血清miR⁃23a、miR⁃27a联合CEA在结直肠癌诊断中的临床价值

目的：探讨结直肠癌（colorectal cancer,CRC）患者血清miR?23a和miR?27a的表达水平联合癌胚抗原（carcinoembryo?nic antigen,CEA）在CRC诊断中的临床价值。方法：通过GEO数据库分析GSE25609中miR?23a和miR?27a在CRC患者及健康体检者中的表达水平。收集2014年1月—2018年12月在南京医科大学附属南京医院进行治疗的100例CRC患者为CRC组,以及同期在南京市第一医院健康体检者100例为对照组。分析所有纳入研究者的临床资料,通过qRT?PCR检测CRC患者及健康体检者血清miR?23a及miR?27a等的相对表达水平,分析血清miR?23a及miR?27a与CRC患者各临床病理特征之间的关系,绘制ROC曲线分析miR?23a、miR?27a联合CEA对结直肠癌的诊断价值。结果：GSE25609中miR?23a和miR?27a在CRC患者血清中显著升高（P < 0.01）。通过临床样本进一步证实CRC患者血清miR?23a和miR?27a的相对表达水平明显高于健康体检者（P < 0.001）。CRC患者血清miR?23a和miR?27a的相对表达水平均与CRC患者的T分期、淋巴结转移及远处转移密切相关。血清miR?23a、miR?27a联合CEA诊断CRC的AUC为0.921（95% CI：0.879~0.962）（P < 0.001）,灵敏度为86%,特异度为94%。结论：miR?23a与miR?27a在CRC患者血清中高表达,并且与CRC患者的T分期、淋巴结转移及远处转移密切相关,血清miR?23a、miR?27a联合CEA检测可显著提高对CRC的诊断效率。     

三氧化二砷抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖及诱导凋亡的初步研究

目的：探讨三氧化二砷（AS2O3)抑制神经母细胞瘤SK－N－SH细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法：①采用MTT法测定不同浓度的As2O3在不同时间对SK－N－SH细胞增殖的抑制率；②用TUNEL－POD法检测不同浓度的As2O3诱导SK－N－SH细胞凋亡的情况。结果：①各浓度组As2O3均可抑制SK－N－SH细胞增殖，而且延长作用时间比增加作用浓度更能增强药物的抑制作用；②两个浓度的As2O3均可诱导SK－N－SH细胞凋亡，且凋亡指数与浓度高低有关。结论：As2O3可以通过诱导神经母细胞瘤SK－N－SH细胞凋亡而抑制其增殖，有一定的临床应用价值。     

miR-449a靶向 DLL1调控骨关节炎软骨细胞的凋亡

目的 探讨miR 449a对骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡的影响及机制。方法 体外分离培养人正常软骨细胞和OA软骨细胞,采用实时荧光定量PCR检测miR 449a的表达。将体外培养的OA软骨细胞分为miR 449a mimics组（转染miR 449a mimics）、mimics-NC组（转染miR-449a mimics阴性对照）、miR 449a inhibitor组（转染miR-449a-inhibitor）和inhibitor-NC组（转染miR 449a inhibitor阴性对照）4组,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-449a表达,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-449a与Delta样配体1(DLL1)的靶向关系,免疫印迹法检测miR-449a对DLL1蛋白表达的影响;通过转染DLL1干扰序列siRNA DLL1和DLL1过表达质粒GFP-DLL1构建DLL1低表达和过表达的OA软骨细胞,观察DLL1对OA软骨细胞凋亡的影响。结果与人正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中miR-449a的表达水平明显升高（P＜0.05）。与mimics-NC组比较,miR-449a mimics组细胞中miR 449a表达水平和细胞凋亡率明显升高;而miR-449a inhibitor组细胞中miR-449a的表达水平和细胞凋亡率较inhibitor NC组明显降低（均P＜0.05）。DLL1是miR-449a的潜在靶基因,miR 449a可负向调控DLL1蛋白的表达。DLL1低表达的OA软骨细胞凋亡率较相应对照siRNA-NC组明显升高,而DLL1过表达后OA软骨细胞凋亡率较相应对照GFP组明显降低（P＜0.05）。结论 miR-449a可通过靶向调控DLL1表达促进OA软骨细胞凋亡。     

