胃泌素及其受体与胃癌研究进展

胃泌素是一种多肽激素，主要由胃肠道G细胞分泌，与胃泌素受体特异性结合，主要具有刺激胃酸分泌和对胃肠粘膜的营养作用。大量研究表明，多种胃肠道激素包括胃泌素能促进胃肠肿瘤生长，本文就近几年胃泌素及胃泌素受体与胃癌方面的若干研究综述如下。     

胆囊收缩素,胃泌素与胆管癌细胞增殖关系的研究

胆囊收缩素、胃泌素与胆管癌细胞增殖关系的研究博士生论文摘要ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｔｈｅＣＣＫａｎｄｇａｓｔｒｉｎ马宽生何振平（第三军医...     

阻断自分泌性胃泌素对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨胃癌组织中是否存在胃泌素／胆囊收缩素（CCK）-B受体自分泌环及其在胃癌的发生发展中的作用。方法 采用人胃癌细胞系SGC-7901在含10％新生小牛血清RPMI-1640培养基中培养于37％、5％CO：的培养箱中。SGC-7901细胞中胃泌素／CCK-B受体自分泌环的检测分别用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫细胞化学及放射免疫分析法。抗胃泌素单克隆抗体阻断自分泌环对细胞生长与凋亡的影响采用SGC-7901细胞与不同浓度的抗胃泌素单克隆抗体共同孵育72h后,搜集细胞,分别用四甲基偶氮唑盐比色法及流式细胞术检测细胞生长率、细胞周期及凋亡细胞,以不加抗体孵育作为阴性对照。结果 SGC-7901细胞复合表达CCK-B受体和胃泌素基因,其序列已被测序证实。胃泌素蛋白主要在SGC-7901细胞的胞质中表达,且培养液中的胃泌素浓度随培养时间的延长和细胞数的增加而增加。用抗胃泌素单克隆抗体阻断此自分泌环后,细胞的生长率从正常对照的100％降至31．4％（抗体浓度为2μg／ml）,而S期细胞数从正常对照的27．8％降至9．5％（抗体浓度为1．2μg／ml）,且细胞凋亡率分别从正常对照的0．9％（亚G1峰法）和1．1％（膜联蛋白-V／碘化丙啶双染法）升至6．5％（亚G1峰法）和7．5％（膜联蛋白-V／碘化丙啶双染法）。结论 胃癌细胞系SGC-7901中存在胃泌素／CCK-B受体自分泌环,阻断此自分泌环后能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

胆囊收缩素对胰腺癌细胞SW1990的生长调控

目的:通过研究胆囊收缩素对胰腺癌细胞株SW1990的生长调控,探讨胆囊收缩素与胰腺癌的发生、发展的关系。方法:应用流式细胞仪检测不同浓度的胆囊收缩素八肽(CCK-8肽)作用不同时间对胰腺癌细胞株SW1990细胞周期及凋亡的影响。结果:CCK-8肽能促进SW1990细胞的生长,抑制细胞的凋亡。随着CCK-8肽浓度的增加,细胞凋亡率呈下降趋势。结论:CCK在胰腺癌细胞的生长中发挥重要作用,抑制CCK可能是一种有效的治疗胰腺癌的策略。     

小鼠B淋巴细胞胆囊收缩素受体的表达

目的 观察小鼠B淋巴细胞胆囊收缩素受体(cholecystokinin receptor,CCKR)的表达.方法 分离正常小鼠脾细胞,用免疫磁珠法分选B淋巴细胞.光镜观察细胞形态.流式细胞术进行B淋巴细胞纯度鉴定.反转录聚合酶链反应方法检测细胞CCKR mRNA表达;流式细胞术检测细胞CCKR蛋白表达.结果 B淋巴细胞在mRNA水平和蛋白水平均有CCKIR和CCK2R表达.结论 B淋巴细胞存在2种类型的CCKR,此为进一步研究八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)的免疫调节机制提供了实验依据.     

