不同类型肺结核患者外周血维生素D与抗菌肽LL-37表达水平的研究

目的 评价不同类型活动性肺结核患者血清维生素D及抗菌肽LL-37表达水平的差异。 方法 搜集2017年6—12月成都市公共卫生临床医疗中心住院的178例活动性肺结核患者(包括81例单纯肺结核患者、57例肺结核并发肺外结核患者和40例结核病并发糖尿病患者,分别作为B组、C组和D组;根据病情严重程度划分,分为重症肺结核患者79例和轻症肺结核患者99例)及同期在我院进行健康体检的100名医务人员(A组)作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定纳入人群维生素D[以25-羟基维生素D3(25-(OH)D₃)水平衡量]及LL-37的水平,分析不同类型肺结核患者与健康对照者25-(OH)D₃和LL-37水平的差异,以及肺结核严重程度与25-(OH)D₃和LL-37水平的关系。 结果 B组、C组和D组患者外周血25-(OH)D₃水平分别为(31.58±11.89)nmol/L、(25.68±13.57)nmol/L和(26.39±10.01)nmol/L,均明显低于A组的(40.57±14.32)nmol/L,差异均有统计学意义(t=4.61,P=0.000;t=6.48,P=0.000;t=5.72,P=0.000);LL-37水平分别为(26.97±10.29)μg/L、(30.75±10.16)μg/L和(31.84±11.36)μg/L,均明显高于A组的(24.38±4.57)μg/L,差异均有统计学意义(t=2.26,P=0.025;t=4.48,P=0.000;t=4.03,P=0.000)。与B组患者相比,C组和D组25-(OH)D₃水平均明显降低,LL-37水平均明显升高,差异均有统计学意义(t=2.64,P=0.008;t=2.52,P=0.011和t=2.14,P=0.032;t=2.29,P=0.022)。79例重症肺结核患者的25-(OH)D₃和LL-37水平分别为(24.59±12.36)nmol/L和(31.97±11.43)μg/L,明显低于轻症肺结核患者(99例)的25-(OH)D₃水平[(33.79±15.47)nmol/L],但高于轻症肺结核患者的LL-37水平[(27.32±10.69)μg/L],差异均有统计学意义(t=4.41,P=0.000;t=2.77,P=0.006)。 结论 活动性肺结核患者血清中维生素D水平明显低于健康人群,LL-37水平明显高于健康人群,且不同类型活动性肺结核患者血维生素D及LL-37表达水平存在差异。     

Sigma E基因对耻垢分枝杆菌五种药物敏感性的影响及机制研究

目的 探讨Sigma E (sigma factor E,SigE)基因影响耻垢分枝杆菌对5种药物的敏感性及其作用机制研究。方法 PCR法扩增出耻垢分枝杆菌sigE基因,克隆入质粒pMV261构建重组pMV261-SigE质粒,测序验证。重组质粒电转入耻垢分枝杆菌,Western blot检测SigE的表达。设立含空质粒转化菌为对照组,采用刃天青作为指示剂的微量滴定板法和菌落计数法检测pMV261-SigE重组耻垢分枝杆菌对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、左氧氟沙星和环丙沙星5种抗结核药物的敏感性。采用相应抗生素处理重组耻垢分枝杆菌48 h诱导细菌进入非复制持留状态,随后在含20 ng/mL的结核分枝杆菌复苏促进因子E (resuscitation-promoting factor E, RpfE)的7H9中静置培养2周,计数最大可能数和细菌生长数,测算复苏指数来了解SigE对药物敏感性的影响机制。结果 成功构建pMV261-SigE,经测序鉴定序列正确,Western blot检测到SigE在耻垢分枝杆菌中表达。与对照组相比,表达SigE重组耻垢分枝杆菌组对异烟肼、利福平等5种药物的相对荧光百分比高,敏感性下降。5组抗生素中,异烟肼、乙胺丁醇两种药物作用后pMV261-SigE重组耻垢分枝杆菌复苏指数明显高于对照组。结论 SigE可通过促进耻垢分枝杆菌进入持留状态影响异烟肼和乙胺丁醇作用的敏感性。     

四对结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统基因功能的初步研究

目的探讨结核分枝杆菌毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系统中的4对基因的功能,为研究结核分枝杆菌的传播机制提供基础科学数据。方法选取结核分枝杆菌TA系统VapBC家族中4对基因,包括VapC 4个毒素基因(Rv1720c、Rv2103c、Rv2494和Rv3408)和VapB4个抗毒素基因(Rv1721c、Rv2104c、Rv2493、Rv3407),在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌中分别构建严谨型阿拉伯糖诱导质粒体系及乙酰胺诱导穿梭质粒体系观察VapC对细菌生长的抑制作用,及其对应的VapB解除抑制作用。结果在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌的实验结果一致,Rv2103c具有一定抑制作用和Rv2104c具有消除抑制作用,其余3对毒素-抗毒素基因未见到明显的对细菌生长的抑制和消除抑制的作用。结论成功构建了VapBC家族在大肠杆菌及耻垢分枝杆菌中的表达体系,并发现了一对TA系统基因对细菌生长的抑制和消除抑制的作用。     

杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路诱导MTB感染巨噬细胞发生自噬的研究

目的 对杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬进行研究,从而探讨杨梅素抗结核作用的机理。方法 用CCK8法检测杨梅素对细胞增殖的影响,确定安全的用药范围;以H37Ra菌株感染的小鼠巨噬细胞Raw 264.7为模型组,并设空白组和药物处理组。按感染复数(MOI,即细菌∶细胞=10∶1)加入模型组、药物处理组,共孵育4h后,磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次以弃掉未进入胞内的MTB。药物处理组分别用不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)的杨梅素作用24h, Western blot法检测自噬相关蛋白即“微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和p62”表达水平的变化,并以此筛选出杨梅素促进自噬的最佳作用浓度;100μmol/L杨梅素作用于感染细胞72h后,0.1%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)冰上裂解细胞10min,菌落形成单位(CFU)法检测巨噬细胞胞内荷菌量;杨梅素作用感染细胞不同时间(30、60、180min)后Western blot测定PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt、mTOR的磷酸化水平。以Image J软件做蛋白定量分析,用GraphPad Prism 7.0制图,采用单因素方差分析(ANOVA)进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 杨梅素在100μmol/L浓度以下细胞生存率在90%左右,对细胞毒性较小;Western blot结果显示:与模型组(0.52±0.01)相比,杨梅素不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)处理均能促进LC3Ⅱ的表达(0.59±0.02、 0.65±0.01、 0.71±0.01、 0.83±0.01),差异有统计学意义(t=2.97、P=0.04,t=7.91、P=0.00,t=9.77、P=0.00,t=16.37、P=0.00);而较模型组p62蛋白(0.86±0.02),药物处理亦能抑制p62的表达(0.72±0.01、0.86±0.00、0.60±0.02、0.58±0.01),25μmol/L杨梅素处理组差异无统计学意义(t=0.81、P=0.46),12.5、50、100μmol/L处理组差异均有统计学意义(t=6.50、P=0.00,t=9.53、P=0.00,t=12.01、P=0.00);杨梅素促进自噬的最佳药物浓度为100μmol/L;100μmol/L杨梅素作用于感染细胞72h后,对胞内MTB的抑制率为21.02%;模型组细胞在MTB感染后30、60、180min时,PI3K/Akt/mTOR通路中Akt蛋白的磷酸化(p-Akt)水平(1.23±0.01、1.52±0.01、0.74±0.02)明显增加,而杨梅素作用相同的时间后,可明显抑制Akt蛋白的磷酸化(0.99±0.01、0.96±0.01、0.43±0.01),差异有统计学意义(t=27.60、P=0.00,t=30.06、P=0.00,t=18.60、P=0.00);而模型组磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白水平仅在MTB感染后180min(0.57±0.00)明显增加(t=94.61、P=0.00),杨梅素作用180min亦能抑制mTOR蛋白的磷酸化(0.46±0.01),差异有统计学意义(t=21.60、P=0.00)。结论 杨梅素通过抑制Akt和mTOR蛋白的磷酸化来抑制PI3K/Akt/mTOR通路,从而诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬来杀灭胞内的MTB。     

阿舒瑞韦联合达拉他韦治疗慢性丙型肝炎患者初步疗效及其病毒准种变化和耐药变异特征分析*

目的 观察应用阿舒瑞韦(ASV)联合达拉他韦(DCV)治疗慢性丙型肝炎(CHC)或代偿期丙型肝炎肝硬化患者的初步疗效,并分析复发患者丙型肝炎病毒(HCV)耐药变异和准种变化特征。方法 27例CHC和13例丙型肝炎肝硬化患者接受ASV联合DCV治疗24周,随访12周。纳入患者均为HCV 1b基因型感染。结果 在随访结束时,38例(95.0%)获得持续病毒学应答(SVR),2例治疗失败的患者基线均存在NS5A抑制剂相关的耐药变异;在治疗过程中有7例(17.5%)患者出现血清谷丙转氨酶或尿酸升高和血小板或血红蛋白下降;1例治疗失败的患者基线和复发时均存L31V+Y93H NS5A抑制剂相关的耐药变异,但复发时血清耐药株的比例显著高于基线时(100.0%+100.0%对 2.1%+56.2%),复发血清HCV各基因片段准种复杂度(Sn为0.91±0.02对0.40±0.07,t=19.127,P<0.001)和多样性(d为17.70±6.63对1.65±0.36,t=6.75,P<0.001;dN为3.55±2.18 对1.37±0.41,t=2.801,P=0.026;dS为48.11±10.06对2.06±0.90,t=13.598,P<0.001)均显著低于基线血清,Tajima中性检验提示复发时血清HCV各基因片段的D值显著低于基线血清(1.84±1.20对-2.30±0.18,t=10.352,P<0.001)。结论 ASV联合DCV治疗HCV 1b基因型感染的CHC和丙型肝炎肝硬化患者具有良好的近期疗效和安全性,存在NS5A抑制剂相关耐药变异者可能导致治疗失败。     

