一种防脱玻片的制作方法

玻片的处理是做好免疫组化染色的重要步骤之一，如果处理不当，在染色过程中出现掉片，不但影响日常工作，也浪费试剂。多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine)具有良好的防脱片效果，为目前国内大多数病理实验室所采用。制作防脱玻片的方法有多种，我们采取两玻片反推法制作防脱玻片，操作简单，节省试剂。     

防止免疫组化染色组织脱片的处理方法

在免疫组化染色过程中,切片需要长时间在液体中浸泡,并要经受高温、高压、抗原修复的考验,因此脱片现象经常发生,尤其在组织处理不佳时更加明显,为了解决这一难题,我科做了大量的探索工作,最终找到了一种简便可行的方法,能有效防止脱片现象的发生.     

聚丙烯补片与脱细胞真皮基质补片及传统方法修复战伤性腹壁软组织缺损的比较

背景:近年来随着各种新型的人工合成修补材料问世,应用这类材料修补疾病所致的腹壁缺损也取得了很好的效果,但应用于战伤腹壁缺损的研究较少.目的:比较脱细胞真皮基质、聚丙烯补片以及传统方法修补战伤腹擘缺损的有效性和安全性.设计、时间及地点:随机对照动物实验.于2008-01/08 在解放军第四军医大学西京医院及唐都医院动物实验外科实验室完成.材料:脱细胞真皮基质由烟台正海生物技术有限公司提供;聚丙烯补片购于北京.方法:27只成年杂种犬制作腹部开放伤动物模型后,随机分为3组,分别以脱细胞真皮基质、聚丙烯补片,传统修复方法进行修补.主要观察指标:3组分别于术后1,3,6个月时取材行光镜检查及抗拉力强度测定.结果:全部动物无伤口裂开、无腹壁疝形成,脱细胞真皮摹质修补组脏面未与内脏粘连,聚丙烯补片修补组均与内脏粘连.组织切片苏木精-伊红染色检查表明脱细胞真皮基质较聚丙烯补片、传统修补更有利于成纤维细胞及血管形成,6个月内脱细胞真皮基质可逐渐降解替代:6个月时聚丙烯补片仍有炎症反应,表现了长期的异物影响:传统修补只是肌肉之间简单的瘢痕愈合,增殖较少,生长较慢.抗拉力试验结果提示在3个阶段除6个月时脱细胞真皮基质修补处与聚丙烯补片修补处抗拉力强度相等外,余均提示在抗拉力强度上脱细胞真皮基质修补处＞聚丙烯补片修补处＞传统方法修补处.结论:脱细胞真皮基质修复战伤腹壁缺损的效果等同于聚丙烯补片,均优于传统修复方法,安全性优于聚丙烯补片.     

脱细胞异体组织补片修复口腔黏膜缺损16例

目的:探讨脱细胞异体组织补片修复口腔黏膜缺损的方法及疗效.方法:对16例口腔黏膜缺损患者行脱细胞异体组织补片修复,并与同期12例行自体中厚皮片修复口腔黏膜缺损患者进行比较.结果:两种移植物均完全成活,脱细胞异体组织补片黏膜化进程快于自体皮片移植者,修复效果好,不良反应轻微.1例皮片移植病例有轻度异物感,2例颊部黏膜缺损皮片移植修复后张口轻度受限.结论:运用脱细胞异体组织补片行口腔黏膜缺损修复是一种效果好、并发症少、简单易行、值得推广的修复方法.     

防脱片剂在免疫组织化学染色中的应用

目的 对多聚-L-赖氨酸(Poly-L-Lysine)及APES进行比较,讨论哪种防脱片剂更实用.方法 任意选取2006年10月～2007年1月间100例需要进行免疫组织化学染色的常规石蜡组织,做4 μm连续切片,利用多聚-L-赖氨酸及APES处理过的玻片作为载玻片,行免疫组织化学染色,对防脱片效果进行比较.结果 经多聚赖氨酸及APES处理的载玻片掉片率分别为5%及1%.结论 APES更加经济、实惠,经其处理的载玻片保存时间更长,防脱片效果相对更好.在客观条件比较复杂的情况下,APES在防脱片效果方面优势更加明显,推荐应用APES作为免疫组织化学染色防脱片剂.     