胃泌素与脾虚证关系的研究进展

关于脾虚病人和牌虚模型动物的胃泌素水平各家报道很不一致。笔者认为,单纯测定血清或组织胃泌素水平的意义十分有限,胃泌素值尚不能做为脾虚证的诊断指标,还需要从胃泌素受体数目、活性、基因表达以及受体后信息传递等方面去深入研究。同时还要研究其他胃肠激素,研究神经内分泌免疫网络与牌虚证的关系,注意牌的主运化以外其他功能的研究,从不同层面和水平去阐明脾虚证的本质。     

胃泌素受体拮抗剂对胃癌细胞株MKN_(45)裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探索应用胃泌素受体拮抗剂调控胃癌细胞自分泌生长的作用及其机制。方法建立胃癌细胞株ＭＫＮ４５移植瘤的动物模型,观察胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对移植瘤的面积、重量、胃癌细胞ＤＮＡ及血清促胃液素含量的影响。结果第１６天丙谷胺组移植瘤面积（６１．４１±１８．５７）ｍｍ２较对照组（９４．８６±２８．０５）ｍｍ２明显缩小（Ｐ＜０．０５）,第２８天时差别更明显（１２５．５７±４０．２６）∶（２１１．５９±５０．０８）ｍｍ２。第２８天时丙谷胺组及对照组的移植瘤重量分别为（８４７．９±６９．６）ｍｇ及（１１７７．７±８３．５）ｍｇ（Ｐ＜０．０５）。丙谷胺组胃癌细胞ＤＮＡ指数、平均ＤＮＡ含量及Ｓ期细胞比例均低于对照组。丙谷胺对血清促胃液素含量没有影响。结论丙谷胺对胃癌细胞株ＭＫＮ４５移植瘤有抑制生长的作用;丙谷胺发挥抗肿瘤作用是通过改变胃癌细胞ＤＮＡ代谢过程,而与血清促胃液素含量的改变无关。     

胆囊收缩素及其受体的研究进展

胆囊收缩素(CCK)作为一种肽类激素,在与靶细胞的CCK受体(CCKR)结合后调节消化系统、心血管系统和神经系统的多项功能.在消化系统中,受CCK调节的功能包括胆囊收缩、胰酶分泌、胰腺生长和胃肠蠕动等;而在心血管系统中,CCK参与心率和血压的调节;在神经系统中,CCK则作为神经递质,在进食、疼痛、体温及情绪等方面发挥调节作用.近年来的研究表明,CCK和CCKR与肿瘤密切相关,对其深入研究将有助于寻找肿瘤的治疗靶点,并设计出针对独特靶点的药物,进而为相关肿瘤的治疗开辟道路.     

胃泌素受体拮抗剂与环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺与特异性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞株MKN-45增殖、凋亡的调控作用。方法MKN-45细胞常规培养于RPMI-1640培养液中,细胞长至亚单层后加丙谷胺(终浓度5.0mmol/L)和/或NS-398(10.0μmol/L),连续培养48h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析检查细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测凋亡抑制基因bcl-2mRNA及蛋白表达。结果丙谷胺和NS-398协同抑制MKN-45细胞增殖;丙谷胺组、NS-398组和联合用药组的细胞凋亡率分别为24.7%±3.2%,26.7%±3.4%和36.1%±4.6%,显著高于对照组的1.6%±0.6%(均P<0.01);联合用药组的细胞凋亡率明显高于单一用药组(P<0.05)。丙谷胺和NS-398显著下调bcl-2mRNA及蛋白表达(均P<0.05)。结论丙谷胺、NS-398抑制MKN-45细胞增殖,通过下调bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,两者联合具有协同抗癌作用。     

MiR-148a调控胃癌细胞侵袭迁移的作用机制研究

目的 研究miR-148a在胃癌侵袭迁移中的作用,为新肿瘤标志物的研究提供理论基础。方法 荧光实时定量PCR（RT-PCR）检测miR-148a在胃癌细胞系和正常胃黏膜细胞中的表达水平,HGC-27分别转染miR-148a control/miR-148a mimic和miR-148a control/miR-148a inhibitor后检测miR-148a表达水平的改变,Transwell法检测miR-148a对HGC-27细胞侵袭和迁移的影响,Western blot法检测miR-148a对胃癌细胞中c-myc蛋白表达的调控。结果 MiR-148a在胃癌细胞中的表达明显低于正常胃黏膜细胞;HGC-27转染miR-148a mimic后miR-148a表达升高,HGC-27转染miR-148a inhibitor后miR-148a表达下降;miR-148a能够显著抑制HGC-27细胞的侵袭和迁移;miR-148a能够明显下调c-myc蛋白的表达。结论 miR-148a通过c-myc来发挥抑制胃癌侵袭迁移的作用。     

