小鼠β-防御素2肿瘤疫苗的构建及特性鉴定

目的：构建分泌性小鼠β-防御素2（MBD2）真核表达质粒,转染L1210淋巴细胞白血病细胞,对转染细胞进行功能及特性鉴定。方法：RT-PCR法从小鼠皮肤细胞克隆MBD2成熟部分基因片段,用overlap PCR法将小鼠Igκ信号肽与MBD2成熟片段相连,构建MBD2分泌表达载体。经测序证实序列正确后,脂质体法转染L1210细胞,筛选稳定表达细胞株。RT-PCR、Western blot检测瘤苗MBD2的表达。Transwell法检测瘤苗分泌的MBD2对不成熟树突状细胞（iDC）迁移的作用。细胞计数、PI染色及FACS观察转染MBD2对肿瘤细胞增殖、细胞周期及MHCⅠ类（H-2K^d,H-2D^d）、Ⅱ类（I-A^d）分子及共刺激分子（CD80、CD860）表达的影响。结果：转染MBD2基因的肿瘤细胞表达并分泌MBD2,并以剂量依赖方式趋化iDC,表明具有生物学活性。转染MBD2基因对肿瘤细胞生长增殖、细胞周期及细胞表面MHC分子及共刺激分子表达无明显影响。结论：本实验成功构建了MBD2白血病细胞疫苗,为进一步体内评价抗白血病效果奠定了基础。     

支气管哮喘与急性呼吸道感染患儿血浆β防御素3水平的对照研究

目的β防御素3(HBD3)除了具有天然免疫功能,还发挥调节后天适应性免疫的作用。本研究拟通过支气管哮喘患儿、急性上呼吸道感染患儿及正常儿血浆HBD3浓度的比较,探讨HBD3在哮喘发病中的作用。方法研究对象选择2009年4月到12月在哈尔滨医科大学附属第一医院儿科就诊病例共81例,其中哮喘组21例,为急性发作期支气管哮喘患儿,感染组29例,为急性上呼吸道感染患儿,正常对照组31例,为健康体检儿。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行血浆HBD3水平测定。同时测定血嗜酸性粒细胞总数和白细胞数,9例哮喘儿测定了血清IgE浓度。结果血浆HBD3浓度正常儿为(8.028±1.078)μg/ml,哮喘患儿(12.212±1.124)μg/ml感染患儿(8.976±1.110)μg/ml,哮喘患儿与急性呼吸道感染及正常儿3组总体比较,血浆HBD3浓度明显升高,差异有显著性(F=4.448,P<0.05);哮喘组与正常组比较,差异显著,P<0.01;哮喘组与感染组比较,差异有显著性P<0.05;感染组与正常组比较,差异无显著性P>0.05;同时发现血浆HBD3水平与血清总IgE,血嗜酸性粒细胞及白细胞水平无显著相关性。结论支气管哮喘发作时HBD3表达升高,HBD3可能是超越感染之外,参与哮喘发病的独立因素。HBD3是否始动因素尚待进一步探索。     

昆虫防御素及其研究进展

昆虫防御素是在昆虫体内发现的一类阳离子抗菌肽,属内源性抗生素家族,对G 具有较强的抗菌活性,参与 昆虫的先天性和获得性免疫,具有不需要抗体、补体和吞噬细胞参与的新的抗菌机制。本文主要从昆虫防御紊的分子特征、基 因及其表达、生物学作用及其作用机理和研究进展等方面对其进行综述。     

人β-防御素2联合乙肝疫苗对小鼠免疫效应的研究

目的:探讨人β-防御素2加强乙肝疫苗对小鼠免疫应答的作用。方法:采用乙肝疫苗2μg/次/只联合HBD2基因真核表达质粒pEGF-C1/HBD2 100μg/次/只,按间隔2周、共免疫3次的左后肢股四头肌肌肉接种方案免疫BALB/c小鼠,同时设立相应的对照。免疫后用双抗原夹心ELISA法测小鼠血清HBsAb水平。采用流式细胞仪检测脾脏CD4+T和CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值。应用CCK8试剂盒检测脾淋巴细胞在不同抗原刺激下的增殖反应。结果:pEGF-C1/HBD2质粒联合乙肝疫苗免疫小鼠抗体水平明显升高,CD4+T细胞百分率比其他免疫组都高,脾淋巴细胞体外增殖实验明显。与其他各免疫组相比,pEGF-C1空质粒联合乙肝疫苗免疫组抗体水平和淋巴细胞体外增殖情况及CD4+T细胞百分率都较低。结论:人β-防御素-2对乙肝疫苗在小鼠中的免疫功能有一定增强作用。     

