ERK1／2信号通路对T淋巴细胞的影响

细胞外信号调节激酶1／2（extracellular regulated kinase1／2，ERK1／2）是将信号从细胞表面受体传导至细胞核的关键。磷酸化的ERKl／2由胞质转位到核内，进而介导NF-AT、AP-1、NF-KB等转录因子的活化，参与细胞多种生物学反应。近年来研究发现，ERK1／2信号通路的激活能促进T淋巴细胞的活化、增殖并抑制其凋亡，这可能为T淋巴细胞相关的免疫性疾病和肿瘤的治疗提供了新的策略。     

寻常型银屑病患者皮损组织中miR-145-5p、MLK3表达变化及意义

目的 探讨寻常型银屑病(PV)患者皮损组织中微小RNA(miR)-145-5p、混合谱系酶3(MLK3)表达及意义.方法 选取78例PV患者,根据病情严重程度分为轻度组(n=31)、中度组(n=28)、重度组(n=19).采用RT-qPCR检测皮损组织和相邻非皮损组织中miR-145-5p和MLK3、肿瘤坏死因子-α(...     

茯苓酸对银屑病小鼠皮损组织IRS-1/ERK1/2通路及角质形成细胞增殖的影响

目的 探讨茯苓酸(PA)对银屑病小鼠皮损组织胰岛素受体底物(IRS)-1/细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2通路及角质形成细胞增殖的影响。方法 将BALB/C雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、PA低、中、高(1.25、2.50、5.00 mg/kg)剂量组、阳性药物组(氨甲蝶呤,2 mg/kg),每组10只。除正常对照组外,其余各组于背部涂抹5%咪喹莫特乳膏建立银屑病模型;各组均在分组后当天开始给药,PA各剂量组及阳性药物组灌胃给予相应剂量的PA和氨甲蝶呤,正常对照组和模型组灌胃给予相应体积生理盐水,连续给药1 w, 1次/d。各组末次给药24 h后,观察各组背部皮肤组织,并对银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)进行评分;取背部皮损组织,采用苏木素-伊红(HE)染色观察皮肤组织形态学改变;取血液和皮损组织,用酶联免疫吸附试验检测空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)水平及皮损组织炎性因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-17、IL-23含量,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);Western印迹检测皮损组织IRS-1、ERK1/2、磷酸化ERK1/2...     

ERK1/2信号转导通路在宫颈癌发病中的作用

细胞外信号调节激酶（ERK）是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族成员之一,该酶被激活后,在细胞生长、发育、分裂、死亡及恶性转化等过程中发挥作用。由E RK1/2介导的信号转导通路接受来自细胞内外的各种丝裂原刺激和应激,激活ERK1/2底物,调控细胞增殖、凋亡与侵袭。为了揭示宫颈癌发生发展的分子学机制，探讨宫颈癌的有效防治方法，研究者从ERK1／2信号转导通路途径对宫颈癌做了大量研究。     

miR-526b-3p调控ERK1/2通路对阿霉素所致大鼠心脏损害的干预作用

目的 探究miR-526b-3p调控细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2通路对阿霉素(ADM)所致大鼠心脏损害干预作用。方法 选取40只健康雌雄各半SPF级Wistar大鼠为研究对象,空白组10只,建立心脏损害模型,分为模型组、miR-526b-3p上调组、miR-526b-3p下调组,各10只。用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验检测miR-526b-3p表达水平,检测各组心功能各指标水平,采用碱性二甲基亚砜-鲁米诺化学发光法检测心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用酶联免疫双抗体夹心法检测心肌磷酸肌酸激酶(CPK)活性,采用Western印迹检测左心室组织ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的相对表达量。结果 与模型组相比,miR-526b-3p上调组miR-526b-3p表达水平、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVEDs)、心搏出量(SV)、左心室射血分数(LVEF)水平、SOD活性、CPK活性、心肌组织ERK1/2、p-ERK1/2通路蛋白表达量均较高,miR-526b-3p下调组上述指标均较低;与miR-526b-3p下调组相比,miR-526b-...     

