微孔板法与GeneXpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的价值

目的探讨微孔板法和GeneXpertMTB/RIF(简称"GeneXpert")技术检测MTB对利福平(RFP)耐药性的价值。方法收集陕西省结核病防治院2017年收住入院和门诊诊治的疑似结核病患者6893例,按照临床诊断标准确诊为结核病患者6086例,同时使用BACTEC MGIT 960液体培养(简称"MGIT 960法")和GeneXpert技术检测上述确诊患者的425份临床标本;其中,痰标本217份、肺泡灌洗液标本170份、肺外标本(包括胸腹腔积液、脓液,脑脊液等)38份;排除3例报告错误或无法判读、2例培养结果污染的标本,有效标本份数为420份。对其中GeneXpert技术和MGIT 960液体培养均为阳性的372株临床分离株同时进行微孔板法、GeneXpert技术和MGIT 960耐药性检测,其中痰标本191例、肺泡灌洗液标本158例、肺外标本(包括胸腹腔积液、脓液及脑脊液等)23例,以MGIT 960检测结果为标准,分析微孔板法和GeneXpert技术检测结核分枝杆菌对RFP耐药性的诊断价值。结果GeneXpert技术、微孔板法和MGIT 960法对RFP耐药性检测总的阳性率分别为18.8%(70/372)、16. 7%(62/372)、16. 7%(62/372)。以MGIT 960法检测结果为标准,微孔板法和GeneXpert法对利福平耐药性检测的敏感度、特异度、符合率、Kappa值分别为91. 9%(57/62)、98. 4%(305/310)、97. 3%(362/372)、0. 8,96. 8%(60/62)、96. 8%(300/310)、96. 8%(360/372)、0. 8;微孔板法和GeneXpert法对痰液、肺泡灌洗液、肺外标本利福平耐药性检测的敏感度、特异度、符合率、Kappa值分别为96. 7%(29/30)、98.1%(158/161)、97. 9%(187/191)、0. 9,93.3%(28/30)、96.3%(155/161)、95. 8%(183/191)、0.9, 91. 7%(22/24)、98. 5%(132/134)、97. 5%(154/158)、0.9和100.0%(24/24)、97.0%(130/134)、97. 5%(154/158)、0.9,75.0%(6/8)、100.0%(15/15)、91. 3%(21/23)、0.8,100.0%(8/8)、100.0%(15/15)、100.0%(23/23)、1.0。结论以MGIT 960检测结果为标准,微孔板法和GeneXpert技术对利福平耐药性检测总的阳性率和不同标本对利福平耐药性检测的阳性率均具有较好的一致性。     

894株结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药情况分析

收集2016年1月至2018年3月吉林省9个市(州)894例肺结核患者痰标本中的结核分枝杆菌临床分离株进行分析。并采用比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)对全部结核分枝杆菌菌株进行利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(Sm)和乙胺丁醇(EMB)4种一线抗结核药物的药敏试验。结果显示,894株结核分枝杆菌对一线抗结核药物敏感者有546株(61.07%),对一线抗结核药物耐药者有348株(38.93%);其中初治患者的耐药率为36.30%(265/730),低于复治患者的耐药率(50.61%,83/164),差异有统计学意义(χ ²=11.53,P=0.001)。全部患者的总耐多药率为10.07%(90/894),复治患者耐多药率(20.73%,34/164)高于初治患者(7.67%,56/730),差异有统计学意义(χ ²=25.23,P=0.001)。全部患者对一线抗结核药物的耐药率顺位为Sm(25.95%,232/894)>INH(18.57%,166/894)>RFP(17.23%,154/894)>EMB(9.73%,87/894)。吉林省肺结核患者对一线抗结核药物耐药率较高,尤其是复治患者;耐药结核病防治形势依然严峻,需加强结核病的防控工作。     

