清肝化瘀方药对大鼠肝癌前病变中卵圆细胞表型的影响

背景与目的:探讨清肝化瘀方药阻断二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)Solt_Farber二步法致大鼠肝癌前病变的机制。材料与方法:用DEN建立Solt_Farber二步法肝癌前病变短期动物模型,以不同浓度的清肝化瘀方药进行干预。透射电镜观察此模型中卵圆细胞的超微结构;酶组织化学方法检测γ_谷胺酰转肽酶(γ_GT酶)、葡萄糖_6_磷酸酶(G_6_P酶)的表达变化;免疫组织化学方法检测甲胎球蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)表达的变化。结果:清肝化瘀方药能明显抑制肝癌前病变中肝细胞γ_GT酶的表达,增加G_6_P酶的表达;同时降低卵圆细胞及肝细胞中AFP的表达,增加ALB的表达。结论:清肝化瘀方药可有效阻断肝癌前病变,大剂量组较小剂量组作用明显,其作用机制可能与诱导卵圆细胞向肝细胞主向分化有关。     

大黄素抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长机制探讨

目的研究大黄素对人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤细胞凋亡及凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、核酸内切酶G(endonuclease G,Endo G)表达的影响,探讨大黄素体内抗癌机制。方法复制裸鼠人肝癌移植瘤模型,带瘤模型裸鼠腹腔注射大黄素。实验随机分为对照组(生理盐水+1%DMSO)、大黄素低剂量组〔25mg/(kg·d)〕、中剂量组〔50mg/(kg·d)〕和高剂量组〔100mg/(kg·d)〕,每组各8只。观察裸鼠一般生长情况和肿瘤体积变化,计算肿瘤生长抑制率以及肿瘤生长延迟时间。治疗结束次日处死裸鼠,取病变组织后,TUNEL检测肿瘤组织的凋亡指数,免疫组化检测各组AIF和EndoG表达情况。结果 32只裸鼠均成功建立模型。试验过程中裸鼠一般情况正常,实验结束后各组之间裸鼠体质量差异无统计学意义,P=0.79。治疗结束后,与对照组相比,大黄素低、中、高剂量组均有抑制肿瘤生长作用,大黄素各剂量组的肿瘤生长抑制率呈剂量效应正相关。低剂量组肿瘤生长抑制率为(37.2±1.09)%,中剂量组为(57.7±1.15)%,高剂量组为(72.3±1.21)%,高剂量组显著高于中剂量组,P<0.01;中剂量组显著高于低剂量组,P=0.019。低剂量组肿瘤生长延迟时间为(1.9±0.6)d,中剂量组为(3.4±0.9)d,高剂量组为(4.6±1.1)d。TUNEL结果显示,对照组肿瘤细胞凋亡指数为(8.23±1.65)%,低剂量组为(34.38±8.73)%,中剂量组为(48.14±9.57)%,高剂量组为(68.71±10.56)%。低剂量组较对照组明显升高,P=0.003;中剂量组较低剂量组明显升高,P=0.023;高剂量组较中剂量组明显升高,P=0.009。免疫组化结果显示,随着大黄素剂量的不断增加,肿瘤组织中AIF和EndoG蛋白表达逐渐增强,低剂量组高于对照组,P值均为0.001;中剂量组高于低剂量组,P值分别为0.015和0.004;高剂量组高于中剂量组,P值分别为0.021和0.013。免疫荧光结果显示,不同剂量大黄素组肿瘤组织中AIF及EndoG的表达位置发生了明显变化,出现由胞质向胞核移位的现象;对照组肿瘤组织中AIF、EndoG的表达位置变化不明显。结论大黄素可以明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞在裸鼠体内的生长;经AIF和EndoG介导的非Caspase依赖线粒体通路诱导细胞凋亡,是大黄素抑制人肝癌SMMC-7721细胞移植瘤生长的机制之一。     