ERK1/2信号通路在内皮微粒诱导人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达中的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号通路在内皮微粒（EMPs）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）中的作用。方法:体外培养HUVECs,选取生长良好的第4～5代细胞,分为EMPs不同浓度作用组、EMPs不同时间作用组及ERKl/2特异性抑制剂组。应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测ICAM-1和磷酸化ERK1/2蛋白的表达。用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测ICAM-1 mRNA的表达。结果:EMPs作用HUVECs后,ICAM-1 mRNA和其蛋白以及磷酸化ERK1/2蛋白的表达显著高于对照组,且呈浓度和时间依赖性的关系（均P<0.01）;而ERKl/2特异性抑制剂PD98059对ICAM-1 mRNA和其蛋白以及磷酸化ERK1/2蛋白的表达,均有明显的抑制作用（均P<0.01）。结论:EMPs可诱导HUVECs中ICAM-1表达,其机制可能与激活ERK1/2信号通路有关。     

鱼藤酮诱导多巴胺能细胞α-突触核蛋白聚集和ERK1/2通路活化的研究

目的探讨鱼藤酮对多巴胺能细胞α-突触核蛋白聚集和细胞外信号调节激酶-1／2（ERK1／2）通路活化的影响。方法用鱼藤酮处理神经元样分化的PCI2细胞,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,免疫荧光法检测α-突触核蛋白聚集,免疫细胞化学法检测ERK1／2通路活化情况。结果鱼藤酮处理后细胞活力呈时间依赖性下降;磷酸化ERK1／2水平逐渐升高（P均〈0．01）;处理16h后细胞内出现α-突触核蛋白聚集体,24h后进一步增多。结论鱼藤酮可诱导α-突触核蛋白聚集和ERK1／2通路活化,参与多巴胺能神经元损伤。     

iNOS及ERK1/2信号转导通路在17β-雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 观察诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）及细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号转导通路在17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖中的作用。方法: 采用MTT比色法和Western blot技术,检测E2预处理前后胎牛血清（fetal calf serum,FCS）对VSMCs中DNA合成、iNOS表达及磷酸化的ERK1/2蛋白表达的影响。结果: E2作用24 h,可明显抑制FCS诱导的VSMCs增殖。Western blot的结果显示,FCS孵育VSMCs后,iNOS蛋白的表达下降,磷酸化的ERK1/2蛋白表达增加。E2预处理后,可增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化ERK1/2蛋白表达。若提前应用iNOS阻断剂L-精氨酸甲酯（L-NAME）孵育VSMCs,可部分逆转E2诱导的磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降的效应。结论: E2可抑制FCS诱导的VSMCs增殖,其作用可能与增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化的ERK1/2表达有关。     

4-氨基吡啶调节大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩时ERK1/2信号通路的作用

目的 探讨电压依赖性钾离子通道（K_V）及细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号通路在大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩（HHPV）中的作用。方法 制作正常SD大鼠离体二级肺动脉环,在常氧及低氧高二氧化碳条件下分别观察肺动脉环的张力变化。在急性低氧高二氧化碳条件下,分别用K_V阻断剂4-氨基吡啶（4-AP）、ERK1/2信号通路抑制剂U0126、4-AP＋U0126孵育二级肺动脉环,测定各组血管环的张力值。结果 在急性低氧高二氧化碳条件下：①肺动脉环呈现双向性的收缩（与常氧状态比较,P<0.05）;②经4-AP孵育的二级肺动脉环收缩幅度增强,尤其是Ⅱ期持续收缩（P<0.05）;③U0126能使4-AP所致的二级肺动脉环的Ⅱ期持续收缩幅度显著降低（P<0.05）。结论 4-AP可增强大鼠的HHPV,而U0126能使4-AP所致的二级肺动脉环的Ⅱ期持续收缩幅度显著降低,提示ERK1/2信号通路可能在电压依赖性钾离子通道调节大鼠HHPV的机制中发挥重要作用。     

补肾益肝活血方含药血清对ERK/p38MAPK信号通路的影响

目的观察补肾益肝活血方含药血清对骨关节炎的细胞外信号调节激酶(ERK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路的影响。方法 40只雌性SD大鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只;补肾益肝活血方含药血清的制备:给予大鼠补肾益肝活血方3.2 g/(kg·d)灌胃,连续灌胃5 d,每日给药2次,最后一次灌胃后3 h,对SD大鼠进行腹主动脉采血,制备血清;软骨细胞分离:取新生SD乳大鼠肋骨处的软骨;原代培养:将清洗干净的软骨用0.2%Ⅱ型胶原蛋白酶和10%的胰蛋白酶消化后进行细胞传代;软骨细胞的鉴定:包括细胞形态观察、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学染色;退变软骨细胞模型的建立及含药血清干预:将传至第2代的软骨细胞予10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β诱导获得退变的软骨细胞,诱导退变24 h后弃培养液,分4组,分别用低、中、高剂量的补肾益肝活血方含药血清及20%空白血清进行干预,每组每个时间段设置6个复孔,做好标记及记录,分别于培养24 h、36 h、48 h后取1板运用MTT法检测干预后软骨细胞的活性,确定干预软骨细胞的最佳量效与时效关系;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组上清液中IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平;Westem印迹法检测蛋白。结果在IL-1β诱导下,体外培养的大鼠关节软骨细胞退化,p38MAPK增高,与对照组相比,中、高剂量组的ERK、p38MAPK表达均显著下降(P0.05)。结论 ERK、p38MAPK参与并介导了骨关节炎的发生和发展;补肾益肝活血方能够通过下调p38MAPK基因的表达,改善IL-1β介导的关节软骨细胞退化模型的软骨细胞进一步的退化。     

