三氧化二砷对哮喘小鼠肺组织IκB-α表达和核因子κB激活的作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对哮喘小鼠肺组织核因子κB(NF-κB)激活和抑制蛋白IκB-α表达的影响,探讨As2O3抗炎作用的可能机制以及哮喘防治的新思路。方法BALB/c小鼠36只随机分为对照组、哮喘组(卵蛋白末次激发后1,4,12和24h)和As2O3治疗组(4mg/kg),每组6只。Diff-Quick染色观察支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中嗜酸细胞募集特点,电泳迁移率实验和免疫印迹实验分别检测肺组织NF-κB活性和IκB-α表达水平。结果①哮喘组BALF中嗜酸细胞募集[(48.72±5.38)%]较对照组[(0.56±0.21)%]增加(q=33.46,P<0.01),治疗组较哮喘组减少(q=34.65,P<0.01)。②哮喘组肺组织NF-κB活性均较对照组增加(q=41.84,72.75,61.61,16.32,P<0.01或0.05),以4h活性最高,治疗组较哮喘组减少(q=89.48,P<0.01)。③哮喘组肺组织IκB-α表达较对照组减少(q=30.94,P<0.01),治疗组较哮喘组增加(q=23.67,P<0.01)。④BALF中嗜酸细胞募集、肺组织NF-κB活性与IκB-α表达水平均呈负相关(r=-0.82,-0.94,P<0.01)。结论肺组织NF-κB过度激活可能是哮喘慢性气道炎症持续存在的基础;诱导肺组织IκB-α表达和抑制NF-κB激活,可能是As2O3发挥广泛抗炎作用的重要机制。     

严重烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子的变化及免疫功能机制

背景：严重烫伤导致机体免疫系统各方面的功能紊乱，活化的巨噬细胞可分泌许多生物活性递质。烧伤后巨噬细胞功能紊乱与信号转导的关系目前尚不清楚。目的：观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性NF—κB抑制剂吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)后小鼠腹腔巨噬细胞内NF—κB活性、IκB—α的表达及肿瘤坏死因子(TNF—α)的变化，从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制。设计：随机对照的实验研究。单位：创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室。材料：实验于1999—01／06在第三军医大学烧伤研究所实验室(国家级)完成。实验动物为健康清洁级近交系昆明小白鼠30只。干预：以小鼠常规烫伤模型造成体表面积15％Ⅲ度烫伤实验按烫伤前及伤后不同时相随机分为6组，即0(正常对照组)，2，6，12，24，48h组。收集腹腔巨噬细胞采用放射免疫法检测TNF—α的含量，电泳迁移率改变分析法测NF—κB的活性，免疫印迹法测IκB—α的表达，反转录—PCR测TNF—α mRNA的表达。主要观察指标：①检测TNF—α的含量，②测定NF—κB的活性，③检测IκB-α的表达。④测TNF—α mRNA的表达。结果：烫伤后巨噬细胞分泌TNF—α亢进，于伤后12h达到高峰，为(1085．65&;#177;122．99)ng／L，较正常对照组明显增高(t=14.92，P&;lt;0．01)。NF—κB活性于伤后明显活化，于2h达到了高峰(t=13．31，P&;lt;0．01)，为(56．8&;#177;73)RDU，早于TNF—α的增多。与正常对照组相比．IκB—α的表达于烫伤后2h显著下降(t=4．23，P&;lt;0．01)，达到0．632&;#177;0.086，以后上升，至24h达到高峰(t=7．06，P&;lt;0．01)，为1．161&;#177;0．097，48h稍降(t=4．82，P&;lt;0．01)，为1．149&;#177;0.167以伤后12h为调控点，予PDTC后NF—κB活性及TNF—α mRNA表达量均显著下降(P&;lt;0．01)。结论：烫伤后NF—κB活性及TNF—α表达明显增强，IκB—α对NF—κB在高水平上维持着一种制约关系。烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞内NF—κB信号途径参与TNF—α表达的调控。     

