microRNA-127抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控研究

目的：研究microRNA-127（miR-127）在人葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达水平及其对细胞增殖的影响。方法：实验研究。通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测miR-127在葡萄膜黑色素瘤细胞M23和SP6.5与正常葡萄膜黑色素细胞UM95中的表达水平。细胞实验通过阳离子脂质体介导的方法将miR-127和阴性对照（NC）转染入M23和SP6.5中,并应用细胞增殖实验法（MTS法）和流式细胞技术分别检测细胞增殖能力和细胞周期,采用Western Blot法检测转染miR-127后细胞周期相关蛋白的表达。另外,通过RT-qPCR检测用表观药物5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-Aza-dC）和（或）曲古抑菌素A（TSA）处理后的M23和SP6.5细胞内miR-127的表达水平。MiR-127的表达量及细胞实验各参数在2组间比较采用独立样本t检验。结果：miR-127在M23和SP6.5中的表达水平低于UM95（t=72.2、591.5,P<0.001）。MTS结果显示,在M23和SP6.5细胞中,转染miR-127组相对细胞数目较NC组的100%分别减少至（62.3±4.2）%和（65.4±2.3）%,差异具有统计学意义（t=12.7、21.6,P<0.001）。流式细胞技术分析显示,转染miR-127组处于G0/G1期的M23和SP6.5细胞数量比例明显高于NC组（t=-6.7,P=0.003;t=-9.9,P<0.001）,同时处于S期的M23和SP6.5细胞数量比例明显低于NC组（t=8.6,P=0.001;t=12.7,P<0.001）。Western Blot结果表明miR-127可明显降低M23和SP6.5细胞内磷酸化Rb 蛋白的表达水平（t=22.2、15.6,P<0.001）。此外,miR-127在M23和SP6.5细胞中的表达可被5-Aza-dC和TSA诱导上调（P<0.05）。结论：miR-127通过抑制细胞周期而抑制人葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖,并可被DNA甲基化和组蛋白乙酰化表观遗传机制调控。     

SIRT1对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控

目的：探讨沉默信息调节蛋白1（SIRT1）对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法：实验研究。通 过定量PCR和Western blot法检测SIRT1在葡萄膜黑色素瘤细胞（M23和SP6.5）和正常人葡萄膜黑色 素细胞（DM78、UM95和UM96）中的表达。在葡萄膜黑色素瘤细胞（M23、SP6.5）中，用EX527抑 制SIRT1活性，以溶剂DMSO作为阴性对照组；用SIRT1小干扰RNA（siSIRT1）转染细胞抑制SIRT1 表达，以无义小干扰RNA（NC）转染作为阴性对照组。细胞增殖实验（MTS）、流式细胞术、平板 克隆形成实验分别检测细胞活性、细胞周期以及细胞克隆形成能力。裸鼠眼内成瘤实验检测葡萄 膜黑色素瘤细胞眼内成瘤能力。Western blot法检测增殖相关蛋白。组间数据均采用独立样本t检验 进行比较。结果：与葡萄膜黑色素细胞相比，葡萄膜黑色素瘤细胞（M23、SP6.5）中SIRT1 mRNA （t=17.08，P<0.001；t=13.24，P<0.001）和蛋白（t=6.26，P=0.008）表达水平显著升高。MTS结果显示， EX527抑制M23和SP6.5细胞活性，并呈药物浓度依赖性；与NC转染组相比，siSIRT1转染组细胞 活性显著减弱（t=5.94，P<0.001；t=10.73，P<0.001）。与溶剂DMSO组相比，EX527处理组（t=5.10， P=0.047；t=7.57，P=0.002）和SIRT1 siRNA转染组（t=6.41，P=0.003；t=6.10，P=0.004）中处于G1期 的细胞比例均显著升高。另外，M23和SP6.5细胞EX527处理组（t=5.04，P=0.001；t=5.93，P<0.001） 和siSIRT1转染组（t=11.44，P<0.001；t=8.24，P<0.001）克隆形成数量显著降低。在裸鼠眼内成瘤实 验中，与NC组相比，siSIRT1转染组眼内瘤体大小显著变小（t=5.50，P<0.001）。Western blot结果显 示，与DMSO处理组相比，EX527处理组中P21（t=4.63，P=0.010；t=7.90，P=0.001）表达升高，E2F1 （t=12.10，P=0.003；t=5.96，P=0.004）、CYCLIND2（t=36.28，P<0.001；t=16.58，P<0.001）、p-RB（t=17.55， P<0.001；t=21.34，P<0.001）表达降低，p-AKT表达下调。与NC转染组相比，siSIRT1转染组中， P21（t=5.88，P=0.004；t=10.51，P<0.001）表达升高，E2F1（t=4.60，P=0.01；t=4.89，P=0.008）、 CYCLIND2（t=5.13，P=0.007；t=5.63，P=0.005）、p-RB（t=4.45，P=0.011；t=6.53，P=0.003）表达水 平降低，p-AKT（t=9.61，P<0.001；t=6.44，P=0.003）表达下调。结论：抑制SIRT1活性或表达可以明 显抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖，提示SIRT1可以作为治疗葡萄膜黑色素瘤的一个新靶标。     

