应用实时荧光PCR技术检测783例手足口病病原体的探讨

目的应用实时荧光PCR技术对临床783份样本进行分析探讨,拟建立一种特异、灵敏、快速的PCR方法检测肠道病毒核酸,应用于暴发疫情的实验室应急检测。方法应用广州达安生物有限公司提供的《肠道病毒7l核酸检测试剂盒（PCR一荧光探针法）》、《肠道病毒柯萨奇A16核酸检测试剂盒（PCR．荧光探针法）》,此试剂盒检测原理为：在肠道病毒基因的保守区设计特异性引物和TaqMan探针,采用RT．PCR一步法技术,检测样品中是否含有EV71或CAVl6RNA。结果应用实时荧光PCR技术对783例临床标本进行检测,其中肠道病毒71型（EV71）阳性187例;柯萨奇A16（CAVl6）阳性92例。标本类型包括：咽拭子716份;血清38份;大便19份;疱疹液10份;结论实时荧光PCR技术快速、不易污染、易操作,适合用于手足口病暴发疫情的实验室应急检测。     

79例重症手足口病儿童病原学分析

目的分析重症手足口病的病原体,为预防和控制重症手足口病提供依据。方法采集我院PICU收治的79例重症手足口病患儿的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液等标本进行RT-PCR定性检测肠道病毒通用引物及EV71和CA16的VP1基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定。结果共收集标本257份,肠道病毒通用引物阳性164例,EV71阳性118例,CoA16阳性40例,其他6例。其中粪便标本79份,病毒分离阳性61份,阳性率为77.2%;肛拭子79份,病毒分离阳性53份,阳性率为67.1%;咽拭子79份,病毒分离阳性41份,阳性率为51.9%;疱疹液20份,病毒分离阳性9份,阳性率为45%。结论 EV71是引起重症手足口病的主要病原体。粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液的阳性率不同,以粪便阳性率最高。     

手足口病病原学检测及流行病学分析

目的分析信阳市手足口病实验室检测结果,掌握手足口病流行趋势,为本地区手足口病的综合防治提供参考资料。方法采集临床880份诊断为手足口病病例的咽拭子、粪便和肛拭子、疱疹液,应用real time RT-PCR技术检测肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)、通用型肠道病毒(EV)。结果 880份检测标本中,肠道病毒总体检出率为74.32%,其中肠道病毒EV71型、CA16型和其它肠道病毒阳性检出率分别为34.66%、17.27%和20.11%。不同病毒阳性检出率差异有统计学意义(χ2=307.45,P<0.01)。880份检测标本中,从发病至采样0～3d病毒核酸检测率最高(83.54%),其次是4～7d(76.87%)。咽拭子、粪便、肛拭和疱疹液阳性率分别为8.33%、78.01%、66.15%和75%。粪便与其它样本的阳性检出率差异有统计学意义(χ2=27.05,P<0.01)。病例发病集中在4～7月份,以EV71感染为主,病毒感染率以<1岁组最高,男女病毒感染率差异无统计学意义(χ2=0.12,P=0.73)。结论信阳市手足口病的病原体主要是EV71,其流行具有明显的年龄、季节界限。     

某市2011年手足口病RT-PCR诊断结果分析

目的分析2011年致白城市手足口病流行的肠道病毒特点,为白城市手足口病的综合防治提供参考资料。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对2011年白城市174份手足口病临床诊断标本进行检测并进行统计分析。结果 2011年白城市174份手足口病临床诊断标本实验室检测阳性标本为89份(51.15%),其中8份柯萨奇病毒A16(4.6%)、43份肠道病毒71型(24.71%)、38份肠道其他病毒(21.84%)。结论 2011年致白城市手足口病主要病原体为EV71。     

