人外周血白细胞低亲和力糖皮质激素受体的检测方法

目的:研究人白细胞是否存在GRL并建立适合临床应用的检测方法。方法:回收白细胞,调白细胞浓度为(1～3)×107/ml,加入不同浓度[3H]Dex(5～5 000 nmol/L,应用加冷法;一点分析用1 000 nmol/L),共12点。非特异结合测定管再加100倍非标Dex。37℃孵育60 min。应用多头细胞收集器,通过玻璃纤维滤膜洗涤游离甾体。烘干滤膜,测定其放射强度。应用pseudo—Scatehard分析电脑程序计算出高亲和力GR(GRH)和GRL的最大结合容量(Bmax)及平衡解离常数(Kd)。一点法求出特异结     

细胞因子和低亲合力IgE受体与外源性哮喘的关系

细胞因子和低亲合力ＩｇＥ受体与外源性哮喘的关系赵斌王丹琪张冰夏国光通过测定３０例外源性哮喘（简称哮喘）患者血清可溶性白介素－２受体（ｓｏｌｕｂｌｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２ｒｅ－ｃｅｐｔｏｒ，ｓＩＬ－２Ｒ）、白介素－４（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－４，Ｉ...     

糖皮质激素对兔脑,肺和肝细胞糖皮质激素受体的调节

采用放射配基结合分析法，研究地塞米松对兔脑、肺、肝的糖皮质激素受体的调节作用。结果发现，静脉注射Ｄｅｘ５ｍｇ／ｋｇ后兔肺、肝胞液ＧＲ的结合量明显下降，与对照组比较Ｐ＜０．００１，脑胞液ＧＲ与对照组比较无显著差异。提示糖皮质激素对兔不同靶器官ＧＲ的调节存在不同特点。     

糖皮质激素受体高,低亲和力位点在急性淋巴细胞性白血病…

研究了１０例正常人和２９例急性淋巴细胞性白血病患外周血糖皮质激素受体高、低亲和力结合位点，利用Ｒｕ３８４８６对ＧＣＲＬ进行封闭，对部分患ＧＣＲＨ、ＧＣＲＬ在激素联合化疗前后水平的变化进行了动态观察。结果表明，正常对照组ＧＣＲＨ、ＧＣＲＬ分别为４６０８±１８８９位点／细胞和１３５２３８±８８５０９位点／细胞，两相关良好。     

IgE低亲和力受体基因的克隆、表达及初步鉴定

目的 利用基因重组的方法建立IgE低亲和力受体(FceR Ⅱ)基因的原核表达系统.方法 用RTPCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞扩增FceR Ⅱ cDNA基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建原核表达载体 FceR Ⅱ-pGEX-4T-1,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta,诱导表达FceR Ⅱ蛋白,通过割胶回收纯化,并用Western blot检测FceR Ⅱ的表达.结果 测序表明所扩增FceR Ⅱ cDNA基因,与已报道的序列一致.获得的重组蛋白经Western blot鉴定可以和人IgE特异性结合.结论 成功构建了FceR Ⅱ-pGEX-4T-1表达载体,获得了能和人lgE特异性结合的重组蛋白,为下一步FceR Ⅱ单克隆抗体的制备及应用研究打下了基础.     

脑创伤后内源性糖皮质激素及其受体的变化

脑创伤是平时或战时的常见伤病 ,其发生率高 ,后遗症多。目前认为 ,脑创伤的病变初期仅为局限性损伤 ,以后数小时至数天后产生继发性损伤。脑创伤后的脑缺血、缺氧以及由此导致的兴奋性氨基酸、氧自由基增多和Ca2 +细胞内流增多等是继发性损伤的主要原因。内源性糖皮质激素 (GC)是通过下丘脑 垂体 肾上腺皮质轴 (HPA轴 )激活后释放的 ,在脑创伤中发挥着双重作用。一方面内源性GC作为一种内源性抗炎物质 ,具有很强的抗炎作用 ,对脑创伤具有保护作用 ;另一方面内源性GC又可以加重脑创伤后继发性损伤。本文根据近年来的研究成果对内源性…     

