锌指蛋白ZFX在儿童B系急性淋巴细胞性白血病中的表达及意义

目的：研究儿童B系急性淋巴细胞性白血病（B-ALL）患者骨髓单个核细胞中X染色体耦联锌指蛋白（ZFX）的表达及其与白血病预后的关系。方法：通过Western blot方法检测白血病细胞株（REH、HL-60、NB4、K562）中ZFX蛋白的表达;利用PCR方法扩增获得全长ZFX,并测序验证;通过实时定量PCR检测82例初发B-ALL儿童骨髓样本,24例B-ALL缓解期样本,以及64例骨折或先天性心脏病手术患儿样本(对照组)ZFX的表达;并根据治疗3年内有无骨髓或中枢神经系统复发分为预后好组和预后差组,比较两组患儿初发时骨髓中ZFX mRNA的表达水平。结果：ZFX蛋白在白血病细胞株REH、HL-60、NB4和K562中均有表达。初发ALL组骨髓中ZFX mRNA表达高于对照组（P＜0.01）;ALL缓解组ZFX mRNA表达明显低于ALL初发组（P<0.01）;预后差的ALL患儿初发骨髓中ZFX mRNA的表达高于预后好的患儿（P＜0.05）。结论ZFX在儿童B-ALL中高表达,且预后差组表达相对较高,提示它可能在B-ALL预后判断中有重要意义。     

儿童急性白血病Notch1和Jagged1的基因表达

目的：探讨儿童急性白血病（AL）骨髓或外周血单个核细胞中Notch1和Jagged1基因表达及其在AL发病中的可能作用。方法：收集2009年2月至2011年7月初诊的47例AL患儿和20例正常或非恶性血液病儿童（对照组）骨髓或外周血单个核细胞,采用二步法半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测骨髓或外周血中Notch1和Jagged1基因表达情况。47例AL患儿中,急性淋巴细胞白血病（ALL）32例,其中B-ALL 26例,T-ALL 6例;急性髓细胞白血病（AML）15例。结果：ALL组及AML组Notch1基因阳性率高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。T-ALL患儿Notch1 基因表达水平高于B-ALL患儿,差异有统计学意义（P<0.01）。ALL组及AML组Jagged1基因阳性率与对照组比较差异无统计学意义,但ALL组及AML组Jagged1表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Notch1在儿童不同类型ALL中的表达有明显差异,T-ALL 患儿中的Notch1表达明显高于B-ALL患儿;在儿童AL细胞中,普遍存在Notch1信号的活化;Notch1在AML儿童中异常表达,提示Notch1在AML儿童中也起着重要作用。Jagged1在ALL及AML儿童中异常表达,但需要收集更多资料论证。     

同源盒基因HOXA9在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的：研究同源盒基因HOXA9在儿童急性白血病（AL）患儿骨髓单个核细胞中的表达,并探讨其临床意义。方法：采用RT-PCR方法检测46例不同时期AL患儿HOXA9 mRNA的表达水平,以15例特发性血小板减少性紫癜（ITP）患儿作为对照。结果：46例AL患儿（52份骨髓标本）HOXA9基因阳性表达率为63%,其中急性髓细胞白血病(AML)组阳性表达率（86%）明显高于急性淋巴细胞白血病（ALL）组（35%）及对照组（13%）（P<0.05）; AML组HOXA9 mRNA表达水平明显高于ALL组及对照组（P<0.05）。HOXA9在各型儿童AML中表达不同,mRNA相对表达水平依次为：M5型＞M4型＞M1和（或）M2型,而在M3型中未检测到表达。HOXA9在AML患儿高危组中的阳性表达水平较高。AML患儿初治组HOXA9基因阳性表达率及mRNA水平明显高于缓解组和对照组（P<0.05）,而缓解组与对照组比较差异无统计学意义;未缓解组HOXA9基因表达显著高于缓解组和对照组（P<0.05）。结论：HOXA9基因高表达与AL的发生相关;AML患儿HOXA9基因表达水平明显高于ALL患儿。HOXA9基因高表达者与白血病危险程度有关,且提示预后不良。因此,HOXA9基因有望成为儿童AL诊断、治疗及判断预后的一个靶点。     