术后结合替莫唑胺对神经胶质瘤患者血清miR⁃181b及miR⁃497的影响

目的：分析神经胶质瘤患者术后结合替莫唑胺对血清miR?181b及miR?497表达的影响。方法：将收治的76例神经胶质瘤术后患者随机分为A、B两组。其中A组（38例）采用司莫司汀方法治疗,B组（38例）采用司莫司汀联合替莫唑胺的方法治疗。观察比较两组患者的临床疗效,术后 1、2、3年生存率,Karnofsky 评分。同时收集患者治疗前、治疗后的血清样本,以检测miR?181b及miR?497表达的变化。结果：B组患者的客观有效率明显高于A组,差异有统计学意义（P < 0.05）;B组中位生存期以及术后1、2、3年生存率明显高于A组（P < 0.05）;B组术后的Karnofsky 评分显著高于A组（P < 0.05）。术后血清miR?181b浓度明显提高［术后（162.34 ± 51.79）fmol/L vs. 术前（91.37 ± 40.41）fmol/L,P <0.05］;术后血清miR?497明显提高［术后（166.23 ± 53.68）fmol/L vs. 术前（88.36 ± 36.72）fmol/L,P < 0.05］。结论：术后结合替莫唑胺能够提高神经胶质瘤患者血清miR?181b及miR?497的表达,延长患者生存期。     

MDM2与MDM4抑制剂的研究进展

p53在DNA修复、细胞周期阻滞、细胞凋亡、衰老、自噬及代谢等的调控中发挥着重要作用。MDM2和MDM4是p53的关键负调控因子,其抑制剂已成为抗肿瘤药物研究的热点。目前,7个MDM2抑制剂(RG7112,MI-77301,RG7388,AMG232,CGM097,MK-8242及DS-3032b)和1个MDM2/MDM4双重抑制剂(ALRN-6924)已进入临床研究阶段。本文重点从分子发现过程、药理活性、临床研究进展等方面对已进入临床研究的MDM2抑制剂进行综述,此外,还重点介绍MDM2/MDM4双重抑制剂的研究进展。     

大鼠神经干细胞通过Wnt/β-catenin途径抑制神经胶质瘤生长

\[摘要\]目的探讨大鼠神经干细胞对C6成胶质细胞瘤细胞生长的影响,并探讨可能的作用机制。方法采用0.4 μm孔径的Transwell小室将C6成胶质细胞瘤细胞和大鼠神经干细胞(NSCs)按不同比例\[(C6NSCs):51(2×1054×104)、11(2×1052×105)、15(4×1042×105)\]在无血清培养基中共培养7 d作为实验组,以单独培养的C6成胶质细胞瘤细胞作为对照组。采用SCID荷瘤动物模型观察共培养体系中C6成胶质细胞瘤细胞的成瘤能力;利用半定量RT-PCR及蛋白质印迹等方法分析在共培养体系中C6成胶质细胞瘤细胞凋亡相关基因(BMP2、c-Myc、Bcl-2、p53 mRNA)及Wnt信号分子蛋白(β-catenin、survivin)的表达。结果与实验组相比,对照组的组织切片中肿瘤细胞恶性程度高,有较多的核分裂像,核/质比例高;大片区域出现单核或多核瘤巨细胞。在实验组中,随着共培养体系中起始神经干细胞比例增高,肿瘤细胞异型性逐步降低。随着共培养体系中起始神经干细胞比例增高,C6成胶质细胞瘤细胞p53 mRNA的表达水平逐步增高,BMP2、c-Myc、Bcl-2 mRNA表达水平则逐步降低(P<0.05),β-catenin、survivin蛋白表达水平逐步降低(P<0.05)。结论大鼠神经干细胞在胶质瘤微环境中可能通过Wnt/β-catenin途径促进神经胶质瘤细胞凋亡进而抑制神经胶质瘤生长。     