胃癌中miR-148a通过DNMT1调控E-cadherin的表达

目的:研究胃癌中miR-148a与E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的相关性,并进一步探索miR-148a对E-cadherin的内在调控机制?方法:通过qRT-PCR或Western blot检测胃癌组织中E-cadherin及miR-148a的表达,使用Pearson相关分析检测E-cadherin与miR-148a表达的相关性;通过去甲基化药物处理,研究启动子异常甲基化与E-cadherin表达的关系;通过转染miR-148a mimics 提高miR-148a的表达水平,转染DNA化转移酶1(DNMT1)siRNA干扰DNMT1的表达水平,进一步研究miR-148a对E-cadherin的调控机制?结果:与正常胃黏膜相比,E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平在胃癌组织中显著下调,并与miR-148a的表达呈正相关?去甲基化药物5-aza-dC处理后,胃癌细胞MGC-803及SGC-7901中E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平显著上升?胃癌细胞转染miR-148a mimics后,E-cadherin的蛋白表达水平明显提高,并且干扰DNMT1的表达后,E-cadherin的蛋白表达水平也显著上调?结论:miR-148a能通过DNMT1进一步调控E-cadherin的表达?     

血清miR-148a检测作为肝癌标志物的临床价值研究

目的:探讨血清miR-148a作为肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)标志物的临床应用价值?方法:实时荧光定量PCR法(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测HCC患者血清miR-148a水平,并与良性肝病组以及健康对照组进行比较分析?结果:HCC患者血清miR-148a水平明显低于良性肝病组及健康体检组 (P < 0.001)?ROC曲线(receiver operating characteristic curve)结果显示HCC组 vs. 良性肝病组的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.666,95%置信区间(Confidence interval,CI)为0.581~0.744,诊断灵敏度为67.7%,特异性为59.2%(P < 0.001);HCC组 vs. 健康对照组的AUC为0.746,95%CI为0.663~0.818,诊断灵敏度为43.6%,特异性为96.1%(P < 0.001)?血清miR-148a与HCC患者肿瘤大小(P=0.011)及TNM分期(P < 0.001)有关,而与其他临床参数无明显相关性(P > 0.05)?HCC患者术后血清miR-148a水平与术前相比明显升高(P=0.023);而术后出现复发或转移的HCC患者其血清miR-148a水平明显下降,并且低于术前水平(P < 0.05)?生存曲线分析显示血清miR-148a低表达的HCC患者其总生存率明显低于血清miR-148a高表达的HCC患者(P < 0.001),Cox回归分析进一步显示血清miR-148a可作为HCC预后评估的一个独立决定因子?结论:HCC患者血清miR-148a明显降低,并与HCC病情?恶性进展及预后相关,可作为HCC诊断与鉴别诊断?病情评估?疗效观察及预后判断的指标?     

miR-148a对食管癌细胞迁移及侵袭的影响及潜在分子机制研究

目的探究微小核糖核酸148a（miR-148a）在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达及对食管癌TE-1 细胞迁移和侵袭能力的影响。方法收集48例食管癌患者肿瘤及癌旁组织的RNA标本,逆转录PCR合成互补脱氧核糖核酸（cDNA）,实时荧光定量聚合酶链反应PCR检测miR-148a 在肿瘤及癌旁组织中的表达情况,分析肿瘤组织中miR-148a 表达差异的临床意义。将人工合成的miR-148a模拟物（miR-148a mimics）转染入食管癌细胞TE-1中,划痕愈合实验检测过表达miR-148a对TE-1细胞迁移的影响,Transwell小室模型检测miR-148a 对TE-1 侵袭的影响。Western blot检测miR-148a 过表达对TE-1 细胞中原癌基因（c-myc）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达的影响。结果MiR-148a在食管癌组织中表达水平下调（P =0.031）;过表达miR-148a能够抑制TE-1细胞迁移（P =0.021）及侵袭（P =0.018）并下调细胞内c-myc（P =0.037）及MMP-9（ P=0.026）的表达水平。结论miR-148a 在食管癌中低表达,miR-148a可能通过抑制c-myc/MMP-9 通路的表达来发挥抑制食管癌细胞迁移及侵袭。     

Decreased expression and clinical significance of miR-148a in hepatocellular carcinoma tissues

Background

Aberrant expression of microRNA-148a (miR-148a) has been reported in several types of malignancies. However, its expression and clinicopathological significance in hepatocellular carcinoma (HCC) has not been entirely clarified. Our objective was to investigate the clinicopathological contribution of the miR-148a expression in HCC formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues.