糖皮质激素受体高、低亲和力位点在急性淋巴细胞性白血病治疗中的意义

研究了１０例正常人和２９例急性淋巴细胞性白血病（急淋）患者外周血糖皮质激素受体高、低亲和力结合位，或（ＧＣＲＨ、ＧＣＲＬ），利用Ｒｕ３８４８６对ＧＣＲＬ进行封闭，对部分患者ＧＣＲＨ、ＧＣＲＬ在激素联合化疗前后水平的变化进行了动态观察。结果表明，正常对照组ＧＣＲＨ、ＧＣＲＬ分别为４６０８±１８８９位点／细胞和１３５２３８±８８５０９位点／细胞，两者相关良好。急淋患者ＧＣＲＨ、ＧＣＲＬ分别为６０５２±３８８８位点／细胞和１２６４０５±１０２１３３位点／细胞，经过糖皮质激素药物联合化疗后，其水平分别为３６１６±１９６２位点／细胞和１４３５９７±１１２２８９位点／细胞，ＧＣＲＨ下降明显（Ｐ＜０．０１），下降率为４０．３％；而ＧＣＲＬ化疗前后差异不显著（Ｐ＞０．０５）。提示ＧＣＲＬ在介导糖皮质激素联合化疗疗效的维持中起重要的作用。     

大鼠肝胞液糖皮质激素受体的高效液相分析

目的：应用高效液相疏水作用层析法（HPHIC）分离并纯化大鼠肝胞液高、低亲和力糖皮质激素受体（GRH和GRL），为临床大剂量糖皮质激素（GC）冲击治疗提供实验依据。方法：超速离心大鼠肝组织，取上清，核素^3H-地塞米松（Dex）标记后，分别行Pseudoscatchard分析及HPHIC分析，SDS-PAGE及Western印迹法鉴定HPHIC分析后所收集的峰值管蛋白的性质。结果：在标准大气压，0～4℃条件下，只出现一个洗脱峰，峰值位置在9～11min。而在标准大气压，25℃且^3H-Dex≥50nmol/L时出现两个洗脱峰，峰值位置在3～7min及9～11min。SDS-PAGE及Western印迹法显示5～7min和9～11min时出现相对分子质量约60000、可与GC单克隆抗体结合的蛋白质分子。结论：提示有两种不同大小的GR分子存在，但是否存在GRH和GRL尚需进一步的实验证实。     

慢性给予糖皮质激素对大鼠肝胞液糖皮质激素受体的影响

给大鼠每天肌肉注射氢化可的松2mg/100mg体重,连续注射20天左右,引起了大鼠肝胞液[~3H]地塞米松特异结合部位的结合容量(R_0)明显减少,平衡解离常数(kd)增加。盐水对照组和处死前5小时和24小时一次注射氢化可的松对照组皆无明显变化。实验结果提示,慢性给予糖皮质激素对其受体具有反向调节的作用。     

RNA干扰技术抑制糖皮质激素受体在大鼠肺泡巨噬细胞表达及活性的研究

目的利用RNA干扰技术,建立糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)基因阻断的大鼠肺泡巨噬细胞模型.方法构建2个针对GR的RNAi表达载体,分别命名为psilencer 3.1-GR1和psilencer 3.1-GR2,经测序确认后,转染大鼠肺泡巨噬细胞.RT-PCR、Western Blot分别检测GR mRNA水平和蛋白水平表达变化;相对荧光素酶活性法检测GR转录激活功能的变化.结果经测序证实:成功构建2个针对GR的RNAi表达载体(psilencer 3.1-GR1和2);转染psilencer 3.1-GR2可明显降低细胞内GR mRNA的丰度及GR蛋白表达,细胞GR转录激活活性明显降低;转染psilencer 3.1-GR1与对照组相比无显著变化.结论成功地构建并筛选出一个特异而高效地阻断GR表达及功能的质粒表达载体,为进一步研究糖皮质激素受体的功能提供新方法.     

脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体表达及活性变化

目的探讨脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞24 h内,糖皮质激素受体表达及活性变化特点.方法将原代培养的大鼠肺泡巨噬细胞分为脂多糖致伤组和地塞米松治疗组,采用RT-PCR和Western Blot在mRNA水平和蛋白质水平测定肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体;EMSA测定肺泡巨噬细胞核蛋白中糖皮质激素受体活性.结果脂多糖作用后,糖皮质激素受体mRNA表达下调,24 h恢复正常水平;糖皮质激素受体蛋白质表达降低,4 h降至最低,24 h维持在低水平表达;糖皮质激素受体活性在1 h降到最低,24 h未恢复至正常水平.地塞米松治疗组在治疗后期不能有效维持糖皮质激素受体活性.结论脂多糖(100 ng/ml)作用大鼠肺泡巨噬细胞后,糖皮质激素受体蛋白表达降低,可能与mRNA表达降低及蛋白降解加速有关;糖皮质激素受体活性被显著抑制,出现糖皮质激素抵抗.     