儿童急性髓细胞白血病WT1基因表达及其临床意义

目的研究急性髓细胞白血病(AML)患儿WT1基因表达情况及其与临床预后的关系。方法采用实时荧光定量PCR方法检测45例非M3儿童AML的WT1表达水平,并回顾性分析其与AML预后的关系。结果骨髓幼稚细胞比例60%的AML患儿WT1表达水平高于幼稚细胞≤60%的患儿(P0.05)。M2病例组初诊时WT1表达量低于非M2病例组(P0.05)。完全缓解组患儿的WT1表达量显著低于初诊组和复发组(P0.01)。诱导化疗结束时WT1高表达组的2年无病生存率(DFS)低于WT1低表达组(P0.05)。诱导化疗结束时WT1下降程度≥1个数量级病例组的2年总生存率(OS)和DFS高于WT1下降程度1个数量级病例组(P0.05)。AML患儿骨髓复发2~3个月前WT1表达呈上升趋势。结论 WT1表达水平与儿童AML预后密切相关,动态监测WT1表达在指导儿童AML个体化治疗、预后评估和复发预测方面具有重要临床应用价值。     

急性白血病患儿骨髓细胞血管内皮生长因子及其受体表达

目的探讨儿童急性白血病（AL）骨髓细胞血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（Flt,KDR）表达差异,分析其与儿童AL临床特征关系及化疗前后变化。方法采用S-P免疫组织化学方法检测53例AL患儿治疗前后及对照组骨髓VEGF/Flt-1,KDR表达情况,其中急性淋巴细胞白血病（ALL）33例,急性髓系白血病（AML）20例;对照组21例为骨髓像正常非恶性血液病患儿,抽取骨髓肝素抗凝,应用梯度离心法分离单个核细胞。结果VEGF、Flt-1、KDR在AL患儿骨髓中表达水平高于对照组,AML组表达高于ALL组。化疗后完全缓解（CR）40例患儿,其VEGF、Flt-1、KDR的表达在化疗后较化疗前显著性降低;化疗后未获得CR患儿的表达在化疗前后无显著性。AL患儿VEGF的表达与骨髓中幼稚细胞百分比、外周血幼稚细胞百分比呈正相关。骨髓VEGF、Flt-1、KDR表达水平在不同年龄、性别、有无髓外浸润无差异。高表达VEGF组缓解率低于低表达组。结论VEGF、Flt-1、KDR在儿童AL中高表达,提示可能与儿童AL的发生过程、发展、疾病预后有关。     

紫外线在低氧条件下对急性早幼粒白血病细胞增殖的影响及机制研究

目的 观察280 nm波长紫外发光二极管照射在低氧条件下对急性早幼粒白血病细胞（HL-60）增殖的影响,并探讨发生机制。方法 取对数生长期的HL-60细胞为研究对象,分为对照组、低氧组、紫外线组及低氧+紫外线组。低氧组给予氯化钴（终浓度150 μmol/L）处理,紫外线组用30 J/m²能量的280 nm波长紫外发光二极管照射,低氧+紫外线组在氯化钴处理基础上用30 J/m²能量的280 nm波长紫外发光二极管照射,48 h后收集细胞于倒置显微镜下观察细胞形态变化。采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Annexin-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测Bcl-2基因mRNA的表达量。上述各实验均独立重复3次。结果 与对照组相比,各实验组细胞皱缩、透亮度降低、排列紊乱,随着培养时间延长,细胞数量减少。各组细胞增殖抑制率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P < 0.01）,其中低氧组+紫外线组细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用最强,紫外线组次之,低氧组最弱。与对照组比较,低氧组、紫外线组及低氧+紫外线组Bcl-2 mRNA的表达逐渐下调,且低氧+紫外线组Bcl-2 mRNA表达量较低氧组和紫外线组下调更明显（P < 0.05）。结论 低氧和紫外线作用均可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,紫外线在低氧条件下对细胞的增殖抑制及凋亡作用较常氧条件下更明显,其机制可能与Bcl-2基因表达下调有关。     