microRNA⁃1调控神经嵴细胞进而影响颅面发育

目的：采用基因敲除斑马鱼模型,观测microRNA?1（miR?1）对神经嵴细胞（neural crest cell,NCC）和颅面发育的影响。方法：用CRISPR/Cas9基因敲除系统敲除斑马鱼miR?1,观察其神经嵴衍生物的表型。原位杂交检测NCC诱导分化相关基因的表达,并用实时定量PCR （qRT?PCR）等检验与凋亡相关基因的表达。结果：基因敲除组斑马鱼下颌骨严重萎缩,色素细胞延迟出现。原位杂交显示,受精后24 h,tfap2a、dlx3b、ngn1和snailb表达下降。qRT?PCR结果证明miR?1影响凋亡相关基因的表达。结论：miR?1参与NCC的调控进而影响颅面发育,其可能通过凋亡相关通路而发挥作用。     

通过生物信息学分析鉴定调控神经母细胞瘤骨髓转移的中枢基因

目的:利用生物信息学的方法，探讨神经母细胞瘤骨髓转移的中枢基因及其可能的分子机制。方法: 选取GEO数据库中神经母细胞瘤基因骨髓转移的芯片数据集GSE42548，应用在线分析工具Networkanalyst筛选差异表达基因。使用DAVID数据库对上述差异表达基因进行GO功能分析及KEGG通路分析。应用STRING在线数据库和Cytoscape软件构建蛋白质相互作用（PPI）网络，并筛选hub genes、枢纽模块和seed genes，利用Venn图对hub genes和seed进行分析。结果: 分析芯片数据，筛选得到990个差异表达基因，GO和KEGG分析结果显示，差异表达基因与信号转导、生物膜合成等过程有关，并富集在Hematopoietic cell lineage通路上。通过构建PPI网络筛选得到了10个hub genes、6个枢纽模块和17个seed genes。通过Venn图确定关键基因Cxcr4。结论: 研究中筛选出了10个hubgenes和17个seed genes，其中Cxcr4基因在神经母细胞瘤骨髓转移起到关键作用，提示基于CXCR4- SDF-1之间的调控关系可能为神经母细胞瘤骨髓转移的早期诊断提供新的见解。     

miR⁃558靶向TNFAIP1调控肝癌的生长

目的：探讨肝癌中微小RNA（microRNA,miR）?558的作用以及可能的相关分子机制。方法：采用RT?PCR检测miR?558在35对肝癌组织和癌旁组织中的表达。CCK?8、平板克隆和流式细胞仪检测miR?558和人肿瘤坏死因子?α诱导蛋白1（tumor necrosis factor?α induced protein 1,TNFAIP1）对肝癌细胞生长及周期的影响。荧光素酶报告实验研究miR?558与TNFAIP1的靶向关系。Western blot检测蛋白水平的表达变化。结果：miR?558在肝癌组织中的表达量明显高于癌旁组织（P < 0.01）。敲低miR?558可显著抑制肝癌细胞增殖,过表达miR?558可明显促进肝癌细胞生长（P < 0.01）。miR?558在肝癌细胞中直接靶向TNFAIP1抑制其表达发挥作用。上调TNFAIP1可显著消除miR?558对肝癌细胞的促进作用。结论：miR?558在肝癌组织中明显高表达,miR?558通过靶向调节TNFAIP1可明显促进肝癌细胞增殖。miR?558在肝癌患者中具有一定的靶向治疗价值。     

27-羟基胆甾醇诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的调控机制

目的探讨27-羟基胆甾醇（27-OHCH）诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）凋亡的调控机制。方法不同浓度（0、3.125、6.25、12.5、25.0、50.0滋M）的27-OHCH作用SH-SY5Y细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率,在光学显微镜下观察27-OHCH处理组、添加苏氨酸蛋白激酶（AKT）抑制剂（LY294002）的27-OHCH处理组细胞形态变化,Westernblot法检测磷酸化AKT（p-AKT）、cleaved-caspase-9蛋白表达,AnnexinV-PE/7-AAD双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果给药24h,12.5、25.0、50.0滋M27-OHCH处理组SH-SY5Y细胞存活率均明显降低（均P＜0.05）;给药48h,不同浓度（3.125~50.0滋M）27-OHCH处理组SH-SY5Y细胞存活率均明显降低（均P＜0.05）。在显微镜下观察发现,27-OHCH能诱导SH-SY5Y细胞凋亡,使细胞数量减少,而LY294002能减弱27-OHCH诱导的细胞毒效应。随着27-OHCH处理组浓度的增加,SH-SY5Y细胞内p-AKT（Ser473）、cleaved-caspase-9（37/35kD）表达明显增强;经LY294002预作用后,不同浓度（0~50.0滋M）27-OHCH处理组p-AKT（Ser473）表达均受抑制,而12.5、25.0、50.0滋M27-OHCH处理组cleaved-caspase-9蛋白表达变化不明显。给药48h,12.5、25.0滋M27-OHCH处理组均能引起SH-SY5Y细胞凋亡效应,而LY294002预作用2h能逆转细胞凋亡效应（均P＜0.05）。结论27-OHCH可通过AKT信号通路诱导SH-SY5Y细胞凋亡。     