金蒲抑瘤片在实验诱发大鼠肝癌过程中的作用

目的探讨金蒲抑瘤片对黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)致肝癌作用的影响。方法实验动物随机分为高剂量、低剂量和对照组。用AFB1处理各组动物,高、低剂量组大鼠在接受AFB1期间分别喂含量为9.3和2.3g/kg的金蒲抑瘤片混合饲料,对照组喂基础饲料。8周后处死动物,观察各组动物肝组织内γ-谷氨酰转肽酶阳性肝细胞增生(γ-glu-tamyltranspeptidase-positive hyperplastic livercell,γ-GT)灶的数量和大小。结果高、低剂量金蒲抑瘤片均能减少AFB1诱发的γ-GT灶的数量和大小高、低剂量组的数量分别为0.90和3.72个/cm2,均低于对照组6.10个/cm2,抑制率分别为85%和39%,高剂量组与对照组相比差异有统计学意义,t=2.597,P=0.028。高、低剂量组的大小分别为0.24和1.94mm2/个,均低于对照组2.36mm2/个,抑制率分别为90%和17%,但差异无统计学意义,P>0.05。结论金蒲抑瘤片有减少AFB1诱发大鼠肝γ-GT灶的数量和大小的作用,而高剂量金蒲抑瘤片的减少趋势更强。     

卡铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞的作用

[目的]研究卡铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞的作用.[方法]不同浓度卡铂(空白对照组、低剂量卡铂组、高剂量卡铂组)作用Ishikawa细胞48h,Western blot技术检测卡铂处理后Ishikawa细胞株中bcl-2、bax蛋白表达的变化;Annexin V-PE染色后流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;PI染色检测细胞周期变化;Tranwell肿瘤侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.[结果]卡铂作用于Ishikawa细胞的IC50为31.86μg/ml.卡铂作用48h后,细胞内bcl-2蛋白表达下调,bax蛋白表达上调(P＜0.05).卡铂可诱导Ishikawa细胞凋亡,空白对照组凋亡率为3.2％±0.3％,明显低于低剂量卡铂组的17.3％±2.8％和高剂量卡铂组的50.0％±3.7％(P＜0.05).卡铂作用后细胞周期呈G2期阻滞,空白对照组G2期比例为28.75％±4.29％,明显低于低剂量卡铂组的57.74％±6.42％和高剂量卡铂组的78.64％±6.38％ (P＜0.05);Ishikawa细胞侵袭能力受到抑制,相对于空白对照组,低剂量卡铂组抑制率为62.00％,高剂量卡铂组抑制率为81.33％(P＜0.05).[结论]卡铂可明显抑质Ishikawa细胞生长,诱导细胞凋亡,并下调Ishikawa细胞中bcl-2/bax比例.     

卵圆细胞的生物学特征及其与肝癌发生的关系

目的通过动态的方法观察卵圆细胞的主要生物学特征及其在肝癌发生过程中的演变规律,揭示卵圆细胞与肝癌发生之间的关系。方法构建实验性肝癌的大鼠诱癌模型,运用常规HE染色、免疫组织化学和爱新蓝染色等方法,动态观察卵圆细胞在肝癌发生过程中的演变规律和分子表达特征。结果随着诱癌时间延长,逐渐出现卵圆细胞的增生、癌前病变、胆管细胞癌和(或)肝细胞癌,各阶段卵圆细胞均表达OV-6、AFP和c-kit。结论原发性肝癌可能与卵圆细胞异常分化有关,卵圆细胞特征性表达为OV-6、AFP和c-kit。     

苦参碱对胃癌细胞培养基上清液诱导的人脐静脉内皮细胞增殖及迁移的抑制作用

目的:研究苦参碱(Matrine)对人胃癌细胞SGC-7901培养基上清液诱导的人脐静脉内皮细胞ECV-304增殖及侵袭能力的影响.方法:人胃癌细胞SGC-7901培养基上清液诱导人脐静脉内皮细胞ECV-304细胞增殖,不同浓度苦参碱干预后,MTT法检测内皮细胞增殖抑制率;采用Transwell共培养模型观察苦参碱对SGC-7901诱导血管内皮细胞ECV-304迁移的抑制作用.结果:15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml、240μg/ml苦参碱干预48小时,ECV-304增殖抑制率分别为(20.8±1.3)%、(25.1±2.2)%、(40.9±1.1)%,(62.9±2.2)%,(77.2±1.9)%;呈剂量依赖(P<0.05).对照组和苦参碱浓度在2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml时内皮细胞迁移细胞数分别为350.8±51.3、230.0±13.7、144.1±12.6、 53.6±4.9,呈剂量效应关系.结论:苦参碱可抑制人胃癌细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力.     