MicroRNA-96对人视网膜色素上皮细胞增殖与迁移的影响

目的：探讨MicroRNA-96（miR-96）对人视网膜色素上皮（RPE）细胞增殖和迁移的影响。方法：实验研究。通过RNA原位杂交检测人胚胎眼（20周）石蜡切片中RPE层miR-96的表达情况。将miR-96和阴性对照（NC）通过阳离子脂质体介导转染人眼RPE细胞,采用细胞增殖实验（MTS）、流式细胞术和Transwell实验分别检测细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移能力。通过生物信息学及Western blot法确定miR-96作用的靶基因。应用Western blot检测miR-96对细胞增殖迁移相关信号通路蛋白（Akt、ERK）及细胞周期相关蛋白（p-Cdc2、CyclinD2、p-Rb）表达的影响。组间数据比较采用独立样本t检 验。结果：MiR-96在人眼RPE细胞中有表达。MTS结果显示,转染NC、miR-96后,人眼RPE细胞的相对增殖速率分别为100%、74%±2%,差异有统计学意义（t=42.174,P=0.002）。流式细胞术检测结果显示,转染miR-96后阻滞在G1期的RPE细胞显著多于转染NC后,且差异有统计学意义（t= -18.444,P=0.003）。Transwell实验结果显示,与转染NC相比,转染miR-96能显著抑制RPE细胞的迁移,差异具有统计学意义（t=6.754,P=0.002）。进而,明确了MITF是miR-96作用的靶基因。Western blot检测结果显示,转染miR-96后细胞中细胞周期相关蛋白p-Rb（t=11.211,P=0.002）、p-Cdc2（t=9.133, P=0.003）、CyclinD2（t=7.542,P=0.005）以及迁移相关信号通路蛋白p-ERK（t=16.699,P<0.001）,p-Akt （t=23.552,P<0.001）的表达水平均降低。结论：miR-96通过作用于靶基因MITF,并调控细胞周期和迁移相关蛋白的表达从而抑制人RPE细胞的增殖和迁移。     

SIRT1对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控

目的: 探讨沉默信息调节蛋白1(SIRT1)对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法: 实验研究。通过定量PCR和Western blot法检测SIRT1在葡萄膜黑色素瘤细胞(M23和SP6.5)和正常人葡萄膜黑色素细胞(DM78、UM95和UM96)中的表达。在葡萄膜黑色素瘤细胞(M23、SP6.5)中, 用EX527抑制SIRT1活性, 以溶剂DMSO作为阴性对照组;用SIRT1小干扰RNA(siSIRT1)转染细胞抑制SIRT1表达, 以无义小干扰RNA(NC)转染作为阴性对照组。细胞增殖实验(MTS)、流式细胞术、平板克隆形成实验分别检测细胞活性、细胞周期以及细胞克隆形成能力。裸鼠眼内成瘤实验检测葡萄膜黑色素瘤细胞眼内成瘤能力。Western blot法检测增殖相关蛋白。组间数据均采用独立样本t检验进行比较。结果: 与葡萄膜黑色素细胞相比, 葡萄膜黑色素瘤细胞(M23、SP6.5)中SIRT1 mRNA(t=17.08, P<0.001;t=13.24, P<0.001)和蛋白(t=6.26, P=0.008)表达水平显著升高。MTS结果显示, EX527抑制M23和...     

