逍遥散抗慢性心理应激海马神经元凋亡的机理研究

目的 观察逍遥散抗慢性心理应激海马神经元凋亡及糖皮质激素受体(GR)表达的影响.方法 Wistar 大鼠按体重分为正常组、模型组、逍遥散组.正常组及模型组灌胃等量生理盐水,逍遥散组给予逍遥散7.02g/kg.观察实验前后大鼠体重及糖水偏爱度的变化,采用PI法检测大鼠海马神经元凋亡,原位杂交法检测GR mrRNA表达.结果 经过21 d慢性轻度不可预计应激(CMUS)造模后,模型组、逍遥散组体重及增重明显低于正常组(P<0.01),模型组的糖水偏爱度明显低于正常组(P<0.01),模型组大鼠海马神经元凋亡率明显增加(P<0.05),GR mRNA表达降低(P<0.01);逍遥散可显著降低大鼠海马神经元凋亡率(P<0.05),升高GR mRNA表达(P<0.01).结论 表明CMUS可引起大鼠糖水偏爱度下降,而逍遥散能逆转CMUS抑郁大鼠的糖水偏爱度的下降,可显著改善慢性心理应激所致大鼠海马神经元凋亡,其机理可能与调节GR mRNA表达有关.     

逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区FGFR1的影响

目的:研究逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区FGFR1基因表达及翻译的影响,探讨其改善慢性应激损伤的可能机制。方法:以120只Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、慢性应激慢性应激模型组、逍遥散干预组、西药(开克)对照组4组,每组30只。造模方法采用慢性温和不可预知应激(CUMS)大鼠模型,逍遥散干预组和西药(开克)对照组在造模同时分别给予逍遥散10 mL/Kg、开克10 mL/Kg,并设定三种造模时间21 d、28 d、35 d。连续造模后,分别于第22天、第29天、第36天处死大鼠并取材。采用荧光定量RT-PCR检测及Western-Blot检测方法测定各组大鼠海马区FGFR1基因及其蛋白表达情况。结果:慢性应激慢性应激模型组大鼠海马区FGFR1mRNA及其相应蛋白表达均显著下调,逍遥散可从基因及蛋白水平同时纠正这种下调的表达变化。结论:成纤维细胞生长因子受体1的表达变化参与了慢性应激损伤过程,逍遥散对慢性应激所致的损伤可能通过调节这一基因发挥保护性作用。     

逍遥散干预抑郁症睡眠障碍模型大鼠海马5-HT_(1A)受体,5-HT_(2A)受体的变化

目的:观察逍遥散干预抑郁症睡眠障碍(SDD)大鼠自主行为及海马5羟色胺1A受体(5-HT1A受体),5羟色胺2A受体(5-HT2A受体)mRNA表达变化,探讨其治疗SDD的分子生物学机制。方法:48只Wistar大鼠进行敞箱行为(OFT)试验,根据得分将大鼠随机分为4组:正常组、模型组、米氮平组、逍遥散组。除正常组外,其余各组共接受18 d不同的应激,应激18 d后,进行72 h快眼睡眠剥夺造模(DEM)。每天在应激前1 h按组给药;模型组、米氮平组、逍遥散组分别予等容量生理盐水、米氮平、逍遥散水提液。21 d计算行为得分后处死大鼠,取大鼠海马置液氮中备测。结果:21 d后模型组大鼠自主活动较应激前显著减少(P0.01)。与模型组比较,逍遥散组及米氮平组大鼠的自主活动明显增加,已达正常组水平;与正常组比较,模型组海马5-HT1AR mRNA表达水平下降,5-HT2AR mRNA表达水平上升(P0.01);逍遥散组海马5-HT1AR mRNA,5-HT2ARmRNA的表达改善明显,与模型组比较,(P0.01);而米氮平组与模型组比较无统计学意义,逍遥散组作用明显优于米氮平组(P0.05)。结论:逍遥散可能通过上调海马5-HT1AR,下调5-HT2AR,调节5-HT再摄取发挥治疗SDD效应。     

