人脂肪间充质干细胞体外分化为视网膜细胞观察

目的:研究成人脂肪间充质干细胞(hAD-MSC)体外诱导分化为视网膜色素上皮细胞(RPE)、光感受器细胞和血管内皮细胞的情况.方法:分离、培养和鉴定hAD-MSC,用血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子诱导hAD-MSC向血管内皮细胞分化,并检测血管内皮细胞标志物血管内皮细胞Ⅷ因子(vWF)的表达情况.制备hAD-MSC体外诱导液,用诱导剂和诱导液共同诱导hAD-MSC向视网膜细胞分化,采用免疫荧光法检测hAD-MSC经诱导后表达光感受器细胞标志物视紫红质(Rhodopsin)和RPE细胞标志细胞角蛋白(Pan-CK)的表达情况.结果:免疫荧光法证实,分离培养的hAD-MSC经体外诱导后可表达RPE、光感受器细胞和血管内皮细胞的标志Pan-CK、Rhodopsin和vWF.结论:hAD-MSC经过体外诱导可以向视网膜RPE、光感受器细胞和血管内皮细胞分化.     

阿魏酸钠诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的初步研究

目的 探讨阿魏酸钠诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的可能作用。方法 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，采用阿魏酸钠对其进行诱导培养，倒置显微镜下观察诱导培养不同时间后细胞的形态变化，并应用免疫细胞化学方法鉴定诱导培养后细胞表面神经细胞特异性标志物神经丝蛋白(NF)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果 阿魏酸钠诱导培养6h后即可见细胞形态发生明显变化，24h后表现为典型的神经细胞样形态，NF和NSE神经细胞特异性标志物呈阳性表达。结论 初步证实阿魏酸钠具有诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。     

诱导胶质纤维酸性蛋白阳性神经前体细胞系向神经元分化

目的：探讨来源于人胚胎脑室下区(SVZ)的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性神经前体细胞系向神经元分化的潜能。方法：分别采用定量RT-PCR、Western印迹分析及免疫荧光染色检测被全反式视黄酸诱导前后GFAP阳性神经前体细胞系中神经干细胞和神经元特异性标志物表达量的变化情况。采用免疫荧光染色检测GFAP阳性神经前体细胞系移植到动物体内后神经元特异性标志物表达情况。结果：在体外诱导后，GFAP阳性神经前体细胞系中神经元特异性标志物在mRNA和蛋白水平的表达量上升，而神经干细胞标志物表达量下降。移植动物体内，GFAP阳性神经前体细胞系可分化产生神经元。结论：GFAP阳性神经前体细胞系在体内外可以向神经元诱导分化。     

大鼠胚胎后肾间充质干细胞体外诱导分化的实验研究

目的 研究大鼠胚胎后肾间充质干细胞(MMSCs)体外诱导分化的生物学特性.方法 原代分离培养后肾间充质干细胞,在体外特定诱导条件下观察细胞向成骨细胞、脂肪细胞及肾小管上皮细胞的分化及其形态演变,采用细胞免疫荧光检测细胞表面特定蛋白的表达变化.结果 大鼠后肾间充质干细胞在特定诱导条件下可向成骨细胞、脂肪细胞及上皮细胞分化,免疫荧光结果显示分化后的上皮细胞E-cadherin蛋白表达明显增强,而vimentin、fibronectin的表达则明显降低甚至无表达.结论 大鼠胚胎后肾间充质干细胞在特定条件下有定向分化的能力,具有潜在分化为肾实质细胞的能力.     

骨髓间充质干细胞体外可定向诱导为内皮细胞

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养方法和向血管内皮细胞分化的能力。方法:利用淋巴细胞分离液分离出MSCs,体外扩增,激光共聚焦显微镜检测表面抗原表达,以含VEGF、bFGF的诱导分化培养液定向诱导传代使细胞向血管内皮细胞分化,免疫荧光及免疫组化检测内皮细胞特异性标志物鉴定。结果:MSCs在体外传代扩增后激光共聚焦显微镜检测结果显示CD44、CD90表达阳性,CD31、CD45为阴性,分化后的细胞具有内皮细胞的形态学特征可表达CD31及Ⅷ因子。结论:骨髓间充质干细胞可在体外诱导向内皮细胞方向分化。     

间充质干细胞定向诱导为内皮细胞的体外研究

目的:为寻找心血管组织工程新的种子细胞来源,探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养方法和向血管内皮细胞分化的能力.方法:利用淋巴细胞分离液分离出MSCs,并体外扩增,激光共聚焦显微镜检测表面抗原表达,以含血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)的诱导分化培养液定向诱导传代使其向血管内皮细胞方向分化,观察细胞形态的变化,检测内皮细胞特异性标志物的表达.结果:MSCs在体外传代扩增后激光共聚焦显微镜检测结果显示CD44、CD90表达阳性,CD31、CD45为阴性,分化后细胞具有内皮细胞的形态学特征,并表达内皮细胞特异性标志物CD31.结论:骨髓间充质干细胞可在体外诱导向内皮细胞方向分化.     