噬菌体法同时检测四种一线抗结核药物耐药性

目的探讨噬菌体检测技术（PhaB）同时快速检测四种一线抗结核药物耐药性的可能性,分析其临床应用价值.方法应用PhaB同时测定139株结核分枝杆菌（MTB）临床分离株对链霉素（S）、异烟肼（H）、利福平（R）和乙胺丁醇（E）的耐药性,并与Bactec-960药敏结果比较,对两法检测结果不符的菌株进行最低抑菌浓度（MIC）测定.结果 PhaB检测S、H、R、E药敏结果与Bactec-960药敏结果符合率分别为97.1%、99.3%、95.7%和95.0%.如以Bactec-960药敏结果为判断标准,则PhaB检测S的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值（PPV、NPV）及准确性分别为90.0%、99.1%、96.4%、98.2%和97.1%;检测H的敏感性、特异性、PPV、NPV及准确性为97.9%、98.9%、97.9%、98.9%和95.0%;检测R的敏感性、特异性、PPV、NPV及准确性为86.2%、97.3%、89.3%、96.4%和95.0%;检测E的敏感性、特异性、PPV、NPV及准确性为81.0%、97.5%、85.0%、96.6%和95.0%.共有13株菌株19个药敏结果PhaB与Bactec-960检测结果不符.MIC检测结果有12株18个药敏结果支持PhaB结果,1株1个药敏结果支持Bactec-960结果.结论 PhB同时检测S、H、R、E药敏结果与Bactec-960结果有较高的符合率,可作为MTB耐药性的快速筛选方法.     

表型药物敏感性试验与GeneXpert MTB/RIF在耐药脊柱结核诊断中的作用

目的分析表型药物敏感性试验(简称"表型药敏试验")与GeneXpert MTB/RIF在耐药脊柱结核诊断中发挥的作用。方法回顾性分析2015-2018年首都医科大学附属北京胸科医院514例临床诊断为脊柱结核的患者资料,通过穿刺或外科手术获得病灶中的脓液、肉芽组织及干酪样坏死组织,并以无淀粉改良罗氏培养和浓度法进行结核分枝杆菌培养和表型药敏试验,同时进行GeneXpert MTB/RIF检测。结果 514例患者中,男260例(50. 6%),女254例(49. 4%);年龄1～86岁,平均(46. 2±18. 7)岁;腰椎结核200例(38. 9%),胸椎结核186例(36.2%),腰骶椎结核60例(11. 7%),胸腰段结核46例(8.9%),颈椎结核14例(2. 7%),颈胸段结核8例(1.6%)。109例培养阳性并获得表型药敏试验结果 ,阳性率为21. 2%;检出耐药患者25例(4. 9%,25/514),其中耐多药结核病(MDR-TB)和广泛耐药结核病(XDR-TB)患者9例,占阳性患者的8. 3%。GeneXpert MTB/RIF阳性383例(74.5%),其中发现rpoB突变47例(9. 1%, 47/514),包括表型药敏试验检出的9例MDR-TB和XDR-TB患者。结论脊柱结核病灶中耐药结核分枝杆菌通过表型药敏试验检出率偏低,不能及早发现耐药结核病患者,通过GeneXpert MTB/RIF方法可尽早发现更多耐药结核病患者。     

噻唑蓝和刃天青法在一线抗结核药物药敏试验中的应用

目的评价噻唑蓝（3．（4,5-二甲基噻唑）-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝,MTT]和刃天青（resazurin）2种快速而价廉的药敏试验方法进行一线抗结核药物的药敏试验的可行性。方法分别用MTT和刃天青2种微孔板方法对64株结核临床分离菌株进行一线抗结核药物的药敏检测,并将结果与传统罗氏培养基的绝对浓度法的结果进行比较分析。结果MTT和刃天青2种微孔板方法所得利福平（RFP）、异烟肼（INH）、乙胺丁醇（EMB）、链霉素（SM）4种一线抗结核药物的药敏结果与传统绝对浓度法有较好的一致性,MTT法进行RFP、INH、EMB、SM药敏试验的敏感性分别为94．8％、93．8％、92．9％、90．6％,特异性分别为96．0％、93．8％、96．0％、87．5％,准确性分别为95．3％、93．8％、95．3％、89．1％;刃天青法进行RFP、INH、EMB、SM药敏试验的敏感性分别为92．3％、90．6％、92．9％、87．5％,特异性分别为96．O％、90．6％,94．0％、87．5％,准确性分别为93．8％、90．6％、93．8％、87．5％。4种一线抗结核药物应用MTT法与绝对浓度法的Kappa值为：RFP0．857,INH0．831,EMB0．714,SM0．792;应用刃天青法与绝对浓度法的Kappa值为：RFP0．871,INH0．826,EMB0．826,SM0．750。MTT和刃天青2种药敏方法4种一线抗结核药物的Kappa值为：RFP0．889,INH0．875,EMB0．787,SMO．844。结论MTT和刃天青是2种简单快速、价廉且敏感的药敏方法,有希望成为一线抗结核药物药敏试验的候选方法。     