实验性病毒性心肌炎小鼠中核因子κB、单核细胞趋化蛋白-1的表达及意义

目的：探讨核因子κB(nuclear factor kappaB，NF-κB)活化、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoatlxactant protein-1，MCP-1)表达在小鼠病毒性心肌炎(viral myocarditls，VMC)中的作用。方法：Balb／c小鼠40只随机分为2组：柯萨奇病毒B3(the coxsackievirus B3,CVB3)感染组和对照组。分别在实验第7，14和21天处死动物。免疫组化检测心肌组织中NF-κB活化和MCP-1表达，反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测心肌组织中MCP-1mRNA的表达，双抗体夹心ELISA法检测血清MCP-1含量。结果：①感染组小鼠心肌组织中NF-κB活化、MCP-1表达均较对照组明显增强(P&;lt;0．01)，第14天达高峰，阳性信号指数分别为(38．28&;#177;8．25)和(2s．47&;#177;4．36)，且与心肌病变呈正相关。②感染组小鼠MCP-1mRNA的表达量明显增加，且第14天的表达量(0．74&;#177;0．17)大于第7天(0．55&;#177;0．13)和21 d(0．24&;#177;0．06)。③感染组小鼠MCP-1表达增加与NF-κB活化呈正相关(r=0．685，P&;lt;0．05)。④与对照组比较，感染组小鼠血清MCP-1含量明显增加(P&;lt;0．001)，第14天达高峰(20．464&;#177;3．347)，且与心肌组织中MCP-1的表达水平一致。结论：MCP-1能调节炎性细胞至受损心肌组织中，降低了心脏功能，可能在VMC发病机制中发挥了重要作用，且其表达至少部分通过NF-κB的活化来调控。     

实时荧光定量PCR分析海水浸泡伤大鼠小肠组织NF-κB及IκB mRNA表达水平

目的 建立检测大鼠小肠组织NF-κB及IκB-α mRNA表达水平的SYBR Green 实时定量(real time)PCR实验技术,观察海水浸泡伤大鼠小肠组织NF-κB及IκB-α mRNA表达水平的动态变化.方法 Wistar大鼠63只,随机分为三组:空白对照组(C组,n=7),创伤组(W组,分为12、24、48、72 h四组,每组n=7),创伤+海水浸泡组(W+S组,分为12、24、48、72 h四组,每组n=7).W组采用腹部开放伤模型,W+S组在腹部开放伤的基础上海水浸泡1 h.采用real-time PCR方法测定三组实验动物小肠组织NF-κB及IκB-α mRNA表达量并进行统计分析和组间比较.结果 与W组相比,W+S组大鼠小肠组织NF-κB mRNA在72 h后出现显著表达水平上调(P<0.01),W组和W+S组大鼠小肠组织IκB-α mRNA在48 h后都出现显著表达水平上调,但W+S组在72 h IκB-α mRNA表达上调更为显著(P<0.01).结论 在海水浸泡伤的后期(＞72 h),NF-κB mRNA表达明显上调,促进NF-κB蛋白水平的合成,从而进一步放大NF-κB信号转导途径,诱导炎症反应.同时, IκB-α mRNA表达水平的也明显上调,促使IκB-α蛋白表达增加,以尽量下调细胞核中NF-κB的活性.     

二烯丙基三硫对急性肺损伤小鼠肿瘤坏死因子-α表达及核转录因子-κB活性的影响

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法复制LPS致ALI小鼠模型。实验动物按随机数字表法分为生理盐水对照组、ALI模型组、DATS预防组、DATS治疗组和DATS对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组血清和肺组织匀浆上清液中TNF-α浓度;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肺组织TNF-a mRNA表达;凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)检测肺组织NF-κB活性。结果ALI模型组2 h血清及肺组织TNF-α含量明显升高(P均＜0．01),6 h有所降低,但仍高于生理盐水和DATS对照组(P均＜0．01)DATS预防组2 h和6 h血清及肺组织TNF-α含量较ALI模型组均明显降低(P＜0．05或P＜0．01),但DATS治疗组无明显效果(P均＞0．05)。ALI模型组2 h肺组织TNF-αmRNA表达较生理盐水对照组和DATS对照组均明显升高(P均＜0．01),DATS预防组可明显抑制肺组织中TNF-αmRNA表达(P＜0．05),但DATS治疗组无明显效果。ALI模型组肺组织NF-κB活性较生理盐水对照组和DATS对照组均明显升高(P均＜0．05),DATS预防组可明显抑制肺组织NF-κB活性(P＜0．05),但DATS治疗组的抑制效果不明显。结论预先给予DATS可抑制LPS诱导的ALI小鼠肺组织NF-κB活性和TNF-αmRNA表达,减少血清及肺组织中TNF-α的生成,具有一定的抗ALI作用。     