细粒棘球绦虫EgM123重组耻垢分枝杆菌疫苗在小鼠体内的表达及其免疫应答

目的构建表达细粒棘球绦虫成虫特异性基因EgM123的耻垢分枝杆菌疫苗株,接种BALB/c小鼠,观察其免疫原性。方法 PCR扩增EgM123片段,定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261中,构建重组质粒pMV261-EgM123。连接产物转化至大肠埃希菌DH5α中,培养后提取质粒,测序确定阅读框架正确,后电穿孔转入耻垢分枝杆菌,构建表达EgM123的重组耻垢分枝杆菌疫苗(rMS-EgM123),经热诱导后采用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白表达。在培养过程中连续检测菌液A600值,绘制重组菌生长曲线。取重组菌接种小鼠,检测基础接种和加强免疫接种后血清特异抗体水平。结果 PCR扩增出大小为594bp的EgM123片段,EgM123基因正确插入到穿梭质粒pMV261中,测序鉴定阅读框架正确。重组耻垢分枝杆菌连续传10代培养,重组质粒DNA序列未发生变异。Western blot检测表达产物能被抗EgM123鼠血清识别。用重组耻垢分枝杆菌疫苗加强免疫后的小鼠血清特异性抗体呈持续上升趋势,单次加强免疫8周后抗体水平(A405值为2.504±0.659)显著高于亚单位疫苗组(P0.05)。结论重组耻垢杆菌疫苗菌能表达细粒棘球绦虫成虫EgM123蛋白,且该重组疫苗可通过加强免疫增强基础免疫诱导小鼠产生的抗体水平。     

保护性肺通气模式在结核性毁损肺全肺切除术麻醉中的价值

目的 探讨小潮气量通气和呼气末正压通气(positive end expiratory pressure,PEEP)结合压力控制通气(pressure controlled ventilation,PCV)对结核性毁损肺(tuberculous destroyed lung,TDL)患者全肺切除术单肺通气(one-lung ventilation, OLV)呼吸力学、肺内分流(Qs/Qt)、PaO₂和术后肺部感染等的影响。方法 经首都医科大学附属北京胸科医院医学伦理委员会批准,选取2016年8月至2018年3月在首都医科大学附属北京胸科医院接受择期开胸全肺切除手术的TDL患者为研究对象,共48例。采用随机数字表法将患者分为观察组和对照组,每组24例。观察组OLV期间潮气量6ml/kg,OLV开始即刻给予PCV通气,然后给予7cm H₂O(1cm H₂O=0.0098kPa)的PEEP通气;对照组OLV期间潮气量8ml/kg。记录OLV前(T₁)、OLV开始后30min(T₂)及全肺切除术后5min (T₃)时气道峰压(P_peak)和平台压(P_plat);T₁、T₂、T₃和术后6h(T₄)抽取动静脉血,测血气指标pH、PaCO₂和PaO₂,并计算Qs/Qt 值;术后第1天、第7天行临床肺部感染评分。计量资料组间比较,若方差齐,采用t检验,若方差不齐采用t'检验;组内比较采用重复测量设计的方差分析;计数资料比较采用χ²检验,均以P<0.05为差异有统计学意义。结果 T₂时与对照组比较,观察组P_peak明显降低[观察组:(21.0±2.2)cm H₂O;对照组:(22.4±2.2)cm H₂O;t=-2.446,P=0.021];T₂时与对照组比较,观察组 P_plat明显降低[观察组:(19.7±2.2)cm H₂O;对照组:(21.0±2.7)cm H₂O;t=-3.610,P=0.001];T₃时与对照组比较,观察组pH明显降低[观察组:7.3±0.053;对照组,7.37±0.047;t=-3.000,P=0.006];T₂时与对照组比较,观察组PaCO₂明显升高[观察组:(44.0±2.2)mm Hg (1mm Hg=0.133kPa);对照组:(35.7±4.0)mm Hg;t=7.091,P=0.000];T₂时与对照组比较,观察组Qs/Qt 明显降低[观察组:(21.4±5.4)%;对照组:(25.4±6.8)%;t=-0.256,P=0.020];T₄时与对照组比较,观察组PaO₂/FiO₂明显升高[观察组:(181.2±29.0)mm Hg;对照组:(159.1±25.2)mm Hg;t=2.938,P=0.009]。术后第1天,与对照组比较,观察组肺部感染评分明显降低[观察组:(4.7±0.6)分;对照组:(5.2±0.9)分;t=-2.567,P=0.017]。结论 小潮气量和PEEP结合PCV的通气模式,在TDL患者开胸全肺切除手术OLV中可以较好的降低OLV期间气道压力、降低Qs/Qt,改善术后PaO₂,降低术后第1天肺部感染的评分。     

