牙骨质附着蛋白对猴骨髓基质细胞增殖和矿化能力的影响

目的观察牙骨质附着蛋白（CAP）对体外培养的猴骨髓基质细胞增殖及矿化能力的影响。方法抽取猴髂骨骨髓，全血培养法获得骨髓基质细胞。培养液中CAP的浓度分别为0．125、0．25、0．5、1、2μg／ml，以不加CAP为空白对照。MTF法测定各组细胞的增殖活性，同时检测细胞内碱性磷酸酶活性。采用SAS6．12软件对实验数据行单因素方差分析。结果从第3天开始，0．5、1、2μg／ml CAP组与对照组相比能显著促进细胞增殖。对照组与不同浓度CAP实验组对细胞内碱性磷酸酶合成差异无统计学意义。结论0．5～2μg／ml的CAP都能显著促进体外培养的猴BMSCs增殖，但各浓度组CAP对细胞内碱性磷酸酶合成无影响。     

牛牙骨质来源细胞的分离、培养和鉴定

目的 探索体外分离培养牙骨质来源细胞（cementum-derived cells,CDC)的方法，并研究其生物学特性。方法 用组织法联合酶消化法，分离培养新生牛牙根表面的细胞；免疫细胞化学方法检测CDC中与骨相关的标志物如骨钙素、碱性磷酸酶和特异性牙骨质附着蛋白的表达；改良钙钴法检测碱性磷酸酶的活性。结果 培养增殖的细胞具有成牙骨质细胞的形态特征，经5次传代后细胞形态无明显改变；该细胞骨钙素、碱性磷酸酶免疫细胞化学染色均为阳性，并有碱性磷酸酶活性表达；牙骨质附着蛋白呈阳性着色。结论 初步确定本实验首次成功分离培养了牛牙骨质来源的、具成牙骨质细胞特性的成牙骨质细胞。为进一步研究成牙骨质细胞的生物学特性及牙骨质生成和修复提供了条件。     

骨髓基质细胞分化成骨的实验研究

将兔骨髓细胞悬液体外培养，造血细胞死亡或在换液时被清除，吸附于培养瓶壁上的基质细胞迅速增殖。ｌ周时有明显的集落形成，２周时汇合成层。把培养的成纤维样细胞移植到扩散中种植到兔腹腔。经过一段时问可以分化为骨、软骨和纤维结缔组织，从而证实骨髓基质中存在着可以分化成骨细胞和成软骨细胞的成骨前体细胞。     

成牙骨质细胞培养方法的比较

尽管牙骨质在维持牙周组织健康方面发挥重要作用,但对形成牙骨质的细胞的生物学特性了解甚少,主要原因是缺乏可供体外研究的细胞模型。本文综述了近几年发展的六种成牙骨质细胞体外培养方法,它们各自取材来源和部位不同,鉴别方法各异,表现出不同优缺点,可供国内学者参考。     

可注射壳聚糖温敏水凝胶对犬骨髓基质细胞生物学行为的影响

目的:探讨可注射壳聚糖(chitosan,CS)基温敏水凝胶对犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)生物学活性的影响。方法:利用密度梯度离心法获得犬BMSCs,含10%胎牛血清的L-DMEM培养液进行原代培养并进行初步鉴定。合成壳聚糖温敏水凝胶,光镜下观察BMSCs在凝胶中的存活情况。制备凝胶浸提液,检测其对细胞增殖分化的影响。采用SPSS13.0软件包对实验数据进行单因素方差分析。结果:犬BMSCs可在壳聚糖温敏凝胶中存活。壳聚糖浸提液组对BMSCs的增殖与正常培养液组相比,无显著性差异;但在培养第1、4、7天时,矿化培养液组和矿化浸提液组的细胞增殖率明显低于未矿化的完全培养液组和壳聚糖浸提液组,第10天时,4组间无显著性差异。壳聚糖矿化浸提液组碱性磷酸酶和骨钙素活性明显提高。结论:制备的壳聚糖温敏水凝胶具有良好的生物相容性,可进行水凝胶复合BMSCs的体内外实验研究。     