miR⁃552⁃3p通过抑制DACH1促进肝细胞性肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探讨miR?552?3p在肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达及其促进细胞增殖和迁移、侵袭的机制。方法：qRT?PCR检测HCC细胞系及人正常肝细胞系中miR?552?3p的表达情况;下载TCGA数据库中HCC样本的微阵列数据,分析miR?552?3p在HCC癌组织及癌旁组织中是否存在表达差异;miR?552?3p mimics以及miR?552?3p inhibitor转染HCC细胞,荧光素酶报告基因验证miR?552?3p与DACH1是否存在靶向关系,CCK?8及Transwell实验检测miR?552?3p及其与DACH1相互作用对于HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结果：TCGA数据库中HCC样本的分析结果表明,miR?552?3p在HCC中高表达,同时qRT?PCR显示miR?552?3p在HCC细胞系中的表达水平显著高于人肝细胞系L02;miR?552?3p的高表达促进HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,而抑制miR?552?3p表达后则相反;荧光素酶报告实验证实miR?552?3p靶向作用于DACH1的3′?UTR,上调miR?552?3p可抑制DACH1的表达,而下调miR?552?3p则增加DACH1表达;DACH1的过表达可抑制HCC细胞增殖、迁移和侵袭,但同时过表达miR?552?3p后DACH1对于HCC细胞相关功能的抑制即可解除;miR?552?3p正向调控Wnt/β?catenin信号通路的激活。结论：miR?552?3p靶向作用于DACH1促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭,并参与调控Wnt/β?catenin信号。可能为HCC的诊疗策略提供潜在靶点。     

白藜芦醇通过调节miR⁃21⁃5p/PDCD4通路抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移

目的：探讨白藜芦醇治疗高血压的作用靶点及相关作用机制。方法：利用血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7r5模拟高血压时平滑肌细胞增殖细胞模型,并使用白藜芦醇与miR?21?5p mimic进行干预。利用CCK?8实验检测A7r5细胞活力;利用细胞划痕实验检测A7r5细胞的迁移能力;利用real?time PCR技术检测miR?21?5p的表达;利用Western blot技术检测细胞增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4与细胞迁移相关蛋白MMP2、MMP9、PDCD4的表达。此外,选取对数生长期293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测技术验证miR?21?5p与PDCD4的靶向关系。结果：与正常对照组相比,模型组细胞活力、迁移能力及增殖和迁移相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、MMP2、MMP9与miR?21?5p的表达水平显著上调,PDCD4蛋白的表达水平显著下降,且差异具有统计学意义（P < 0.01）;与模型组相比,白藜芦醇处理组的细胞活力、迁移能力及增殖和迁移相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、MMP2、MMP9与miR?21?5p的表达水平显著下调,PDCD4蛋白的表达水平显著上调,且差异具有统计学意义（P＜0.001）;而miR?21?5p mimic转染后细胞活力、迁移能力及增殖和迁移相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、MMP2、MMP9与miR?21?5p的表达水平显著上调,PDCD4蛋白的表达水平显著下降且差异具有统计学意义（P＜0.001）,双荧光素酶检测显示miR?21?5p可显著抑制野生型PDCD4 3''UTR报告基因载体的荧光素酶活性（P < 0.01）。结论：白藜芦醇通过调节miR?21?5p/PDCD4通路,抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移,进而对高血压起到一定的治疗作用。     

