活性维生素D3对糖尿病大鼠肾组织SHIP2表达及多态性的影响

目的：研究SHIP2基因多态性与糖尿病肾病（DN）的关系，观察应用活性维生素D[-1，25-（OH）2D3]干预对SHIP2表达的影响。方法：选择健康雄性Wistar大鼠30只经腹腔注射链佐脲菌素（STZ）制备糖尿病模型，在糖尿病模型制备后给予1，25-（OH）2D3 0．03ng·g^-1·d^-1皮下泵入，连用8周。于模型成功后检测大鼠血糖（Glu）、24h尿蛋白（24hUP）、血肌酐（Scr）、尿足细胞（UPC）。采用RT—PCR检测肾小球SHIP2基因多态性的表达。结果：VitD3治疗后，SHIP2基因SNP5AA／ACGlu、24hUP较CC型明显下降，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：SHIP2基因SNP5为AA／AC型者对VitD3的治疗反应优于GG型者。SHIP2基因SNP5多态性可能影响VitD3对T2DM患者的治疗效果。     

1，25-二羟维生素D3对糖尿病肾病患者尿足细胞相关蛋白Nephrin的影响

目的：探讨1,25-二羟维生素D3（1,25-（OH）2D3）对糖尿病肾病（DN）患者尿足细胞相关蛋白Nephrin的影响。方法选取DN患者共40例,根据尿清蛋白排泄率（UAER）水平分为微量清蛋白尿的DN1组22例和大量清蛋白尿的DN2组18例,经6周洗脱期后给予1,25-（O H ）2 D30．25μg/d ,共治疗12周,10例健康体检者为对照组,测定各组人群血钙（Ca2＋）、血磷（P3＋）、血肌酐（Scr）及24 h尿蛋白及VAER ,采用定量酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组观察人群尿液中Nephrin的表达。结果DN组患者尿中Nephrin表达明显多于对照组,DN1组与DN2组间尿中Nephrin表达也存在差异,1,25-（OH）2D3可使DN1组患者尿中Nephrin表达基线下移（P＜0．05）,但对DN2组患者尿中Nephrin表达无明显影响（P＞0．05）。结论尿中Nephrin的表达是预测DN进展的有效因子,1,25-（OH）2D3可减少早期DN患者尿中Nephrin表达从而减少蛋白尿,延缓DN进展。     

1,25-二羟维生素D3对人系膜细胞增殖作用的影响

目的 通过观察1,25-二羟维生素D3〔1,25（OH）2D3〕对Ki-67抗原表达的影响,探讨其对人系膜细胞增殖的抑制作用。方法 体外培养人肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、表皮生长因子（EGF）组、1,25（OH）2D3组及EGF联合1,25（OH）2D3组,培养48 h后,应用免疫荧光技术和荧光定量PCR（RT-PCR）检测Ki-67抗原及其mRNA的表达。结果 正常对照组、EGF组、1,25（OH）2D3组和EGF联合1,25（OH）2D3组细胞荧光强度分别为（35.958±2.563）、（49.872±2.745）、（22.415±2.277）和（36.567±2.270）,4组比较差异有统计学意义（F=123.429,P＜0.05）。其中,EGF组荧光强度高于正常对照组,1,25（OH）2D3组荧光强度低于正常对照组（P＜0.05）;1,25（OH）2D3组和EGF联合1,25（OH）2D3组荧光强度低于EGF组（P＜0.05）。以正常对照组为基准,EGF组、1,25（OH）2D3组和EGF联合1,25（OH）2D3组Ki-67 mRNA相对表达量分别为（2.479±0.150）、（0.584±0.031）和（1.176±0.017）,4组比较差异有统计学意义（F=51.107,P＜0.05）。其中,EGF组Ki-67 mRNA相对表达量高于正常对照组,1,25（OH）2D3组Ki-67 mRNA相对表达量低于正常对照组（P＜0.05）;1,25（OH）2D3组和EGF联合1,25（OH）2D3组Ki-67 mRNA相对表达量低于EGF组（P＜0.05）。结论 1,25（OH）2D3可抑制人肾小球系膜细胞的增殖,并降低EGF对人肾小球系膜细胞增殖的促进作用。     