钛表面微弧氧化膜对骨髓基质细胞附着和生长的影响

目的:通过培养骨髓基质细胞(BMSCs),观察细胞在纯钛表面微弧氧化膜的早期附着、生长及ALP活性,评价该材料的生物相容性.方法:实验分为4组,分别对钛表面试件进行微弧氧化处理(A组)、喷砂处理(B组)、喷砂碱处理(C组)和机械处理(D组).4个实验组取第2代羊BMSCs与各自试件进行培养,24h后计算各组的细胞数,并对各组试件表面进行扫描电镜观察;取第3代羊BMSCs进行培养,3d和7d后计算各组细胞的平均ALP活性.采用SPSS11.5软件包对数据进行单因素方差分析.结果:A组表面附着细胞体积大,呈扁平多角形,细胞附着计数和平均ALP活性与其他3组有显著性差异(P＜0.01).结论:微弧氧化膜能够有效促进BMSCs的附着、增殖和ALP活性的表达,显示出良好的生物相容性.     

骨髓基质细胞修复骨缺损的实验研究

目的 探讨骨髓基质细胞(BMSC)对骨缺损的修复作用.方法 实验动物为新西兰大白兔,抽取2 ml骨髓制成细胞悬液,体外培养2周.采用外科手术的方法在兔双侧桡骨处形成1.5 cm的骨膜-骨缺损,将培养2周的骨髓基质细胞注射到桡骨缺损处,于移植后第1、2、3、4 周末,用钼靶X线分别检查双侧桡骨缺损处的骨形成情况,并取第4周末的骨痂进行组织学检查.结果 移植后实验侧骨痂形成快于对照侧;第4周末,实验侧缺损处全部为骨性骨痂连接,对照侧缺损处仍未形成骨痂连接.结论 BMSC可以促进骨缺损的修复.     

柚皮苷对犬骨髓基质细胞体外增殖及成骨分化的影响

目的:研究犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)在柚皮苷诱导下定向成骨及成骨分化能力。方法:抽取犬骨髓,贴壁法体外培养,流式细胞仪鉴定,加入不同浓度柚皮苷(1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9 mol/L)诱导,以CCK-8检测药物毒性,定量检测碱性磷酸酶、von Kossa检测钙结节形成。采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:经流式细胞仪检测,CD34、CD45低表达、CD90高表达分别为0.126%、0.075%和95.4%;柚皮苷浓度在10-6、10-7 mol/L时,能明显促进细胞增殖;经柚皮苷诱导后,碱性磷酸酶含量显著提高,其中,浓度为10-6 mol/L时,ALP相对值最高(P<0.05);von Kossa钙结节检测呈阳性。结论:犬骨髓基质细胞在柚皮苷诱导下能分化为成骨细胞。柚皮苷浓度为10-6 mol/L时,能明显促进骨髓基质细胞的增殖及分化。     

雌激素对大鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响

目的：研究雌激素对大鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响,探讨其对成骨的影响。方法：体外培养4周龄雌性大鼠骨髓基质细胞,以不同浓度雌激素作用于成骨细胞,用噻唑蓝法测定细胞增殖情况;对硝基酚磷酸酯法测定细胞碱性磷酸酶活性;检测培养液中羟脯氨酸含量,了解细胞Ⅰ型胶原的分泌情况;通过矿化结节计数反映细胞的矿化能力。结果：雌激素促进成骨细胞增殖,增加碱性磷酸酶活性;提高培养液中羟脯氨酸含量,峰值浓度为10^-7mol／1,与对照组比较有统计学意义（P〈0．05）;雌激素显著提高细胞的矿化能力,10^-7mol／L浓度作用最显著（＋45．4％,P〈0．05）。结论：雌激素促进成骨细胞增殖和分化,提高其矿化能力,从而刺激骨形成。     