比例法与绝对浓度法测试结核分枝杆菌药物敏感性探讨

目的探讨比例法与绝对浓度法测试结核分枝杆菌药物敏感性结果的一致性。方法用绝对浓度法和比例法同时对2946株结核分枝杆菌进行4种抗结核药物（RFP、EMB、SM、INH）的耐药性测定。结果RFP、EMB、SM、INH用绝对浓度法与比例法药敏测试结果一致率分别为：97.8%、96.7%、94.3%、92.3%。经统计学检验,两种方法测试2946株菌株4种药物敏感性结果差异有统计学意义（P<0.05）。结论绝对浓度法与比例法进行结核分枝杆菌测定总的一致率较高,但差别有统计学意义,在进行耐药性评价时应考虑药敏方法是否一致。     

荧光PCR探针熔解曲线技术检测涂阳患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的价值

目的 评估荧光PCR探针熔解曲线(MeltPro)技术检测涂阳患者痰标本中MTB耐药性的效能。方法 收集2016年9月至2018年8月西安市胸科医院500例痰涂片阳性患者的痰标本,分别进行痰涂片镜检、GeneXpert MTB /RIF检测、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)液体培养、表型药物敏感性试验(简称“药敏试验”),并应用MeltPro法检测痰标本中MTB菌株对利福平、异烟肼、二线注射类和氟喹诺酮类等抗结核药物的耐药性,并以表型药敏试验为标准,评价MeltPro法的检测效能。结果 以表型药敏试验结果为标准,MeltPro法检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为98.7%(76/77)和94.2%(343/364),检测对异烟肼耐药性的敏感度和特异度分别为82.3%(102/124)和96.2%(304/316),检测对阿米卡星耐药性的敏感度和特异度分别为8/9和99.5%(432/434),检测对卷曲霉素耐药性的敏感度和特异度分别为6/7和99.1%(432/436),检测对左氧氟沙星耐药性的敏感度和特异度分别为90.6%(48/53)和99.2%(386/389),检测对莫西沙星耐药性的敏感度和特异度分别为88.1%(37/42)和96.5%(386/400)。以表型药敏试验结果为标准,GeneXpert MTB/RIF检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为94.8%(73/77)和94.0%(342/364)。GeneXpert-MTB/RIF和MeltPro法与表型药敏试验结果一致性均较好(Kappa值分别为0.81和0.84),但MeltPro法检测效能与表型药敏试验检测结果的一致性更高。结论 MeltPro法检测涂阳患者痰标本中MTB菌株对利福平、异烟肼,以及二线注射类和氟喹诺酮类抗结核药物耐药性有较好的效能。     