鼠尾草酸增加1,25(OH)2D3诱导HL-60细胞分化及其机制研究

目的：已证实1, 25(OH)2D3可以诱导HL-60细胞向成熟单核细胞分化,但其不足之处是高钙血症和形成耐药株。该实验应用鼠尾草酸（CA）联合1, 25(OH)2D3研究对HL-60细胞分化的影响及引起细胞内活性氧（ROS）水平和细胞内钙离子浓度的改变。方法：应用鼠尾草酸,1,25（OH）2D3单独和联合应用处理HL-60细胞,共分为5组：空白对照组;低浓度1,25（OH）2D3（1 nmol/L）组、鼠尾草酸组;联合处理组（10 μmol/L鼠尾草酸和1 nmol/L 1,25（OH）2D3）;高浓度1,25（OH）2D3（100 nmol/L）组。每24 h监测1次,通过四唑氮蓝(MTT)法观察细胞生长,共72 h;收集处理后72 h的HL-60细胞,通过光学显微镜观察细胞形态,用流式细胞仪（FCM）检测不同处理组细胞周期及单核细胞分化标记CD14的表达,ROS和细胞内钙离子浓度。结果：72 h后,联合处理组HL-60细胞与空白对照组相比,细胞增殖明显受抑制（Ab= 0.560±0.020; P<0.01）,细胞形态具有成熟单核细胞特征,CD14的表达率升高（57.62%;P<0.01）,G0/G1 期细胞显著增多, ROS水平下降［（52.67±10.76）%,P＜0.01］;联合处理组细胞内钙离子水平同空白对照组比较差异无显著性（115.64±17.74 nmol/L,P>0.05）,但与高浓度1,25（OH）2D3组相比细胞内钙离子水平明显下降(P<0.01)。结论：鼠尾草酸可增强1,25（OH）2D3对HL-60细胞的诱导分化、增强抑制HL-60细胞增殖作用,细胞阻滞于G0/G1期,细胞内活性氧水平降低,这可能与细胞的诱导分化机制有关,且这一联合作用不增高细胞内钙离子水平。     

铁超载与铁剥夺对HL-60细胞bcl-2和c-myc基因的影响

目的 探讨铁超载与铁剥夺对HL-60细胞bel-2和c-myc基因表达的影响。方法 体外培养HL-60细胞，分别加入不同浓度的三氯化铁（FeCl3）。采用免疫组化LASB法测定凋亡相关基因bel-2及c-myc表达。结果 不同浓度的FeCl3作用于HL-60细胞6h、12h、24h、48h，bel-2表达显著高于对照组。尤以100μmol／LF eCl3组显著，与对照组相比差异显著（P〈0．05）。不同浓度DFO作用于HL-60细胞一定时间后，其c-myc表达增高。结论 铁超载时bel-2高表达，铁剥夺时c-myc高表达。     

CREB在反复喘息患儿中的表达及对ORMDL3基因表达的影响

目的 探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）在3岁以下反复喘息患儿中的表达水平及其对血清类黏蛋白1样蛋白3基因（ORMDL3）表达水平的影响。方法 选取2017年6月至2019年6月就诊的3岁以下反复喘息儿童36例为病例组,另选取行健康体检的24例儿童为健康对照组,使用荧光定量PCR法检测外周血CREB的表达水平。培养人支气管上皮细胞（BEAS-2B）,使用双荧光素酶报告基因和荧光定量PCR法检测过表达和siRNA干扰CREB对BEAS-2B细胞ORMDL3基因启动子活性及mRNA表达水平的影响。结果 病例组CREB表达水平高于健康对照组（P < 0.001）。在BEAS-2B细胞中,过表达CREB能上调ORMDL3基因的启动子活性及mRNA表达水平（P < 0.05）;siRNA干扰CREB的表达后ORMDL3基因的启动子活性及mRNA表达水平均降低（P < 0.05）。结论 反复喘息患儿CREB表达增加,其可能通过调控ORMDL3基因的表达参与了反复喘息的发病。     

