21号染色体上STR位点的遗传多态性研究

目的 调查21号染色体上4个短串联重复序列位点:D21S11、D21S1432、D21S2054和D21S1446在西安汉族人群中的基因频率分布和法医学统计参数.方法 以西安地区汉族100例无关个体为研究对象,选用唐氏综合征关键区域内及其附近4个短串联重复序列位点.应用聚合酶链反应和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术时其进行遗传多态性调查分析.结果 100例无关个体4个位点(D21S11、D21S1432、D21S2054和D21S1446)分别检出12、8、6、8个等位基因;基因型分布均符合Hardy-Weinberg定律.结论 21号染色体上4个短串联重复序列位点均有较高的个体识别率,在个体识别和亲权鉴定中有应用价值,对唐氏综合征的基因诊断有临床指导意义.     

多重荧光定量PCR技术快速诊断唐氏综合征方法的建立及临床应用

目的:建立适合中国广东地区人群特点的唐氏综合征快速产前诊断技术,并评价其临床应用价值。方法:选取21号染色体上杂合度较高的3个短串联重复序列(STR,D21S1411、D21S1412、D21S1270)作为遗传标记,采用多重荧光定量聚合酶链反应(QF-PCR)扩增技术,对广东地区106例无亲缘关系的正常人外周血DNA进行分析,计算这3个STR位标的多态性信息含量(PIC);用该方法对25例唐氏综合征患儿外周血和10例正常孕妇羊水的DNA进行检测,并与染色体核型分析结果进行对照分析。结果:21号染色体上的3个STR(D21S1411、D21S1412、D21S1270)的PIC分别为0.913、0.835、0.856,确立了QF-PCR产前诊断唐氏综合征的方法。对25例唐氏综合征患儿外周血和10例孕妇羊水同时进行QF-PCR检测与染色体核型分析,两种方法均检测到27例唐氏综合征,结果吻合。结论:本研究所选STR位标在中国广东人群中呈现较高的遗传多态性,符合Hardy-W e inberg平衡定律;所构建的QF-PCR技术产前诊断唐氏综合征具有准确、快速、高效等特点,有较高的临床使用价值。     

细胞周期调控基因多态与氯乙烯接触工人染色体损伤的易感性

目的探讨细胞周期调控基因P53、P21和细胞周期蛋白D1基因多态与氯乙烯致外周血淋巴细胞染色体损伤易感性的关系。方法采用胞质分裂阻滞微核试验方法评价183名氯乙烯接触工人染色体损伤水平，应用聚合酶链反应-限制性片段多态性技术对P53第4外显子、第3和6内含子，P21第2外显子和第3外显子的3’非翻译区，以及CCND1基因第4外显子等多态位点进行检测。结果研究对象P53基因第4外显子，第3和6内含子等位基因的突变频率分别为0．45，0．04，0．05，P21第2外显子和第3外显子两个位点的突变频率分别为0．37和0．50，CCNDl第4外显子突变频率为0．42。多因素Poisson回归分析结果表明，30岁以上年龄组的人群发生染色体损伤的危险度是30岁以下年龄组人群的1．2202倍，差异有统计学意义（OR=1．2202，95％CI：1．0580～1．4072，P=0．0062）；女性发生染色体损伤的危险度是男性的1．1491倍，差异有统计学意义（017=1．1491，95％CI：0．9841～1．3416，P=0．0772）；P53第6内含子突变基因型人群发生染色体损伤的危险度是野生基因型人群的1．3032倍，差异有统计学意义（OR=I，3032，95％CI：1．1285～1．6405，P=0，0285）。P53单倍型分析结果表明，携带BBB／AAA和BAB／AAA单倍型对（按照P53第4外显子、第3和6内含子顺序，B表示突变型，A表示野生型）的人群微核率与野生型AAA／AAA人群相比，OR值分别为1．4418（95％CI：1．0316-2．0152）和1．7100（95％CI：1．0385～2．8157）。结论氯乙烯暴露人群中，30岁以上、女性、P53INTRON6等位基因突变以及P53第4外显子，第3和第6内含子单倍型对为BBB／AAA和BAB／AAA都是个体发生染色体损伤的危险因素。     