显微镜观察药物敏感性检测在分枝杆菌分离培养和药物敏感性测定中的应用研究

目的评价显微镜观察药物敏感性检测(MODS,microscopic observation drug suscepti-bility assay)方法用于分枝杆菌分离培养和直接药物敏感性测定的应用前景。方法应用MODS方法对113例涂片镜检阳性患者痰标本进行分离培养,同时进行异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇4个药物的直接药物敏感性测定,以罗氏法分离培养和间接绝对浓度法作为对照,对分离培养和药敏结果进行对比分析,并通过DNA序列分析对不一致药敏结果进一步验证。结果 MODS与罗氏法分离培养的阳性率均为83.2%,污染率分别为0%和2.7%,两方面差异无统计学意义,两者的符合率为93.6%(kappa值:0.75),培养的敏感性、特异性分别为95.7%、81.3%。MODS的分离培养中位数时间为10 d(第95百分位数为21.5 d),罗氏分离培养的中位数时间为25 d(第95百分位数为39.3d)。MODS与间接绝对浓度法的耐药株检出率分别为49.5%、47.8%,符合率为95.5%(kappa值:0.91)差异无统计学意义,MODS检测的敏感性、特异性分别为97.7%、93.3%。MODS对结核分枝杆菌检测的敏感性、特异性、符合率分别为异烟肼(100%、84.5%、89.8%);利福平(100%、100%、100%);链霉素(94.6%、98.0%、96.6%);乙胺丁醇(100%、73.8%、75.0%)。对于利福平、链霉素的药物敏感性检测两种方法有相当高的一致性,而对异烟肼、乙胺丁醇的检测一致性较低。结论 MODS方法是一种操作简单、成本低廉、快速、敏感的诊断和药物敏感性检测方法。适合发展中国家和经济欠发达地区,在我国结核病防控工作中,具有广泛的应用前景。     

四种实验室检测技术对利福平和异烟肼耐药性检测的临床价值

目的 探讨微孔板法、实时荧光PCR熔解曲线技术(简称“熔解曲线法”)、多色巢式实时荧光定量PCR技术(简称“Xpert 法”)和罗氏药物敏感性试验(L-J药敏试验,简称“比例法”)用于快速筛查耐多药结核病(MDR-TB)的临床价值。方法 从医院信息系统(hospital information system,HIS)连续收集2014年7月至2018年3月重庆市公共卫生医疗救治中心收治的确诊为结核病,且具有微孔板法、比例法、熔解曲线法、Xpert 法检测MTB对利福平、异烟肼耐药性诊断结果的2792例患者资料;其中微孔板法、比例法采用阳性分离菌株检测,熔解曲线法和Xpert 法采用患者标本直接检测。纳入同时具有微孔板法和比例法耐药性检测结果的1488例患者作为研究对象,其中341例行微孔板法+比例法+Xpert法检测利福平耐药性,87例行微孔板法+比例法+熔解曲线法检测利福平耐药性,66例行微孔板法+比例法+熔解曲线法检测异烟肼耐药性。以比例法为标准,采用SPSS 13.0软件分别计算微孔板法、熔解曲线法、Xpert法检测利福平和(或)异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率、Kappa值等。结果 以比例法为标准,微孔板法、Xpert法、熔解曲线法检测利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值分别为97.2%(731/752)、96.9%(713/736)、96.9%(731/754)、97.1%(713/734)、97.0%(1444/1488)、0.94,97.2%(140/144)、94.9%(187/197)、93.3%(140/150)、97.9%(187/191)、95.9%(327/341)、0.92,97.1%(33/34)、84.9%(45/53)、80.5%(33/41)、97.8%(45/46)、89.7%(78/87)、0.79;微孔板法和熔解曲线法检测异烟肼耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值分别为94.8%(751/792)、95.7%(667/697)、96.3%(751/780)、94.2%(667/708)、97.9%(1418/1448)、0.91, 97.3%(36/37)、86.2%(25/29)、90.0%(36/40)、96.2%(25/26)、92.4%(61/66)、0.84。结论 微孔板法、熔解曲线法、Xpert 法检测利福平和(或)异烟肼耐药性均具有较高的敏感度和特异度,适合快速筛查耐多药结核病;微孔板法还能获得各药物最低药物浓度,为临床用药剂量的选择提供参考依据。     

41例耐多药肺结核患者二线药物药敏试验结果分析

目的了解滨州地区耐多药病例菌株耐二线药物状况。方法采用绝对浓度法,对确定的41例耐多药菌株进行二线抗结核药物敏感试验。结果 41例MDR-TB中,耐KM为14.6%,耐AMK为9.8%,耐LFX为7.3%,耐CPM为4.9%,65.9%的耐多药菌株对二线药物均敏感,XDR-TB占2.4%。结论耐多药病例做二线药物药敏试验,对于制定合理的个体治疗方案有较大价值。     