脂多糖诱导大鼠急性肺损伤时核因子-κB信号转导及盐酸氨溴索的作用

目的探讨脂多糖（LPS）诱导的大鼠急性肺损伤（acute lung injury,ALI）时核因子κB（NF-κB）的信号转导,以及盐酸氨溴索（AMB）对其的作用。方法雄性SD大鼠108只,实验分为两部分：第一部分选择其中90只,采用随机排列表法分为6组（n=15）：A组无菌生理盐水（NS）0．5ml腹腔注射1h后,再腹腔注射NS0．5ml;B组腹腔注射AMB10mg／kg 1h后腹腔注射NS0．5ml;C组腹腔注射NS0．5ml 1h后腹腔注射LPS5mg／kg;D、E、F组分别腹腔注射AMB5、10、20mg／kg后1h腹腔注射LPS5mg／kg。各组分别按1、2、4h再分为3个亚组,每组5只。采用酶联吸附免疫法（ELISA）测定肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）和巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）水平,并测定BALF中乳酸脱氢酶（LDH）与总蛋白量的变化。采用蛋白印迹法（Western blot）测定肺组织细胞胞核中NF-κBp65、胞浆中NF-κB抑制蛋白-α（IκBβ）及C—Jun氨基末端激酶（JNK）的表达。第二部分选择18只大鼠按上述分组法随机分为6组（n=3）,A、B、C、D、E、F组,给药方法同第一部分,腹腔注射NS（A组、B组）或腹腔注射LPS（C、D、E、F组）后4h观察大鼠肺组织病理形态学变化。结果第一部分：与A组比较,C、D、E、F组BALF中LDH、总蛋白量、总蛋白量、TNF-α、IL-1β和MIP-2均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）：与C组比较,E、F组上述指标均降低（P〈0．05或P〈0．01）。与A组比较,C、D、E、F组肺组织细胞中的NF-κB p65与JNK表达明显增多（P〈0．01）,而IκBα的表达量减少（P〈0．01）;与C组比较,E、F组NF-κB p65与磷酸化JNK的表达减少（P〈0．05或P〈0．01）,而IκBα的表达量增多（P〈0．05或P〈0．01）。第二部分：A、B组肺组织形态学正常,C组呈明显的肺损伤病理形态学改变,D组肺损伤程度与C组相似,E、F组肺损伤程度较C组减轻。结论AMB可以减轻LPS诱导大鼠ALI．其机制可能与抑制肺组织细胞NF-κB065与JNK的活化,并促进IκBα的表达,以及下调TNF-α、IL-1β和MIP-2的表达有关,且呈剂量依赖性。     

严重烫伤小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子α、蛋白激酶C的变化及调控

背景：严重烫伤导致机体免疫系统各方面的功能紊乱，活化的巨噬细胞可分泌许多生物活性递质。烧伤后巨噬细胞功能紊乱与信号转导的关系目前尚不清楚。目的：观察烧伤后不同时相点肿瘤坏死因子α(tumor necmsis factorm TNF-α)的变化及运用特异性调控剂H-7后小鼠腹腔巨噬细胞内核因子-κB(nuclear flactor-κB，NF-κB)活性及膜浆蛋白激酶C(pmtein kinase C，PKC)的变化，在信号转导的水平探讨PKC是否参与了巨噬细胞TNF-α的调控，阐明巨噬细胞功能紊乱的某些机制。设计：以实验动物为研究对象的随机对照的实验研究。单位：一所军医大学的烧伤研究所。材料：实验于1999-01／12在解放军第三军医大学烧伤研究所实验室(国家级)完成。实验动物为健康清洁级近交系昆明小白鼠，32只。方法：以本所小鼠常规烫伤模型造成体表面积15％Ⅲ度烫伤。实验按烫伤前及伤后不同时相随机分为6组，即0(正常对照组)，2，6，12，24，48h6组。收集腹腔巨噬细胞。采用放射免疫法检测TNF-α的含量，电泳迁移率改变分析法测NF-κB的活性，同位素掺入测膜浆PKC活性。主要观察指标：①检测TNF-α的含量。②测定NF-κB的活性。③检测膜浆PKC的活性。结果：烫伤后巨噬细胞分泌TNF-α亢进，于伤后12h达到高峰，为(1085．65&;#177;122．99)ng／L，较正常对照组明显增高(t=14．92,P&;lt;0．01)。与正常对照组相比，伤后膜浆PKC活性升高，其中膜PKC活性于伤后2h显著增高(t=7．930,P&;lt;0．01)，为(231．80&;#177;31．66)nmol／min&;#183;g。6h稍降，接近于正常(t=2．531，P&;lt;0．05)，为(174．29&;#177;16．80)nmol／min&;#183;g，12h及24h迅速上升，至48h达到峰值(t=29．42,28．03，30．19，P&;lt;0．01)，分别为(512．10&;#177;33．42)，(454．70&;#177;21．06)及(530．49&;#177;28．54)nmol／min&;#183;g。TNF-α和膜PKC的变化进行相关分析表明，二者呈显著的正相关(r=0．7964，P&;lt;0．05)。EMSA图像显示，烫伤后NF-κB活性明显升高。以伤后12h为调控点，经H-7作用后，NF．KB活性显著被抑制。结论：烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的分泌及PKC，NF-κB的活性明显被激活，PKC-NF-κB信号通路参与了TNF-α表达的调控，为烧伤过程中免疫功能的调整及康复干预提供了实验学数据。     