关节融合术与改良叉状成形术治疗全肘关节结核的疗效分析

目的 分析肘关节病灶清除术后行关节融合术与改良叉状成形术治疗肘关节结核的疗效,探讨叉状成形术在肘关节结核治疗中的价值。方法 选择2009年2月至2018年2月于陕西省结核病防治院行手术治疗并随访12个月以上的48例成人全肘关节结核患者,其中2009年2月至2015年7月的20例患者采用病灶清除术后行关节融合术治疗(融合术组),2015年8至2018年2月的28例患者采用病灶清除术后行改良叉状成形术治疗(成形术组),比较两组患者患肘关节在手术前与术后12个月的屈伸和旋转活动度、疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)及Mayo肘关节功能评分(Mayo elbow performance score,MEPS),以评估患肘与前臂功能(运动、稳定性、疼痛、日常生活功能)的手术治疗效果,并观察随访情况。采用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析,组间计量资料比较采用t检验,计数资料采用χ²检验,均以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 48例患者均随访12~24个月,平均(13.4±5.5)个月。45例患者均一期治愈,3例患者术后切口未闭合经局部换药,二次手术清创后闭合。 融合术组关节活动度均由术前的屈伸(7.8±6.8)°和旋转(5.5±5.1)°降低到术后12个月时的0°(t=5.111、4.819,P值均<0.001);VAS和MEPS评分由术前的(7.3±1.4)分和(7.3±5.0)分改善到术后12个月时的(1.0±1.0)分和(17.5±4.7)分(t=21.642、5.832, P值均<0.001)。成形术组关节活动度分别由术前的屈伸(8.8±6.9)°和旋转(6.4±5.9)°提高到术后12个月时的(58.8±15.4)°和(37.0±11.8)°(t=16.733、11.569, P值均<0.001);VAS和MEPS评分分别由术前的(7.5±1.2)分和(6.3±4.8)分改善到术后12个月时的(1.1±0.9)分和(20.5±3.9)分(t=22.055、13.587,P值均<0.001)。成形术组术后12个月时的屈伸、旋转活动度和MEPS评分均明显优于融合术组(t=20.222,P<0.001;t=16.560,P<0.001;t=2.424,P=0.037);VAS评分差异无统计学意义(t=0.527, P=0.076)。结论 在规范的抗结核药物治疗基础上,一期病灶清除术后行叉状成形术在改善患肘关节活动度和日常生活功能方面均明显优于病灶清除术后行关节融合术,更有利于治疗成人晚期全肘关节结核。     

慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞杀伤细胞凝集素样受体G1表达及其对NK细胞杀伤功能的影响*

目的 探讨CHB患者外周血NK细胞杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1(KLRG1)表达的变化以及其对NK细胞杀伤功能的影响。方法 在120例CHB患者和120例健康体检者,抽取外周血,提取外周血单个核细胞,使用流式细胞仪检测NK细胞、KLRG1⁺ NK细胞和分泌γ-干扰素的NK细胞百分率,体外检测NK细胞对LX-2细胞的杀伤力。结果 CHB患者外周血NK细胞百分率为(17.2±7.7)%,显著高于对照组 [(11.3±6.9)%,t=9.85,P=0.01】, KLRG1⁺NK细胞百分率为(52.2±20.3)%,显著高于对照组 【(30.3±16.9)%,t=6.57,P=0.01】,分泌IFN-γ的NK细胞百分率为(14.6±3.8)%,显著低于对照组【(42.5±9.5)%,t=11.24,P=0.01】;CHB患者外周血NK细胞CD38、CD69、HLA-DR和TRAIL表达均显著高于对照组(P=0.012,P=0.015,P=0.025,P=0.019);CHB患者NK细胞诱导LX-2细胞发生早期凋亡率为11.5% (6.6%～13.7%),晚期凋亡率为7.2% (5.1%～8.5%),与对照组的15.4% (11.5%～24.3%)和13.5% (8.1%～20.4%) 比,显著降低 (U=6.50, P=0.025;U=2.02,P=0.002) 。结论 CHB患者NK细胞表达KLRG1增强,通过减少分泌INF-γ而导致其杀伤功能减弱,可能系造成慢性感染的重要原因。     