1，25—（OH）2D3对糖尿病肾病大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨1，25～（OH）。D3对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织VEGFmRNA及蛋白质表达的影响。方法SD大鼠分为3组，对照组，糖尿病肾病（DN）组，1，25—（OH）2D3组。链脲菌素腹腔注射诱导DM大鼠模型，尿蛋白定量≥30mg／24h为DN大鼠，诱导成功后1，25—（OH）2D3组给予3ng／（100g·d）皮下注射。实验12周末检测大鼠体重、血糖、血肌酐、24h尿白蛋白。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测VEGFmRNA及蛋白质的表达。结果DN组大鼠体重、血糖、尿白蛋白，肾脏VEGFmRNA及蛋白质的表达，肾小球细胞数，细胞外基质（ECM）均高于对照组（P〈0．01）。与DN组相比，1，25—（OH）2D3组大鼠体重、血糖、尿白蛋白，肾脏VEGFmRNA及蛋白质的表达，肾小球细胞数，ECM聚积显著降低（P〈0．01或P〈0．05）。尿VEGF与尿白蛋白呈正相关（rs=0．41，P=0．037），与体重、血糖、血肌酐无相关性（rs分别为0．18，0．13，0．21，P〉0．05）。结论1，25-（OH）2D3可减轻DN大鼠尿白蛋白的排泄，抑制肾小球系膜增殖，降低VEGFmRNA及蛋白质的表达。     

吡格列酮对糖尿病大鼠足细胞的保护作用

目的观察糖尿病（DM）大鼠肾小球上皮细胞蛋白-1（GLEPPl）表达及尿液足细胞（UPC）排泄的改变，吡格列酮对DM大鼠肾小球足细胞分布及UPC排泄的影响。方法大鼠分为3组，对照组；DM组；吡格列酮治疗组。腹腔注射链脲菌素诱导DM大鼠模型。实验10周末测24h尿蛋白定量（TP）、血清总胆固醇（TC）、血糖（BG）。间接免疫荧光法检测尿沉渣足细胞特异性标志蛋白podocalyxin以观察UPC排泄水平，检测GLEPPl以观察肾小球足细胞分布。结果DM组及吡格列酮治疗组UPC、TP、TC、BG较对照组明显升高（P〈O．01）。与DM组相比，吡格列酮治疗组TP、BG显著降低（P〈O．01），UPC及TC亦降低（P〈O．05）。病理组织肾小球荧光染色示GLEPPl在对照组正常，DM组明显缺失，吡格列酮治疗组呈节段性缺失。UPC与TP呈正相关（rs=0．41，P〈0，05），而与TC、BG无显著相关性（rs=0．19，0．23，P〉O．05）。结论肾小球足细胞缺失参与糖尿病肾病（DN）的发病，UPC检测可作为判断DN病情活动性的标志之一。吡格列酮可减轻DN大鼠尿蛋白，降低TC、血糖，减少足细胞脱落及尿液足细胞的排泄。     