肺损伤机制研究：脂多糖结合蛋白抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株核转录因子κB活性的影响

目的：探讨肺损伤机制和脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein，LBP)抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株U937细胞核转录因子κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)活性的影响，研究LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤的作用。方法：佛波脂诱导U937成熟后分为5组。即正常对照组；脂多糖组(10μg／L脂多糖+100μg／L重组人LBP)；低剂量抑制肽组；中剂量抑制肽组；高剂量抑制肽组(后3组分别给予10，100和1000μg／L抑制肽)。用免疫细胞化学染色图像分析法和蛋白质定量分析法(Western blot)测定U937细胞NFKB的活性；ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF—α)水平。结果：脂多糖刺激后NFκB P65进入核内，抑制肽组核易位明显减少。低、中、高剂量抑制肽组P65核浆灰度比分别为0．59&;#177;0．06，1．02&;#177;0．12和1．08&;#177;0．10，明显低于脂多糖组(1．34&;#177;0．12)(t=4．756，P&;lt;0．01；t=2．235，2．308，P&;lt;0．05)。低、中、高剂量抑制肽组TNF—α水平分别为(93．66&;#177;2．30)，(75．78&;#177;6．55)和(71．50&;#177;7．75)pg／L，明显低于脂多糖组[(128．67&;#177;39．67)pg／L](t=2．216，P&;lt;0．05；t=2．423，2．389，P&;lt;0．01)。结论：LBP抑制肽抑制了U937细胞NFκB的活性和TNF—α的释放；LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤可能具有潜在的预防作用。     

褪黑素对戊四氮致癫痫大鼠海马谷氨酸受体和γ-氨基丁酸受体的影响

目的：探讨褪黑素抗癫痫的机制。方法：应用SP法研究戊四氮致癫痫大鼠和褪黑素抗癫痫大鼠海马谷氨酸受体ζ1(N-methyl-D-aspartate recepterζ1，NMDAζ1)和γ-氨基丁酸受体Aα1(r-aminobutyric acid-A recepter α1，GABAAR α1)的变化。结果：海马NMDAζl表达在戊四氮致癫痫组明显高于正常对照组(q吸光度=6．34，P&;lt;0.01；q阳性率=9．394，P&;lt;0．01)，褪黑素抗癫痫组明显低于戊四氮致癫痫组(q吸光度=6．01，P&;lt;0．01；q阳性率=9．000，P&;lt;0．01)．褪黑素抗癫痫组与正常对照组之间差异无显著性意义(q吸光度=0．032，P&;gt;0．05；q阳性率=0．4015，P&;gt;0．05)；海马GABAARα1表达在戊四氮致癫痫组明显低于正常对照组(q吸光度=4．65，P&;lt;0．01；q阳性率=5．3，P&;lt;0．01)，褪黑素抗癫痫组明显高于戊四氮致癫痫组(q吸光度=4．58，P&;lt;0．01；q吸光度=5.21，P&;lt;0．01)，褪黑素抗癫痫组与正常对照组之间差异无显著性意义(q吸光度=0．07，P&;gt;0．05；q吸光度=0．097，P&;gt;0．05)。结论：褪黑素可能通过抑制海马兴奋性神经递质受体NMDAζ1和激活海马抑制性神经递质受体GABAARα1的活性与表达，降低大脑皮质的兴奋性，抑制癫痫的形成及发展来发挥抗癫痫作用。     