耐药MTB分离株对不同组合抗结核药品体外药物敏感性试验的结果分析

目的 分析耐药MTB分离株对不同组合抗结核药品(简称“不同组合药品”)进行体外药物敏感性试验(简称“药敏试验”)的检测结果,评价不同组合药品的最低抑菌浓度(MIC)及对耐药菌株的抗结核协同作用。方法 搜集同济大学附属上海市肺科医院“十二五”国家科技重大专项入组的148例首次复治肺结核患者,通过对患者痰标本进行BACTEC MGIT 960和改良罗氏法培养获取167株MTB分离株,对75例患者经上述两种方法进行药敏试验结果均为阳性的92株耐药菌株(包括36株MDR-MTB、54株XDR-MTB和2株单耐H菌株),采用MIC三维棋盘法分别以H-R、Mfx-Pa、Mfx-Pa-Rfb、Mfx-Pa-Rft等4种组合药品进行体外药敏试验,计算不同药品组合的协同率。结果 药品未组合前的H、R、Rfb、Rft、Pa体外药敏试验MIC值的中位数(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]分别为4(1,8)、24(2,64)、0.5(0.125,1)、4(4,4)、8(4,8)mg/L,均明显高于组合后的H[2(1,4)mg/L]、R[1(0.25,16)mg/L]、与Mfx-Pa组合后的Rfb[0.125(0.03125,0.125)mg/L]、与Mfx-Pa组合后的Rft[1(1,1)mg/L]、与Mfx/Mfx-Rfb/Mfx-Rft组合后的Pa[分别为0.0075(0.0075,0.875)、0.0075(0.0075,0.125)、0.0225(0.0075,0.5)mg/L](Z=-4.855,-6.908,-8.386,-8.632,-8.094,-8.335,-7.771,P值均<0.001);且H-R、Mfx-Pa、Mfx-Pa-Rfb、Mfx-Pa-Rft药品组合后的协同率分别为12.0%(11/92)、5.4%(5/92)、17.4%(16/92)、23.9%(22/92);其中H-R和Mfx-Pa组合分别与Mfx-Pa-Rfb和Mfx-Pa-Rft组合的协同率比较,差异均有统计学意义(χ²=12.670,P=0.002;χ²=19.420,P<0.001;χ²=18.640,P<0.001;χ²=28.500,P<0.001)。结论 组合药品中H、R、Rfb、Rft、Pa的MIC值均低于未组合前该药品的MIC值,说明耐药菌株对组合后上述药品的敏感性增强。三药组合的协同率均优于两药组合,且Mfx-Pa-Rft较Mfx-Pa-Rfb组合表现出更好的协同作用。     

Clinical analysis of drug sensitivity tests of various drug-resistant MTB isolates against different combinations of anti-tuberculosis drugs in vitro

目的 分析耐药MTB分离株对不同组合抗结核药品(简称“不同组合药品”)进行体外药物敏感性试验(简称“药敏试验”)的检测结果,评价不同组合药品的最低抑菌浓度(MIC)及对耐药菌株的抗结核协同作用。方法 搜集同济大学附属上海市肺科医院“十二五”国家科技重大专项入组的148例首次复治肺结核患者,通过对患者痰标本进行BACTEC MGIT 960和改良罗氏法培养获取167株MTB分离株,对75例患者经上述两种方法进行药敏试验结果均为阳性的92株耐药菌株(包括36株MDR-MTB、54株XDR-MTB和2株单耐H菌株),采用MIC三维棋盘法分别以H-R、Mfx-Pa、Mfx-Pa-Rfb、Mfx-Pa-Rft等4种组合药品进行体外药敏试验,计算不同药品组合的协同率。结果 药品未组合前的H、R、Rfb、Rft、Pa体外药敏试验MIC值的中位数(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]分别为4(1,8)、24(2,64)、0.5(0.125,1)、4(4,4)、8(4,8)mg/L,均明显高于组合后的H[2(1,4)mg/L]、R[1(0.25,16)mg/L]、与Mfx-Pa组合后的Rfb[0.125(0.03125,0.125)mg/L]、与Mfx-Pa组合后的Rft[1(1,1)mg/L]、与Mfx/Mfx-Rfb/Mfx-Rft组合后的Pa[分别为0.0075(0.0075,0.875)、0.0075(0.0075,0.125)、0.0225(0.0075,0.5)mg/L](Z=-4.855,-6.908,-8.386,-8.632,-8.094,-8.335,-7.771,P值均<0.001);且H-R、Mfx-Pa、Mfx-Pa-Rfb、Mfx-Pa-Rft药品组合后的协同率分别为12.0%(11/92)、5.4%(5/92)、17.4%(16/92)、23.9%(22/92);其中H-R和Mfx-Pa组合分别与Mfx-Pa-Rfb和Mfx-Pa-Rft组合的协同率比较,差异均有统计学意义(χ²=12.670,P=0.002;χ²=19.420,P<0.001;χ²=18.640,P<0.001;χ²=28.500,P<0.001)。结论 组合药品中H、R、Rfb、Rft、Pa的MIC值均低于未组合前该药品的MIC值,说明耐药菌株对组合后上述药品的敏感性增强。三药组合的协同率均优于两药组合,且Mfx-Pa-Rft较Mfx-Pa-Rfb组合表现出更好的协同作用。     