个案管理模式在结核性脑膜炎患者治疗管理中的评价分析

选择2015年1月1日至2016年12月31日在新乡医学院第一附属医院初次治疗的60例结核性脑膜炎患者作为研究对象。60例患者分别入住4个病区,其中第一、二病区的患者列入观察组,第三、四病区的患者列入对照组,每组各30例患者。对照组采用常规的健康教育模式,于入院时介绍住院规则、常用检查和化验的注意事项,发放健康教育读物;观察组在常规健康教育模式的基础上建立个人健康教育档案,实施个案管理的模式,由个案管理护士进行个体评估,制订个案管理计划并实施。出院时,观察组对护士工作满意25例(83.3%),基本满意5例(16.7%),不满意0例(0.0%),满意度(100.0%,30/30)明显高于对照组[满意15例(50.0%),基本满意11例(36.7%),不满意4例(13.3%);满意度为86.7%(26/30)],差异有统计学意义(χ ²=8.75,P=0.013);观察组对结核性脑膜炎的治疗知识、饮食知识、休息和运动注意事项、药物知识、防止出现耐药措施等知识的得分[分别为(18.54±0.23)、(19.14±0.32)、(18.54±0.31)、(19.01±0.11)、(19.16±0.25)分]均明显高于对照组[分别为(13.41±0.43)、(15.21±0.33)、(15.21±0.56)、(14.54±0.14)、(15.76±0.34)分],差异均有统计学意义(t=12.48,P=0.005;t=11.63,P=0.012;t=8.91,P=0.021;t=11.98,P=0.010;t=10.30,P=0.016);出院后1、3、6个月观察组服药依从性高的比率分别为100.0%(30/30)、93.3%(28/30)、86.7%(26/30),均明显高于对照组[分别为85.7%(24/28)、60.7%(17/28)、53.6%(15/28)],差异均有统计学意义(χ ²=4.60,P=0.032;χ ²=8.86,P=0.003;χ ²=7.66,P=0.006)。个案管理模式应用于结核性脑膜炎患者的管理,能提高患者对护理工作的满意度,提高患者对疾病知识的掌握程度和遵医行为。     

医护一体化模式在肺结核围术期患者护理中的实施效果分析

目的 探究医护一体化模式在肺结核围术期护理中的应用效果。方法 将2017年6月实施医护一体化模式前后的患者根据护理模式分为2组,分别为实施前组、实施后组,采用数字表法各随机选取100例患者。实施前组为传统模式:平行线式管理模式,医生下医嘱,护士被动执行,互不交叉。实施后组采用医护一体化模式,医生和护士在平等自主、互相尊重和信任且具有一定专业知识与能力的前提下,通过开放的沟通和协调,共同决策,分担责任,为患者提供医疗护理服务。分别比较两组患者的肺功能指标[第1秒用力呼气容积(FVE₁)、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积百分比(FVE₁%)]、平均住院时间、并发症发生率、患者满意度情况。结果 术后7d肺功能检测:医护一体化实施前组FVE₁、FVC、FVE₁%分别为(1.79±0.30)L、 (2.49±0.55)L、(45.79±3.13)%;实施后组分别为(2.05±0.38)L、 (3.05±0.61)L、(49.05±5.38)%;两组比较,t值分别为5.371、6.824、5.243,P值分别为0.016、0.010、0.017,差异均有统计学意义。实施前组平均住院日为(14.23±2.88)d,实施后组为(10.45±2.15)d;两组比较,t=-10.523,P=0.004。实施前组拔管时间为(4.08±1.85)d,实施后组为(2.54±0.97)d;两组比较,t=-7.371,P=0.008;实施前组并发症发生率为19.00%(19/100),实施后组并发症发生率为3.00%(3/100);两组比较,χ ²=11.494,P=0.003。两组满意度比较,实施前组“很满意”者为61例,实施后组为 82例(χ ²=3.891,P=0.048);实施前组“一般满意”者为27例,实施后组为12例(χ ²=7.172,P=0.007);实施前组“不满意”者12例,实施后组为6例(χ ²=1.532,P=0.220)。医护一体化实施后组较实施前组平均住院日、拔管时间、并发症均下降,同时患者满意度增加。 结论 医护一体化模式能够促进肺结核患者围术期肺功能恢复,缩短住院时间,减少并发症,同时可提高患者的医疗满意度。     

