2总蛋白及磷酸化FAK-Tyr397/Pyk2-Tyr402表达水平变化。结果:200μmol/L Co Cl2明显抑制C6细胞增殖(P<0.05),10μg/m L VEGF抗体可明显抑制C6细胞增殖(P<0.05)。与常氧相比,缺氧可使C6细胞的迁移、侵袭能力增强(P<0.05)。常氧和缺氧下,VEGF抗体的干预均增强C6细胞的迁移、侵袭能力(P<0.05),且相对于常氧,缺氧可进一步增强VEGF抗体促C6细胞迁移、侵袭的作用(P<0.05)。Co Cl2干预可增加C6细胞中HIF-1α的含量;在常氧和缺氧情况下,只有1μg/m L VEGF抗体可降低FAK的总蛋白量(P<0.05);在缺氧情况下,VEGF抗体可明显增高Pyk2-Tyr402位点的磷酸化水平。结论:在缺氧情况下,VEGF抗体的干预可使Pyk2-Tyr402位点的磷酸化水平增高,引起C6细胞的侵袭迁移能力进一步增强。     

边缘系统胶质瘤的特点及显微外科治疗

目的:探讨应用显微外科手术广泛切除边缘系统胶质瘤的方法和疗效.方法:回顾分析2000年1月～2003年5月应用显微外科手术广泛切除的边缘系统胶质瘤10例,术后常规化疗或(和)放疗,6～12个月中复查头颅CT或MRI观察病灶区域的情况,随访其疗效.结果:患者均行广泛性边缘系统肿瘤全切除术.病理检查:星形细胞瘤Ⅰ级6例,Ⅰ～Ⅱ级3例,少枝胶质细胞瘤1例.围手术期情况均良好,无手术死亡.10例患者均获门诊随访,其中最长3年5个月,最短10个月.早期复查头颅CT,未见明显肿瘤残留.近期复查头颅CT或MRI,尚未发现肿瘤复发征象.结论:应用显微外科手术广泛切除边缘系统胶质瘤,辅助化疗或(和)放疗是有效治疗方法之一,无明显后遗症.