不同病理类型的葡萄膜黑色素瘤中微小RNA差异表达谱分析

背景 目前研究证实微小RNA(miRNA)参与大多数人类肿瘤疾病的发生和发展,其作用类似于抑癌基因或癌基因.葡萄膜黑色素瘤(UM)是成人常见的眼部恶性肿瘤,其发生和转移机制仍未完全阐明.探讨UM组织中miRNA的差异表达情况有望为UM的靶向治疗提供依据. 目的 筛选不同病理类型的UM组织中特异性miRNA表达谱. 方法 收集于2013年3月至2015年10月在北京同仁医院手术局部切除并经常规组织病理学和免疫组织化学检测证实为梭型细胞型UM的标本4例和上皮细胞型UM标本4例,采用miRNA芯片分别检测2种UM组织中miRNA的表达,收集同期死于非肿瘤疾病的8个供体眼的正常葡萄膜组织作为对照,利用组间差异倍数筛选出差异≥2倍差异表达的miRNA;用在线软件预测差异表达miRNA的靶基因,采用生物信息学方法分析靶基因参与的信号功能通路.采用实时定量PCR法验证芯片检测结果.结果 收集的梭形细胞型和上皮细胞型UM标本经组织病理学检查均得到确诊,免疫组织化学检测梭形细胞型及上皮细胞型UM组织中HMB45、黑色素-A和S-100均呈阳性反应.与正常葡萄膜组织比较,在梭形细胞型UM组织中差异表达的miRNA有109个,其中29个上调,80个下调,上调的miRNA包括miR-146a-5p、miR-25-3p和miR-29b-1-5p,下调的miRNA包括miR-126-5 p、miR-183-5p和miR-96-5p;上皮细胞型UM中差异表达的miRNA有50个,其中23个上调,27个下调,上调的miRNA包括miR-155-5p、miR-210和miR-378 a-5p;下调的miRNA包括miR-199a-5p、miR-143-3p和miR-143-5p.在梭形细胞型和上皮细胞型UM组织中共同上调的miRNA为miR-132-3p、miR-21-5p、miR-34a-5p和miR-34b-5p,共同下调的miRNA为miR-125b-2-3p、miR-126-3p、miR-199a-3p和miR-214-3p.梭形细胞型和上皮细胞型UM组织中差异表达的miRNA所预测的靶基因分别参与癌症通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、Wnt信号通路、细胞间黏附、胞吞作用、前列腺癌通路、结直肠癌通路和细胞黏附通路.结论 与正常葡萄膜组织相比,梭形细胞型UM和上皮细胞型UM组织中存在多种miRNA的差异表达,梭形细胞型UM和上皮细胞型UM组织之间也存在明显的miRNA差异表达,这些差异表达的miRNA可通过不同的信号转导通路参与调控UM的生物学行为.     