改良单叠氮丙啶-荧光定量PCR法的建立及其检测抗结核药物活性的价值

目的 建立改良单叠氮丙啶(propidium monoazide xx, PMAxx)-荧光定量PCR(qPCR)鉴定MTB活菌和热灭活菌的方法,并探讨PMAxx-qPCR进行抗结核药物体外活性检测的价值。方法 通过活菌和热灭活菌优化 PMAxx针对MTB菌株H37Rv的预处理条件,包括曝光时间、暗孵育时间、PMAxx浓度,以及靶标DNA片段长度等。通过绘制量效曲线和建立循环阈值(Cq)与菌负荷的标准曲线,应用PMAxx-qPCR法计算测定异烟肼(INH)、利福平(RFP)的体外抗菌活性,评价检测敏感度,并分别与微孔板Alamar Blue(MABA)法和菌落形成单位(CFU)计数法进行比较,菌落计数采用独立样本t检验进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 当细菌负荷设定为10 ⁷CFU/ml时,在PMAxx浓度为10μmol/L、暗孵育10min后曝光15min可有效鉴别活菌、死菌(ΔCq_死-活=6.772±0.453),且使用>200bp靶标片段可更有效地反映活菌、死菌的差异。PMAxx-qPCR方法在药物作用后3d可获得与MABA法一致性良好的最低抑菌浓度(MIC)检测结果(INH:0.049~0.076μg/ml与0.032~0.064μg/ml,t=0.782,P=0.491;RFP:0.102~0.145μg/ml与0.051~0.079μg/ml,t=2.828,P=0.066)。定量标准曲线Cq与菌计数(lgCFU/ml)呈良好的线性关系(R ²=0.9863),最低检测限为10 ²CFU/ml,且PMAxx-qPCR方法和CFU计数方法测算16×MIC、8×MIC、4×MIC、2×MIC和1×MIC浓度的INH的抗菌计数分别为(4.376±0.344)和(4.325±0.318)、(4.232±0.106)和(3.936±0.194)、(4.122±0.277)和(3.874±0.105)、(3.950±0.113)和(3.675±0.250)、(3.770±0.228)和(3.618±0.257)CFU/ml,两种方法计数比较差异均无统计学意义(t值分别为0.165、1.894、1.186、1.419和0.626,P值分别为0.880、0.199、0.357、0.292和0.595),而16×MIC、8×MIC、4×MIC、2×MIC和1×MIC浓度的RFP的抗菌计数分别为(4.577±0.216)和(4.675±0.250)、(4.445±0.054)和(4.374±0.675)、(3.627±0.173)和(3.154±0.076)、(1.946±0.359)和(2.159±0.083)、(1.552±0.423)和(0.960±0.202)CFU/ml,两种方法计数比较差异均无统计学意义(t值分别为0.469、0.199、3.535、0.784、1.777,P值分别为0.671、0.855、 0.071、0.490、0.174)。结论 建立的PMAxx-qPCR方法稳定,可应用于一线抗结核药物INH和RFP的活性检测,敏感度高且快速准确。     

溃疡穿孔型Ⅵ型支气管结核患者经支气管镜氩气刀联合冷冻及异烟肼灌注治疗的疗效评价

目的 评估经支气管镜氩气刀联合冷冻及异烟肼灌注治疗溃疡穿孔型Ⅵ型支气管结核(endobronchial tuberculosis,EBTB)患者的临床效果。方法 搜集2013年1月至2018年8月湖南省胸科医院收治的符合纳入标准的65例溃疡穿孔型Ⅵ型EBTB患者的临床资料,将2017年1月之前收治的31例接受经支气管镜冷冻+异烟肼灌注治疗的患者作为对照组,将2017年1月至2018年8月前收治的34例接受经支气管镜氩气刀+冷冻+异烟肼灌注治疗的患者作为观察组。观察并分析两组患者瘘口愈合时间、治疗效果及并发症情况。采用SPSS 19.0软件进行数据的统计学分析,计量资料采用t检验或秩和检验,计数资料采用χ ²检验,均以P<0.05为差异有统计学意义。结果 对照组和观察组患者分别进行经支气管镜介入治疗241例次和222例次,例均治疗次数分别为(7.81±2.20)次/例和(6.53±2.05)次/例,差异有统计学意义(t=2.425,P=0.018)。对照组行冷冻+异烟肼灌注治疗次数(3.45±0.91)次/例,高于观察组行氩气刀+冷冻+异烟肼灌注治疗(2.59±0.82)次/例(t=3.987,P<0.001)。对照组瘘口愈合中位时间[12.0(10.0, 12.0) 周]长于观察组[10.0(8.0,12.0)周](Z=-2.001,P=0.045)。对照组和观察组患者治疗后痊愈和有效者分别为29例和33例、2例和1例,治疗有效率均为100.00%(χ ²=0.000,P=1.000)。两组患者在治疗过程中均未出现与治疗相关的支气管-纵隔瘘、大出血或氩气刀相关气体栓塞等严重并发症。结论 对溃疡穿孔型Ⅵ型EBTB行经支气管镜氩气刀联合冷冻及异烟肼灌注治疗,可减少治疗次数、缩短瘘口愈合时间,安全有效,值得推广。     