犬同种异体脱钙骨基质复合细胞片层的体外培养与观察(英文)

背景:如何构建具有类似天然骨结构组织工程骨的问题是组织工程学发展的一个难题.细胞片层技术的出现,为其提供了新的途径.目的:观察细胞片层与脱钙骨基质的生物相容性及其在脱钙骨基质上的生长情况.设计、时间及地点:体外观察性实验,于2009-06/2009-09在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成.材料:利用温度感应培养基制备犬骨髓基质细胞片层;脱脂、脱钙、脱非胶原蛋白方法制备犬脱钙骨基质.方法:将温度感应技术制备刮取的细胞片层铺盖于脱钙骨基质表面,用含体积分数为10%胎牛血清及成骨诱导剂的DMEM培养液浸没培养.主要观察指标:扫描电镜下观察脱钙骨基质的结构及细胞片层在脱钙骨基质上的附着、生长情况.计算脱钙骨基质孔隙率和孔径大小.结果:扫描电镜下观察可见脱钙骨基质呈三维立体网孔结构.材料孔隙率约为.75%.平均孔隙直径为(250.11±98.89)μm,成正态性分布.扫描电镜下观察细胞片层在脱钙骨基质上的附着、生长状况良好,增殖迅速.结论:细胞片层与脱钙骨基质有较好的生物相容性,脱钙骨基质/细胞片层复合体能够应用于组织工程骨,为构建类似骨结构组织工程骨起到促进作用.     

皮肤撕脱伤的治疗修复

目的 探讨皮肤撕脱伤的修复治疗.方法 对56例皮肤撕脱伤患者在早期常规行清创术后均采用中厚皮片原位回植修复创面,同时处理合并损伤.结果 56例患者中,优17例(30.3%);良37例(66.1%),其中皮片成活90%以上者33例,成活80%以上者4例;差2例(3.6%),原因为回植皮片后皮下合并感染,后经换药或使用负压吸引后再次大部游离植皮术后愈合.所有患者均获6～18个月的随访,伤口均愈合,皮片成活后功能良好.结论 准确判断伤情和正确选用创面修复方法是确保治疗成功的关键.     

EDC⁃NHS交联的骨骼肌脱细胞支架对心肌细胞生物功能性的影响

目的 探讨利用骨骼肌脱细胞支架制备工程化心肌补片的方法,并评价其生物功能性.方法 取大鼠腹直肌进行脱细胞后进行EDC和NHS交联得到工程化骨骼肌脱细胞支架;观察脱细胞情况、微观结构和测定力学性能;通过体外细胞实验和qRT?PCR实验等评估骨骼肌脱细胞支架的生物相容性、心肌细胞功能化及内皮细胞血管化功能.结果 当EDC浓...     

冰冻切片技术经验探讨

目的探讨冰冻切片制作过程中的常见问题及解决方法。方法针对8 126例甲状腺、子宫、乳腺、脂肪、脑、卵巢、淋巴结、肺、皮肤、肠息肉等不同组织在冰冻切片制作过程中出现的组织脱片、组织收缩、制片困难及冰晶过多和染色时间长、染色效果不佳等问题进行改进。结果通过对取材组织的预处理,包埋剂用量的把握,冷冻时间的控制以及酒精灯和胶片的配合使用,圆满地解决了冰冻切片制作过程中的冰晶过多、、组织收缩、组织脱片等问题。结论冰冻切片中对组织取材、包埋、冷冻及染色的改进,有助于及时准确地制作出优质的冰冻切片,为明确诊断提供了良好的技术支持和条件保障。     