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

目的和方法 :β -防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β -防御素 - 2 (rBD2 )重组质粒pBK -CMV -rBD2和pCDNA - 3 1-Myc -His(+) -rBD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果 :显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2 -His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β -防御素 - 2pBK-CMV -rBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示…     

人β-防御素的研究进展

β-防御素是一类富含精氨酸,而且具有特殊结构的小分子阳离子多肽,是过去几十年里寻找新型抗生素的重要发现之一.对人类基因组序列的分析表明,人染色编码体的基因含有多达一百多种的β-防御素,它们是连接固有免疫和适应性免疫的重要因子.β-防御素不但对多种细菌、真菌、病毒等具有直接的杀伤作用,而且还与肿瘤发生、组织修复以及生殖成熟等生理过程密切相关.     

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

β-防御素体外试验显示具广谱抗菌活性，本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠β-防御素-2(rBD2)重组质粒pBK-CMV-rBD2和pCDNA-3．1-Myc-His( )-rBD2，通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入，检测其在气管和肺组织表达情况，并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2-His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达，说明脂质体包裹的重组p防御素-2pBK-CMV-rBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒pBK-CMV-rBD2气道转染与对照相比可显著提高肺组织对绿脓杆菌的清除率(n(8，p(0．01)．本研究表明β-防御素基因气道转染可提高呼吸道天然抗感染防御功能，可能在呼吸道感染的防治实践中具有潜在应用价值。     

慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化

目的:观察慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化,揭示其与慢性牙周炎发病的相关性。方法:收集慢性牙周炎患者和同期牙周健康者各80例。ELISA检测血浆β-防御素-2浓度。统计分析其与慢性牙周炎发病的相关性。结果:经t检验,慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度(405.2±133.9)pg/ml显著低于牙周健康者(641.6±128.3)pg/ml(t=6.492,P<0.01)。经Spearman相关分析,慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度与牙周探诊深度(r=-0.482,P<0.01)、附着丧失(r=-0.498,P<0.01)和出血指数(r=-0.501,P<0.01)均呈显著负相关。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-2浓度(OR=0.415,95%CI=0.297～0.862,P<0.01)是罹患慢性牙周炎的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-2浓度预测罹患慢性牙周炎有显著预测价值(曲线下面积=0.843,95%CI=0.774～0.894,P<0.01),且判定血浆β-防御素-2浓度<621.5 pg/ml,对预测罹患慢性牙周炎有81.3%的灵敏度和75.0%的特异度。结论:慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2水平降低,血浆β-防御素-2水平降低可能是慢性牙周炎的危险因素。     

大蒜素上调节β防御素3的表达

目的:探索大蒜素与β防御素3(HBD3)的关系及其在人体抗感染的免疫机制。方法:采用含大蒜素培养液(5 mg/L)培养肺癌A549细胞,通过RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色等方法检测HBD3在不同培养时间后表达量的差别。结果:大蒜素作用第4小时HBD3的mRNA表达量增加,第12小时HBD3的蛋白表达量增加。结论:通过本研究可以推断,大蒜素除本身的杀菌作用外,对人体自身主动免疫防御能力的影响调节也是其发挥抗菌作用的重要机制。     

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

β 防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β 防御素 2 (rBD2 )重组质粒 pBK CMV$CrBD2和 pCD NA 3.1 Myc His( + ) rBD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2 His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β 防御素 2pBK CMV$CrBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒 p…     