miR⁃16/15a-/-小鼠NK细胞功能及其对结肠癌移植瘤敏感度分析

目的：观察miR?16是否通过调节NKG2D表达而影响自然杀伤（natural killer,NK）细胞的生物学功能及其抗肿瘤活性。方法：miR?16/15a-/-小鼠和对照小鼠经皮下注射MC38细胞制备结肠癌移植瘤模型,观察两组小鼠皮下实体瘤生长情况;比较普通小鼠生理或荷瘤状态下NK1.1+NKG2D+细胞和NK1.1+NKG2D?细胞内miR?16的表达;分析生理及荷瘤状态下miR?16/15a-/-小鼠NK细胞NKG2D表达、γ干扰素（interferon?γ,IFN?γ）分泌及细胞毒性作用。结果：与同品系小鼠比较,miR?16/15a-/-小鼠中MC38结肠癌移植瘤的生长受到显著抑制,生理状态小鼠NK1.1+NKG2D+细胞miR?16的表达明显低于NK1.1+NKG2D?细胞,而在荷瘤小鼠来源的两组细胞中无明显差异;与野生型小鼠相比,生理及荷瘤状态下的miR?16/15a-/-小鼠NK1.1+NKG2D+细胞的比例及NK细胞活性无明显变化。结论：miR?16/15a敲除抑制MC38结肠癌移植瘤生长,而miR?16/15a敲除小鼠体内NK细胞的比例及功能及荷瘤状态下NK细胞活性并无明显变化,提示miR?16/15a缺失并非通过NK细胞抑制MC38结肠癌移植瘤生长。     

虎杖苷对神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨虎杖苷对神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法:以不同梯度浓度的虎杖苷处理神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞24、48和72 h, CCK-8法检测细胞增殖,并计算其IC₅₀。1 120.00μmol/L的虎杖苷处理SH-SY5Y细胞72 h后(以不加虎杖苷处理为空白对照组),采用Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p70 S6K、p-p70 S6K蛋白的表达。结果:虎杖苷可有效抑制SH-SY5Y细胞的增殖,72 h的IC₅₀为1 120.00μmol/L。与空白对照组相比,1 120.00μmol/L的虎杖苷作用72 h后,SH-SY5Y细胞凋亡率增加(P<0.05);细胞周期中S期的细胞比例增高(P<0.05),G₀/G₁期细胞比例下降(P<0.05);PI3K、AKT、p-AKT、p-p70 S6K蛋白表达降低(P<0.05),而mTOR...     

miR-150靶向调控FOXO4促进宫颈癌C 33A细胞生长与生存

【摘要】 目的 检测miR 150在宫颈癌细胞C 33A中的表达,并探讨其是否通过调控靶向基因FOXO4促进宫颈癌细胞的增殖与凋亡。方法 将携带miR 150 mimic（模拟物）和miR 150 inhibitor（抑制物）、阴性对照siRNA经 LipofectamineTM 2000 转染至C 33A细胞中,将细胞分为 NC组( 阴性对照组) 、miR 150 模拟物组( 转染miR 150 mimic细胞组) 及 miR 150 in 抑制物组( 转染miR 150 inhibitor细胞组)。采用流式细胞仪、TUNEL检测法、荧光定量PCR、Western bolt 分别检测miR 150对宫颈癌C 33A细胞周期、凋亡以及周期和凋亡相关基因的影响。3’ 端非翻译区（UTR）荧光素酶活性分析证实miR 150的直接靶向作用。结果 miR 150模拟物促进宫颈癌细胞C 33A的增殖与凋亡,抑制物作用相反,miR 150模拟物促进细胞由G1/G0期进展到S期,从而促进宫颈癌细胞增殖,抑制物相反,miR 150调控几个细胞周期、凋亡相关基因CyclinD1、 p27、 BIM和FASL的表达; miR 150通过靶向结合FOXO4的3’UTR区从而抑制FOXO4的表达。结论 miR 150靶向作用于FOXO4从而调节多种基因的表达以致宫颈癌细胞C 33A的增殖与凋亡。     

