平肝潜阳药物对偏头痛肝阳上亢证患者的临床疗效及其对血淋巴细胞蛋白质表达的影响

目的：观察平肝潜阳药物对偏头痛肝阳上亢证患者的临床疗效和对血淋巴细胞蛋白质表达的影响,为深入研究偏头痛肝阳上亢证病理生理机制及平肝潜阳法治疗作用的分子机制奠定基础。 方法：32例偏头痛肝阳上亢证患者随机分为治疗组和对照组。治疗组口服平肝潜阳方,对照组口服氟桂利嗪片剂。治疗2个疗程。观察患者治疗前后的中医症状积分、止痛疗效和不良反应;采用双向凝胶电泳、基质辅助激光解吸电离一飞行时间质谱法分离和鉴定偏头痛患者外周血淋巴细胞和正常人之间差异蛋白表达,并观察应用平肝潜阳方干预后,各组差异蛋白质表达水平的变化。结果：平肝潜阳方有明显止痛效果（87．5％）,与氟桂利嗪片（75．0％）比较,差异有统计-9意义（P〈0．01）;以改善眩晕、烦躁易怒和面部烘热症状更为明显（P〈0．05）。两组中医症状积分均降低（P〈0．01）,其中以治疗组更为明显（P〈0．01）,治疗组未出现明显不良反应。正常人、平肝潜阳方治疗组偏头痛肝阳上亢证患者治疗前和治疗后血淋巴细胞凝胶蛋白质点数依次为534±42、552±54和529±55。平肝潜阳方治疗组偏头痛肝阳上亢证患者与正常人比较有6个蛋白质表达下调,14个蛋白质表达上调;平肝潜阳方治疗组偏头痛肝阳上亢证患者治疗前后比较发现表达下调的6个蛋白质中有4个表达增强,而表达上调的14个蛋白质中有11个表达降低。共得到12个肽质量指纹图谱,2个无质谱结果,搜索到10个具有统计-9意义的蛋白质,主要有通道蛋白、抗氧化蛋白、细胞信号转导蛋白、代谢相关蛋白和免疫相关蛋白等。 结论：平肝潜阳中药复方有良好的止痛作用,能改善中医症状;可能通过调节部分血淋巴细胞蛋白质的表达治疗偏头痛肝阳上亢正。     

平肝潜阳药物对高血压病肝阳上亢证患者淋巴细胞蛋白质表达的影响

目的：观察平肝潜阳药物对高血压病肝阳上亢证患者的临床疗效和血淋巴细胞蛋白质表达的影响,为识别鉴定平肝潜阳药物治疗高血压病肝阳上亢证相关蛋白质奠定基础。方法：26例高血压病肝阳上亢证患者采用平肝潜阳药物中药复方治疗。2个疗程结束后观察患者治疗前后的中医症状记分、血压,利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离正常人及高血压病肝阳上亢证患者治疗前后淋巴细胞总蛋白质,用ImageMaster 2DE软件分析双向电泳图谱,以识别差异表达的蛋白质。结果：平肝潜阳药物中药复方治疗总有效率为88.5%;改善高血压病肝阳上亢证患者症状,如头痛、眩晕、口干和烦躁易怒等;平肝潜阳药物中药复方有降低血压的作用,治疗前后比较差异有统计学意义（P〈0.05）。正常人、高血压病肝阳上亢证患者治疗前、治疗后3种淋巴细胞凝胶蛋白质点数依次为527±41,559±62和543±59。高血压病肝阳上亢证患者与正常人比较,有15个蛋白质表达下调,10个蛋白质表达上调;高血压病肝阳上亢证治疗前后比较,表达下调15个蛋白质中有12个表达增强,而表达上调10个蛋白质中有6个表达降低。结论：平肝潜阳药物中药复方有缓和的降压作用,有较好的改善中医症状的作用;平肝潜阳药物治疗高血压病肝阳上亢证可能是通过调节血淋巴细胞蛋白质的表达而实现的。     

脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证蛋白质组学比较研究

目的 建立脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,初步分析其差异蛋白质表达情况.方法 双向凝胶电泳(2-DE)分离脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清标本,考马斯亮兰染色,PD-QUEST图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF),Mascot软件搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质,对差异蛋白质进行组间对比.结果 获得了分辨率较好的脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证双向凝胶电泳图谱,质谱分析了29个差异蛋白质点,获取了87张肽质量指纹图谱,通过查询数据库鉴定了29个蛋白质,其中部分蛋白质与肝阳化风证及阴虚风动证发生发展有关.结论 建立了脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定了部分差异蛋白质点,为脑梗死肝阳上亢证与阴虚风动证与正常组血清双向凝胶电泳图谱血清蛋白质组数据库的建立提供了有意义的数据,并认为蛋白质组学能在脑梗死不同证型具有代表意义.     

平肝潜阳方治疗前后高血压病肝阳上亢证大鼠肾上腺组织蛋白表达变化的蛋白质组学研究

目的：从蛋白质组学水平探讨大鼠高血压肝阳上亢证发生机制及平肝潜阳方治疗肝阳上亢证的分子机制，为治疗高血压肝阳上亢证寻找新的药物标志蛋白提供理论和实验依据。 方法：以自发性高血压大鼠（spontaneous hypertensive rat，SHR）加灌服附子汤法制备高血压肝阳上亢证大鼠模型，二维凝胶电泳分离大鼠肾上腺蛋白质，获得差异表达蛋白质；利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）和数据库分析鉴定差异表达蛋白质。 结果：高血压肝阳上亢证大鼠模型复制成功，平肝潜阳法治疗后易激惹程度和结膜充血减轻，收缩压下降（P〈0．05，P〈0．01）。通过点检测后，发现12个具有明显表达差异的蛋白质斑点，经鉴定可以确认的蛋白质点有8个，其中2个蛋白点为同一蛋白。其中异柠檬酸脱氢酶、类固醇合成急性调节蛋白在模型组表达较正常组上调，在治疗组重新下调至前水平；铁轻链蛋白、Tu翻译延长因子、鸟苷酸解离抑制因子、黄素还原酶、Basic转录因子3在模型组表达较正常组下调。在治疗组重新上调至前水平。 结论：成功鉴定了高血压肝阳上亢证大鼠平肝潜阳方治疗前后肾上腺组织差异表达蛋白，为深入研究高血压病肝阳上亢证的病理机制及平肝潜阳方治疗的分子机制奠定了基础。     

平肝潜阳方药对自发性高血压大鼠血管组织蛋白质表达谱的影响

目的：观察平肝潜阳方药对自发性高血压大鼠血管组织中蛋白质表达的影响,为深入研究平肝潜阳方药治疗高血压的作用机制奠定基础。方法：选择WKY大鼠10只作为正常对照,自发性高血压大鼠20只随机分为模型组和平肝潜阳方治疗组。治疗时间为4周,治疗期间每周监测大鼠血压和心率,并观察大鼠行为学指标;治疗结束后,采用双向凝胶电泳（two-di mensional gel electrophoresis,2-DE）结合质谱技术分离鉴定血管组织相关蛋白。结果：平肝潜阳方药不仅能够明显降低自发性高血压大鼠的血压,而且能够改善大鼠的心率、易激惹程度和旋转耐受时间。本实验建立了自发性高血压大鼠血管组织的2-DE图谱。与正常组比较,模型组蛋白质点表达上升2倍及以上的有12个,下降2倍及以上的有15个。治疗组与模型组比较发现,表达下调的15个蛋白质中有10个表达增强,而表达上调的12个蛋白质中有8个表达降低。共得到16个肽质量指纹图谱,3个无质谱结果,搜索到13个具有统计学意义的蛋白质。结论：平肝潜阳方药能够降低血压和改善大鼠的行为学指标,其机制可能与调节血管组织的蛋白质表达谱有关。     

鼻咽癌低分化细胞系CNE-2双向凝胶电泳图谱的建立

目的：建立人鼻咽癌低分化细胞系CNE-2双向凝胶电泳图谱,初步分析其蛋白质表达情况。方法：采用双向凝胶电泳（2-DE）分离人鼻咽癌低分化细胞系CNE-2总蛋白,银染显色,Image Master图象分析系统分析,从胶中选取分离较好的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析获取肽质量指纹图谱（PMF）,Mascot软件搜索MSDB和SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果：获得重复性和分辨率较好的CNE-2双向凝胶电泳图谱;质谱分析了78个蛋白质点,获取77张肽质量指纹图谱,通过查询数据库鉴定了48个蛋白质。结论：建立了人鼻咽癌低分化细胞系CNE-2双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定了部分蛋白质点,为人鼻咽癌蛋白质组数据库的建立提供了有意义的数据。     