经胸壁超声导入三联药品辅助治疗结核性胸膜炎的临床价值

目的 探讨经胸壁超声导入三联药品辅助治疗结核性胸膜炎(tuberculous pleurisy, TBP)的临床价值。方法 搜集海南省人民医院自2016年1月至2018年12月收治的符合入组条件的结核性胸膜炎患者76例,按入院顺序,采用随机数字表法分为观察组与对照组,每组38例。两组均给予2H-R-Z-E/10H-R全身化疗+胸腔穿刺抽液术治疗,在此基础上,观察组辅以经胸壁超声导入异烟肼+利福平+尿激酶三联药品治疗,对照组则给予异烟肼+利福平+尿激酶三联药品单纯贴于胸壁皮肤上治疗。比较两组患者的治疗疗效,计数资料以“$\bar{x}$±s”表示,采用t检验;计量资料以“率(%)”表示,采用χ²检验,均以P<0.05为差异有统计学意义。结果 观察组与对照组患者治疗总有效率分别为94.74%(36/38)和78.95%(30/38),差异有统计学意义(χ²=4.146, P=0.042)。观察组与对照组患者壁层胸膜厚度在治疗2个月时分别为(5.29±0.21)mm和(5.98±0.25)mm;治疗6个月时分别为(3.25±0.39)mm和(3.75±0.41)mm;疗程结束后6个月时分别为(2.15±0.25)mm和(2.62±0.34)mm,差异均有统计学意义(t值分别为13.028、29.669和47.132,P值分别为0.000、0.000和0.000)。观察组和对照组患者胸腔积液完全吸收例数的比率在治疗6个月时分别为65.79%(25/38)和42.11%(16/38);疗程结束6个月时分别为94.74%(36/38)和78.95%(30/38),差异均有统计学意义(χ ²值分别为4.290、4.146,P值分别为0.038、0.042)。观察组和对照组用力肺活量(forced vital capacity, FVC)比较,治疗2个月时分别为(3.86±0.68)L和(3.51±0.61)L;治疗6个月时分别为(4.28±0.90)L和(3.74±0.84)L;疗程结束6个月时分别为(4.68±0.75)L和(3.98±0.79)L;两组比较,差异有统计学意义(t值分别为5.578、4.894、35.307,P值分别为0.021、0.000、0.000)。观察组和对照组1s用力呼气量(FEV₁)比较,在治疗2个月时分别为(3.54±0.67)L和(3.38±0.69)L;治疗6个月时分别为(3.89±0.72)L和(3.38±0.69)L;疗程结束6个月时分别为(4.23±0.75)L和(3.54±0.71)L;两组比较,差异均有统计学意义(t值分别为4.541、3.153、16.962,P值分别为0.036、0.000、0.000)。观察组和对照组深吸气量(inspiratory capacity, IC)比较,治疗6个月时分别为(2.76±0.42)L和(2.30±0.38)L;疗程结束6个月时分别为(2.98±0.45)L和(2.49±0.43)L;两组比较,差异均有统计学意义(t值分别为5.007、23.551,P值分别为0.000、0.000)。结论 经胸壁超声导入异烟肼+利福平+尿激酶三联药品治疗可进一步提升结核性胸膜炎的临床疗效,明显减轻胸膜厚度,加快胸腔积液吸收,改善肺功能。     

斜前方入路腰椎椎间融合术治疗腰椎布鲁杆菌性脊柱炎的临床分析

目的 探讨斜前方入路腰椎椎间融合术治疗腰椎布鲁杆菌性脊柱炎的临床效果。方法 回顾性分析2015年3月至2017年10月青岛市胸科医院收治的行斜前方入路腰椎椎间融合术治疗的腰椎布鲁杆菌性脊柱炎20例,分析其临床症状、手术时间、出血量、并发症、治疗转归、植骨融合的情况,以及手术前后视觉模拟评分法(VAS)评分、白细胞(WBC)、血红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)检测水平的变化情况。结果 本组手术中时间40~90min,平均(65.00±8.21)min;出血量200~400ml,平均(290.53±37.25)ml。在手术显露过程中出现腹膜损伤1例,术中给予修补;腰椎4~5手术导致交感神经链损伤1例,术后对侧神经根疼痛再手术1例,均治愈。末次随访VAS评分[(1.31±0.96)分]、WBC[(4.56±1.02)×10 ⁹/L]、ESR[(25.53±3.56)mm/1h]、CRP[(13.61±7.65)mg/L]较术前[分别为(7.43±1.07)分,(9.65±2.38)×10 ⁹/L,(81.22±12.27)mm/1h,(59.08±20.39)mg/L]明显改善(t=29.37,P=0.000;t=12.49,P=0.034;t=39.93,P=0.000;t=15.82,P=0.008)。术后随访6~18个月,无1例复发,20例植骨融合均满意。 结论 斜前方入路腰椎椎间融合术创伤小、出血少、康复快,是治疗腰椎布鲁杆菌性脊柱炎理想的微创技术。     

病灶清除术治疗结核性脓胸并发外周局限性肺结核病灶的效果观察

目的 对比病灶清除术与肺楔形切除术治疗结核性脓胸并发肺结核外周局限性结核病灶的效果,探讨病灶清除术治疗的安全性、有效性。方法 回顾性分析2008年1月至2018年1月西安市胸科医院109例结核性脓胸并发外周局限性肺结核患者资料,根据术中处理肺结核病变手术方式不同分为肺结核病灶清除组(29例)和肺楔形切除组(80例)。对比两组患者手术时间、术中出血量、术后肺漏气发生率、术后漏气至漏气消失时间、带管时间、术后残腔发生率、术后住院时间、住院费用。所有患者术后均随访3年。结果 病灶清除组术后17例出现肺持续性漏气,楔形切除组术后63例发生肺持续性漏气,发生率分别为58.6%(17/29)和78.8%(63/80),差异有统计学意义(χ ²=4.42,P=0.036)。两组患者术后带管时间分别为(7.2±2.7)d和(8.2±2.3)d,差异有统计学意义(t=-2.01,P=0.046)。两组患者术后住院时间分别为(14.2±2.1)d和(15.1±1.9)d,差异有统计学意义(t=-2.15,P=0.034);住院费用分别为(29016.1±2299.7)元和(41617.2±4244.5)元,差异有统计学意义(t=-15.17,P=0.000)。 结论 肺结核病灶清除术治疗结核性脓胸并发外周局限性肺结核病变安全、有效,住院费用低于楔形切除术。     