1,25（OH）2D3对miR-130b转染的高糖条件下HMC细胞TGF-β1/Smad3及Col-Ⅳ表达的影响

目的观察高糖环境下1,25（OH）2D3对miR-130b转染肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3、Col-IV表达水平的变化,探索1,25（OH）2D3是否可通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法 HMC细胞传代培养,miR-130b mimics及miR-130b inhibitor经LipofectamineTM 2000转染肾小球系膜细胞,依据分组加入1,25（OH）2D3 1.0×10-8 mol/L,37℃、5%CO2饱和湿度条件下继续培养48 h,共分为6组:（1）空白对照组;（2）细胞+无水乙醇组（A组）;（3）细胞+miR-130b mimics+无水乙醇组（B组）;（4）细胞+miR-130b mimics+1,25（OH）2D3组（C组）;（5）细胞+miR-130b inhibitor+无水乙醇组（D组）;（6）细胞+miR-130b inhibitor+1,25（OH）2D3组（E组）。以实时荧光定量PCR检测细胞miR-130b及TGF-β1、Smad3、Col-IVmRNA的表达水平,以Western blot方法检测细胞TGF-β1、Smad3、Col-IV蛋白的表达水平。采用多组间比较的单因素方差分析及组内两两比较采用LSD、Dunnett’s T3法比较各组数据。结果空白对照组与A组细胞miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平,差异无统计学意义（P>0.05）,与A组相比,B组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显升高（P<0.05）,D组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低（P<0.05）。经1,25（OH）2D3治疗发现,与B组相比,C组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低（P<0.05）,与D组相比,E组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低（P<0.05）。结论 1,25（OH）2D3可降低miR-130b转染肾小球系膜细胞miR-130b及纤维化相关因子TGF-β1、Smad3、Col-IV的表达水平,1,25（OH）2D3可能通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。     

活性维生素D3对人系膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 探讨活性维生素D3〔1,25（OH）2D3〕对人系膜细胞凋亡的影响,并初步探究其作用机制。方法 体外培养人系膜细胞,随机分为4组：正常对照组,表皮生长因子（EGF）组,1,25（OH）2D3组,EGF联合1,25（OH）2D3组,采用流式细胞术检测各组系膜细胞的凋亡率,Western blotting检测各组半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达的情况。结果 与正常对照组比较,EGF组系膜细胞凋亡率降低,Caspase-3表达量降低（P＜0.05）,1,25（OH）2D3组系膜细胞的凋亡率升高,Caspase-3表达量升高（P＜0.05）;与EGF组比较,EGF联合1,25（OH）2D3组系膜细胞的凋亡率升高,Caspase-3表达量升高（P＜0.05）;EGF联合1,25（OH）2D3组与正常对照组系膜细胞的凋亡率和Caspase-3表达量间差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 1,25（OH）2D3可能是通过上调Caspase-3的表达而诱导系膜细胞的凋亡。EGF可抑制人系膜细胞的凋亡,1,25（OH）2D3可逆转EGF对系膜细胞凋亡的抑制作用。     

糖尿病肾病患者血清1，25二羟维生素D3水平与氧化应激的关系

探讨糖尿病肾病（DN）患者血清1,25二羟维生素D3[1,25（OH）2D3]与氧化应激的关系。 DN组血清1,25（OH）2D3水平明显低于糖尿病（DM）组和正常对照组。在 DN 患者,1,25（OH）2D3与晚期氧化蛋白产物（AOPP,r＝-0.646,P＜0.01）、活性氧簇（ROS,r＝-0.703,P＜0.01）呈负相关,与超氧化物歧化酶（SOD,r＝0.962,P＜0.01）呈正相关。多元逐步线性回归分析显示,1,25（OH）2D3、LDL-C、BMI、血肌酐和年龄影响DN患者体内氧化应激系统。随着慢性肾脏病的进展,血清AOPP、ROS水平显著升高,SOD水平显著下降,血清1,25（OH）2D3水平亦明显降低。     

1，25-二羟维生素 D3对白血病6T-CEM细胞株作用的体外研究

目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25（OH）2 D3]对人白血病6T-CEM细胞株凋亡及维生素D受体（VDR）蛋白表达的影响。方法在体外用不同浓度的1,25（OH）2 D3作用于6T-CEM。末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记染色法（TUNEL）检测细胞晚期凋亡的变化,免疫细胞化学法检测VDR蛋白表达。结果不同浓度的1,25（OH）2 D3作用后可促进6T-CEM 细胞的凋亡,呈剂量和时间依赖性（P ＜0．05）。1,25（OH）2 D3作用前后6T-CEM细胞均表达VDR蛋白,药物作用后VDR蛋白表达上调。结论1,25（OH）2 D3在一定浓度范围内可诱导6T-CEM细胞凋亡,使VDR蛋白表达上调。     