糖皮质激素对大潮气量机械通气大鼠肺组织巨噬细胞炎症蛋白-1 α和核因子-κB表达的影响

目的 观察大潮气量机械通气大鼠血浆和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)含量以及肺组织MIP-1α mRNA和NF-κBp65 mRNA表达水平.方法 32只健康雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为对照组,机械通气致肺损伤(VILI)组、地塞米松干预(DEX)组和布地奈德干预(BUD)组.给与相应处理后分别采用ELISA法检测各组大鼠BALF和血浆MIP-1α含量,采用RT-PCR法检测其肺组织MIP-1αmRNA和NF-κB p65mRNA表达水平,比较4组之间的差异,并将VILI,DEX,BUD组间MIP-1α mRNA与MIP-1α含量,MIP-1α mRNA与NF-κB p65 mRNA表达水平间进行直线相关分析.结果 DEX组和BUD组BALF及血浆中MIP-1α含量及肺组织MIP-1αmRNA和NF-κBp65 mRNA表达水平均明显低于VILI组(P＜0.05),同时肺组织损伤程度明显减轻;BUD组BALF和血浆中MIP-1α含量及肺组织MIP-1α mRNA和NF-κB p65 mRNA表达水平虽高于DEX组,但差异无统计学意义(P＞0.05).相关分析结果表明,肺组织MIP-1α mRNA表达量与BALF中MIP-1α含量呈正相关(r=0.895,P＜0.05);肺组织MIP-1α mRNA表达量与NF-κB p65 mRNA表达量呈正相关(r=0.801,P＜0.05).结论 糖皮质激素可能通过抑制NF-κB的活性而下调肺组织MIP-1α的表达,对VILI有一定防治作用;局部应用糖皮质激素对VILI的保护作用与全身用药的作用相似,且副作用小.     

早期切痂对烧伤大鼠肺组织核因子-κB活化的影响

目的探讨大鼠烧伤后早期切痂对肺组织核因子-κB（NF-κB）活化和促炎细胞因子表达的影响,进一步阐明烧伤早期切痂有利于控制全身炎症反应的机制。方法采用Wistar大鼠Ⅲ°35％TBSA烧伤模型,实验分正常对照组（A组）、烧伤后非切痂组（B组）和烧伤后早期切痂组（C组）。大鼠烧伤后12、24h凝胶电泳迁移率分析法（EMSA）检测肺组织NF-κB活性;逆转录．聚合酶链式反应（RT-PCR）检测肺组织TNF-α mRNA表达;酶联免疫吸附分析（ELISA）检测肺组织TNF-α含量。数据采用Excel统计分析软件行t检验。结果B组大鼠伤后12、24h肺组织NF-κB活性分别为（19．56±1．36）×10^4积分灰度值（A）和（15．23±1．94）×10^4A,均明显高于A组[（4．36±0．38）×10^4A,P〈0．01]。B组伤后12h肺组织TNF-α mRNA表达（1．37±0．47）较A组（0．28±0．04）升高（P〈0．01）,TNF-α含量（1．88±0．75）ng／ml也明显高于A组[（0．62±0．05）ng／ml,P〈0．01]。C组肺组织NF-κB活性伤后12h为（7．12±1．15）×10^4A,24h为（6．33±0．90）×10^4A,分别较B组显著降低（P〈0．01）;C组大鼠肺组织伤后12、24h时TNF-α mRNA表达和含量均显著低于B组（P〈0．01）。结论严重烧伤可激活大鼠肺组织NF-κB,烧伤后早期切痂可有效抑制肺组织NF-κB活化,从而下调肺组织对致炎细胞因子的合成和释放,减轻机体全身炎症反应。     