miR-885-5p对人心肌成纤维细胞增殖和MMP2、SP1基因表达的影响

目的 培养人心肌成纤维细胞（HEH2）将miR-885-5p应用脂质体转染的方法来探讨转染miR-885-5p 48小时后对人心肌成纤维细胞增殖的调控作用以及对基质金属蛋白酶2（MMP2）基因和（SP1）基因的表达的影响,为临床心血管疾病研究提供研究线索。方法 培养HEH2细胞待细胞长到60%时通过脂质体转染方法对细胞转染miR-885-5p和阴性对照（NC）,48h后用CCK8细胞活力试剂盒来检查细胞增殖情况。实时荧光定量PCR法检查miR-885-5p对MMP2和SP1的RNA表达的作用。结果 CCK8结果表明转染48小时后阴性对照组细胞活率为100%±8%,miR-885-5p组细胞活率为139%±16%,提示miR-885-5p促进HEH2细胞的增殖(n=6,p<0.05),HEH2细胞转染miR-885-5p后,心肌重构相关基因MMP2和SP1的miRNA表达增高(p<0.05)。结论 miR-885-5p能够促进人心肌成纤维细胞的增殖,同时促进细胞中MMP2和SP1基因的表达,提示miR-885-5p抑制剂可能是心肌纤维化相关疾病的新策略。     

miR-106a-5p靶向调控ERK2对胃癌细胞顺铂耐药性的影响及其分子机制

目的 观察微小RNA106a-5p(miR-106a-5p)通过靶向调控细胞外信号调节激酶2(ERK2)对胃癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 建立胃癌细胞系MGC-803 DDP耐药细胞株MGC-803/DDP,采用RT-PCR法检测MGC-803及MGC-803/DDP中miR-106a...     

促红细胞生成素衍生肽对表柔比星致大鼠心肌损伤ERK1/2信号通路的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)衍生肽(HBSP)对表柔比星(EPI)致大鼠心肌损伤的作用机制。方法 雄性大鼠40只,随机分为正常对照(CON)组、EPI模型组、EPO治疗组和HBSP治疗组。采用EPI制作大鼠心肌损伤模型(2.5 mg/kg腹腔注射,每周1次,共6 w),EPO治疗组和HBSP治疗组在腹腔注射EPI前1 d、后1 d、后3 d分别腹腔注射rhEPO(5 000 IU/kg)、HBSP(60μg/kg),共6 w。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠心肌细胞形态结构;免疫组织化学法检测各组大鼠左心室心肌细胞色素(Cyt)C、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-9蛋白的表达。通过聚合酶链反应(PCR)检测大鼠心肌组织中细胞外信号调节激酶(ERK)1、ERK2 mRNA的表达。结果 与CON组比较,EPI模型组心肌细胞损伤明显增加,心肌组织中CytC、caspase-9蛋白表达明显升高,ERK1、ERK2 mRNA表达水平显著降低(P<0.05);与EPI模型组比较,EPO治疗组及HBSP治疗组心肌细胞损伤明显降低,心肌组织中CytC和caspase-9蛋白表达明...     

miR-139-5p靶向PAK5基因通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

背景胃癌(Gastric cancer,GC)是人类消化系统最常见的癌症类型,发生局部或全身转移是导致患者预后差的主要原因.微小RNA(microRNA,miRNA)是胃癌发生发展的重要调控因子.然而,miR-139-5p对胃癌细胞侵袭和转移的影响及机制尚不清楚.目的探究miR-139-5p靶向p21活化的激酶5(PA...     

寻常型银屑病患者外周血miR-155水平变化及其与Th1/Th2平衡的关系

目的 探讨寻常型银屑病患者外周血微小RNA(miRNA)-155水平变化及其与辅助性T细胞(Th)1/Th2平衡的关系.方法 选取95例寻常型银屑病患者为PV组,根据银屑病严重程度分为重度组(n=23)、中度组(n=34)、轻度组(n=38),另选取同期56例体检健康者为对照组.采用qRT-PCR测定外周血miR-15...     