急性阑尾炎患者血浆β-防御素-2的检测及临床意义

目的:探索急性阑尾炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化,探讨其与急性阑尾炎患病危险性的相关性。方法:收集急性阑尾炎患者作为阑尾炎组,共208例。收集同期健康体检者作为对照组,共104例。ELISA检测血浆β-防御素-2浓度。统计分析其与急性阑尾炎患病危险性的相关性。结果:t检验显示,阑尾炎组血浆β-防御素-2浓度(398.6±128.0)pg/ml显著低于对照组(629.1±47.2)pg/ml(t=6.470,P<0.05)。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-2浓度(OR=0.429,95%CI=0.251～0.795,P<0.05)是罹患急性阑尾炎的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-2浓度预测罹患急性阑尾炎有显著预测价值(曲线下面积=0.817,95%CI=0.778～0.865,P<0.001),且判定血浆β-防御素-2浓度<612.4 pg/ml,对预测罹患急性阑尾炎有75.0%的灵敏度和72.1%特异度。结论:急性阑尾炎患者血浆β-防御素-2水平降低,血浆β-防御素-2水平降低可能是急性阑尾炎发病的危险因素。     

β-防御素-2与呼吸系统的免疫调节及呼吸道过敏性疾病

人类β-防御素(HBD)有6种,其中人体内HBD-2主要来源于呼吸系统,与呼吸道疾病的发生发展密切相关.本文综述了HBD-2在呼吸道免疫调节方面的作用,并简述其与呼吸道过敏性疾病的关系.     

侵袭性牙周炎患者血浆β-防御素-2的检测及临床意义

目的:揭示侵袭性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化,探讨其与侵袭性牙周炎患病危险性的相关性.方法:收集侵袭性牙周炎患者作为牙周炎组,共56例.收集同期牙周健康者作为对照组,共35例.ELISA检测血浆β-防御素-2浓度.统计分析其与侵袭性牙周炎患病危险性的相关性.结果:协方差分析显示,牙周炎组血浆β-防御素-2浓度...     

小鼠β防御素2与柯萨奇病毒B3 VP1融合基因疫苗的构建和免疫效果研究

目的:构建小鼠β-防御素2(Mouse beta-defensin-2,mBD2)与柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus B3,CVB3)VP1融合基因疫苗,并观察其对小鼠的免疫效果.方法:克隆mBD2基因,构建重组质粒pcDNA3/mBD2和pcDNA3/mBD2-L-VP1.将4～6周龄BALB/c雄性小鼠随机分为5组,分别于股四头肌注射PBS(A组)、pcDNA3(B组)、pcDNA3/mBD2(C组)、pcDNA3/VP1(D组)、pcDNA3/mBD2-L-VP1(E组),每次接种剂量100 μg/只,3周免疫1次,共3次.每次免疫后第14天眼眶静脉取血,用微量中和试验滴定血清中和抗体效价.第三次免疫后第21天,每组随机取3只小鼠,制备脾淋巴细胞悬液,用CCK-8细胞计数法检测特异性CTL的杀伤活性;每组取3只小鼠以3LD50 CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血清病毒滴度.结果:成功克隆了mBD2基因,构建了pcDNA3/mBD2和pcDNA3/mBD2-L-VP1两种重组质粒;D组和E组血清中和抗体滴度随免疫次数增加而提高(P＜0.01);E组血清中和抗体滴度和脾细胞特异性CTL杀伤活性显著高于其他组(P＜0.01),血中CVB3病毒滴度显著低于其他组(P＜0.01).结论:pcDNA3/mBD2-L-VP1能诱导小鼠对CVB3产生较强的体液免疫和细胞免疫,能有效抑制病毒在体内增殖.     

大肠杆菌对大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的抑制

目的：探讨细菌对大鼠β-防御素-2(rBD-2)基因的表达调控。方法：将大肠杆菌E．coliML-35和绿脓杆菌27853大鼠气管内接种,于24小时后提取肺组织RNA,用RT-PCR法检验大鼠β-防御素-2基因的表达情况。结果：气管内接种大肠杆菌使大鼠肺组织β-防御素-2mRNA的表达受抑制。结论：大肠杆菌及其产物直接或通过炎症细胞因子间接抑制rBD-2mRNA的表达。     