超声分散比浊法处理BACTEC MGIT 960培养阳性的菌液标本用于药物敏感性试验的价值

目的分析应用超声分散比浊法处理的BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960")培养阳性的液体培养物菌液标本用于分枝杆菌药物敏感性试验(简称"药敏试验")的价值。方法搜集2018年1—12月西安市胸科医院经MGIT 960液体分枝杆菌培养阳性的标本,共计1086份。其中,818份菌液标本进行MGIT 960液体药敏试验,包括MGIT 960推荐方法处理的菌液标本100份、超声分散比浊法处理的菌液标本718份;268份菌液标本进行比例法药敏试验,包括采用传统磨菌法处理的菌液标本30份、超声分散比浊法处理的菌液标本238份。与传统菌液标本处理方法比较,分析超声分散比浊法处理后的菌液标本用于MGIT 960液体药敏试验和比例法药敏试验的效果。结果超声分散比浊法处理后的0.6～1.0麦氏单位菌液标本进行MGIT 960液体药敏试验报告结果的时间主要集中在8～10 d,而MGIT 960法处理后的菌液标本报告结果时间则较均匀分布在5～14 d。浊度为0.6、0.7、0.8、0.9、1.0麦氏单位菌液标本系统检测X200(标本活菌量少)报告率[分别为0.00%、0.00%、0.00%、0.72%(1/138)、1.31%(2/153)]均低于MGIT 960菌液处理法[11.00%(11/100)],差异均有统计学意义(χ~2值分别为11.41、9.94、12.43、12.79、11.28,P值均<0.01)。进行二线抗结核药物比例法药敏试验时,增菌6～7 d后,应用超声分散比浊法处理的菌液标本基本可以达到目标浊度,而传统磨菌法处理的标本在增菌第7天时仅有80%达到目标浊度。应用超声分散比浊法处理后的浊度为0.7、0.8、0.9、1.0麦氏单位的菌液标本,药敏试验成功率分别为82.61%(19/23)、82.69%(43/52)、94.00%(47/50)、96.00%(48/50),与传统磨菌法处理的菌液标本药敏试验成功率[83.33%(25/30)]相近,差异均无统计学意义(χ~2值分别为0.01、0.01、2.37、3.77,P值均>0.05)。结论应用超声分散比浊法处理MGIT 960液体培养阳性的菌液标本,可提高MGIT 960液体药敏试验成功率,缩短比例法药敏试验时间。     

结核分枝杆菌耐药性检测专家共识

耐药结核病尤其是耐多药结核病(MDR-TB)和广泛耐药结核病(XDR-TB)是目前临床亟待解决的难题之一,而对抗结核药物进行药物敏感性试验(DST)可为耐药结核病的诊断提供实验室依据。本专家共识简要地介绍了我国临床常用的结核分枝杆菌(MTB)DST方法(包括表型DST和分子DST);提出了MTB耐药性检测策略和正确判读检测结果的建议;指出目前DST检测技术和临床应用存在的问题,并对未来DST的发展前景进行了展望。