血清miR-92a-1-5p及miR-92a-2-5p表达水平与老年卒中后抑郁的关系

目的 分析血清微小核糖核酸-92a-1-5p ( miR-92a-1-5p)、 miR-92a-2-5p 表达水平与老年卒中后抑郁的关系.方法 选取2018年2月至2020年10月胶州中心医院收治的129例老年卒中患者为研究组,另选取110名同期健康体检者为对照组,均检测血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2...     

ERK1/2蛋白在17β-雌二醇抑制睾酮诱导的心肌细胞肥大反应中的作用

目的 观察17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌肥大反应的影响,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2蛋白)在性激素对心肌肥大影响中的作用.方法 采用差速贴壁法分离、纯化培养新生SD大鼠心肌细胞,以Bradford法测定心肌细胞蛋白质含量,同位素法分析3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入,以免疫印迹法检测心肌细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化.结果 10-10 ～ 10-6 mol/L 17β-雌二醇可明显对抗睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量和3H-Leu掺入的增加,其中以10-8 mol/L 17β-雌二醇作用最为明显;预先给予10-6 mol/L雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用2h,可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量增加的抑制效应.用50μmol/L ERK1/2上游激酶MEK1/2的特异性抑制剂PD98059预处理2h不能增强17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞3H-Leu掺入的抑制作用;10-8 mol/L 17β-雌二醇可以对抗睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加;10-6mol/L他莫昔芬预处理2 h可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加的抑制作用.结论 17β-雌二醇经雌激素受体介导下调睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达,从而抑制由睾酮诱导的心肌细胞肥大反应.     

老年肺癌患者ERK1/2和GSK-3β蛋白表达特点及意义

目的 探讨老年肺癌患者细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2和糖原合成酶激酶(GSK)-3β蛋白表达特点及意义。方法 选取老年肺癌患者84例,均行胸腔镜下肺叶切除术治疗,术中取肺癌组织和癌旁组织(距离癌变组织>5 cm)。免疫组化法检测ERK1/2、p-ERK1/2、GSK-3β蛋白表达情况。收集患者性别、年龄、吸烟史、组织学类型、TNM分期、淋巴结转移情况、分化程度、肿瘤直径、被膜侵犯情况;术后进行3年随访,记录患者生存情况。结果 肺癌组织中ERK1/2、p-ERK1/2阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.01)。GSK-3β蛋白阳性表达于癌旁正常肺组织细胞膜和细胞质中,肺癌组织中GSK-3β蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织(P<0.01)。ERK1/2、p-ERK1/2、GSK-3β表达阳性率在不同组织学类型、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、被膜侵犯的老年肺癌患者间差异有统计学意义(P<0.01)。ERK1/2、p-ERK1/2阳性的老年肺癌患者3年生存率明显低于ERK1/2、p-ERK1/2阴性者(P<0.01);GSK-3β阴性的老年肺癌患者3年生存率...     

miR-17-5p靶向PI3K/AKT信号通路调控皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的机制

目的 探讨miR-17-5p靶向磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路调控皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的机制.方法 实时荧光定量(qRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测HaCaT和A431细胞中miR-17-5p的表达.构建抑制miR-17-5p表达A431细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力...     

miR-7-5p调控NF-κB/RelA信号通路对Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转化的作用机制研究

目的探讨miR-7-5p对Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549细胞)间质转化的影响及其作用机制。方法10 ng/mL TGF-β1处理A549细胞12 h、24 h和48h后,利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)检测细胞中miR-7-5p和RelA的表达量,Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达量;过表达或下调miR-7-5p后,Transwell实验检测miR-7-5p对A549细胞侵袭的影响;细胞划痕愈合实验检测miR-7-5p对A549细胞迁移的影响;Western blot检测miR-7-5p对A549细胞内E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达和NF-κB通路的影响;TargetScan预测miR-7-5p和RelA的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验分析miR-7-5p和RelA之间的关系;RT-qPCR和Western blot检测过表达或下调miR-7-5p对RelA的影响。检测下调RelA表达后,A549细胞的侵袭、迁移和EMT能力。结果10 ng/mL TGF-β1处理A549细胞12 h、24 h和48h后,E-cadherin表达明显下调(P<0.01),N-cadherin和Vimentin表达明显上调(P<0.01),miR-7-5p表达明显降低(P<0.01),RelA表达明显升高(P<0.01)。过表达miR-7-5p抑制了A549细胞侵袭、迁移与EMT,p-TAK1/TAK1和NF-κB p-p65/NF-κB p65比值明显降低,下调miR-7-5p则起到促进作用;miR-7-5p靶向且负调控RelA表达;下调RelA抑制了A549细胞侵袭、迁移与EMT。结论miR-7-5p调控NF-κB/RelA信号通路促进A549细胞的上皮间质转化。