穿心莲内酯体内诱导人胃癌BGC823细胞凋亡作用及机制探讨

目的:探讨穿心莲内酯的体内抗肿瘤作用和诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:选取体质量18～20g的6周龄雌性BALB/C裸鼠制备裸鼠移植瘤模型,用400、200和100mg/(kg.d)穿心莲内酯进行体内药敏实验,测定肿瘤生长抑制率,透射电镜形态学观察,RT-PCR和免疫组织化学检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果:穿心莲内酯对裸鼠移植瘤有明显的抑瘤效应,低剂量组的抑瘤率为22.2%(P=0.029),中剂量组为44.7%(P=0.009),高剂量组为57.8%(P=0.007),且抑瘤率随剂量增加逐渐增高。光镜和电镜下可见细胞凋亡形态改变。穿心莲内酯低、中、高剂量分别作用14d后,Caspase-3水平均逐渐增加,与阴性对照组(0.71±0.14)比较,低剂量为1.04±0.19(P=0.034),中剂量为1.55±0.34(P=0.008),高剂量为1.89±0.36(P=0.005),并呈剂量依赖性关系;同时,随着药物剂量的增加,肿瘤细胞质的Bax蛋白表达逐渐增加,与阴性对照组(0.179±0.042)比较,低剂量为0.248±0.055(P=0.04),中剂量为0.310±0.051(P=0.032),高剂量为0.337±0.050(P=0.021);Bcl-2蛋白表达逐渐降低,与阴性对照组(0.353±0.066)比较,低剂量为0.291±0.032(P=0.035),中剂量为0.241±0.036(P=0.024),高剂量为0.218±0.042,P=0.018。结论:穿心莲内酯对裸鼠移植瘤有显著的抗肿瘤作用,其抗肿瘤机制可能与下调Bcl-2表达、上调Bax表达、引起Caspase-3的活化进而诱导细胞凋亡有关。     

人参皂甙 Rh2对人肝癌细胞 SMMC-7721的诱导分化作用

背景与目的:目前寻找低毒高效的分化诱导剂是肿瘤诱导分化治疗的关键.人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物学活性,其主要的活性有效成分人参皂甙 Rh2( ginsenoside Rh2,G-Rh2)具有较强的抗癌活性,但其抗肿瘤机制还不十分清楚.因此,本研究探讨 G-Rh2对人肝癌细胞株 SMMC-7721的生长抑制作用及抗癌机制.方法:以 MTT法、光镜、电子显微镜观察 G-Rh2对 SMMC-7721细胞增殖、形态、超微结构的影响.用免疫组化染色和 ELISA法检测细胞浆中甲胎蛋白( alpha-fetoprotein, AFP)合成情况,酶促反应试剂盒检测细胞浆中碱性磷酸酶( alkaline phosphatase, ALP)和γ谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT)活性,放射免疫法检测细胞 AFP和白蛋白( albumin, Alb)分泌量,并观察 G-Rh2对以上指标的影响.结果: G-Rh2以时间依赖性和浓度依赖性抑制 SMMC-7721细胞增殖, 10 μ g/ml G-Rh2作用 6天抑制率达 50%;而 20 μ g/ml G-Rh2作用 4天抑制率近 50%.经 20 μ g/ml G-Rh2作用 4天,肝癌细胞形态及亚细胞结构向正常肝细胞方向逆转. 10 μ g/ml、 20 μ g/ml G-Rh2作用 SMMC-7721细胞后, AFP合成明显下降( P< 0.05),分泌量从 6.60± 0.30下降到 2.35± 0.06( P< 0.01);γ-GT及耐热型 ALP活性显著降低( P< 0.01); ALP活性及 Alb分泌量显著升高( P< 0.01).结论: G-Rh2具有诱导人肝癌细胞 SMMC-7721向正常细胞分化的作用.     