CREB在反复喘息患儿中的表达及对ORMDL3基因表达的影响

目的 探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）在3岁以下反复喘息患儿中的表达水平及其对血清类黏蛋白1样蛋白3基因（ORMDL3）表达水平的影响。方法 选取2017年6月至2019年6月就诊的3岁以下反复喘息儿童36例为病例组,另选取行健康体检的24例儿童为健康对照组,使用荧光定量PCR法检测外周血CREB的表达水平。培养人支气管上皮细胞（BEAS-2B）,使用双荧光素酶报告基因和荧光定量PCR法检测过表达和siRNA干扰CREB对BEAS-2B细胞ORMDL3基因启动子活性及mRNA表达水平的影响。结果 病例组CREB表达水平高于健康对照组（P < 0.001）。在BEAS-2B细胞中,过表达CREB能上调ORMDL3基因的启动子活性及mRNA表达水平（P < 0.05）;siRNA干扰CREB的表达后ORMDL3基因的启动子活性及mRNA表达水平均降低（P < 0.05）。结论 反复喘息患儿CREB表达增加,其可能通过调控ORMDL3基因的表达参与了反复喘息的发病。     

Wnt通路中散乱蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

目的 探讨Wnt信号通路中散乱蛋白（DVL）对儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）发病及预后的意义。方法 选取33例新发ALL患儿为病例组,根据危险度将ALL患儿分为低危组（n=14）、中危组（n=5）和高危组（n=14）;29例免疫性血小板减少症（ITP）患儿为对照组。采集病例组患儿初发及诱导治疗第33天时,以及对照组骨髓血各2 mL,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测骨髓血细胞DVL1、DVL2、DVL3 mRNA表达。结果 病例组初发期DVL1、DVL2、DVL3 mRNA表达水平高于缓解期及对照组（P < 0.05）,与对照组比较,病例组缓解期DVL2 mRNA水平升高（P < 0.05）。DVL2 mRNA表达水平在病例组初发期及缓解期均高于DVL 1、DVL 3 mRNA （P < 0.05）。高、中危组DVL1、DVL2 mRNA表达水平高于低危组（P < 0.05）。DVL2 mRNA表达水平在低、中、高危组均高于DVL1、DVL3 mRNA （P < 0.05）。结论 Wnt通路中DVL,尤其是DVL2的表达变化可能对儿童ALL的发病及预后有一定意义。     

沉默Pin1表达抑制高氧诱导人肺泡上皮细胞凋亡

目的　研究沉默Pin1表达对高氧诱导人肺泡上皮细胞(A549细胞)凋亡的影响。方法　在体外常规培养A549细胞, 随机分为对照组、高氧组、空载体组和Pin1-shRNA组, 以3 L/min速度向各处理组细胞中通入95% O2和5% CO2的高纯混合气10 min。培养24 h后, 倒置相差显微镜下观察细胞形态; 流式细胞术检测细胞凋亡率; SP细胞免疫化学法检测细胞凋亡相关蛋白XIAP和Caspase-9表达; 荧光显微镜检测细胞线粒体活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位。结果　高氧组和空载体组细胞均生长状态差, Pin1-shRNA组活细胞数量较高氧组和空载体组多, 但比对照组少。与对照组相比, 高氧组和空载体组细胞凋亡率增加、Caspase-9表达增加、XIAP表达降低、ROS含量增加、线粒体膜电位下降(均P<0.05)。而Pin1-shRNA组与高氧组和空载体组相比, 细胞凋亡率下降、Caspase-9表达降低、XIAP表达增加、ROS含量降低、线粒体膜电位升高(均P<0.05), 但与对照组相比差异亦有统计学意义(均P<0.05)。结论 抑制人肺泡上皮细胞Pin1表达可减轻高氧诱导的细胞凋亡。     