不同剂量的1，25（OH）2D3对大鼠Thy1肾炎系膜细胞凋亡的影响

目的：探讨不同剂量的1,25（OH）2D3对大鼠抗胸腺细胞抗体（Thy1）肾炎系膜细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠120只分为空白对照组（A组）、肾炎模型组（B组）、低剂量1,25（OH）2D3组（C组）和高剂量1,25（OH）2D3组（D组）,每组30只。C、D两组造模成功后给药干预,4组分别于干预后第1、3、7、14、21天每组随机处死6只大鼠,取肾组织标本经HE及PAS染色后确定肾脏病理损害分级;免疫组化法检测肾组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase‐3）的表达;TUNEL试剂盒检测其肾小球内细胞凋亡。结果与A组比较,B组Caspase‐3表达增强（P＜0．05）;与B组比较,C、D组Caspase‐3表达增强,但差异无统计学意义（P＞0．05）;D组表达最高,但与C组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。与A组比较,B组肾小球内凋亡细胞明显增多（P＜0．05）,且随时间推移逐渐增强;与B组比较,C、D两组凋亡明显增多（P＜0．05）,并在3d达高峰,7、14d逐渐下降,21d趋于正常（P＜0．05）;C、D两组比较,D组凋亡细胞增多明显,但差异无统计学意义（P＞0．05）。结论1,25（OH）2D3具有诱导大鼠肾小球系膜细胞凋亡的作用,其参与了对Caspase‐3的调节,诱导系膜细胞凋亡,促进肾炎的修复,可延缓肾脏疾病进展。     

1,25-（OH）2D3及LPS对2型糖尿病肾病尿毒症患者单核细胞维生素D受体表达的影响

目的探讨1,25-(OH)2D3及TLR4配体(脂多糖,LPS)对2型糖尿病(T2DM)和糖尿病肾病(diabetic ne-phropathy,DN)尿毒症患者血清干预的单核细胞维生素D受体(VDR)表达的影响,进一步探索1,25-(OH)2D3在T2DM和DN炎症性免疫反应中的作用。方法分离研究对象(健康对照组、T2DM组和DN尿毒症组)外周血血清,孵育THP-1单核细胞,然后于含或不含10-7mol/L的1,25-(OH)2D3培养液中培养48 h后,再用终浓度为1μg/ml的LPS干预24 h,收集单核细胞和培养上清。采用RT-PCR检测VDR mRNA表达,Western blot、免疫荧光检测THP-1单核细胞内VDR蛋白表达。ELISA法检测细胞培养上清IL-6和IL-10浓度。结果与正常对照组比较,在LPS的刺激下T2DM组和DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR mRNA水平下调[对照组(0.99±0.25);T2DM组(0.65±0.24);DN尿毒症组(0.62±0.27),P<0.05];DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR蛋白表达比正常对照组和T2DM组显著下调[对照组(0.48±0.05);T2DM组(0.50±0.06);DN尿毒症组(0.20±0.01),P<0.01],且LPS增强以上患者血清孵育的THP-1单核细胞炎症细胞因子IL-6的分泌[对照组(15.13±1.61);T2DM组(24.06±2.92);DN尿毒症组(70.77±5.48),P<0.05];而1,25-(OH)2D3可部分阻断上述作用。结论 LPS能下调T2DM和DN尿毒症患者单核细胞VDR mRNA和蛋白的表达,引起促炎和抗炎细胞因子失调。1,25-(OH)2D3可部分逆转LPS的作用,对T2DM和DN尿毒症可能具有一定的保护作用。     