MAPK磷酸酯酶-1通过抑制JNK和p38的磷酸化调节SH-SY5Y神经母细胞瘤的凋亡

目的研究MKP-1在SH-SY5Y神经母细胞瘤中的抗凋亡。方法建立稳定表达MKP-1的SH-SY5Y细胞,用H2O2诱导细胞凋亡,并通过Western blotting比较分析MKP-1的表达对JNK和p38磷酸化的调节。结果①H2O2诱导SH-SY5Y细胞表达MKP-1,同时导致JNK和p38的去磷酸化;②在稳定表达MKP-1的SH-SY5Y细胞中,MKP-1可以抑制JNK和p38的磷酸化。③稳定表达MKP-1的SH-SY5Y细胞抵抗H2O2诱导细胞凋亡的能力比对照细胞提高了1倍左右。结论MKP-1对神经细胞的凋亡具有重要的调节作用,提示MKP-1作为调节ERK、JNK和p38蛋白激酶信号途径的重要分子,可能对退行性神经系统疾病的发病机制和治疗有重要的作用。     

反义P38cDNA抑制胆红素诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡

目的：观察P38激酶特异性抑制剂SB203580及反义P38激酶cDNA对胆红素诱导人神经母细囊瘤SH—SY5Y细胞凋亡的影响，探讨P38激酶信号转导通路在胆红素诱导SH—SY5Y细胞凋亡中的作用及高胆红素血症损伤中枢神经细胞的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法：分别经SB203580和二甲基亚砜预处理的SH—SY5Y细胞在胆红素作用3h和5h后，在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况；流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。采用脂质体法将含人反义P38cDNA的真核表达载体pcDNA3．O—antiP38导入SH—SYSY细胞，建立稳定低表达P38蛋白的细胞株，经Western blotting鉴定后命名为SH—SY5Y—antiP38，而转染空载体pcDNA3．0的SH—SY5Y细胞株则命名为SH—SY5Y细胞株则命名为SH-SY5Y-pcDNA3.0；SH—SY5Y—antiP38细胞和SH-SY5Y-pcDNA3．O细胞分别经胆红素作用3h和5h，在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况；流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果：在0．02g／L胆红素作用下，流式细胞仪显示与对照相比SB203580预处理的SH—SY5Y细胞在胆红素作用3h后，其凋亡细胞由19．4％下降到12．1％，5h后由66．2％降到39．3％；与SH—SY5Y—pcDNA3．O细胞相比，SH—SY5Y—antiP38细胞在胆红素作用3h后，其凋亡细胞由11．1％降到8．02％，5h后67％降到23．4％。结论：P38激酶参与了胆红素诱导SH—SY5Y细胞凋亡的信号转导。P38通路的激活可能在高胆红素血症导致的神经细胞损伤中(包括听神经细胞)发挥重要作用。     

雷帕霉素抑制人神经母细胞瘤细胞株生长及诱导凋亡的机制研究

目的研究雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生长抑制和诱导凋亡作用,以及对靶向信号通路磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（P13K／AkCmTOR）的影响。方敞用不同浓度的雷帕霉素（10、15、20μmol／L）处理SH-SY5Y细胞（雷帕霉素干预组）,以加入相同体积二甲基亚砜（DMSO）的SH-SY5Y细胞作为阴性对照组,设立空白对照组。CCK．8法测定细胞生长率;采用流式细胞仪检测细胞周期,通过AnnexinV-FITC／PI双染法检测细胞凋亡率;Westernblotting检测easpase-3剪切体及P13K／Akt/mTOR信号通路上下游分子PDKp85、Akt、mTOR、4E-BPl表达及其磷酸化水平的变化。结果与阴性对照组和空白对照组比较,雷帕霉素干预组细胞生长率显著降低（P〈0．05或P〈0．01）;G。／G,期细胞百分比显著增高（P〈0．05）;细胞凋亡率显著升高（P〈0．01）。Westernblotting检测结果显示：与阴性对照组和空白对照组比较,雷帕霉素干预组easpase-3剪切体表达水平较高;P13K／Akt/mTOR信号通路上下游分子的活性均被抑制,P13Kp85、Akt、mTOR、4E-BP1的磷酸化水平均明显降低。结论雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y具有抑制生长和诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制P13K／Akt/mTOR信号通路有关。