食管鳞状细胞癌组织中微卫星不稳定的研究

目的观察食管鳞状细胞癌组织中的微卫星不稳定（MSI）表达及临床意义。方法采用PCR技术和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，检测45例食管鳞状细胞癌及相应癌旁正常组织2个位点的MSI状态。结果D3S1067位点MSI检出频率较高，为24．4％（11／45）；D18S58位点MSI阳性率为13．3％（6／45）。有3例既在D3S1067又在D18S58中检出MSI。有31对组织在D3S1067和D18S58两个位点均未检出MSI。MSI在食管鳞状细胞癌中表达率为31．1％（14／45），与肿瘤的病理病理分级、PTNM分期、有无区域淋巴结转移和侵润深度无关（p〉0．05）。结论食管鳞状细胞癌发生过程中存在MSI途径，MSI可能作为临床筛查食管鳞状细胞癌高危人群的分子手段，具有潜在的应用前景。     

21三体综合征产前基因诊断的研究

[目的]建立一种准确、快速、简便的21三体综合征即唐氏综合征产前诊断技术,探讨应用串联重复序列信息进行21三体定性诊断的可行性。[方法]抽取109例高风险孕妇羊水,提取DNA,PCR扩增特异性STR片段,并对其进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染分析,通过电泳带型特征诊断21三体。同时选择17号染色体D17S953作为质控,排除羊水被母血污染造成对结果的影响。[结果]发现异常5例,其中D21S11异常2例,D21S1270异常3例。[结论]基于短串联重复序列（short tandem repeat,STR）的聚合酶链反应技术是一种简单、快速和可靠的21三体定性基因诊断技术,可应用于21三体的基因诊断和遗传筛查。     

大骨节病患者12号染色体7个STR位点基因频率分析

目的分析大骨节病患者、病区内对照人群和非病区外对照人群12号染色体上7个短串联重复序列（STR）位点的多态性。方法采用荧光标记基因扫描方法，对12号染色体上D12S1718、D12S1675、D12S358、D12S367、D12S1638、D12S1646和D12S1682位点在陕西省永寿县、榆林地区大骨节病区患者和病区内对照人群及咸阳地区非病区外对照人群中的多态性进行分析，计算相应人群中7个位点的基因频率、基因型频率，并对各组间基因频率进行X^2检验。结果D12S1718、D12S1675、D12S358、D12S367、D12S1638、D12S1646和D12S1682位点在大骨节病患者中分别检出4、7、7、8、5、5和7个等位基因，5、12、13、11、10、9和13个基因型；在病区内对照人群中分别检出4、9、7、6、6、6和8个等位基因，5、10、12、14、12、9和13个基因型；在非病区外对照人群中分别检出7、9、7、7、5、8和11个等位基因，9、16、17、16、12、15和20个基因型；各组间基因频率进行比较，在D12S367位点和D12S1638位点，患者与病区内对照（D12S367：P=0．034；D12S1638：P=0．041）及非病区外对照间（D12S367：P=0．029；D12S1638：P=0．028）均有显著性差异；在D12S1646位点，患者与病区内对照间无差异（P=0．446），但病区人群与非病区外对照间有差异（患者一非病区外对照：P=0．036；病区内对照一非病区外对照：P=0．039）。结论大骨节病患者12号染色体的7个STR位点中D12S367和D12S1638等位基因分布显著不同于病区与非病区正常人。     

脆性X 染色体综合征快速筛查的聚合酶链反应技术

目的 建立一种简便的筛查脆性X综合征的聚合酶链反应(PCR)方法。方法提取76例原因不明的智力低下男性患儿外周血DNA，用PCR扩增FMR1基因的三核苷酸重复序列。结果96．1％(73／76)的标本PCR反应出现产物，条带大小为400～500bp，相当于三核苷酸重复次数20～30；3．9％(3／76)PCR反应无产物，其中2例被证实为脆性X综合征患者。结论该方法简便、快速、价廉，可用于高危人群的快速筛查。     