脂多糖对中性粒细胞核转录因子-κB活性的影响

目的：探讨在脂多糖（LPS）刺激下,中性粒细胞核转录因子-κB（NF-κB）活性变化及其抑制因子（IκBα）的影响。方法：离体培养人中性粒细胞,分为来普霉素B（LMB）干预组（A组）、LPS刺激组（B组）和LPM＋LPS组（C组）。各组分别在刺激后0、15、60、120min,用NF-κBp65试剂盒检测细胞核NF-κB活性,用Western-blot检测细胞核、浆中IκBα含量。结果：A组中各时相点NF-κB活性无明显变化;同一时相点细胞核、浆之间,以及不同时相点细胞核之间、细胞浆之间IκBα含量无明显变化。B组LPS刺激后,NF-κB活性较0点时明显增强;细胞核、浆中各时相点IκBα较未刺激时显著降低;细胞核、浆中呈现一致性变化。C组NF-κB活性于60min时点后,较B组同时相点明显受抑制;胞浆中IκBα于60min时较B组明显减少,而核中IκBα于60min后较B组明显增加。结论：NF-κB活性与核中IκBα含量呈负相关;IκBα在中性粒细胞存在核浆穿梭,通过抑制IκBα核浆穿梭,可显著降低NF-κB活性。     

粉防己碱对高脂饮食兔血清白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α及血管壁细胞核因子-κB表达的影响

目的：观察中药粉防己碱对高脂饮食兔血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血管壁细胞核因子-κB表达的影响，进一步探讨粉防己碱抗动脉粥样硬化的机制。方法：将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(普通饲料)、高脂模型组(高脂饲料)和粉防己碱组(高脂饲料+粉防己碱)。喂养12周后处死动物，放射免疫法检测血清IL-1β，TNF-α含量；采用逆转录聚合酶链式反应对血管壁细胞核因子-κB mRNA表达定量分析：Western杂交定量分析血管壁细胞核因子-κB p65蛋白亚基。结果：高脂模型组血清IL-1β，TNF-α显著高于正常对照组和粉防己碱组(P&;lt;0．05)，正常对照组和粉防己碱组差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；高脂模型组(1．414&;#177;0．106)NF-κB mRNA显著高于正常对照组(0．085&;#177;0．062)和粉防己碱组(0．453&;#177;0．034)，而高脂模型组NF-κB蛋白亚基p65(10．08&;#177;5．75)显著低于正常对照组(35．90&;#177;3．07)和粉防己碱组(35．91&;#177;4．38)(P&;lt;0．001)。结论：粉防己碱有抑制炎症因子IL-1β，TNF-α合成和分泌的作用；高血脂激活NF-κB，p65易位人胞核促进转录而降解，而粉防己碱对其有抑制作用，这可能是粉防己碱抗AS作用的机制。     

核因子-κB活化在大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤中的作用

目的研究核因子-κB (NF-κB) 活化在大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤中的作用和NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的作用. 方法实验动物随机分成3组,对照组,ANP组,PDTC组,然后逆行性胰胆管注射5%牛磺胆酸钠制作ANP模型.观察血清淀粉酶、动脉血氧分压(PaO2)、胰腺、肺组织病理变化、NF-κB抑制蛋白IκBα及NF-κB p65 mRNA在肺组织的表达.结果 应用PDTC后,PDTC组与ANP组比较,血清淀粉酶明显下降,由(8 231.20±848.70)U/L降至(4 205.20±1 611.49)U/L;PaO2升高,由(80.70±8.05)mmHg升至(86.80±3.58)mmHg;胰腺、肺组织损伤减轻;NF-κB迅速活化,肺组织中IκBα表达升高,NF-κB p65 mRNA表达下降.结论 NF-κB活化在ANP肺损伤发病机制中起作用,抑制NF-κB活化可改善大鼠ANP肺损伤.     

中度低温对急性胰腺炎大鼠核转录因子-κB表达的影响

目的观察急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）后不同时间点胰腺和肺组织中核转录因子-κB（NF-κB）的DNA结合活性动态变化，以及胰腺炎后应用中度低温对NF-κB活性的影响。方法第一部分实验采用牛磺胆酸钠逆行注射造成大鼠AHNP模型。大鼠随机分为正常对照组以及AHNP常温2、5和12h组，用电泳迁移率改变法（EMSA）测定各组大鼠胰腺和肺组织中NF-κB的活性。第二部分实验将大鼠随机分为假手术组、AHNP常温组和低温组，诱导AHNP后2h和5h测定各组胰腺和肺组织中NF-κB的活性。结果急性胰腺炎后大鼠胰腺和肺组织NF-κB活性均持续增强，且各时间点胰腺组织NF-κB活性显著强于肺组织（P均〈0．01）。与AHNP常温组相比，低温组AHNP后2h和5h肺组织NF-κB活性均显著降低（P均〈0．01），而胰腺组织NF-κB活性与常温组差异不明显。结论急性胰腺炎伴有胰腺和肺组织NF-κB活性的显著增强。中度低温对急性胰腺炎后肺组织NF-κB的激活有抑制作用。     