转染人骨形成蛋白-7基因对骨髓基质细胞体外生物学活性的影响

目的：观察hBMP-7基因转染对Beagle犬骨髓基质细胞（BMSC）生物学特性的影响。方法：利用脂质体介导法将hBMP-7基因转染Beagle犬BMSC，观察细胞形态及生长情况，检测碱性磷酸酶、骨钙素及钙化结节等成骨细胞表型。结果：目的基因转染后细胞形态略有变化，增殖能力无明显改变，凋亡率无明显变化，碱性磷酸酶活性明显增高，骨钙素表达增强，钙化结节增大。结论：hBMP-7基因转染可以加速BMSC向成骨细胞表型转化。hBMP-7基因转染的BMSC有望成为牙周组织工程理想的种子细胞。     

富血小板血浆PRP的体外骨诱导作用研究

目的 :探讨在体外培养中富血小板血浆 (Platelet -RichPlasma ,PRP)对骨髓基质细胞诱导成骨的影响。方法 :从自体静脉血中提取PRP ,配制成条件培养液 ,并作用于培养状态的骨髓基质细胞 ,染色检测细胞碱性磷酸酶表达情况 ,钙化结节形成率 ,放免法测定培养液中骨钙素的含量。结果 :骨髓基质细胞经诱导培养后 ,碱性磷酸酶、骨钙素表达明显增加。结论 :体外培养时 ,PRP可促进骨髓基质细胞的成骨分化。     

兔骨髓基质干细胞培养及鉴定

目的：对新西兰大白兔骨髓基质干细胞（BMSCs）进行体外培养及扩增,观察其原代及传代细胞的生长特点及生物学特点,获得足够量的细胞用于材料细胞相容性实验。方法：骨髓髓腔冲洗获得新西兰大白兔幼兔股骨骨髓,用全骨髓培养法进行体外培养获得BMSCs,胰酶消化传代,用条件培养基培养传代细胞。逐日倒置显微镜观察细胞生长情况,对传代细胞进行HE染色和碱性磷酸酶（ALP）染色。结果：幼兔骨髓基质干细胞体外培养生长良好,原代细胞约2周汇成单层,传代后1周左右长满瓶底。HE染色光镜下观察见兔骨髓基质干细胞为单核细胞,细胞呈梭形或不规则长多边形,传代细胞碱性磷酸酶染色呈强阳性。结论：兔骨髓基质干细胞的体外增殖能力强,可诱导为成骨细胞,可作为骨缺损材料细胞相容性研究的受试细胞。并且可以作为骨组织工程的种子细胞。     

培养状态下成人骨髓基质细胞的生长特性

目的研究培养状态下成人骨髓基质细胞的生长特性,为自体骨组织工程的功能细胞培养提供实验基础研究。方法培养健康成人骨髓基质细胞连续8代,测定第3、6代细胞的生长曲线、分裂指数、贴壁率及倍增时间。结果所测第3、6代细胞生长曲线基本相同,12h内细胞贴壁率达88.54%,分裂指数最高达15‰。结论在本实验条件下,细胞生长较稳定,接种成活率较高,增殖速度较快,可用于自体骨组织工程。     

大鼠颌骨与髂骨来源骨髓基质干细胞的体外生物学特性比较

目的比较大鼠颌骨与髂骨来源的骨髓基质干细胞(bone marrowstromal cells,BMSCs)的体外生物学特性差异。方法采用贴壁法分离培养大鼠颌骨与髂骨来源的BMSCs,从细胞生长特点,诱导矿化及成脂能力等方面比较两者的体外生物学特性。结果颌骨来源的BMSCs与髂骨来源的相比,具有更强的增殖能力,矿化诱导后形成更多的钙结节(P<0.05);而髂骨来源BMSCs在成脂诱导条件下形成更多脂质(P<0.05)。结论不同部位来源的BMSCs具有不同的生物学特点,颌骨来源的BMSCs具有更强的增殖和诱导后形成更多钙结节的能力,这为进一步研究颌骨病变与再生修复机制提供细胞学模型。     