早期糖尿病肾病患者1,25-(OH)_2D_3及炎性因子的变化及骨化三醇胶丸的干预作用

目的观察维生素D代谢物1,25-二羟维生素D_3[1,25-(OH)_2D_3]对早期糖尿病肾病(DN)患者炎性因子TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平的影响。方法2型糖尿病患者150例,其中单纯糖尿病患者60例为DM组,早期DN 90例为DN组。DN组再随机分为治疗亚组和对照亚组各45例。对照亚组常规治疗,治疗亚组常规治疗+骨化三醇胶丸,疗程均3个月,比较各组1,25-(OH)_2D_3、24 h尿蛋白定量及相关炎性因子的变化。结果治疗前,DN组1,25-(OH)_2D_3水平低于DM组(P<0.05);TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP,24 h尿蛋白定量、SCr水平均高于DM组(P<0.05);治疗亚组治疗后TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平及24 h尿蛋白定量均较治疗前降低(P<0.05),1,25-(OH)_2D_3水平较前升高(P<0.05)。对照亚组与治疗亚组不良反应发生率比较差异无统计学意义(11.1】%vs.11.11%,P>0.05)。结论早期DN患者1,25-(OH)_2D_3缺乏,炎性因子水平增高,补充骨化三醇胶丸可以改善炎性反应状态。     

糖尿病肾病Vit D缺乏与颈动脉内中膜厚度及冠脉钙化相关关系研究

目的了解糖尿病肾病(DN)患者血清维生素D不足与缺乏的发生情况,探讨其与颈动脉内中膜厚度(IMT)、冠脉钙化之间的相关关系。方法采用放射免疫分析法检测151例DN患者空腹血清25-羟胆骨化醇〔25(OH)D3〕、1,25-二羟胆骨化醇〔1,25(OH)2D3〕、全段甲状旁腺激素(iPTH)浓度,根据25(OH)D3水平将DN患者分为维生素D缺乏组(Vit-D-D)、不足组(Vit-D-I)及正常组(Vit-D-N),比较各组间矿物质代谢、脂代谢、颈动脉内中膜厚度(IMT)、冠脉钙化等指标的差异。多元线性回归分析法分析IMT与25(OH)D3、1,25(OH)2D3、iPTH、脂代谢指标的相关性;logistic回归分析法分析冠脉钙化与25(OH)D3、1,25(OH)2D3、iPTH、脂代谢指标的相关性。结果 DN患者血清25(OH)D3水平为(28±18.1)ng/mL,四分位数间距16.92～35.45ng/mL,Vit-D-I组71例,占47.01%,Vit-D-D组28例,占18.54%。血清1,25(OH)2D3水平为(28.93±33.13)pg/mL,四分位数间距10.36～31.08pg/mL,Vit-D-I者117例,占77.5%。与Vit-D-N组相比,Vit-D-D组的体质量指数(BMI)、24h尿蛋白、胆固醇(CHO)和低密度脂蛋白(LDL)增高,差异有统计学意义(P<0.05)。多元线性回归分析,IMT与年龄、性别、血磷正相关,logistic回归分析,冠脉钙化与血清1,25(OH)2D3负相关。结论 DN患者中维生素D不足和缺乏发生率高,维生素D缺乏者具有较高的尿蛋白、CHO和LDL,冠脉钙化与血清1,25(OH)2D3呈负相关关系。     

厄贝沙坦对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏CTGF、p27kip1表达的影响

目的:观察厄贝沙坦(Irb)对大鼠糖尿病模型肾脏结缔组织生长因子(CTGF)、p27k ip1表达的影响。方法:将SD大鼠分为健康对照组(C组)、糖尿病肾病组(DN组)和糖尿病肾病Irb治疗组(DNI组),DN组和DNI组大鼠制成糖尿病模型,DNI组予以50 mg.kg-1伊贝沙坦灌胃。各组大鼠再分为4个亚组,分别于成模后1、2、4、8周时处死,观察各组大鼠的血糖、体重、24 h尿白蛋白、内生肌酐清除率(Ccr)、肾重、肾脏肥大指数、肾小球面积(AG)和体积(VG)、肾小管面积(AT)、肾小球基底膜(GBM)厚度、肾小管基底膜(TBM)厚度的改变,通过免疫组化观察肾CTGF和p27k ip1的表达。结果:DN组和DNI组大鼠血糖较C组明显升高且维持在一个较高水平(P<0.01)。C组体重增长迅速,DN组和DNI组大鼠体重增长缓慢(P<0.01)。DN组大鼠的24 h尿白蛋白、Ccr、肾重、肾脏肥大指数、AT和VG在糖尿病早期即呈时间依赖性增加(P<0.01或P<0.05)。免疫组化半定量分析显示,各期DN组大鼠肾小球和肾小管的CTGF、p27k ip1表达均高于C组(P<0.01或P<0.05)。8周时DN组大鼠GBM和TBM均较C组明显增厚(P<0.01),而Irb可显著抑制上述参数的增加。CTGF与p27k ip1的表达、24 h尿白蛋白、AT、AG、VG呈显著正相关关系(P<0.05)。结论:早期应用Irb可抑制糖尿病大鼠早期肾脏肥大和CT-GF与p27k ip1的表达,此为早期使用该药预防DN肾脏肥大的发生提供了新的理论依据。     