Methods

Eighty-nine HCC and their para-cancerous liver tissues were recruited. Total mRNA including miRNA was isolated and miR-148a expression was determined by using real time RT-qPCR. Furthermore, the relationship between the miR-148a level and clinicopathological features was explored.

Results

Significantly lower miR-148a expression in HCC tissues was observed than that in adjacent noncancerous hepatic tissues. miR-148a expression was also correlated to clinical TNM stage, metastasis, status of capsular infiltration and numbers of tumor nodes.

Conclusions

Underexpression of miR-148a might be associated with HCC tumorigenesis and deterioration of HCC. miR-148a might act as a suppressor miRNA of HCC and it therefore has a potential role in prognosis of HCC patients.     

miR-26a抑制胃癌AGS细胞生长的分子机制

目的 检测miR-26a在胃癌组织的表达改变,明确miR-26a调控胃癌细胞生长的分子机制。方法 运用qRT-PCR检测71例胃癌及相应癌旁正常组织中miR-26a的表达改变;将miR-26a模拟物转染胃癌细胞AGS,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-26a对AGS细胞生长增殖的影响。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-26a在71例胃癌组织中表达下调0.44倍;Western blot结果显示,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,转染MTDH siRNA和miR-26a模拟物组AGS细胞从48 h起OD值分别为（0.158±0.006）、（0.201±0.006）,与对照组细胞相比（0.515±0.032）、（0.479±0.028）,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 miR-26a通过靶向调控MTDH的表达而抑制胃癌细胞的生长。     

结直肠癌胃泌素水平及其受体表达的研究

目的 探讨结直肠癌组织和血清胃泌素（gastrin,GAS)变化及其受体（gastrin receptor,GR)表达的意义。方法 运用放射免疫和免疫组化法检测大肠癌患者术前和术后血清、癌组织 、癌旁和正常组织中GAS含量的变化及其GR的表达。结果 大肠癌患者血清GAS高于对照组,术后降低，均以Dukd‘sC、D期明显（P＜0．05）。癌组织中GAS含量显著高于癌旁和正常组织（P＜0．01）；癌组织和癌旁组织中的GR阳性表达率明显高于正常组织（P＜0．05），而前两者之间无差异（P＞0．05）。结论 结直肠癌细胞能分泌GAS并具有GR；术后GAS变化可作为判断结直肠癌患者手术和预后的指标；癌旁组织中GR阳性率高，根治肠段的 范围应扩大。     

microRNA-148a对前列腺癌细胞系LNCaP神经内分泌分化的影响

目的探讨microRNA(miRNA)-148a对前列腺癌细胞系LNCaP神经内分泌分化的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)验证miRNA-148a在雄激素依赖性与雄激素非依赖性前列腺癌细胞系中的差异表达。采用miRNA-148a及其抑制物(anti-miRNA-148a)改变LNCaP细胞中miRNA-148a的表达量,观察LNCaP细胞神经内分泌分化的差异程度,并检测神经内分泌分化标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)的差异表达。结果 LNCaP-AI细胞中的miRNA-148a相对表达量显著低于LNCaP细胞(P<0.05)。下调miRNA-148a在LNCaP细胞中的表达量,可明显促进LNCaP细胞神经内分泌分化。结论 miRNA-148a可以抑制LNCaP细胞的神经内分泌分化,可能成为前列腺癌生物治疗的新靶点。     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。     

miRNA-145调控靶基因c-Myc抑制胃癌增殖、侵袭

目的 探索microRNA145（miR-145）对胃癌细胞增殖活性的影响,及与其靶基因c-Myc的调控关系。方法 选取人胃癌细胞株SGC-7901作为研究对象,并向细胞株内转染miR-145模拟物和miR-145阴性对照物,荧光显微镜观察、Q-PCR检测转染后细胞株miR-145的变化,并通过细胞软琼脂克隆增殖实验和MTT实验检测转染后SGC-7901细胞株的增殖能力、Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力。Western blot法检测转染后SGC-7901细胞株中c-Myc蛋白的表达情况。结果 转染后,miR-145模拟物组中miR-145的表达明显高于miR-145阴性对照和空白组,转染miR-145模拟物后SGC-7901细胞增殖能力显著降低（P<0.05）,c-Myc蛋白表达也明显较低（P<0.05）。结论 miR-145能通过抑制靶基因c-Myc的表达,抑制胃癌细胞的增殖与侵袭能力。总之,miR-145可能在胃癌中发挥抑癌基因的作用,是胃癌潜在的早期诊断指标和治疗靶点。