miR-135a/b靶向SIRT1调控葡萄膜黑色素瘤细胞的迁移

目的：研究microRNA-135a/b（miR-135a/b）对葡萄膜黑色素瘤（UM）细胞迁移能力的调控作用及其机制。方法：实验研究。采用定量RT-PCR检测UM标本和癌旁组织中miR-135a/b的表达水平。将miRNA模拟物转染入UM细胞（M23和SP6.5）过表达miR-135a/b，转染无义序列作为对照组（NC）。利用小RNA干扰技术和慢病毒过表达载体感染技术分别下调和上调细胞中SIRT1蛋白表达水平，分别以无义小干扰RNA（siNC）和插入无义序列的慢病毒载体（Lv-NC）作为阴性对照。采用划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力。双萤光素酶报告实验用于鉴定miR-135a/b的靶基因。Western blot检测SIRT1蛋白的表达水平。采用独立样本t检验进行数据分析。结果：定量RT-PCR结果显示miR-135a/b在UM组织较癌旁组织的表达水平明显下调（miR-135a：t=6.38，P=0.003；miR-135b：t=23.26，P<0.001）。划痕实验和Transwell实验结果显示，与NC组相比，miR-135a/b过表达M23和SP6.5细胞迁移距离减小（miR-135a：t=36.01、8.98，均P<0.01；miR-135b：t=27.53、10.51，均P<0.01）且迁移细胞数量减少（miR-135a：t=7.04、7.02，均P<0.01；miR-135b：t=5.01、7.32，均P<0.01）。双萤光素酶实验证实，miR-135a/b能够明显抑制SIRT1野生组萤光素酶的荧光值（miR-135a：t=2.88，P=0.028；miR-135b：t=4.99，P=0.003）；Western blot结果表明，与NC组相比，过表达miR-135a/b的M23和SP6.5细胞中SIRT1的蛋白水平下调（miR-135a：t=9.93、4.13，均P<0.01；miR-135b：t=4.66、6.20，均P<0.01）。siSIRT1转染后划痕实验和Transwell实验结果显示，与siRNC组相比，M23和SP6.5细胞中下调SIRT1蛋白水平后细胞的迁移距离减小（siSIRT1-I：t=13.88、11.78，均P<0.01；siSIRT1-II：t=31.20、6.27，均P<0.01）且迁移细胞数量减少（siSIRT1-I：t=7.57、4.66，均P<0.01；siSIRT1-II：t=5.58、3.25，均P<0.05）。M23和SP6.5细胞中上调SIRT1蛋白水平同时过表达miR-135a/b，Transwell实验结果显示，细胞的迁移数量较仅过表达miR-135a/b升高（miR-135a+Lv-SIRT1：t=4.10、2.75，均P<0.05；miR-135b+Lv-SIRT1：t=2.99、2.49，均P<0.05）。结论：miR-135a/b在UM中明显下调且通过靶向结合SIRT1 mRNA 3'非翻译区抑制UM细胞的迁移，提示miR-135a/b-SIRT1信号轴在UM发展中发挥重要作用。     

DZNep靶向EZH2抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖

目的：探讨EZH2抑制剂3-deazaneplanocin A（DZNep）对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法：实验研究。先采用Western blot法检测EZH2在正常葡萄膜黑色素细胞（UM95、UM96）和葡萄膜黑色素瘤细胞（M23、SP6.5）中的表达，然后在M23和SP6.5细胞的培养基中加入DZNep进行处理，作为实验组；以溶剂DMSO处理作为阴性对照组。采用MTS、平板克隆形成、EdU实验以及流式细胞 术分别检测细胞存活、克隆形成能力、细胞增殖以及细胞周期。Western blot技术检测DZNep对细胞中H3K27me3修饰水平，细胞周期相关蛋白以及ERK信号通路的影响。组间数据均采用独立样本t 检验进行比较。结果：EZH2在M23和SP6.5细胞中的表达水平与在UM95细胞中的表达相比显著升高（t=25.050，P=0.002；t=14.220，P=0.005）。MTS结果显示，DZNep显著抑制M23和SP6.5细胞的活性，呈浓度和作用时间依赖性。与阴性对照组相比，实验组中M23和SP6.5细胞的克隆形成数量 显著降低（t=3.364，P=0.015；t=6.997，P<0.001），并且反映细胞增殖的EdU标记细胞比例明显减少 （t=5.117，P=0.002；t=3.399，P=0.015）。流式细胞术检测结果显示，与阴性对照组相比，实验组中 M23和SP6.5细胞处于G1期的细胞比例均显著升高（t=6.199，P=0.003；t=3.729，P=0.020）。Western blot检测结果显示，与阴性对照组相比，实验组M23和SP6.5细胞中的EZH2（t=5.214，P=0.035； t=13.530，P=0.005）、p-Rb（t=4.551，P=0.045；t=4.655，P=0.043）、E2F1（t=8.090，P=0.015；t=9.313， P=0.011）以及p-ERK（t=4.819，P=0.040；t=8.951，P=0.012）表达均有降低，H3K27me3修饰水平显 著下降（t=5.257，P=0.034；t=5.697，P=0.030）。结论：DZNep能够抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖，具有治疗葡萄膜黑色素瘤的应用前景。     