南方壁虎制剂对DEN诱导大鼠肝癌癌前病变的探讨

目的:探讨南方壁虎制剂对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝癌癌前病变的作用.方法:利用Solt-Farber的DEN诱导肝癌癌前病变短期动物模型,在制模过程中给予不同剂量的南方壁虎制剂进行干预,通过组织化学染色观察各组动物肝组织内r-谷氨酰转肽酶阳性肝细胞增生灶(r-GT灶)的数量和面积,以及免疫组化SP法对肝组织中的Ki-67、EFGR和ErbB4蛋白表达进行检测分析.结果:不同剂量南方壁虎实验组γ-GT阳性灶的数量、面积均小于DEN对照组,其中低剂量组显示差异有统计学意义,P<0.05.各组肝组织均表达Ki-67、EGFR和ErbB4.Ki-67在低剂量组中的阳性和强阳性的表达率(20.0%)与阳性对照组(73.3%)差异有统计学意义,P<0.05;EGFR在高剂量和低剂量的阳性和强阳性的表达率分别为22.2%和10.0%,与阳性对照组(40.0%)差异有统计学意义,P<0.05;ErbB4不同剂量组的表达均高于阳性对照组,差异无统计学意义,P>0.05.结论:南方壁虎制荆对DEN诱发大鼠肝癌癌前病变有一定的抑制作用;Ki-67、EGFR可能参与南方壁虎抑制肝癌癌前病变的调节作用.     

新型维甲酸衍生物ATPR体外诱导消化系统肿瘤细胞分化的研究

目的观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（ATPR）对胃癌细胞株SGC-7901、肝癌细胞株BEL-7402、结肠癌细胞株HT-29的生长和分化的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,检测细胞的生长抑制率;分光光度法检测胃癌细胞分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶（LDH）活性和肝癌细胞分化标志酶LDH、谷酰转肽酶（γ-GT）活性;酶联免疫法检测肝癌细胞标志物甲胎蛋白（AFP）和结肠癌细胞标志物癌胚抗原(CEA)水平;流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果ATPR呈浓度依赖性抑制肿瘤细胞增殖;并使SGC-7901中ALP、LDH活性下降,BEL-7402中AFP、LDH、γ-GT水平下降,HT-29中CEA水平升高;G0/G1期细胞表达量增加,细胞周期进程受影响,细胞阻滞在G0/G1期。结论ATPR对上述三种实体瘤细胞株具有诱导分化的作用。     

Effects of AFP-activated PI3K/Akt signaling pathway on cell proliferation of liver cancer

This study aims to investigate effects of alpha-fetoprotein (AFP)-activated phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B (PI3K/Akt) signaling pathway on hepatocellular carcinoma cell proliferation. Active cirrhosis patients after hepatitis B infection (n?=?20) and viral hepatitis patients with hepatocellular carcinoma (HCC) (n?=?20) were selected as the subjects of the present study. Another 20 healthy subjects were selected as the control group. The serum AFP expression and liver tissue PI3K and Akt gene mRNA expression were detected. The hepatoma cell model HepG2 which had a stable expression of AFP gene was used. Real-time quantitative PCR and Western blot and other methods were used to analyze the intracellular PI3K and Akt protein levels. Compared with control group and cirrhosis group, the serum AFP levels in HCC group significantly increased, and the tissue PI3K and Akt mRNA expression also significantly increased. HepG2 cells were intervened using AFP, in which the PIK and Akt protein expression significantly increased. After intervention by use of AFP monoclonal antibodies or LY294002 inhibitor, the PIK and Akt protein expression in HepG2 cell was significantly decreased (P?<?0.05). AFP can promote the proliferation of hepatoma cells via activation of PI3K/Akt signaling pathway.     