糖尿病视网膜病变与核因子—κB活性的关系

目的：探讨糖尿病患者外周血单核细胞中核因子—κB的活性与视网膜损害的关系。方法：应用凝胶电泳迁移率实验测定了46例糖尿病患者和15例健康正常人(正常对照组)外周血单核细胞中NF-κB的活性，并根据有无视网膜病变将糖尿病患者分为糖尿病无视网膜病变组和糖尿病视网膜病变组。结果：正常对照组、糖尿病无视网膜病变组、糖尿病视网膜病变组NF—κB相对活性分别为15．79&;#177;3．64，26．94&;#177;6．47，57．62&;#177;8．35。与正常对照组(15例)比较，糖尿病无视网膜病变组(17例)、糖尿病视网膜病变组(29例)NF—κB活性显著增强(t=2．74，2．64；P&;lt;0．05)，其中糖尿病视网膜病变组活性最高；糖尿病无视网膜病变组、糖尿病视网膜病变组两组间NF—κB活性也有差别(t=2．09，P&;lt;0．05)。结论：糖尿病患者外周血单核细胞中NF—κB活性显著增强，尤其是伴有视网膜病变的患者，NF—κB与糖尿病视网膜病变的发生、发展有关。     

血管紧张素-Ⅱ活化肺微血管内皮细胞核因子-κB的研究

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对肺微血管内皮细胞(HPMEC)核因子-κB(NF-κB)的活性的影响,以及经典途径在Ang Ⅱ介导的NF-κB活化过程中的作用.方法 本实验分为:Ang Ⅱ组:10-6 mol/L AngⅡ分别刺激HPMEC 0、0.5、1、2、4 h;氯沙坦组:10-6mol/L氯沙坦(AngⅡ 1型受体阻滞剂)预先处理HPMEC 1 h,再予相同10-6mol/L AngⅡ刺激细胞2 h,提取胞浆蛋白和胞核蛋白.凝胶电泳迁移率分析实验(EMSA)观察细胞中NF-κB的DNA结合活性.Western印迹检测细胞浆中抑制因子κBα(IκBα)的含量.结果 AngⅡ刺激HPMEC 0.5 h后细胞中NF-κB活性明显上升(144.5±16.1),在2h达到峰值(270.1±27.2),4 h(215.1±17.8)较2 h有所下降,但仍高于0 h水平,以上各时间点与AngⅡ刺激细胞0 h(100.0±25.1)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).与Ang Ⅱ刺激HPMEC 0 h IκBα含量(44.4%±2.1%)相比,0.5 h后IκBα含量即开始明显下降(38.9%±3.6%,P＜0.05),2 h后IκBα含量下降最为明显(32.6%±2.3%,P＜0.05),4 h细胞中IκBα含量较2 h有所上升,但仍然明显低于ArgⅡ刺激0 h细胞中IκBα的含量(40.1%±4.7%,P＜0.05).氯沙坦组NF-κB活性(115.4±10.7)和IκBα含量(43.6%±3.7%)与AngⅡ组0 h相比无明显差异.氯沙坦组中NF-κB活性明显低于AngⅡ组2 h,氯沙坦组中iκBα的含量亦明显高于AngⅡ组2 h.结论 AugⅡ能通过AT1介导HPMEC中NF-κB活化.经典途径参与了AagⅡ诱导的HPMEC中NF-κB活化过程.     