胰蛋白酶法和Trilon X-100法脱猪软骨细胞的比较

背景:作为修复软骨缺损的一种材料,脱细胞软骨基质已受到越来越多研究者的关注,但是制备脱细胞软骨基质的两种主要背景:作为修复软骨缺损的一种材料,脱细胞软骨基质已受到越来越多研究者的关注,但是制备脱细胞软骨基质的两种主要方法其脱细胞效果孰优孰劣尚不清楚.目的:对比胰蛋白酶法和Triton X-100法脱猪关节软骨细胞的效果.设计、时间及地点:对比观察,于2008-03/07在山西医科大学第二医院骨科中心实验室完成.材料:新鲜猪膝、髋关节软骨市场上购得.方法;选取新鲜猪关节软骨片分别置入2.5g/L胰酶溶液和2.5 g/L Triton X-100溶液中脱细胞处理,并以未经处理的新鲜软骨片作对照.主要观察指标:①大体观察脱细胞后关节软骨的外观形态.②免疫组织化学染色及扫描电镜下观察两种脱细胞方式对细胞外基质胶原的影响.③每组随机选取10片软骨片进行加载、卸载试验和拉断试验,测定断裂强度和断裂拉伸率.结果:①经过两种方法脱细胞后,软骨脱细胞基质在外观上与未脱细胞软骨差别甚微,只是颜色较软骨略白,触摸较未脱细胞基质柔软.②免疫组织化学染色及扫描电镜可见,胰酶法和Triton X-100法均彻底脱去了关节软骨上的细胞成分,胰酶法观察到胶原排列有序,纹理清晰,可见胰酶在脱细胞的同时对细胞外基质没有明显的破坏;Triton X-100法观察到胶原仍比较多,但纹理结构有些紊乱,可能是Triton X-100法脱细胞对细胞外基质进行了破坏.③新鲜关节软骨组、胰酶组和Triton X-100组断裂强度和断裂拉伸率相比,差异均无显著性意义.结论:两种方法均彻底脱去了关节软骨上的细胞成分,脱胰酶法脱猪关节软骨细胞的方法作用时间较短,胶原保存好,且成本较低.Triton X-100法脱细胞步骤较多,时间较长,对胶原结构有轻微的破坏,但对软骨的力学性能没有显著影响.     

四肢大面积皮肤撕脱伤42例治疗分析

目的探讨四肢大面积皮肤撕脱伤治疗方法与疗效。方法对42例四肢大面积皮肤撕脱伤行撕脱皮肤完全切下,修整成全厚皮片原位植皮缝合。结果Ⅰ期愈合35例,Ⅱ期愈合7例。结论四肢大面积皮肤撕脱伤只要彻底清创,修整撕脱皮肤为全厚皮片,然后原位回植,缝合或取健侧下肢全厚皮片补充,同时注意适当的固定方法,均能得到理想的治疗效果。     

介绍一种免疫组化染色防脱片制作方法

免疫组化是一种多步骤、多环节、多因素影响的实验技术,尤其是AP的发展成熟,高压及热处理技术在抗原修复中的广泛应用,进一步要求组织切片提高对物理化学的耐受能力,否则易产生组织脱片,造成人力物力的损耗并延长了诊断的时效,所以高品质的防脱片技术能更好地保证病理诊     

大面积皮肤撕脱伤治疗体会

目的　探讨大面积皮肤撕脱伤的治疗方法。方法　采用将撕脱皮肤修剪成全厚皮肤再植回原处治 疗。结果　皮片平均成活率为95%,剩余创面经换药或Ⅱ期中厚皮片补充植皮获得愈合。大面积皮肤撕脱伤,如 果软组织创面血供良好,撕脱皮肤切除皮下脂肪组织后相当于全厚皮片,再植回原处靠渗出的组织液而成活。结 论　将撕脱皮肤经过处理后再植回原处治疗大面积皮肤撕脱伤是一种较好的治疗方法。     

骨髓活检组织前脱钙法与后脱钙法的体会

鉴于骨髓组织含有大量的钙盐而非常坚硬致密,不能直接进行石蜡制片.需经过脱钙处理后,才能进行切片、HE染色、特殊染色和免疫组化染色[1].一种好的脱钙方法能够提高骨髓活检组织的制片质量,提高HE染色和免疫组化染色的效果,更好地满足临床病理的精准诊断.目前常用的方法是前脱钙法即传统脱钙法:在脱水前采用4％盐酸甲醛溶液先行脱...     