dhfr基因过表达对乙醇致斑马鱼胚胎心血管发育异常的效应研究

目的 观察二氢叶酸还原酶基因（dhfr）过表达对乙醇致斑马鱼胚胎心脏和血管发育异常的作用,并初步探讨其机制。方法 体外转录dhfr mRNA并将其显微注射入斑马鱼受精卵内使dhfr基因过表达,并进行过表达的效率验证。将野生型斑马鱼分为正常对照组、乙醇处理组（400?mmol/L乙醇溶液）、乙醇+dhfr mRNA组（显微注射6?nL dhfr mRNA）,观察各组胚胎的整体发育情况。按照上述分组,利用红色荧光蛋白标记心脏的转基因斑马鱼系Tg（cmlc2：mcherry）观察胚胎心房和心室的发育状况;利用荧光显微造影观察野生型斑马鱼胚胎心脏流出道及血管发育情况;通过心率和心室收缩指数评估心功能情况。构建基因探针并通过胚胎整体原位杂交及Real-time PCR法,检测胚胎nkx2.5、tbx1、flk-1的基因表达情况。结果 与乙醇处理组相比,乙醇+dhfr mRNA组斑马鱼胚胎发育异常百分率明显下降,存活百分率显著上升（P < 0.05）;心房、心室、心脏流出道和血管发育的异常表型及心功能情况明显改善。乙醇处理组nkx2.5、tbx1、flk-1 mRNA的表达较对照组下降（P < 0.05）;乙醇+dhfr mRNA组nkx2.5、tbx1、flk-1 mRNA的表达较乙醇处理组上调,但仍未达到正常对照组水平（P < 0.05）。结论 dhfr基因过表达可部分挽救乙醇所致胚胎心脏和血管发育异常,其机制可能与dhfr基因过表达后上调乙醇导致的nkx2.5、tbx1、flk-1水平降低有关。     

SIRT1在急性髓系白血病患儿骨髓活检组织中的表达及临床意义

目的 了解SIRTl 在急性髓系白血病（AML）患儿骨髓活检组织中的表达水平,并分析其与AML 预后的相关性。方法 回顾性分析2009 年7 月至2012 年4 月确诊为AML 并于初诊时行骨髓活检检查的54 例患儿的临床资料。采用免疫组织化学染色方法检测患儿骨髓活检组织中SIRTl 的表达;根据SIRT1 的表达情况将病例分为SIRT1 阴性组（n=10）和SIRT1 阳性组（n=44）,再根据SIRT1 表达的阳性程度进一步将SIRT1 阳性组分为（+）组（n=8）、（2+）组（n=7）和（3+）组（n=29）,比较各组患儿的预后。Cox 多因素回归分析患儿长期生存的危险因素。结果 SIRT1（3+）组病死率明显高于SIRT1 阴性组（PPPP=0.045,危险系数绝对值=2.071,95%CI：1.017~4.219）。结论 部分AML患儿骨髓活检组织存在SIRTl表达增高情况,且SIRTl高表达与不良预后相关。     