小窝蛋白-1和NF-κB在机械通气肺损伤大鼠肺组织中的表达

目的通过观察小窝蛋白-l(cav-1)及NF-κB p65、IL-8在大潮气量机械通气大鼠肺组织中的表达变化,探讨cav-1在通过对NF-κB信号转导通路的影响而导致对肺组织的损伤作用。方法将雄性SD大鼠随机分为三组:对照组、大潮气量通气0.5 h组(H-VT0.5h组)和大潮气量通气2 h组(H-VT2h组)。光镜下观察各组大鼠肺组织病理学改变;免疫组织化学染色法检测肺组织中cav-1的蛋白含量;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB p65的m RNA表达;计算肺湿/干重比值(W/D);酶联免疫吸附试验(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-8的含量,并对cav-1及NF-κB p65进行相关性分析。结果 H-VT2h组肺组织中肺W/D比值、cav-1的蛋白表达、NF-κB p65 m RNA的表达水平及BALF中IL-8的含量均大于H-VT0.5h组,差异有统计学意义(均P<0.05);H-VT0.5h组肺组织中肺W/D比值、cav-1的蛋白表达、NF-κB p65 m RNA的表达水平以及BALF中IL-8的含量均大于对照组,但差异无统计学意义(均P>0.05)。相关性分析结果显示,各组大鼠肺组织cav-1蛋白表达水平与NF-κB p65 m RNA表达水平之间呈正相关(r=0.820,P<0.01)。结论 cav-1在机械通气导致肺损伤发生中可能起损伤作用。这种损伤作用可能与cav-1经过多种途径激活NF-κB炎症信号通路,使IL-8等细胞因子释放有关,最终导致炎症的加重和肺组织损伤。     

雷公藤对哮喘大鼠气道炎症及重塑影响的研究

目的：探讨雷公藤对哮喘大鼠气道炎症及重塑的影响。方法：40只大鼠被随机均分为阴性对照组、阳性对照组、雷公藤常规剂量组（雷Ⅰ组）和雷公藤小剂量组（雷Ⅱ组）4组。采用卵白蛋白致敏方法制备哮喘模型，采用瑞氏染色，进行支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞分类及计数，免疫组化方法检测肺组织中核转录因子-κB（NF-κB）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达。结果：与阴性对照组相比，阳性对照组BALF中的淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及嗜酸粒细胞数均明显升高；肺组织中NF-κB、MMP-9和TIMP-1的阳性细胞百分数亦明显升高，差异均有显著性（P均〈0．01）。与阳性对照组比较，两个雷公藤治疗组BALF中淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及嗜酸粒细胞数均明显降低（P均〈0．01）；且肺组织中NF-κB、MMP-9和TIMP-1的阳性细胞百分数亦明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。雷Ⅰ组与雷Ⅱ组各指标比较，差异均无显著性。结论：雷公藤能够抑制哮喘大鼠的气道炎症和纤维化，且小剂量雷公藤亦能产生上述效果。     

严重烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子的变化及免疫功能机制

背景严重烫伤导致机体免疫系统各方面的功能紊乱,活化的巨噬细胞可分泌许多生物活性递质.烧伤后巨噬细胞功能紊乱与信号转导的关系目前尚不清楚.目的观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性NF-κB抑制剂吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-κB活性、IκB-α的表达及肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化,从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制.设计随机对照的实验研究.单位创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室.材料实验于1999-01/06在第三军医大学烧伤研究所实验室(国家级)完成.实验动物为健康清洁级近交系昆明小白鼠30只.干预以小鼠常规烫伤模型造成体表面积15%Ⅲ度烫伤.实验按烫伤前及伤后不同时相随机分为6组,即0(正常对照组),2,6,12,24,48 h组.收集腹腔巨噬细胞.采用放射免疫法检测TNF-α的含量,电泳迁移率改变分析法测NF-κB的活性,免疫印迹法测IκB-α的表达,反转录-PCR测TNF-α mRNA的表达.主要观察指标①检测TNF-α的含量.②测定NF-κB的活性.③检测IκB-α的表达.④测TNF-α mRNA的表达.结果烫伤后巨噬细胞分泌TNF-α亢进,于伤后12 h达到高峰,为(1 085.65±122.99)ng/L,较正常对照组明显增高(t=14.92,P＜0.01).NF-κB活性于伤后明显活化,于2 h达到了高峰(t=13.31,P＜0.01),为(56.8±7.3)RDU,早于TNF-α的增多.与正常对照组相比,IκB-α的表达于烫伤后2 h显著下降(t=4.23,P＜0.01),达到0.632±0.086,以后上升,至24 h达到高峰(t=7.06,P＜0.01),为1.161±0.097,48 h稍降(t=4.82,P＜0.01),为1.149±0.167.以伤后12 h为调控点,予PDTC后NF-κB活性及TNF-α mRNA表达量均显著下降(P＜0.01).结论烫伤后NF-κB活性及TNF-α表达明显增强,IκB-α对NF-κB在高水平上维持着一种制约关系.烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-κB信号途径参与TNF-α表达的调控.