平肝潜阳药物对甲亢肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质表达的影响

目的:观察平肝潜阳药物对甲亢肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质表达的影响,为进一步探讨平肝潜阳药物治疗甲亢肝阳上亢证作用机制提供依据.方法:左旋甲状腺素(L-T4)腹腔注射和附子汤灌胃以建立甲亢肝阳上亢证模型,应用蛋白质组学技术比较正常组、甲亢肝阳上亢证组及平肝潜阳药物治疗组中下丘脑的差异蛋白质.结果:3组蛋白质斑点总体分布相似,主要分布在等电点pI 3～10,分子质量为13.8～98.8 kD.与正常组比较,甲亢肝阳上亢证模型组中蛋白质点表达上调的有6个点,下调的有10个点;在模型组中上调的6个点在治疗后均较治疗前有下降;而模型组中下调的10个点在治疗后均较治疗前有上调.结合生物信息学进行质谱鉴定,发现其中9个蛋白质分别为prohibitin,硫氧还蛋白过氧化物酶6,组氨酸三聚体核苷结合蛋白1,蛋白酪氨酸磷酸酶,假定蛋白,肌动蛋白抑制蛋白2,硫氧还蛋白过氧化物酶-Ⅱ,热休克蛋白-27,膜联蛋白-A1.结论:平肝潜阳药物治疗后的甲亢肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质的表达具有差异,所鉴定的这9个蛋白质可能与平肝潜阳药物的作用机制有关.     

平肝潜阳法对高血压模型大鼠下丘脑蛋白质表达的影响

[目的]观察平肝潜阳法对高血压肝阳上亢证模型大鼠下丘脑蛋白质表达差异的影响,从蛋白质组学水平探讨其降血压和改善肝阳上亢证症状的分子机制.[方法]选用自发性高血压大鼠(SHR)灌服附子汤法复制高血压肝阳上亢证大鼠模型,以SD大鼠作正常对照,治疗组给予天麻钩藤饮加减方灌胃给药(0.1g/mL);采用二维凝胶电泳(2-DE)分离大鼠下丘脑蛋白质,获得差异表达蛋白质;利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库分析鉴定差异表达蛋白质.[结果]高血压肝阳上亢证大鼠模型复制成功,其易激惹程度、饮水量、收缩压等与正常组比较,差异均有显著性意义(P＜0.01);治疗组给予中药天麻钩藤饮加减方治疗后,易激惹程度好转,饮水量减少,收缩压下降,与模型组比较差异均有显著性意义(P＜0.01).肝阳上亢模型组蛋白质图谱中有5个蛋白质斑点,与正常组比较表达上升2倍及以上,且同一点在平肝潜阳法治疗组中表达下降2倍及以上;有10个蛋白质斑点表达下降2倍及以上,且同一点在平肝潜阳法治疗组中表达上升2倍及以上.[结论]平肝潜阳法治疗高血压肝阳上亢证的作用可能与下丘脑某些蛋白质的改变有关.     

偏头痛肝阳上亢证大鼠肾上腺蛋白质双向电泳图谱的分析

目的探寻偏头痛肝阳上亢证大鼠相关蛋白。方法将SD大鼠随机分成正常组及偏头痛肝阳上亢证组(简称模型组)。通过对肾上腺组织蛋白质的提取,经双向电泳,Pdquest软件分析,蛋白质点原位酶解及质谱分析。结果发现模型组与正常组大鼠肾上腺总蛋白质的分布模式非常相似,以PI3-8,分子量Mr14.4~75kD范围的蛋白质斑点分布最多。经PDQuest7.0软件分析后得出,在相同条件下识别的蛋白质斑点数分别为正常组(584±25)个,模型组(686±27)个。选取表达有显著差别的12个蛋白质斑点进行酶解和质谱分析,所得结果在网上搜寻,其中有9个点的蛋白质与之匹配。结论表明模型组与正常大鼠肾上腺蛋白质的表达具有差异,经质谱鉴定的9个蛋白质可能与偏头痛肝阳上亢证的形成有关.这为进一步研究偏头痛发病机制打下了基础。     