米非司酮和利洛司酮对大白鼠肝胞浆糖皮质激素受体亲和力的影响

本文以放射配体结合实验测定了国产米非司酮、进口米非司酮和利洛司酮在大白鼠肝胞浆糖皮质激素受体水平的竞争抑制特性。[~3H]地塞米松与其受体结合之kd为0.57±0.06nmol/L,3种化合物Ki分别为0.55 0.09nmol/L、0.55±0.14nmol/L和1.02±0.07nmol/L,地塞米松、米非司酮和利洛司酮的相对结合亲和力LRBA)比值约为1:4:2。国产米非司酮和进口米非司酮的各项受体药理特性指标差异无显著性意义。     

被动型Heymann肾炎大鼠肾胞液糖皮质激素受体的动态变化

应用放射配体结合法检测不同病期被动型Ｈｅ６ｍａｎｎ肾炎（ＰＨＮ）病鼠肾、肝胞液糖皮质激素受体（ＧＲ），同时测定相应病期血浆皮质酮（Ｂ）浓度。结果：病鼠第２周末肾胞液ＧＲ最大结合容量（Ｒ０）较正常大鼠减少（Ｐ〈０．０５）；３周末进一步减少（Ｐ〈０．００５）；４周末Ｒ０已回升，与正常大鼠差异不显著（Ｐ〉０．０５）。这种动态变化与疾病的发生、发展及转归相一致。肾胞液ＧＲ的Ｒ０与蛋白量呈负相关（Ｐ〈０．０     

甲状腺激素对大鼠肝糖原及肝胞液糖皮质激素受体的影响

用实验性甲状腺功能亢进大鼠,同时观察甲状腺激素对肝糖原含量的影响和肝胞液糖皮质激素受体(GCR)的变化。结果表明,甲状腺片(75 mg/kg·d,ig×10 d和100 mg/kg·d,ig×10d)所致甲状腺功能亢进,可同时引起与甲状腺片剂量有依赖关系的肝糖原减低和与之平行的肝胞液GCR数目升高。提示,甲状腺激素减低大鼠肝糖原含量的作用与肝胞液GCR的增高有直接关系。     

中枢5—HT1A受体在大鼠脑中的不同亲和力状态

用特异性配体［＾３Ｈ］８－ＯＨ－ＤＰＡＴ与大鼠脑中不同部位脑组织膜制剂的５－ＨＴ１Ａ受体结合，显示出在海马、延髓、下丘脑的最大结合容量和亲和力有明显不同。各种孵育缓冲液使鼠脑海马、延髓膜制剂与［＾３Ｈ］８－ＯＨ－ＤＰＡＴ的结合呈现乐同的亲和力状态。孵育缓冲液中加入Ｍｎ＾２＋和Ｇｐｐ（ＮＨ）ｐ或均不加时，结合呈高、低两种亲和力状态；而仅加入Ｍｎ＾２＋或同时加入ＥＤＴＡ和Ｇｐｐ（ＮＨ）ｐ时，结合分别呈     

地塞米松对人卵巢癌细胞糖皮质激素受体的调节

目的：观察地塞米松调节人卵巢癌细胞系3AO细胞增殖分化的作用机制及3AO细胞中糖皮质激素受体（GR）的表达。方法：①采用氨基安替比林法测定糖皮质激素受体拮抗剂（RU486）作用3AO细胞后阻断糖皮质激素的效应；②采用放射配体结合分析法检测3AO细胞中GR的表达；③采用定量RT-PCR法检测地塞米松对3AO细胞中GR的调节作用。结果：①RU486可完全阻断地塞米松对3AO细胞活性的诱导作用；②3AO细胞中存在高亲和力、低容量糖皮质激素受体；③地塞米松使GR结合活性明显降低，且具有时间依赖性。结论：3AO细胞中存在GR，地塞米松调节3AO细胞增殖分化的作用由GR介导，地塞米松可向下调节3AO细胞GR的结合活性，且具有时间依赖性。     

大鼠肝、肺胞液糖皮质激素受体的超离心分析

本文用蔗糖密度梯度超离心技术分析了大鼠肝、肺细胞液糖皮质激素受体复合物,结果为在低离子强度介质中,该受体复合物的沉降行为表现为7～8S;在10mM钼酸钠介质中,肝胞液糖皮质激素受体复合物的沉降行为表现为9～10S。本文还对影响该受体复合物稳定性的一些因素作了讨论。