EVI1基因阳性的儿童急性髓细胞性白血病生物学及临床特征分析

目的 研究EVI1 基因在急性髓细胞性白血病（AML）患儿中的表达及EVI1 基因阳性AML 患儿的临床特征。方法 收集分析EVI1 阳性患儿的临床资料;采用RT-PCR 法和实时荧光定量聚合酶链反应法（RQ-PCR）定性和定量测定EVI1 的表达;流式细胞术检测骨髓细胞免疫表型;多参数流式细胞术（MFC）监测微小残留白血病（MRD）;同时对染色体进行检查。结果 241 例AML 患儿中,有33 例EVI1 基因表达呈阳性（13.7%）;与EVI1 基因表达阴性的AML 患儿相比,EVI1 阳性AML 患儿的初诊年龄、外周血白细胞计数、血红蛋白含量和血小板计数差异均无统计学意义（均P>0.05）,但女性患儿比例增加（P<0.05）;EVI1 表达改变与临床缓解和MRD 改变不同步,部分患儿EVI1 转阴滞后于临床缓解和MRD 转阴,而部分患儿临床未缓解或MRD 仍呈阳性,但EVI1 已转阴;EVI1 常与其他融合基因共表达;免疫表型分析提示EVI1 阳性AML 患儿高表达CD33（100%）、CD38（88%）和HLADR（76%）;15 例患儿发现染色体结构或数目异常;EVI1 表达阳性AML 患儿第1 疗程完全缓解（CR）率明显低于EVI1 表达阴性患儿（P<0.05）。结论 EVI1 基因表达阳性的AML 患儿近期预后差;EVI1 基因在AML 的病程中活化不是孤立的,而是与其他基因相互作用或染色体异常的结果,其活化机制及功能还需进一步研究。     

MS275对发育期惊厥大鼠p38 MAPK信号通路的调控机制研究

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS275在发育期大鼠惊厥发病中对p38 MAPK信号通路的调控机制。方法 将32只雄性大鼠随机分为对照组、戊四唑（PTZ）组、低剂量MS275组（3?mg/kg）及高剂量MS275组（6?mg/kg）（n=8）。通过腹腔注射PTZ制作发育期大鼠惊厥模型,对照组仅注射生理盐水;MS275在PTZ诱导惊厥前2?h腹腔注射给药。造模成功后24?h,每组取6只大鼠,Western blot法检测海马组织p38、MK2、CREB和IL-6蛋白表达;qRT-PCR法检测p38、MK2、CREB和IL-6 mRNA表达;苏木精-伊红（HE）染色观察脑组织病理变化;Western blot法检测小胶质细胞活化标志物CD11b的表达。结果 PTZ组大鼠海马组织中p38、MK2、CREB和IL-6 mRNA及其蛋白的表达均较对照组显著增高（P < 0.05）;而MS275能抑制上述指标mRNA及其蛋白在发育期惊厥大鼠中的表达水平（P < 0.05）;6?mg/kg MS275对CREB mRNA及其蛋白、IL-6 mRNA的抑制作用比3?mg/kg MS275更显著（P < 0.05）。HE染色结果可见PTZ组海马组织有明显的神经元凋亡及细胞水肿,伴有较多的炎性细胞浸润;而MS275干预组能减轻发育期惊厥大鼠神经元凋亡及细胞水肿,同时减少炎性细胞浸润。PTZ组小胶质细胞活化明显增多,而MS275能抑制发育期惊厥大鼠小胶质细胞活化（P < 0.05）;且6?mg/kg MS275的抑制作用比3?mg/kg MS275更显著（P < 0.05）。结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS275能抑制发育期惊厥大鼠p38 MAPK信号通路、海马神经元的凋亡和小胶质细胞活化,从而减少炎症反应及惊厥性脑损伤;且MS275的作用可能存在剂量依赖性。     

融合团体箱庭疗法对Asperger综合征儿童的疗效

目的 探讨融合团体箱庭疗法对学龄前Asperger综合征（AS）儿童的临床效果。方法 将44例学龄前AS儿童作为研究对象,随机分成试验组和对照组,每组22例。对照组采用常规训练进行干预,试验组在常规训练的基础上,接受融合团体箱庭疗法。通过社交反应量表（SRS）、情绪识别工具和沙盘主题特征的变化评定治疗6个月后的疗效。结果 干预前试验组儿童SRS总分、各因子得分以及正立、倒置、上半面孔、下半面孔的面部表情识别正确率与对照组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。与干预前比较,干预6个月后对照组和试验组儿童SRS总分和各因子得分均较前降低（P < 0.01）;对照组除正立位外,其余位置表情识别正确率均较前增高（P < 0.05）;试验组各位置表情识别正确率均较前增高（P < 0.05）。干预后试验组儿童SRS总分与除社交知觉因子外的其余各因子得分均低于对照组（P < 0.01）;各位置表情识别正确率均高于对照组（P < 0.01）。试验组儿童干预前与干预后沙盘主题特征个数比较差异具有统计学意义（P < 0.01）。结论 融合团体箱庭疗法可有效提高学龄前AS儿童的社交反应和情绪识别能力。     