microRNA-182抑制人角膜上皮细胞增殖和迁移

目的：通过体内动物实验与体外细胞实验来阐明microRNA-182（miR-182）在角膜上皮损伤修复中的功能。方法：实验研究。体内实验选取5 只C57BL/6J野生型小鼠,通过机械刮伤法构建小鼠角膜上皮损伤修复模型作为实验组,对侧眼作为对照组,通过实时定量RT-PCR法检测miR-182 在损伤修复过程（ 损伤后48 h）的表达。体外实验采用脂质体介导的方法将miR-182和随机序列寡核苷酸链转染入人角膜上皮细胞（HCECs）,通过细胞增殖实验（MTS法）和细胞克隆形成实验检测细胞增殖和生长能力,流式细胞术检测细胞周期,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。MiR-182 表达量及细胞实验各参数2 组间比较采用独立样本t检验。结果：体内实验中,与对照组相比,实验组中5 个样本量的miR-182 在角膜上皮损伤修复过程中表达水平显著下调（t=147.6、79.2、136.8、41.3、89.8,均P<0.001）。体外实验中,miR-182组相对细胞数目为（81±5）%,与阴性对照组（100%）相比显著减少（t=6.6,P=0.003）,同时miR-182组细胞克隆数明显少于阴性对照组。细胞周期检测结果显示实验组处于G1期细胞数量比例为（49±7）%,明显高于阴性对照组的（35±4）%（t=-3.0,P=0.041）。此外,细胞迁移实验结果显示miR-182组HCECs细胞迁移的距离为（99±12）μm,而阴性对照组的迁移距离为（213±14）μm（t=10.8,P=0.001）,迁移速度明显变慢。结论：miR-182通过抑制角膜上皮细胞的增殖与迁移,从而对角膜上皮损伤修复起到负调控的作用。     

miR-194在葡萄膜黑色素瘤细胞系中的表达及对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的　探讨miR-194在葡萄膜黑色素瘤细胞系中的表达及对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法　RT-PCR检测miR-194在正常视网膜上皮细胞系ARPE-19及葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5、M23及OM431中的表达。取SP6.5、M23及OM431细胞分成两组,miR-194过表达组（miR-194组）及阴性对照组（NC组）,经Lipofectamine^TM 2000分别转染miR-194 mimic及阴性对照序列scramble。CCK-8实验及流式细胞仪分别测定细胞增殖和凋亡能力,细胞划痕及Transwell实验分别测定细胞迁移和侵袭能力。Western blot测定叉头盒蛋白A1（forkhead box,FOXOA1)、多聚ADP-核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase,PARP)蛋白表达。结果　正常视网膜上皮细胞系ARPE-19中miR-194的相对表达量为1.03±0.04,葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5、M23及OM431相对表达量分别为0.25±0.02、0.37±0.02及0.47±0.03,葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5、M23及OM431中miR-194相对表达量低于正常视网膜上皮细胞系ARPE-19(均为P<0.001 )。转染0 h、24 h、48 h、72 h、96 h后,miR-194组和 NC组A值分别为:0.23±0.02、0.21±0.03（t=0.960,P=0.391）,0.38±0.02、0.37±0.03（t=0.480,P=0.656）,0.75±0.04、0.78±0.06（t=-0.720,P=0.511）,0.87±0.09、1.59±0.12（t=-8.313,P=0.001）,1.53±0.14、3.05±0.22（t=-10.096,P=0.000）;流式细胞仪检测结果显示:miR-194组细胞凋亡率为23.30%±2.10%,NC组为2.47%±0.30%,miR-194组细胞凋亡率高于NC组（t=17.007,P=0.000）。细胞划痕实验结果显示:miR-194组细胞划痕愈合率为25.3%±3.5%,NC组为72.9%±6.4%,miR-194组细胞划痕愈合率低于NC组（t=-11.302,P=0.000）;Transwell实验结果显示:200倍视野下,miR-194组侵袭细胞数为（188.6±20.7）个,NC组为（352.9±32.8）个,miR-194组侵袭细胞数少于NC组（t=-7.337,P=0.001）。miR-194组FOX A1蛋白相对表达量为0.29±0.03,NC组为1.03±0.06,miR-194组FOX A1蛋白相对表达量低于NC组（t=-19.106,P=0.000）;miR-194组裂解型PARP蛋白相对表达量为2.87±0.24,NC组为1.03±0.06,miR-194组裂解型PARP蛋白相对表达量高于NC组（t=12.882,P=0.000）。结论　miR-194在葡萄膜黑色素瘤细胞系中低表达,上调miR-194表达可抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖,促进凋亡,抑制迁移和侵袭,其机制可能与下调FOX A1及上调裂解型PARP蛋白表达有关。     