人子宫体部平滑肌收缩相关蛋白的筛选

目的：筛选与人子宫平滑肌收缩相关的蛋白质以探讨人子宫体部平滑肌收缩及分娩发动的分子机制。方法：应用双向凝胶电泳技术分离人足月自然临产和未临产子宫体部平滑肌组织总蛋白,经考马斯亮蓝染色、图像分析、识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图谱,搜索数据库鉴定部分差异表达蛋白质;Westernl印迹对3个差异表达蛋白进行验证。结果：建立了人足月自然临产和未临产子宫体部平滑肌的双向凝胶电泳图谱,质谱鉴定得到自然临产和未临产之间的表达差异大于2倍的蛋白质点20个,其功能涉及细胞骨架、钙结合力、分子伴侣、能量代谢、信号转导和抗氧化能力等;Westernl印迹验证结果与蛋白质组学结果一致。结论：筛选并鉴定了20个子宫体部平滑肌收缩相关蛋白质,提示细胞骨架改变、钙结合能力增强是分娩发动的重要原因。     

大鼠栓塞肺组织的比较蛋白质组学研究

目的研究大鼠血栓栓塞肺组织和正常肺组织的蛋白差异表达。方法采用血栓颈静脉注入法制备大鼠急性肺栓塞模型，采用双向电泳技术（2-DE）找出差异蛋白，用MALDI-TOF技术和生物信息学技术鉴定差异蛋白，并对部分差异表达蛋白采用Westernblot技术作进一步验证。结果肺组织蛋白的2-DE胶银染可分离出2800多个点，考染可达到2400个点以上。经图像分析得到的46个差异表达蛋白中有32个蛋白得到鉴定。对部分差异蛋白采用Westernblot方法在蛋白水平的验证结果与2-DE结果基本相符。结论采用比较蛋白质组学的方法可以发现大量栓塞肺组织的差异表达蛋白，这些差异表达蛋白将为研究肺栓塞发病的分子机制和病理生理学研究提供重要的线索和依据。     

人骨关节炎滑膜成纤维细胞差异蛋白质谱初步分析

目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及骨关节炎(osteoarthritis, OA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在骨关节炎发病中的作用.方法采用固相pH梯度(immobilized pH gradient, IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)分离正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest2-DE软件分析图像,比较2种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定.结果胶图差异分析显示36个表达水平存在明显差异的蛋白质,选取15个点进行质谱鉴定,鉴定出6个表达上调蛋白质.结论正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异.这些差异蛋白可能参与骨关节炎的发病.     

肝纤维化组织相关功能蛋白质组的差异分析

目的建立肝纤维化组织双向凝胶电泳图谱,初步分析蛋白质组的变化与差异表达。方法利用2-DE分离肝纤维化组织和正常肝组织总蛋白质后,经图像分析识别差异表达的蛋白点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质,并用Western印迹方法对其中3个蛋白质的表达水平变化进行验证。结果比较分析肝纤维化组织和正常肝组织的2-DE图谱,找到差异蛋白点59个,其中在肝纤维化组织表达上调30个,下调29个。并对其中15个表达差异3倍以上的蛋白点进行了肽质量指纹图分析,鉴定出10个与细胞信号转导、细胞增殖、氧化应激有关的蛋白质,14-3-3β、DJ-1及PEBP蛋白的Western印迹验证结果与2-DE的检测结果相一致。结论肝纤维化组织和正常肝组织之间存在一些差异表达的蛋白质,为进一步阐明肝纤维化的发生机制奠定基础。     