慢性应激损伤对大鼠海马GABRD基因表达的影响及逍遥散干预机制的研究

目的:用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区GABRD基因的表达情况。方法:以45只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组15只。造模方法采用Cart多相慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2 mL/只·d,连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。运用Agilent表达谱芯片筛选各组差异基因,并选取GABRD基因,采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学染色法对各组大鼠海马区域GABRD基因mRNA及其蛋白表达情况加以验证。结果:Agilent表达谱芯片结果显示慢性应激模型组大鼠海马GABRD下调,逍遥散干预后有上调趋势,但无统计学意义。RT-PCR及免疫组化法验证结果显示:慢性应激模型组大鼠海马GABRD mRNA及其相应蛋白表达均显著下调,中药复方逍遥散可从蛋白水平纠正这种下调的表达变化。结论:γ-氨基丁酸A受体δ亚型表达变化参与了慢性应激损伤的过程,逍遥散可能通过调控这一基因的表达而发挥对慢性应激损伤所致一系列神经、精神紊乱症状的保护性调节作用。     

加味丹栀逍遥散对抑郁模型大鼠海马内盐皮质激素受体和糖皮质激素受体的影响

目的:观察加味丹栀逍遥散对抑郁模型大鼠海马内盐皮质激素受体(MR)和糖皮质激素受体(GR)含量的影响。方法:将50只Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、氟西汀组、加味丹栀逍遥散低剂量组、加味丹栀逍遥散高剂量组,每组10只;采用孤养结合慢性轻度不可预见性应激的复合模型,除空白组外,其余各组均接受不同应激因子刺激21 d,建立慢性应激抑郁大鼠模型,随后分别按氟西汀组2.5 mg·kg-1、加味丹栀逍遥散低、高剂量组2.04,4.08 g·kg-1,各组均按10 mL·kg-1ig给药,空白对照组和模型组ig 10 mL·kg-1生理盐水1次/d,每天应激前灌胃,从造模第22天开始,至动物处死当天,共21 d,实验周期共42 d;采用蛋白印迹法(Western-blot)测定大鼠海马内糖皮质激素受体(GR)和盐皮质激素受体(MR)的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠海马内GR的蛋白表达下调而MR的蛋白表达升高;经治疗后,各组大鼠海马内GR的蛋白表达较模型组显著上调(P<0.05),而各组大鼠海马内MR的蛋白表达较模型组显著下调(P<0.05)。结论:加味丹栀逍遥散可以通过调节海马内GR和MR的蛋白表达而起到抗抑郁的作用,经过药物干预后的模型大鼠海马内GR表达升高而MR的表达下调,其抗抑郁的作用机制可能与海马内GR和MR之间的比例关系失调有关。     

逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区PLA2G5的影响

目的:研究逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区V型分泌型磷脂酶(PLA2G5)基因表达及翻译的影响,探讨其改善慢性应激损伤的可能机制。方法:将120只Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散干预组、开克对照组4组,每组30只。造模方法采用慢性温和不可预知应激(CUMS),逍遥散干预组和开克对照组在造模同时分别给予逍遥散10mL/kg、开克10 mL/kg。造模时间分别为21、28、35天。采用荧光定量RT-PCR及Western-Blot检测方法测定各组大鼠海马区PLA2G5基因及其蛋白表达情况。结果:慢性应激模型组大鼠海马区PLA2G5基因mRNA表达及其相应蛋白显著下调。逍遥散可从基因水平同时纠正这种下调的表达变化。结论:PLA2G5的表达变化参与了慢性应激损伤过程,逍遥散对慢性应激所致的损伤可能通过调节这一基因发挥保护性作用。     

加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马NMDA—NR1mRNA／蛋白表达的影响

目的探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马NMDA—NR1mRNA／蛋白表达的影响作用。方法以孤养结合慢性不可预见性应激抑郁模型大鼠为研究对象,在实验7d、14d、21d、28d时,检测各组大鼠旷场实验中水平运动、垂直运动得分,并采用QRT—PCR、Western—Blot技术检测各组大鼠海马NMDA—NR1mRNA／蛋白表达变化。结果21d、28d时,与空白组比较,模型组水平运动、垂直运动得分降低（P〈0．01）;与模型组比较,中、西药组水平运动、垂直运动得分增加（P〈0．05或P〈0．01）。21d、28d时,与空白组比较,模型组大鼠海马NMDA—NR1mRNA／蛋白表达增多（P〈0．01）;与模型组比较,中、西药组大鼠海马NM—DA—NR1tuRNA／蛋白表达减少（P〈0．05或P〈0．01）。结论加味温胆汤的抗抑郁效应可通过阻抑海马NMDA—NR1mRNA／蛋白表达而实现。     

逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区Cacnb4基因表达的影响

目的:本研究用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区Cacnb4基因的表达情况。方法:以60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组20只。造模方法采用Cart多相性慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2m L/(只·d),连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。采用RT-PCR一步法及免疫组化检测方法测定各组大鼠海马区域Cacnb4基因及其蛋白表达情况。结果:慢性应激模型组大鼠海马Cacnb4mRNA及其相应蛋白表达均显著上调,中药复方逍遥散可从基因及蛋白水平同时纠正这种上调的表达变化。结论:电压依赖型钙离子通道β4辅助亚基的表达变化参与了慢性应激损伤过程,逍遥散对慢性应激所致神经细胞损伤可能通过调节这一基因发挥保护性作用。     

激动肝郁脾虚证大鼠海马CA1区AMPA受体对杏仁核区AMPA受体亚基基因表达的影响及逍遥散的调节作用

目的:探讨逍遥散治疗肝郁脾虚证的基因调节机制。方法:25只SD雄性大鼠随机等分为5组,正常组、模型组、假手术组、α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)组和逍遥散组。以21d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型组。假手术组、AMPA组和逍遥散组均采用21d慢性束缚联合脑部埋管微量注射方法造模,AMPA组在双侧海马CA1区埋管微量注射AMPA,逍遥散组灌服逍遥散溶液。运用RT-PCR一步法检测海马CA1区和杏仁核区AMPA受体的重要亚基GluR1 mRNA和GluR2 mRNA的表达变化。结果:在杏仁核区,与AMPA组比较,逍遥散组GluR1mRNA和GluR2 mRNA表达差异无统计学意义;在海马CA1区,与正常组比较,AMPA组GluR1 mRNA和GluR2mRNA表达差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);与AMPA组比较,逍遥散组GluR1 mRNA和GluR2 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论:结合前期实验,从基因表达角度,进一步推断逍遥散通过纠正杏仁核和海马AMPA受体的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,来治疗肝郁脾虚证。     

酸枣仁汤对抑郁模型大鼠海马DKK-1与β-catenin、GSK-3β的影响

目的：探讨酸枣仁汤的抗抑郁作用及机制。方法：48只大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、酸枣仁汤低、中、高剂量组及氟西汀组,采用慢性轻度不可预见性应激制备抑郁大鼠模型,酸枣仁汤与氟西汀连续治疗28 d后观察各组大鼠体质量、糖水消耗、旷场实验得分,免疫组化法检测海马中DKK-1蛋白表达,荧光定量PCR法检测海马组织中β-catenin及GSK-3β的mRNA表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠体质量、糖水偏爱百分比和旷场试验得分均显著降低(P<0.01),海马区DKK-1蛋白表达明显上升(P<0.01),GSK-3β的mRNA表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,酸枣仁汤中、高剂量组、氟西汀组较模型组体质量、糖水偏爱百分比和旷场试验得分均明显升高(P<0.05,P<0.01),酸枣仁汤低、中、高剂量组及氟西汀组大鼠海马中DKK-1蛋白表达显著下降(P<0.01),酸枣仁汤高剂量组大鼠海马中β-catenin、GSK-3βmRNA表达明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论：酸枣仁汤能够调节抑郁模型大鼠海马组织中DKK-1蛋白与β-...     

加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马CaMK信号转导通路的影响

目的 探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马钙调素依赖蛋白激酶(CaMK)信号转导通路的影响.方法 128只SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药组、西药组,每组32只.采用孤养结合慢性不可预见性应激造模抑郁大鼠,从造模第1天开始中药组给予加味温胆汤12g/(kg·d),西药组予氟西汀1.8mg/(kg·d),模型组、空白组给予生理盐水2ml/(kg·d),各组均灌胃给药,连续28天.实验第7、14、21、28天时采用Western印迹法检测各组大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDA-NR1)、钙调素(CaM)、CaMKⅡ蛋白表达变化.结果 第7、14天,各组大鼠海马NMDA-NR1、CaM、CaMKⅡ蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).21、28天时,与空白组比较,模型组大鼠海马NMDA-NR1、CaM、CaMKⅡ蛋白表达增多(P＜0.01);与模型组比较,中、西药组大鼠海马NMDA-NR1、CaM、CaMKⅡ蛋白表达减少(P＜0.05或P＜0.01);中、西药组同时间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 加味温胆汤可通过抑制CaMK信号转导通路的活性发挥其抗抑郁效应.     