蜂毒素对人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤生长及肿瘤血管生成的影响

背景与目的:蜂毒素体外抗骨肉瘤、白血病及宫颈癌的研究已有报道.我们先前的实验发现蜂毒素能够抑制人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖,并诱导其凋亡.本研究拟探讨蜂毒素在裸小鼠体内的抗肝癌作用及其对肿瘤血管生成的影响.方法:建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:生理盐水对照组(10 ml/kg)、阳性对照组(沙利度胺,200 mg/kg)、蜂毒素低剂量组(40 μg/kg)、蜂毒素中剂量组(60 μg/kg)和蜂毒素高剂量组(80 μg/kg).测量各组裸鼠肿瘤体积,观察蜂毒素的体内抗肿瘤作用.光镜下观察肿瘤组织及瘤内血管形态.采用免疫组织化学SABC法检测微血管密度(microvessel density,MVD)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和核转录因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)蛋白表达.应用实时荧光定量PCR法检测BEL-7402细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达.结果:蜂毒素低、中、高剂量组裸鼠肿瘤相对体积(V/V0)分别为4.42±0.58、3.47±0.97和3.06±1.23,与生理盐水对照组(V/V0为9.06±1.45)相比,蜂毒素处理组肿瘤体积明显缩小(P＜0.01).与生理盐水对照组MVD(16.50±2.35)比较,蜂毒素低、中、高剂量组肿瘤组织MVD(11.33±1.86、9.17±1.17和6.67±1.21)明显降低(P＜0.01).显微镜下可见蜂毒素各剂量组肿瘤组织呈片状坏死,肿瘤间质内可见肿瘤血管,并有血管破坏现象.蜂毒素低、中、高剂量组肿瘤组织VEGF(2.59±0.27、2.61±0.17和1.55±0.22)、bFGF(2.45±0.78、2.27±0.36和2.10±0.27)及NF-κB(2.79±0.29、2.71±0.66和2.26±0.56)阳性表达指数均低于生理盐水对照组(3.80±0.60、4.43±0.34和4.98±0.63)(P＜0.01).实时荧光定量PCR检测显示,蜂毒素能够抑制BEL-7402细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达.结论:蜂毒素能够明显抑制人肝癌BEL-7402细胞裸鼠移植瘤的生长,影响NF-κB表达、下调VEGF和bFGF的表达、抑制肝癌血管生成可能是其抗肿瘤作用的重要机理之一.     

RNA sequencing of plasma exosomes revealed novel functional long noncoding RNAs in hepatocellular carcinoma

Exosomal long noncoding RNA (lncRNA) has been found to be associated with the development of cancers. However, the expression characteristics and the biological roles of exosomal lncRNAs in hepatocellular carcinoma (HCC) remain unknown. Here, by RNA sequencing, we found 9440 mRNAs and 8572 lncRNAs were differentially expressed (DE‐) in plasma exosomes between HCC patients and healthy controls. Exosomal DE‐lncRNAs displayed higher expression levels and tissue specificity, lower expression variability and splicing efficiency than DE‐mRNAs. Six candidate DE‐lncRNAs (fold change 6 or more, P ≤ .01) were high in HCC cells and cell exosomes. The knockdown of these candidate DE‐lncRNAs significantly affected the migration, proliferation, and apoptosis in HCC cells. In particular, a novel DE‐lncRNA, RP11‐85G21.1 (lnc85), promoted HCC cellular proliferation and migration by targeted binding and regulating of miR‐324‐5p. More importantly, the level of serum lnc85 was highly expressed in both Alpha‐fetoprotein (AFP)‐positive and AFP‐negative HCC patients and allowed distinguishing AFP‐negative HCC from healthy control and liver cirrhosis (area under the receiver operating characteristic curve, 0.869; sensitivity, 80.0%; specificity, 76.5%) with high accuracy. Our finding offers a new insight into the association between the dysregulation of exosomal lncRNA and HCC, suggesting that lnc85 could be a potential biomarker of HCC.     