人胚胎干细胞向下丘脑神经祖细胞的诱导分化受高雄激素影响

目的：研究体外诱导人胚胎干细胞（human embryonic stem cell,hESC）向下丘脑神经祖细胞分化,并以此为细胞模型,观察不同浓度雄激素对下丘脑神经祖细胞分化的影响。方法：鉴定hESC细胞株CCRM22,体外诱导CCRM22向下丘脑神经祖细胞分化,对其进行初步的细胞生物学鉴定;在分化培养基中添加1×10-8mol/L、1×10-7mol/L睾酮（以无水乙醇为助溶剂对照）,收集不同分化时期细胞,比较分化效率;利用RT?qPCR、流式细胞术、免疫荧光检测等方法鉴定分化细胞,并检测生殖功能调控相关基因的表达。结果：CCRM22分化为下丘脑神经祖细胞的效率超过85%,但睾酮处理降低其分化效率;分化细胞表达神经细胞标志物NESTIN以及下丘脑神经祖细胞特异性标志物NKX2.1,同时表达KISS1和雄激素受体（androgen receptor,AR）,且AR的表达水平与睾酮浓度呈正相关。结论：成功诱导hESC分化形成下丘脑神经祖细胞,高浓度睾酮处理抑制hESC向下丘脑神经祖细胞分化,该细胞模型可应用于后续体外研究多囊卵巢综合征女性孕早期高雄激素环境对后代下丘脑神经细胞分化和发育的影响。     

CNTF 联合RA 诱导成肌细胞类神经分化及与REST 的相关性

目的 探讨睫状神经营养因子（CNTF）联合视黄酸（RA）诱导成肌细胞类神经分化的方法以 及该诱导过程与神经元限制性沉默因子（REST）相关性。方法 以CNTF 诱导C2C12 去分化,再以RA 诱导 C2C12 类神经分化。通过细胞形态学、细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot 等技术对去分化及类神经 分化的细胞进行鉴定及相关分析,比较细胞类神经分化前后REST 表达变化。结果 诱导后细胞聚集生长,呈 典型的神经球样。细胞免疫荧光染色显示神经球能够被神经特异性标志物NSE、Sox1、GFAP 标记,神经球 离散为单个细胞接种后生长状态良好,神经干细胞标志物（nestin）呈阳性表达。Western blot 结果显示CNTF 去分化诱导后成肌细胞分化相关蛋白Myogenin、P21 表达降低,类神经分化后NSE、Sox1、GFAP 表达增多, 且成肌细胞特异性标志物Desmin 及REST 表达下降。流式细胞仪分析表面标志物NSE 显示诱导组与对照组 比较细胞有差异,且诱导组特异性阳性细胞率达84% 左右。结论 CNTF 联合RA 可诱导成肌细胞类神经分化, 且该诱导过程可能与REST 表达降低相关。     

血管紧张素Ⅱ联合生长因子诱导人骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元

目的：观察血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,AngⅡ）联合应用多种生长因子体外诱导人骨髓间充质干细胞（Human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs）向神经元和多巴胺神经元分化的潜能。方法：从正常人骨髓中分离单个核细胞并对hBMSCs进行纯化、鉴定;hBMSCs先经用碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子预诱导,再用胶质细胞源性神经营养因子（Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）和AngⅡ联合诱导生长良好的hBMSCs向神经元分化。倒置显微镜观察hBMSCs分化过程中细胞形态的变化;RT-PCR方法检测诱导前后hBMSCs神经干细胞的标记物巢蛋白（Nestin）、神经元特异性烯醇化酶（Neuron-specific enolase,NSE）、神经胶质细胞的特异性标记物酸性纤维蛋白（Glial fibrillary acidic protein,GFAP）以及多巴胺能神经元特异性标记物酪氨酸羟化酶（Tyrosinehydroxylase,TH）等标志物的表达情况;免疫荧光法检测诱导前后hBMSCs的NSE、TH和GFAP蛋白表达情况。结果：流式分析获得了高纯度的hBMSCs。在不同浓度的AngⅡ诱导2周后,倒置显微镜观察hBMSCs,具有典型神经元细胞形态,大多呈双极、多极和锥形; Nestin、NSE、TH的基因mRNA表达量,诱导组相较于对照组,有显著性差异（P<0.05）;免疫荧光细胞化学检测结果表明诱导分化后表达NSE、Nestin、TH蛋白的细胞数明显增加（P<0.05）,但诱导前后的细胞都不表达GFAP基因。结论：多种生长因子联合AngⅡ可以在体外诱导hBMSCs分化为多巴胺能神经元样细胞。     

肾组织干细胞向肾小管上皮细胞的诱导分化

目的探讨肾组织干细胞向肾小管上皮细胞的诱导分化。方法分离肾乳头肾组织干细胞,对照组加入正常干细胞培养
基,诱导组应用含activin A、BMP-7、维甲酸3种细胞因子的诱导培养基与肾上皮细胞培养基交替诱导,同时与缺氧损伤的肾小
管上皮细胞共培养,通过细胞流式、免疫荧光、qRT-PCR的方法评估诱导效率。结果细胞流式结果提示,对照组肾组织干细胞
CK-18阳性率为6.5%,诱导组CK-18阳性率为44.2%;免疫荧光结果提示,诱导组成熟上皮细胞标记CK-18、E-cadherin、ZO-1部
分阳性表达;qRT-PCR结果提示,诱导组成熟上皮细胞标记E-cadherin、AQP-1基因表达水平较对照组显著升高（P<0.01）。结
论肾组织干细胞在体外可以诱导分化为肾小管上皮细胞。