丹栀逍遥散加味治疗卒中后抑郁的疗效观察

[目的]观察丹栀逍遥散加味治疗卒中后抑郁的疗效.[方法]108例患者按数字表法随机分为3组,每组36例,3组均接受常规药物治疗,联合组用丹栀逍遥散加味和百优解,百优解组和丹栀遣遥散加味组分别单用百优解和丹栀逍遥散加味;于治疗前和治疗后4、12周,采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、简易智能状态量表(MMSE)、神经功能缺损评分量表(SSS,用改良爱丁堡斯堪的那维亚评分)和Barthel指数(BI)评定患者的认知和神经功能状况.[结果]3组HAMD和SSS评分治疗后均较治疗前显著下降(P＜0.01);而3组治疗后的MMSE和BI均较治疗前显著升高(P＜0.05),联合组HAMD评分下降和BI增高比另两组更明显(P＜0.05).[结论]丹栀逍遥散加味对卒中后抑郁有良好的治疗作用,与百优解合用有协同效应.     

补肾、健脾和补肾健脾3方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的：观察补肾、健脾和补肾健脾3方对尾部悬吊模拟失重大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法：大鼠随机分为正常组、模型组、补肾组、健脾组和补肾健脾组共5组。后4组大鼠头低位-30°尾部悬吊连续21天,补肾、健脾和补肾健脾组大鼠从实验第1天开始分别给予补肾、健脾和补肾健脾方灌胃,其余各组大鼠灌服等容积的生理盐水。实验第22天处死各组大鼠,全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,取第3代细胞进行成骨分化诱导实验,成骨分化诱导第4、7、10天采用p-NPP法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,成骨分化诱导第7、14、21天采用ELISA法检测细胞上清液中骨钙素（OC）含量,成骨分化诱导第21天茜素红染色法检测钙结节形成情况。结果：与正常组比较,模型组大鼠BMSCs经成骨诱导4、7、10天ALP活性均显著降低（P<0.01）,经成骨诱导7、14、21天细胞上清OC含量显著降低（P<0.01）,经成骨诱导21天后钙结节形成显著减少（P<0.01）;与模型组比较,补肾组和补肾健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导4、7、10天ALP活性均明显升高（P<0.05或P<0.01）,健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导7、10天ALP活性均明显升高（P<0.05）,补肾、健脾和补肾健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导7、14、21天细胞上清OC含量明显升高（P<0.05或P<0.01）,经成骨诱导21天后钙结节形成显著增多（P<0.01）;与补肾组比较,健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导7天ALP活性降低、经成骨诱导21天细胞上清OC含量明显降低（P<0.05）,而补肾健脾组明显升高（P<0.05）,经成骨诱导21天后补肾健脾组钙结节形成明显增多（P<0.05）。结论：补肾、健脾和补肾健脾3方具有促进尾部悬吊模拟失重大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的作用,以补肾健脾方作用为优。     

基于不同模式高温对大鼠死亡率和 HSP70表达水平的影响探讨六淫相对性

目的比较不同模式高温对大鼠死亡率和热休克蛋白(HSP)70表达的影响,从"热应激"角度探讨六淫相对性产生机制。方法40只SD大鼠随机分为5组:对照组、南方1组、南方2组、北方1组、北方组2组,每组8只,湿度均为60%。对照组保持温度24℃。南方组初始温度28℃,第15 d南方1组温度提高至35℃,南方2组则提高至41℃;北方组初始温度20℃,第15 d北方1组温度提高至35℃,北方2组则提高至33℃。第22 d处死全部大鼠。记录各组大鼠不同时间肛温和死亡情况。RT-PCR检测五脏(心、肝、脾、肺、肾)HSP70 mRNA表达水平。结果南方2组大鼠在温度调高至41℃后3 d内全部死亡,死亡率较其他4组(均死亡0只)升高(P<0.01)。与本组初始温度和7 d肛温比较,北方1组21 d肛温升高(P<0.01)。与对照组和北方2组同时间比较,北方1组21 d肛温升高(P<0.01)。与对照组比较,南方1组、北方2组大鼠五脏HSP70 mRNA表达水升高(P<0.01,P<0.05),南方2组大鼠五脏HSP70 mRNA表达水平降低(P<0.01),北方1组大鼠心、肺两脏HSP70 mRNA表达水平降低(P<0.01、P<0.05)。与南方1组比较,南方2组及北方1组五脏HSP70 mRNA表达水平降低(P<0.01),北方2组肝脏HSP70 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与南方2组比较,北方1、2组五脏HSP70 mRNA表达水平升高(P<0.01)。与北方1组比较,北方2组五脏HSP70 mRNA表达水平升高(P<0.01)。结论不同模式高温影响大鼠适应性及HSP70表达水平,心、肺二脏最为敏感,证明了中医学"六淫致病具有相对性"理论。     