某院手足口病1848例病原体检测结果分析

目的了解该院手足口病病原体分布情况,为其诊断治疗和预防提供有力的科学依据。方法收集2012年5月至2013年7月1 848例手足口病患儿的咽拭子、疱疹液、粪便、肛拭子标本,采用聚合酶链反应-荧光探针体外扩增法检测肠道病毒通用型（EV）、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）。结果 1 848例标本中病毒核酸阳性率为60.71%（1 122/1 848）,其中EV71阳性占1.43%（16/1 122）,Cox A16阳性占1.87%（21/1 122）,EV阳性占57.93%（650/1 122）。男女感染比例为1.69∶1,男性感染率明显高于女性,差异有统计学意义（P〈0.05）,且小于3岁的患儿占84.94%（953/1 122）,4～6月为高发季节,10～12月出现1个次高峰。结论该院手足口病病原体以除EV71、Cox A16外的其他肠道病毒为主,以小于3岁的患儿为主,男性多于女性。     

2012年哈尔滨市手足口病实验室检测结果分析

目的了解哈尔滨市2012年手足口病病原特点。方法采用Real time RT-PCR对2012年采集的粪便、咽拭子、肛拭子等标本检测肠道病毒、CoxA16、EV71。结果共检测手足口标本1046份,肠道病毒阳性676份(64.6%),EV71阳性83份(7.9%),CoxA16阳性489份(46.7%),其他肠道病毒104份(15.3%);阳性标本中,男性阳性382份(56.5%),女性阳性294份(43.5%);全年6~7月份为高峰,肠道病毒感染主要集中于5岁以下儿童,占阳性标本的89.9%。结论 5岁以下儿童是手足口病感染的主要人群,2012年哈尔滨市手足口主要流行株为CoxA16,而EV71和其他HEV也同时存在。     

某市手足口病的病原学研究

目的了解2015年～2017年锦州地区手足口病的病原体分布情况,为手足口病诊断、治疗及防制工作提供依据。方法收集539例手足口病的患儿咽拭子和粪便标本,用实时荧光定量PCR法对病毒进行分型。结果共检测手足口病例标本539份,496例通用型病毒(PE)阳性,其中EV71型占阳性率的8.06%(40/496),CoA16型占阳性率的33.44%(151/496),其他型别肠道病毒占阳性率的61.49%(305/496)。三年间肠道病毒阳性率统计无差异,无统计学意义(χ~2=0.426,P> 0.05)。539份样本中咽拭样本阳性率91.70%(486/495),粪便样本阳性率100%(9/9),检测出肠道病毒阳性率无差异,无统计学意义(χ~2=0.728,P> 0.05)。结论 2015年～2017年锦州市手足口病病原学分布以其他型别肠道病毒为主。     

抚州市2011～2012年手足口病病原学检测结果分析

目的 了解抚州地区手足口病的病原学特征和流行情况.方法 采集2011～2012年抚州市第一人民医院送检的临床诊断手足口病例咽拭子样本338份,实时荧光RT-PCR进行肠道病毒通用型（PE）、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CoxA16）的核酸检测.结果 338例手足口病咽拭子样本中,总阳性率为65.68％（222/338）,2011年咽拭子样本EV71阳性检出率（44.44％）高于2012年（26.89％）,差异有统计学意义（P＜0.01）;2011、2012年均以EV71感染为主,病毒流行株差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 EV71是抚州地区手足口病的主要致病病毒,流行特征和病原学分型分析有助于手足口病的早期防控和治疗.     

惠州市儿童手足口病的流行特征及病原学分析

目的了解惠州市手足口病流行期间（2009—2010年4—10月）的病原学特征及流行病学规律,为科学制定手足口病防控策略提供依据。方法2009—2010年手足口病流行期间共收集578份疑似手足口病标本,用荧光定量RT—PCR法进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）定量分型。结果578例被检测患儿中406例为肠道病毒阳性,阳性率为70．24％;EV71阳性208份,检出率为35．99％;CoxA16阳性145份,检出率为25．09％;手足口病2009年以CoxA16流行为主,2010年以EV71流行为主。手足口病重症病例EV71阳性率为81．55％。手足口病发病以幼儿为主,主要集中在4岁以下儿童,占83．91％。结论手足口病在不同时期的肠道病毒感染往往呈现不同的流行特点,年龄小于3岁的EV71阳性手足口病患儿已成为重症病例的危险因子。及时、持续地开展手足口病病原学调查,预测其流行规律,有助于更好的制定其防控措施。     