PR-957对A1反应性星形胶质细胞形成的影响

目的 探讨PR-957对A1反应性星形胶质细胞形成的影响。方法 取出生1 d内的雌性大鼠脑皮质培养出原代星形胶质细胞,将细胞分为对照组、LPS组及LPS+PR-957组。LPS组给予5 μmol/L LPS处理48 h,LPS+PR-957组先用PR-957（终浓度200 nmol/L）处理1 h,再用5 μmol/L LPS处理48 h。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测补体3（C3,A1反应性星形胶质细胞标记物）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）;采用实时荧光定量PCR法检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖6（glypicans 6,Gpc6）、SPARC样1（SPARC-like 1,Sparcl1）和脂质运载蛋白2（lipocalin 2,lcn2）mRNA的相对表达量。上述各实验均独立重复3次。结果 对照组几乎不表达C3,LPS组与LPS+PR-957组C3水平高于对照组,但LPS+PR-957组的C3水平低于LPS组（P < 0.05）。TNF-α的表达结果与C3一致。与对照组相比,LPS组和LPS+PR-957组的Gpc6 mRNA及Sparcl1 mRNA表达水平均降低,lcn2 mRNA表达水平均升高（P < 0.001）;与LPS组相比,LPS+PR-957组的Gpc6 mRNA及Sparcl1 mRNA表达水平均升高,lcn2 mRNA表达水平降低（P < 0.001）。结论 LPS能够诱导星形胶质细胞成为A1反应性星形胶质细胞;PR-957可以抑制LPS诱导的A1反应性星形胶质细胞形成。     

SOCS低甲基化在儿童过敏性紫癜Th17/Treg细胞失衡中的作用研究

目的 通过研究细胞因子信号转导抑制因子（SOCS）低甲基化与过敏性紫癜（HSP）患儿Th17/Treg细胞失衡的关系,探讨HSP的免疫发病机制。方法 选取2014年5月至2015年1月32例急性期HSP住院患儿为研究对象,另选取行健康体检的28例儿童作为健康对照组。采用ELISA法检测血浆IL-6水平;流式细胞术检测外周血CD4⁺IL-17A⁺T细胞（Th17细胞）比例、CD4⁺CD25⁺调节性T细胞（Treg）比例和CD4⁺T细胞磷酸化STAT3（pSTAT3）蛋白平均荧光强度（MFI）;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测CD4⁺T细胞SOCS1、SOCS3基因mRNA表达;高分辨率熔解曲线（HRM）分析法检测外周血单个核细胞SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'端非翻译区（5'-UTR）可能的STAT3结合位点CpG岛甲基化水平。结果 与健康对照组比较,HSP组血浆IL-6浓度、CD4⁺T细胞pSTAT3的MFI显著增加;HSP组Th17细胞比例显著上调,Treg细胞比例显著下调（P < 0.05）。HSP组患儿急性期外周血单个核细胞SOCS1 mRNA和SOCS3 mRNA水平均显著高于健康对照组（P < 0.05）;HSP组SOCS1 mRNA及SOCS3 mRNA表达均与Th17/Treg比值呈负相关（P < 0.05）。HSP组患儿急性期SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'-UTR区可能的STAT结合位点CpG岛呈低甲基化,而健康对照组呈完全去甲基化状态。结论 SOCS1、SOCS3基因低甲基化所致其相对表达不足可能是HSP患儿Th17/Treg失衡的因素之一。