脑源性神经营养因子对肝癌细胞株HepG2体外转移能力的影响

背景与目的:肝细胞性肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)浸润转移是临床治疗失败的最常见原因,浸润转移的发生与癌细胞的生物学行为(迁移、侵袭、增殖)密不可分。近年来,人们已认识到脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)作为一种功能性蛋白特异地存在于HCC组织中,并与HCC的进展密切相关,但其确切功能不明。本实验初步探讨BDNF对肝癌细胞株HepG2体外迁移能力的影响及其机制。方法:采用MTT法观察BDNF对HepG2细胞增殖的作用,应用肿瘤细胞体外迁移实验和肿瘤细胞体外侵袭实验评价BDNF对HepG2细胞浸润转移能力的影响。采用RT-PCR法和Westernblot法分别从基因水平和蛋白水平检测HepG2细胞中BDNF特异性受体Tr!B的表达情况。结果:外源性的BDNF能有效促进HepG2细胞的增殖,在<100ng/ml的范围内,这一效应呈明显的浓度依赖性;经过50ng/ml和100ng/mlBDNF处理的HepG2细胞,迁移指数明显高于对照组(167vs.100,203vs.100,P<0.05);Transwell侵袭实验中,50ng/ml和100ng/mlBDNF组的每视野侵袭细胞数分别为167±38和215±51,与对照组(113±22)相比差异有显著性(P<0.05);较之正常肝细胞,HepG2细胞高表达Tr"B。结论:BDNF可调节肝癌细胞的生长、迁移与侵袭,是具有促进肝癌浸润转移的细胞因子。     

Downregulated Expression of PTPN9 Contributes to Human Hepatocellular Carcinoma Growth and Progression

Human hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common malignant cancers, whose molecular mechanisms is remains largely. PTPN9 has recently been reported to play a critical role in breast cancer development. However, the role of PTPN9 in human HCC remains elusive. The present study aimed at investigating the potential role of PTPN9 in HCC. Western blot and immunohistochemistry were used to examine the expression of PTPN9 protein in HCC and adjacent non-tumorous tissues in 45 patients. Furthermore, Cell Counting Kit-8, flow cytometry and RNA interference experiments were performed to analyze the role of PTPN9 in the regulation of HCC cell proliferation. We showed that the expression level of PTPN9 was significantly reduced in HCC, compared with adjacent non-tumorous tissues. PTPN9 expression was inversely associated with Tumor size (P?=?0.014), serum AFP level (P?=?0.004) and Ki-67 expression. Low expression of PTPN9 predicted poor survival in HCC patients. Moreover, PTPN9 interference assay that PTPN9 inhibited cell proliferation in HepG2 cells. Cell apoptosis assay revealed that, silencing of PTPN9 expression significantly reduced cell apoptosis, compared with control ShRNA treatment group. Our results suggested that PTPN9 expression was down-regulated in HCC tumor tissues, and reduced PTPN9 expression was associated with worsened overall survival in HCC patients. Depletion of PTPN9 inhibits the apoptosis and promotes the proliferation of HCC cells.     

小鼠AFPcDNA真核表达载体的构建、表达及体外抗肝癌免疫活性的检测

背景与目的:探索肝癌细胞的突变基因产物——具有潜在抗原性的异常蛋白质而无法形成有效免疫原的机理,寻找肝癌的特异性抗原,并在此基础上研制出治疗肝癌的DNA疫苗将对肝癌的免疫学治疗产生积极的影响。本实验构建BALB/c小鼠具有分泌性信号肽的AFP1cDNA和去掉信号肽的AFP2cDNA真核表达载体,分别在小鼠树突细胞(dendriticcells,DCs)中表达,并观察其在体外抗肝癌免疫中的作用。方法:采用RT-PCR方法自小鼠肝癌细胞株H22中扩增出具有分泌性信号肽的AFP1cDNA和去掉分泌性信号肽的AFP2cDNA,将该基因定向插入真核表达载体PEGF-N3中;同时培养经rmGM-CSF、rmIL-4诱导的小鼠骨髓细胞,体外获取大量DCs,脂质体转染PEGF-N3/AFP1、PEGF-N3/AFP2至DCs进行表达、鉴定。将DCs疫苗与同源小鼠脾淋巴细胞混合培养,ELISA方法测定脾细胞γ-干扰素(IFN-γ)分泌活性,51Cr释放法测定脾淋巴细胞的特异性杀伤活性。结果:从H22中克隆到AFP1cDNA和AFP2cDNA,经测序完全正确,所构建的真核表达质粒PEGF-N3/AFP1和PEGF-N3/AFP2在小鼠DCs中获得稳定高效表达,其中PEGF-N3/AFP2明显刺激T细胞增殖,刺激指数(SI)为5.12±1.46,明显高于空质粒组(1.42±0.73)。AFP2/DC疫苗对H22细胞的特异性杀伤活性[(88.15±16.47)%]明显高于空质粒组[(12.72±5.45)%]。结论:成功地构建了真核表达载体PEGF-N3/AFP1和PEGF-N3/AFP2,编码去掉分泌性信号肽的PEGF-N3/AFP2转染的DC,能够诱导较强的特异性抗肝癌免疫效应。其机制可能为诱导肝癌细胞凋亡。     