miR-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路介导年龄相关性白内障氧化应激的实验研究

目的　探讨miR-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路介导年龄相关性白内障的氧化应激。方法　检测年龄相关性白内障患者和正常透明晶状体前囊组织及人晶状体上皮细胞氧化应激模型中miR-34a-5p和预测靶基因Nrf2表达及人晶状体上皮细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）活性。将miR-34a-5p模拟物、模拟物对照、miR-34a-5p抑制剂和抑制剂对照分别转染人晶状体上皮细胞，然后用400 μmol·L^-1 H₂O₂作用8 h后检测miR-34a-5p、Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白表达，并检测人晶状体上皮细胞增殖活性。结果　正常晶状体前囊组织中miR-34a-5p的相对表达量为1.03±0.29，Nrf2 mRNA的相对表达量为1.31±0.39；年龄相关性白内障组织中miR-34a-5p的相对表达量为2.69±0.99，Nrf2 mRNA的相对表达量为0.64±0.25。与正常组织相比，年龄相关性白内障晶状体组织中miR-34a-5p表达显著升高，Nrf2表达显著降低。Nrf2蛋白在年龄相关性白内障晶状体组织中表达也显著降低（均为P<0.001）。在人晶状体上皮细胞氧化应激模型中，miR-34a-5p表达显著升高，靶基因Nrf2表达显著降低，内源性ROS水平显著升高（均为P<0.001）。miR-34a-5p模拟物转染人晶状体上皮细胞后，miR-34a-5p表达显著升高，Nrf2表达显著降低，内源性ROS水平显著升高，细胞增殖活性显著降低（均为P<0.001），然而，miR-34a-5p抑制剂转染人晶状体上皮细胞后，miR-34a-5p表达显著降低，Nrf2表达显著升高，内源性ROS水平显著降低，细胞增殖活性显著升高（均为P<0.001）。双荧光素酶报告分析证实，Nrf2是miR-34a-5p的直接靶点。结论　MiR-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路增加晶状体上皮细胞氧化应激，抑制晶状体上皮细胞的增殖，从而参与年龄相关性白内障的发生发展过程。     

miR-26a对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及机制研究

目的 分析miR26a在葡萄膜黑色素瘤中的表达及对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响.方法 对葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5、M23及正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19行RT-PCR实验,检测3种细胞系中miR-26a的相对表达差异;将葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5分成miR-26a模拟物组和NC组,分别转染miR-26a mimics和对照序列scramble,用CCK-8实验和流式细胞术分别检测两组细胞增殖和凋亡;采用细胞划痕实验及Transwell实验分别检测两组细胞的迁移和侵袭能力;采用Western blot检测其下游蛋白组蛋白甲基化转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)的表达水平.结果 葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5中miR-26a相对表达量为0.250±0.029,细胞系M23中为0.350±0.017,正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19中miR-26a相对表达量为1.0,在细胞系SP6.5及M23中miR-26a的相对表达量均低于正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19中miR-26a的相对表达量(均为P＜0.001).miR-26a模拟物组在培养72 h、96 h、120 h OD450值(0.69 ±0.09、1.23 ±0.15、2.12±0.23)均显著低于NC组(1.39±0.11、2.35 ±0.25、3.53±0.27),差异均有统计学意义(均为P＜0.05).miR-26a模拟物组细胞凋亡率(15.60±2.30)％高于NC组(5.00±0.70)％(P＜0.01);miR-26a模拟物组划痕愈合率(23.7±2.1)％低于NC组(68.9 ±5.1)％(P＜0.01);侵袭细胞数(45.1±3.9)个低于NC组(115.3±8.9)个(P＜0.O1).miR-26a模拟物组EZH2蛋白相对表达量(0.39±0.09)低于NC组(1.0;P＜0.01).结论 miR-26a在葡萄膜黑色素瘤中低表达,过表达miR-26a显著抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖,促进凋亡,并抑制迁移和侵袭,其可能是通过下调EZH2的表达来发挥作用的.     

miRNA-19对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨miR-19在葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞中的表达及其对UM细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法 qRT-PCR检测正常视网膜上皮细胞系ARPE-19和UM细胞系 SP6.5、M23中 miR-19的表达.将 M23细胞分为 miR-19 inhibitor 组(转染 miR-19-inhibit...