臂丛神经阻滞在肩关节结核手术中的作用

目的 探讨肌间沟臂丛神经阻滞在肩关节结核手术中的作用。方法 选择2014年10月至2018年10月首都医科大学附属北京胸科医院择期行肩关节结核手术的42例患者,按照随机数字表法将患者分为A组(23例,采用臂丛神经阻滞+全身麻醉)与B组(19例,采用全身麻醉)。其中A组有1例患者肩因关节结核并发颈淋巴结结核病变未行臂丛神经阻滞,1例患者因阻滞效果不好予以剔除,最终纳入21例。两组患者在相同麻醉深度下,记录患者手术切皮前、切皮时的心率(HR)和平均动脉压(MAP)值,以及术中瑞芬太尼使用量、盐酸尼卡地平应用情况;同时使用数字等级评定量表(numerical rating scale,NRS)进行疼痛评分,记录患者术后6与24h 的NRS 评分和镇痛药物输注量。结果 A组患者切皮时的MAP值[(75.6±10.7)mm Hg;1mm Hg=0.133kPa]、 HR值[(75.1±13.6)次/min],及术中降压药的使用率(14.3%,3/21)均明显低于B组[分别为(88.2±10.0)mm Hg、(80.9±14.8)次/min、52.6%(10/19)](t=3.816,P=0.000;t=2.166,P=0.037;χ ²=6.686,P=0.017)。A组患者瑞芬太尼使用量[(0.4±0.1)mg]、术后6h镇痛泵用药量[(9.1±0.3)ml]、术后6h疼痛评分[(1.7±1.2)分]、术后24h镇痛泵用药量[(38.4±4.1)ml]均明显低于B组[分别为(0.7±0.1)mg、(12.0±1.6)ml、(3.3±1.1)分、(42.7±5.8)ml](t=10.364,P=0.000;t=2.845,P=0.010;t=4.921,P=0.000;t=2.650,P=0.013)。结论 肌间沟臂丛神经阻滞+全身麻醉在肩关节结核手术中能减少切皮时血压波动,以及术中降压药和阿片类药物的使用量,对手术的顺利实施和术后镇痛及康复有重要作用。     

服用利福平后两个时间点监测血药浓度的研究

目的 评价以服用利福平后2h和6h两个时间点血药浓度(C_2h和C_6h)作为最大血药峰浓度(C_max)指导临床用药的可行性。方法 收集2016年11月至2017年11月深圳市第三人民医院收治的确诊为活动性结核病且符合入组标准的148例患者,采用高效液相色谱法监测患者服用利福平1周后的C_2h和C_6h血药浓度水平资料,以国际通用利福平的血药C_max(8~24μg/ml)为标准,采用SPSS 19.0软件比较两个时间点血药浓度水平及吸收不良和吸收延迟情况,并初步分析低血药浓度组(未达标者)与正常血药浓度组在性别、年龄、BMI、利福平使用量、并发糖尿病、并发乙型肝炎、血清白蛋白水平等方面的差异,其中计量资料以“ \bar{x} ±s”表示,采用t检验;计数资料的比较采用χ ²检验。均以P<0.05为差异有统计学意义。结果 24.3%(36/148)的患者利福平C_2h血药浓度未达标,但其中有13例(36.1%,13/36)服药后C_6h血药浓度达标,共计125例(84.5%,125/148)在服药后6h达标,利福平延迟吸收率为10.4%(13/125)。低血药浓度组与正常血药浓度组在男性[60.9%(14/23)和68.8%(86/125)]、年龄[(36.9±4.2)岁和(38.2±3.5)岁]、BMI[ (21.5±4.0)和(22.9±3.7)]、利福平450mg/d使用量[60.9%(14/23)和43.2%(54/125)]、并发糖尿病[8.7%(2/23)和22.4%(28/125)]、并发乙型肝炎[4.3%(1/23)和9.6%(12/125)]、血清白蛋白水平[(42.3±4.4)g/L和(40.9±3.2)g/L]等方面的差异均无统计学意义(χ ²=0.558,P=0.455; t=-1.585,P=0.115;t=-1.647,P=0.102;χ ²=2.442,P=0.118;χ ²=2.257,P=0.166;χ ²=0.669,P=0.694;t=1.457,P=0.157)。结论 服药后两个时间点监测利福平血药浓度水平能更准确反映利福平在体内的吸收情况,但未发现相关影响因素,今后将扩大样本量做进一步研究。