荧光PCR法在手足口病肠道病毒EV71型临床诊断中的意义

目的利用实时荧光PCR检测EV71型肠道病毒,了解焦作地区手足口病流行趋势,并提供防治依据。方法采集2014年4月9日至12月16日焦作地区手足口病患儿肛门拭子407例标本,用实时荧光PCR方法对肠道病毒进行核酸检测。结果检出肠道病毒EV71型341例,Co XA16型26例型,肠道病毒通用型40例。结论 2014年4月至12月焦作地区手足口病以肠道病毒EV71型为主。实时荧光PCR技术可以对手足口病的治疗及疫情的有效控制提供有力的病原学支持。     

荧光定量PCR和酶联免疫吸附技术在手足口病肠道病毒快速检测中的应用比较

目的：比较荧光定量PCR（FQ-PCR）和酶联免疫吸附技术（ELISA）在手足口病肠道病毒快速检测中的应用价值。方法：选取疑似手足口病患儿200例,采集咽拭子、粪便、疱疹液标本232份,进行FQ-PCR检测,同时采用ELISA进行平行检测,比较两者的阳性检出率、灵敏度与特异性以及检测窗口期。结果：应用FQ-PCR方法,咽拭子、粪便、疱疹液中EV71、CoxA16、通用型肠道病毒核酸RNA的总阳性检出率分别为84.83%、81.82%、85.71%,差异无统计学意义（F=0.79,P〉0.05）。FQ-PCR方法咽拭子、粪便、疱疹液阳性检出率均高于ELISA法对血液的阳性检出率（χ2=3.17~5.11,P〈0.05）。FQ-PCR、ELISA诊断灵敏度分别为97.03%、87.50%（χ2=3.98,P〈0.05）,诊断特异性分别为97.22%、88.68%（χ2=3.85,P〈0.05）。在EV71、CoxA16及通用型肠道病毒方面,FQ-PCR的检测窗口期均早于ELISA,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：FQ-PCR在手足口病肠道病毒快速检测方面优于ELISA,具有更高的阳性检出率、灵敏度与特异性,以及更早的检测窗口期,对手足口病的早期诊断具有较高的临床指导意义和推广应用价值。     

三种分子生物学方法诊断手足口病的比较

目的比较三种分子生物学方法检测临床手足口病标本的敏感性、特异性及优缺。方法采用一步法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、巢式PCR和实时RT-PCR(Real-time RT-PCR,RRT-PCR)三种分子生物学方法检测临床手足口病标本,分别计算检测肠道病毒71型(EV71)阳性率差异的显著性。结果住院及重死病例以EV71感染为主,轻症病例以柯萨奇A组16型(CA16)感染为主;一步法RT-PCR检测EV71病原的阳性率与另外两种差异均有显著性,另外两种差异无显著性。结论巢式PCR及实时RT-PCR检测能显著提高检测的敏感性,一步法RT-PCR可以用在病毒株的鉴定及分析中。     

2012年手足口病实验室检测及流行病学分析

目的了解济源市手足口病病例肠道病毒的感染情况,为制定预防和控制策略提供依据。方法对2012＋年1-12月济源市临床诊断为手足口病患者的862例标本,运用实时荧光RT—PCR技术检测样本中的肠道病毒核酸。结果济源市2012年862例手足口病病例标本中检出阳性标本742例,阳性率为86．08％;其中肠道病毒71型（EV71）502例,柯萨奇CoxAl6172例,其他肠道病毒68例。结论济源市2012年1—12月Ev71是手足口病病例的主要病原体,病例主要为5岁以下散届儿童为主。     