电针督脉对实验性脊髓损伤大鼠水通道蛋白-4的影响

目的电针督脉对大鼠脊髓损伤后水通道蛋白-4(AQP-4)表达和后肢功能恢复的影响。方法取SD大鼠150只,分为正常组(50只)、模型组(50只)、电针组(50只),模型组和电针组用改良的Allen法制成脊髓损伤模型,于模型成功后,电针组针刺督脉上大椎和命门穴3min,每天1次,连续7天。于实验第1、3、7、14、21天分别对大鼠后肢功能进行BBB评分,应用免疫组织化学技术检测脊髓组织AQP-4的表达,用图像分析仪进行定量分析。结果脊髓损伤后第1天,模型组和电针组受损脊髓灰质、白质中AQP-4的表达明显增加;第3天时均达到高峰,但电针组低于模型组(P<0．05)。第7、14、21天,与模型组比较,电针组AQP-4表达也较低(P<0．01)。结论电针督脉使脊髓损伤后AQP-4表达减少,这可能有利于抑制脊髓水肿、消除脊髓继发性桶伤．保存了残存正常脊髓组织并促进神经组织重建。     

加味逍遥散配合针刺治疗乳腺增生73例总结

目的:探讨加味逍遥散配合针刺治疗乳腺增生的临床疗效.方法:治疗组73例采用加味逍遥散配合针刺治疗,对照组68例单用针刺治疗.结果:总有效率治疗组为89.4％,对照组为88.2％,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),在降低雌二醇(E2)、泌乳素(PRI)和升高孕酮(P)方面,治疗组优于对照组(P＜0.05).结论:加味逍遥散配合针刺治疗乳腺增生有良好疗效.     

GC-MS代谢组学分析逍遥散干预抑郁模型大鼠盲肠代谢物组的变化规律

目的采用GC-MS代谢组学方法分析逍遥散干预抑郁模型大鼠盲肠组织代谢物组的变化规律。方法采用慢性温和不可预知应激(CUMS)程序对大鼠进行造模,以逍遥散及盐酸氟西汀(氟西汀)为干预药物,采用GC-MS方法分析大鼠盲肠组织代谢物组及其变化规律。化合物的结构通过NIST 05数据库检索及对照品指认确定,将数据预处理后导入SIMCA-P 13.0软件进行多元统计分析。结果 CUMS抑郁大鼠模型复制成功,代谢组学研究结果表明氟西汀及逍遥散干预后大鼠盲肠组织中丙氨酸、丝氨酸、谷氨酸等减少,氟西汀组棕榈酸、硬脂酸升高,且与模型组比较具有显著性差异(P0.05、0.01)。结论逍遥散干预后CUMS大鼠盲肠组织的代谢物组发生明显变化,该研究可为逍遥散抗抑郁作用机制研究提供依据。     

电针对慢性束缚应激抑郁模型大鼠不同时段血清ACTH、CORT表达的影响

目的:观察电针对慢性束缚应激(CRS)抑郁模型大鼠干预期及恢复期血清促肾上腺皮质激素(ACTH)和肾上腺皮质酮(CORT)表达的影响,探究电针抗抑郁效应及其可能机制。方法:将60只5周龄SD大鼠平均随机分为对照组、模型组和电针组。除对照组外,其余大鼠均采用慢性束缚应激结合孤养处理;电针组选取"百会""印堂"穴在每日应激之前1h进行电针干预20 min,1次/d,共28 d。在实验day7、day28、day35(末次干预结束后第7天)采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测3组大鼠血清ACTH与CORT激素表达水平。结果:ELISA结果显示,实验day7,3组之间血清ACTH和CORT表达水平差异无统计学意义。与对照组比较,模型组血清ACTH及CORT表达在实验day28和day35显著增加(P0.01;P0.01;P0.01;P0.01);与模型组比较,电针组血清ACTH及CORT表达在实验day28和day35显著降低(P0.05;P0.05;P0.01;P0.01),电针对慢性束缚应激诱导的大鼠血清ACTH及CORT高表达水平表现出逆转效应。结论:慢性束缚应激诱导的大鼠表现为应激状态下的下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)功能亢进,其血清ACTH和CORT呈高水平表达。电针干预可显著逆转这种效应,说明电针可对亢进的HPA轴进行调控。在停止干预后的第7天,电针组血清ACTH、CORT表达水平仍显著低于模型组,说明电针干预可对亢进的HPA轴进行持续且有效的调控,这可能是电针抗抑郁的长效机制之一。