鼻息肉的2-DE图谱建立和蛋白质组学分析

目的:建立鼻息肉及鼻黏膜双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)图谱,鉴定差异表达蛋白质。方法:收集鼻息肉及鼻黏膜样本各7例,采用固相pH梯度2-DE,凝胶银染,扫描图像,ImageMaster2-DE软件比较分析等方法,识别差异表达蛋白质,通过质谱分析得到相应肽质指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),采用PeptIdent软件查询Swiss-Protand TreMBL数据库,鉴定差异表达蛋白质。结果:建立了鼻息肉和鼻黏膜蛋白质的2-DE图谱。鼻息肉和鼻黏膜3块凝胶的平均蛋白质点数分别为825±78和936±62;平均匹配点数为682±96和821±78,匹配百分率为82.7%和87.7%;同一鼻息肉的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(IEF)方向偏差为(1.06±0.14)mm,在SDS-PAGE方向偏差为(1.45±0.21)mm。比较分析两种组织各7例样本的2-DE图谱,鼻息肉和鼻黏膜蛋白质点数为1458个和1617个,平均匹配点数为1026个。质谱分析差异蛋白质点40个,获取34张PMF,查询数据库鉴定出蛋白质24个。结论:建立了分辨率高和重复性好的鼻息肉及鼻黏膜2-DE图谱,识别鉴定出一些与鼻息肉病变相关的蛋白质。     

吗啡耐受大鼠脊髓蛋白质组双向电泳图谱的建立与差异蛋白鉴定

目的：建立吗啡耐受大鼠腰段脊髓组织蛋白质组双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)图 谱,比较分析吗啡耐受大鼠腰段脊髓组织中蛋白质组的变化和差异表达,鉴定出差异表达的蛋白质点并进行验证。 方法：将16只鞘内置管雄性SD大鼠随机分为吗啡耐受组(MT组,n=8)和生理盐水组(NS组,n=8),取其腰段脊髓组织 蛋白以固相pH梯度等电聚焦(immobilized pH gradients isoelectric focusing,IPGIEF)为第一向,十二烷基硫酸钠-聚丙烯 酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electroporesis,SDS-PAGE)为第二向进行2-DE,应用PDQuest分析 软件对考马斯亮蓝染色的2-DE图谱进行图像分析,对差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrixassisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,并利用Mascot查询软件搜索Swiss- Prot数据库进行生物信息学分析。采用蛋白质印迹法验证部分差异蛋白。结果：MT组和NS组大鼠脊髓组织2-DE图谱 中各分离出约1 000个清晰的蛋白质点,其中明显差异表达的蛋白有36个。采用MALDI-TOF-MS分析,并利用Mascot查 询软件搜索Swiss-Prot数据库,共搜索到14个蛋白质,与NS组比较,MT组中表达下调的蛋白质点有2个,表达上调的 蛋白点有12个。采用蛋白质印迹法对其中的NADH脱氢酶及伽玛烯醇化酶蛋白质点进行验证,结果与蛋白质组学结 果一致。结论：初步建立了吗啡耐受大鼠脊髓组织蛋白质组双向电泳图谱,证明吗啡耐受可以引起脊髓中多种蛋白 质的表达改变。     

大鼠星形胶质细胞与C6胶质瘤细胞的蛋白质组学分析

目的探讨星形胶质瘤细胞与星形胶质细胞间的蛋白谱变化。方法选择星形细胞来源的C6胶质瘤细胞和体外培养纯化大鼠皮层的星形胶质细胞进行蛋白组学分析。星形细胞和C6细胞双向凝胶电泳（2-DE）的凝胶图像用PDQuest软件比较,差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和生物信息分析,部分蛋白质的差异表达结果用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证。结果获得了24个有明显表达变化的蛋白点;17个蛋白质得到质谱结果,与星形胶质细胞相比,经生物信息学分析确认的6个蛋白质中,磷酸甘油酸变位酶1、生物转化酶、谷胱甘肽S-转移酶P、钙网织蛋白和膜联蛋白A2在C6细胞中表达量较高,而波形蛋白和肌动蛋白γ-肌动蛋白在C6细胞中表达量较低。磷酸甘油酸变位酶1、膜联蛋白A2和波形蛋白经半定量RT-PCR验证与2-DE结果相符。结论本研究发现的差异表达蛋白质与许多重要的细胞生理活动和功能有密切关系,包括无氧酵解过程、细胞骨架组装、生物转化和信号转导,可能与胶质瘤的生长迅速、浸润迁移和抗药性相关。