组织病理学切片制作过程中脱片原因分析

在组织学和病理学教学及临床诊断中,观察的绝大多数都是用常规染色的石蜡切片.在制作石蜡切片的染色过程中,作者经常遇到组织片从载玻片上脱落的现象,这不仅造成材料的浪费,而且造成前期取材、固定、切片、贴片等大量工时的浪费.     

不同脱钙液对牙齿牙周联合石蜡切片HE染色的影响

目的探讨不同脱钙液对牙齿牙周联合切片HE染色质量的影响。方法选用10%乙二胺四乙酸钠（EDTA）、复合酸（Plank-Rychlo脱钙液）和5%硝酸3种不同的脱钙液,分成A、B、C3组用于犬和大鼠牙齿牙周组织联合石蜡切片脱钙,通过记录脱钙时间,观察HE染色效果,评价室温下（20℃～28℃）不同脱钙液对切片制作的影响。结果A组脱钙液所制切片染色效果良好,但脱钙速度缓慢,所需时间较长;B组脱钙液脱钙速度快,所制切片染色好;C组脱钙液所制切片的染色强度和对比度均不如前两种脱钙液。结论在制作牙齿牙周联合切片时,EDTA脱钙液和Plank-Rychlo脱钙液所制切片均能取得良好的染色效果,但EDTA脱钙液脱钙周期过长;Plank-Rychlo脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合于临床速检工作;硝酸脱钙液组染色效果较差。     

3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯的血管内生物相容性

背景:可降解聚合材料3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯(3-hydroxybutyrate-co- 3-hydroxyhexanoate,PHBHHx)具有良好的机械性能和生物可降解性.目的:在体研究PHBHHx的血管内生物相容性.方法:采用脱细胞羊肺动脉为支架,以PHBHHx涂层,构建复合补片,植入新西兰兔腹主动脉内,以脱细胞未涂层羊肺动脉片作为对照.分别于植入后第1,4,12周取出移植补片进行组织学、免疫荧光染色、扫描电镜和钙含量测定.结果与结论:复合补片管腔面光滑无血栓,内膜增生适度,再细胞化完全;免疫荧光染色可见新生内膜组织中类内皮细胞呈CD31阳性反应,单层连续排列,间质细胞呈平滑肌肌动蛋白阳性反应;复合补片的钙含量明显低于未涂层羊肺动脉片.说明PHBHHx的血管内生物相容性满意,是心血管组织工程较为理想的腔内涂层材料.     

甲酸混合酸脱钙液在兔股骨头制片中的应用

目的观察甲酸混合酸脱钙液对股骨头组织的制片效果。方法采用成年新西兰大白兔10只,切断股骨头圆韧带,取股骨上1/3段置于甲酸混合酸脱钙液中脱钙1周,随即常规脱水、透明、石蜡包埋,制备5μm厚纵切片,行HE染色。结果所有组织切片厚薄均匀,未见脱片现象,股骨头完整性较好,各层次分明,骨小梁结构完整,软骨细胞、骨细胞细胞形态清晰,着色鲜艳。结论选用甲酸混合酸脱钙液制片股骨头组织具有脱钙时间相对较短、操作简单、组织结构完整、染色效果较好的特点。     

大鼠关节组织硝酸、EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较

骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一.它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的.适用组织化学、免疫组化等技术的染色.大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败.现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10%硝酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色.对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果.     

硝酸液对骨组织脱钙后方法的改良

常规骨及钙化组织石蜡切片其脱钙过程往往需要酸处理 ,酸必然在脱钙的同时对骨的有机物质引起一定的损害。在制作前一般先经无机酸稀溶液浸渍脱钙再用流水洗涤 2 4小时 ,除去组织内原性酸性物质 ,然后才能按常规制片染色。此种方法脱钙时间长、速度慢 ,在客观上延长了病理诊断和临床治疗 ,而且染色效果并不太理想。我们经过反复实践 ,探索出一种有效的快速脱钙方法。1　材料和方法骨及钙化组织 ,锯成 1.2 cm× 1.0 cm× 0 .3cm薄片 ;10 %～15 %中性福尔吗林固定 ,8%硝酸脱钙 ,水洗 1分钟 ,置入 3%氢氧化钠液浸渍 5分钟 ,经 A- F液、95 %乙…