Natural killer cell activity of the peripheral blood in patients with hepatocellular carcinoma

Using 125IudR labeled K562 cells as target cells, peripheral blood of 56 patients with hepatocellular carcinoma (HCC) was studied for natural killer cell (NK cell) activity. The results show that the NK cell activity is in normal range of 53.97 +/- 4.42% and 50.85 +/- 3.55% in stages I and II of HCC but in stage III, the NK cell activity is markedly depressed, only 31.63 +/- 5.55%. The NK cell activity is much lower in HCC patients with metastasis than without metastasis (33.67 +/- 5.37% versus 50.22 +/- 2.79%). So is it in patients with high concentration than with low concentration of AFP except patients with advanced lesion and low concentration of AFP. After effective treatment, the NK cell activity increased in 10 of 11 patients treated with radical and palliative resection and in 6 of 9 after immunotherapy with BCG, mixed bacterial vaccine or interferon.     

苦参碱对淋巴瘤Raji细胞的增殖及survivin蛋白表达的影响

目的：研究苦参碱对淋巴瘤Raji细胞的生长抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法：MTT比色法测定细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色及电镜观察细胞形态及结构变化;免疫细胞化学染色法观察survivin蛋白表达的改变。结果：一定浓度苦参碱作用Raji细胞后,细胞增殖受到明显抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性;荧光显微镜下可见核浓缩,聚集,碎裂等典型的凋亡特征;电镜下可见到凋亡小体形成;免疫细胞化学染色法显示随着苦参碱作用浓度增加,survivin蛋白表达降低。结论：苦参碱在一定浓度范围内可以明显抑制恶性淋巴瘤Raji细胞增殖,并下调抗凋亡基因survivin的表达。     

肝癌组织中CD68+肿瘤相关巨噬细胞数量与Ki-67蛋白表达及原发性肝癌预后的关系

目的 探讨原发性肝癌（HCC）患者肝癌组织中CD68⁺肿瘤相关巨噬细胞（CD68⁺ TAM）的数量与增殖指标Ki-67及肝癌预后的关系,寻找评估肝癌预后更可靠的指标。方法 应用免疫组织化学SABC法检测73例HCC组织中CD68+ TAM的分布情况及增殖指标Ki-67蛋白表达,运用化学发光测定法检测血清AFP水平。结果 CD68⁺ TAM高密度组Ki-67阳性率明显高于低密度组（P=0.0191）。CD68⁺ TAM数量与HCC患者的年龄、性别无关（P>0.05）,而与HCC病理分级有关（P=2.83E-04）。血清AFP水平与HCC患者的年龄、性别、病理分级无关（P>0.05）。CD68⁺ TAM高密度组的总生存时间显著短于低密度组（P=0.0004）。而AFP高水平组与低水平组比较,总生存时间、Ki-67阳性率差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 HCC患者肝癌组织中CD68⁺ TAM数量与肝癌增殖活性密切相关,是HCC预后的独立危险因素。与AFP相比,CD68⁺ TAM有望成为评估肝癌预后更可靠的指标。