骨髓基质细胞矿化诱导条件优化的研究

目的:探讨骨髓基质细胞在不同矿化诱导条件下的生物学特性,优化最佳矿化条件。方法:采用普通矿化液诱导组、BMP诱导组和矿化液BMP联合诱导组,体外诱导兔骨髓基质细胞,以含10%胎牛血清的DMEM作为对照组。倒置相差显微镜观察细胞形态的改变,MTT法检测细胞增殖情况,组化方法检测ALP活性,免疫组织化学方法检测I型胶原合成情况。结果:与对照组相比,实验组骨髓基质细胞增殖力均有所抑制,而ALP活性增强,I型胶原呈强阳性表达。其中矿化液BMP联合诱导组诱导产生的成骨细胞表型最为显著。结论:联合应用矿化液和BMP能在较短的时间内有效诱导BMSC分化为成骨细胞。     

应用骨髓基质细胞片层构建组织工程骨的实验研究

目的 探讨犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)片层在构建组织工程骨中的价值。方法 抽取犬髂骨骨髓,采用密度梯度离心法分离犬骨髓基质细胞(BMSCs)。制备犬同种异体脱钙骨基质(dermineralized bone matrix,DBM)。将人重组骨形态发生蛋白-2(recombination human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)复合到DBM上。将经成骨诱导的第3代细胞接种于温度反应性培养皿中,制备BMSCs细胞片层。用得到的BMSCs细胞片层包裹DBM/rhBMP-2/BMSCs复合体,植入犬左侧背阔肌肌筋膜下为实验组,以无BMSCs细胞片层包裹的DBM/rhBMP-2/BMSCs复合体植入犬右侧背阔肌肌筋膜下为对照组。术后8、12、16周取材行组织学观察,评价体内异位成骨的情况。结果 成骨面积实验组(对照组,两组差异有显著性(P<0.05)。术后16周,实验组有大量板层骨形成,有哈弗氏系统形成,骨髓腔内有红骨髓。对照组有板层骨形成,无哈弗氏系统形成,骨髓腔内无红骨髓。结论 BMSCs细胞片层可促进具有致密板层骨和哈弗氏系统的组织工程骨的形成。     

骨髓基质细胞的体外培养和成骨方向的诱导分化

目的:体外分离狗的骨髓基质细胞,诱导其成骨分化并鉴定成骨活性.方法:体外分离培养狗的骨髓基质细胞,传代培养中加入10-8rnol/L地塞米松、50 μg/ml维生素C和10mmol/L β-甘油磷酸钠进行诱导分化,进行细胞形态和增殖观察,矿化结节Von Kossa染色,细胞碱性磷酸酶染色和Ⅰ型胶原免疫组化染色检测其成骨活性.结果:骨髓基质细胞经诱导后表现出明显的成骨活性,体外矿化结节Von Kossa钙染色阳性;传代细胞碱性磷酸酶染色阳性,酶活性＞80%,Ⅰ型胶原免疫组化染色强阳性.结论:体外分离培养的骨髓基质细胞中含有骨源性前体细胞,传代细胞具有较强的成骨潜能.     

富含血小板的血浆(PRP)促进骨髓基质细胞DNA合成的实验研究

目的 探讨富含血小板的血浆（PRP）对骨髓基质细胞DNA合成和细胞周期变化的影响。方法 以贴壁筛选法分离、培养狗的骨髓基质细胞，应用流式细胞仪观察PRP对骨髓基质细胞DNA合成和细胞周期变化的影响；通过透射电镜观察细胞的超微结构改变。结果 PRP对培养48小时的骨髓基质细胞S期的DNA含量明显增高，并促使细胞内线粒体更丰富，粗面内质网增多。结论 PRP可通过刺激骨髓基质细胞的DNA合成，促进其分裂、增殖及细胞的合成分泌。