卡介苗吸入对LPS致肺炎大鼠肺β-防御素mRNA的影响

目的探讨卡介苗（BCG）雾化吸入是否能增强肺炎大鼠活体内肺组织β-防御素-1、β-防御素-2的mRNA表达。方法采用RT-PCR方法研究肺炎时大鼠活体内β-防御素-1（RBD-1）、β-防御素-2（RBD-2）mRNA的表达，卡介苗雾化吸入时脂多糖所致肺炎大鼠活体内的肺组织RBD-1、RBD-2mRNA的表达。结果脂多糖（LPS）、卡介苗不能增强下呼吸道RBD-1mRNA的表达，但可增强RBD-2mRNA表达。结论通过卡介苗雾化吸入能增强机体表达内源性β-防御素-2，协助治疗呼吸道感染，其在诱导β-防御素方面的作用是一个值得进一步探索的研究领域。     

急性胆囊炎患者血浆β-防御素-3的检测及临床意义

目的:揭示急性胆囊炎患者血浆β-防御素-3浓度的变化,探讨其与急性胆囊炎患病危险性的相关性。方法:收集急性胆囊炎患者作为胆囊炎组,共82例,其中坏疽性胆囊炎15例,非坏疽性胆囊炎67例。收集同期健康体检者作为对照组,共50例。ELISA检测血浆β-防御素-3浓度。统计分析其与急性胆囊炎患病危险性的相关性。结果:t检验显示,胆囊炎组患者血浆β-防御素-3浓度(81.4±36.9)pg/ml显著低于对照组血浆β-防御素-3浓度(154.2±28.3)pg/ml(P<0.001),坏疽性胆囊炎患者血浆β-防御素-3浓度(64.2±24.1)pg/m1显著低于非坏疽性胆囊炎患者血浆β-防御素-3浓度(94.3±29.9)pg/ml(P<0.001)。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-3浓度是罹患急性胆囊炎(OR=0.483,95%CI=0.298～0.709,P<0.01)和坏疽性胆囊炎(OR=0.426,95%CI=0.239～0.648 P<0.01)的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-3浓度预测罹患急性胆囊炎(曲线下面积=0.824,95%CI=0.712～0.896,P<0.001)和坏疽性胆囊炎(曲线下面积=0.836,95%CI=0.723～0.904,P<0.001)有显著预测价值。结论:急性胆囊炎患者血浆β-防御素-3水平降低,可能是急性胆囊炎的危险因素。     

急性阑尾炎患者血浆β-防御素-3的检测及临床意义

目的:揭示急性阑尾炎患者血浆β-防御素-3浓度的变化,探讨其与急性阑尾炎患病危险性的相关性。方法:收集急性阑尾炎患者作为阑尾炎组,共100例。收集同期健康体检者作为对照组,共100例。ELISA检测血浆β-防御素-3浓度。统计分析其与急性阑尾炎患病危险性的相关性。结果:阑尾炎组血浆β-防御素-3浓度(80.1±32.4)pg/ml显著低于对照组(151.3±27.0)pg/ml(P<0.01)。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-3浓度(OR=0.492,95%CI=0.211～0.843,P<0.01)是罹患急性阑尾炎的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-3浓度预测罹患急性阑尾炎有显著预测价值(曲线下面积=0.824,95%CI=0.769～0.874,P<0.01),且判定血浆β-防御素-3浓度<121.4 pg/mL,对预测罹患急性阑尾炎有83.0%的灵敏度和78.0%特异度。结论:急性阑尾炎患者血浆β-防御素-3水平降低,可能是急性阑尾炎发病的危险因素。     

慢性牙周炎患者血浆β-防御素-3的检测及其临床意义

目的:揭示慢性牙周炎患者血浆β-防御素-3浓度的变化,探讨其与慢性牙周炎患病危险性的相关性.方法:收集慢性牙周炎患者作为牙周炎组,共78例.收集同期牙周健康者作为对照组,共40例.ELISA检测血浆β-防御素-3浓度.统计分析其与慢性牙周炎患病危险性的相关性.结果:协方差分析显示,牙周炎组血浆β-防御素-3浓度(87....     

大鼠不同发育阶段β-防御素-2基因在肺组织的表达研究

目的：探讨大鼠β-防御素-2基因在肺组织表达的发育调控。方法：根据Genbank大鼠β-防御素-2的cDNA序列,设计一对特异引物。采用RT-PCR技术在大鼠不同发育阶段的肺组织总RNA中,扩增其特异cDNA片段,并进行DNA序列测定。借助Genbank中BLASI、程序,将从该cDNA序列推导的氨基酸序列与人的hBD-2和大鼠的rBD-1做相似性分析。