活性维生素D3抗炎机制对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

[摘要] 目的 探讨活性维生素D3对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制。方法 实验选用3月龄雄性SD大鼠(清洁级)24只。按随机数字表法分为3组，分别为正常对照组(NC)，糖尿病模型组(DM)，活性维生素D3治疗组(DC)，每组8只。喂养12周后，观测肾组织形态学和肾功能变化，尿白蛋白排泄率等指标的变化，用免疫组化法检测肾脏转化生长因子- 1（TGF- 1）、核转录因子- B （NF- B）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、CD68表达水平的变化，RT-PCR方法检测各组大鼠肾皮质TGF- 1 、NF- B、MCP-1 mRNA表达水平的变化。结果 与正常对照组比较，第12周末糖尿病肾病模型组大鼠的肾脏肥大指数（KW/BW）、平均肾小球体积（MGV）、系膜面积比(FMA)、尿白蛋白排泄率(UAER)、血肌酐(Scr)、均有明显升高(P<0．05)，肾皮质TGF- 1 、NF- B、MCP-1 、CD68的蛋白表达水平也有显著增高(P<0．05)，同时肾组织TGF- 1 、NF- B、MCP-1 mRNA表达水平均明显升高(P<0．05)。活性维生素D3治疗组的上述指标与糖尿病模型组比较，则有明显的降低(P<0．05)。结论 活性维生素D3对于糖尿病肾脏病变至少具有部分保护作用，其机制可能为通过抑制糖尿病大鼠肾脏的TGF- 1 、NF- B、MCP-1等细胞因子的表达，抑制巨噬细胞的聚集，从而经由抗炎机制发挥对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。     

Correlation between podocyte excretion and proteinuria in diabetic nephropathy patients

Objective： To observe the podocyte injury in diabetic nephropathy （DN） patients by identifying the urinary podocytes and the situation of detached podocytes in glomeruli and to demonstrate the correlation between podocyte excretion and proteinuria, blood glucose, serum creatinine in different phases in DN patients. Methods： Urinary podocytes and the podocalyxin （PCX） expression state of podocytes in glomeruli were identified and observed by indirect immunofluorescent method. The DN patients were divided into three groups according to the volume of proteinuria, namely small, medium and large volume proteinuria groups. The podocytes in the urine of every group were calculated. The DN patients were divided into five groups according to the chronic kidney disease （CKD） phases, then the positive podocytes in urine were calculated. Meanwhile, the 24-hour protein in urine, fasting blood glucose （FBG） and the serum creatinine of DN patients were tested. The correlations among the proteinuria, serum creatinine, FBG and the number of positive podocytes in the urine of DN patients were statistically analyzed. Results： Urinary positive podocytes were found in 88% of the patients with DN, whereas podocytes were found in 0% of patients with minimal changed disease （MCD） and healthy cases. The expression of PCX was absent in DN patients. In contrast, PCX was expressed integrally in MCD patients. The positive podocytes was 1.49±0.95/ml in small-volume proteinuria group, 2.15±0.70/ml in the medium-volume proteinuria group, and 3.48±1.27/ml in the large-volume proteinuria group. There was no significant difference between the small- and medium- volume proteinuria groups, and there were significant differences between other groups （P〈0.05）. The positive podocyte number tended to increase as proteinuria was increased. By Pearson analysis, the correlation between podocyte number and proteinuria was podocytes in urine from different groups of DN patients, CKD pc I sitive statistically. The difference of the number of positive -V group was significant statistically. The correlation between serum creatinine of CKD Ⅰ -Ⅲ group and positive podocytes in urine was positive statistically. The correlation between serumcreatinine of CKD Ⅳ- Ⅴ group and positive podocytes in urine was not significant statistically. The correlation between FBG and positive podocytes in urine was not significant either. Conclusion： The mechanism of the podocyte injury in DN patients is present. The podocyte injury in DN may positively correlate to proteinuria and serum creatinine of CKD Ⅰ -ⅢDN patients, but not to the FBG and serum creatinine of CKD Ⅳ-Ⅴ patients.     