产前诊断中胎儿染色体异常的相关指征分析

目的：通过分析胎儿染色体异常的产前诊断指征，为提高胎儿染色体异常的检出率提供临床参考资料。方法：总结2002～2008年因各种指征行羊水或脐血穿刺检查的胎儿染色体核型分析。结果：1342例染色体检查中，发现异常核型82例，畸变率6．11％。染色体数目异常31例，占异常核型37．80％（31／82）％，其中21三体17例，18三体7例。21三体检出率1．27％，占异常核型检出率20．73％（17／82）。染色体倒位21例，其中9号染色体倒位20例，1例7号染色体倒位。平衡易位5例，其中4例平衡易位来源于父亲，一例夫妇均不愿查染色体。且其中3例均于自然流产3次时查夫妇双方染色体才发现为丈夫染色体异常。染色体变异27例，其中16qh＋8例，9qh＋7例，6例XYq＋，1例XYq-。结论：对高龄孕妇进行产前诊断是必要的。对非高龄孕妇应用唐氏筛查软件可避免漏诊部分染色体异常儿的诊断。染色体结构异常的夫妇应行产前诊断。     

432例中国女性雌激素受体α基因多态性分布

[目的]了解雌激素受体（ER）α基因多态位点在中国女性人群中的分布频率。[方法]采用荧光定量PCR技术及聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法对432例中国女性进行Codon594、Pvull、Xbal 3个位点检测,并与其他种族人群比较。[结果]Codon 594位点基因分型频率GG型为59．96％、GA型33．33％、AA型6．71％：Pvull位点频率CC型38．89％、TC型44．91％、TT型16．20％;Xbal位点基因分型频率为GG型45．37％、AG型41．43％、AA型13．20％;3个位点H-W检验符合遗传平衡定律;连锁不平衡分析Codon 594与Pvull、Xbal 3个位点的D’值分别为0．127、0．181,Pvull与Xbal位点之间D’值为0．484,未见连锁不平衡。[结论]Pvull、Xbal位点多态性分布存在种族差异,但Codon 594位点多态性分布无种族差异。     

生殖异常者染色体分析

目的：探讨造成流产，死胎，不孕（不育），闭经和出生缺陷等生殖异常的细胞生物学原因。方法：对我院1999年6月－2001年6月780例优生遗传咨询者外周血G带染色体进行分析。结果：染色体异常占受检人数的4．5％（35／780）（男性25例，女性患者10例），染色体异态，占受检人数的9．6％（75／780），染色体异常和异态患者中患有反复自发流产，死胎等不良妊娠者为16．4％（71／432），不孕不育为50．0％（29／58），闭经患者为9．7％（3／31），在染色体异常核型中，数目异常占57．1％（20／35），染色体结构异常占37．2％（13／35），嵌合体占5．7％（2／35），结论：生殖异常与染色体异常和异态有着密切的关系。     

水体污染物诱导的叙利亚金黄地鼠胚胎转化细胞中P21蛋白的表达

应用体外叙利亚金黄地鼠胚胎（ＳＨＥ）细胞转化试验和免疫组化的方法，对太湖、巢湖和淀山湖水体有机污染物的致癌活性进行了分析。发现在每瓶（０．０５，０．１，０．２Ｌ）原水浓度范围内，这些有机污染物均可不同程度地诱导ＳＨＥ细胞发生形态学转化，并有一定的剂量反应关系。在典型的Ⅲ型转化细胞中ｒａｓＰ２１蛋白表达明显增高，免疫组化染色阳性，且在过度期Ⅰ、Ⅱ型转化细胞中Ｐ２１已有中等程度的表达。提示太湖、巢湖和淀山湖有机污染物具有一定的致癌活性，ｒａｓ癌基因的激活可能是其诱导ＳＨＥ细胞发生恶性转化的机制之一。