洛沙坦对人类正常系膜细胞及糖尿病肾病大鼠肾脏组织环氧化酶2的影响

目的:观察高糖及洛沙坦对正常人类系膜细胞(NHMCs)增殖及环氧化酶表达的影响,及洛沙坦对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏环氧化酶(COX2)及转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法:体外实验采用高糖培养NHMCs,分二组(洛沙坦组,非干预组),用WST-1法检测NHMCs增殖,Western印迹和RT-PCR检测COX2表达.体内实验采用链脲菌素方法制备DN大鼠模型,洛沙坦干预4周后,分别检测大鼠肾脏病理改变、尿血栓素B2(TXB2)、24 h尿蛋白定量,同时采用免疫组织化学及RT-PCR方法检测大鼠肾脏COX2及TGF-β1表达.结果:洛沙坦呈剂量依赖性地抑制高糖引起的NHMCs增殖,同时还能减少高糖及低糖引起的NHMCa的COX2高表达;体内实验中,DN大鼠组肾体质量指数、尿TXB2和24 h尿蛋白均较正常对照组明显升高,洛沙坦能减少DN大鼠肾体质量指数、尿.TXB2、24小时尿蛋白,同时显著抑制肾组织COX2和TGF-β1表达.结论:洛沙坦能减少NHMCs的COX2表达,在高糖条件下更为明显.洛沙坦能抑制DN大鼠肾组织COX2和TGF-β1表达,从而改善DN肾损害.     

FK506对早期糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨FK506对早期糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞损伤的保护作用。方法将38只正常雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组)8只、糖尿病肾病组(DN组)10只、FK506治疗组(F组)10只、洛汀新治疗组(L组)10只,其中DN组、F组、L组应用链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。F组成模4周后给予FK506 1 mg/(kg.d)灌胃,L组成模4周后给予洛汀新10 mg/(kg.d)灌胃,DN组与N组4周后给予等量蒸馏水灌胃,每4周末监测各组大鼠血糖(BS)、体质量(BW)、24 h尿蛋白定量,药物干预8周后测定各组大鼠的血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肾质量/体质量(KW/BW),在光镜、电镜下观察肾脏病理组织学改变,应用West-ern blot印迹检测足细胞特异标记物Nephrin的蛋白表达。结果①与N组比较,DN组大鼠BS、SCr、BUN、KW/BW、24 h尿蛋白定量均明显上升(P<0.05);与DN组比较,F组和L组上述指标除BS外均明显降低(P<0.05),且F组和L组之间差异无统计学意义(P>0.05);②光镜下,肾组织病理学观察N组无明显异常,DN组可见明显的肾小球体积增大,肾小球系膜细胞增生,系膜区增宽,基底膜增厚;F组、L组较DN组病理改变明显减轻(P<0.05),且F组和L组之间病理改变无显著性差异(P>0.05);③电镜下,DN组肾小球基底膜显著增宽,足突排列紊乱,足突增宽、融合,F组、L组较DN组上述病变有所减轻(P<0.05);④Western blot结果显示,DN组肾组织Nephrin蛋白表达较N组下降60.1%(P<0.05),F组和L组可明显恢复肾组织Nephrin蛋白的表达(P<0.05)。结论 FK506可能部分通过恢复糖尿病大鼠肾组织Nephrin蛋白表达、维护足细胞结构和功能的完整而发挥减少尿蛋白、延缓DN进展的作用。