2009—2011年惠州市253例手足口病患儿病原学分析

目的了解2009—2011年惠州市手足口病流行的病原及流行情况。方法采集253份2009—2011年手足口病患儿的标本,采用荧光定量PCR法对患者标本进行核酸检测,对部分结果阳性的样品进行基因序列分型。结果253份样品中,总肠道病毒核酸（PE）检测阳性156份,其中CoxAl6核酸阳性41份,EV71核酸阳性92份;2009年手足口病流行的病原以CoxAl6型为主（69．0％）;2010年和2011年均以EV71型为主（分别为78．1％和67．5％）;30份EV71型病毒的基因测序分型均为EV71-C4a型,2例EV阳性病例标本的病原基因型为ECH03型;肠道病毒阳性率6岁以下儿童占阳性病例的93．5％（146／156）,3岁以下幼童占阳性病例的73．0％（114／156）。结论本地区2009年手足口病流行的病原以CoxAl6型为主,2010年和2011年以EV71型为主,3年流行的EV71病原基因型主要为EV71-C4a型,在其它肠道病毒阳性的标本中检出基因型为ECH03的病原;3岁以下的幼童为EV71感染的高危人群,在夏秋季节做好手足口病的防控工作很有必要。     

一起暴发流行的无菌性脑炎的病原分析

目的 对一起暴发流行的无菌性脑炎进行病原分析.方法 用荧光PCR法对14份咽拭子标本进行核酸定性检测,细胞培养分离得到病毒后进行微量细胞中和试验,并对病毒VP1区3＆#39;段核酸测序以鉴定病毒.结果 14份咽拭子标本中,甲型/乙型流感病毒、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（Cox A16型）均为阴性,其中8份标本肠道病毒通用型为阳性.从该8份标本从中分离到3株疑似肠道病毒,经微量细胞中和试验及病毒VP1区3＆#39;段核酸测序鉴定,均为埃可病毒30（ECHO30）型肠道病毒.结论 本次暴发的无菌性脑炎由ECHO30型肠道病毒引起.     

2009与2010年佳木斯市手足口病监测结果分析

手足口病(Hand-foot-mouth Disease,HFMD)是由多种人肠道病毒引起的一种儿童常见传染病,是我国法定报告管理的丙类传染病。其病原体主要为小RNA病毒科肠道病毒属的一组肠道病毒,包括柯萨奇病毒A组的4、5、7、9、10、16型,B组的2、5、13型,埃可病毒(Echo)以及人肠道病毒71型,尤以人肠道病毒71型(human enterovious 71,EV71)和柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CoxA16)最为常见[1～3]。一般预后良好;少数病例,特别是EV71感染引起     

小儿手足口病临床分析

手足口病是由多种肠道病毒引起的传染病,其病原体为小RNA病毒科、肠道病毒属的柯萨奇病毒（COX）、埃可病毒（ECHO）和肠道病毒71型（EV71）,其中以EV71型及COXA16型最为常见。     

洛阳市2009～2013年手足口病病原学分析

目的通过对洛阳市2009-2013年手足口病（HFMD）病原学进行分析,为该地区HFMD的防治提供一定理论依据。方法按照洛阳市手足口病防控要求,每月要求洛阳市辖内9县6区定点医院采集一定量HFMD患儿粪便标本,采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测人肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（CA16）及其他类型病原类型并进行分析。结果洛阳市2009-2013年共检测标本4 225例,实验室确诊3 248例,阳性率为76.88%;洛阳市引发HFMD病原主要是EV71,但其降低趋势明显,而CA16和其他肠道病毒引起HFMD所占比例逐年稳步升高;2010年HFMD病原性别分布比较,差异有统计学意义（χ^2=9.48,P=0.009）;其他年度HFMD病原性别分布比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。除2013年外,HFMD病原的城乡分布比较,差异均有统计学意义（χ^2=9.48,P=0.009）。结论洛阳市2009-2013年HFMD病原构成存在一定变化趋势且城乡分布存在显著差异,应及时对HFMD病原进行检测,并分析流行原因,以便更好地对HFMD进行防治。     

聊城地区手足口病病原构成的临床研究

目的探讨聊城地区手足口病（HFMD）的病原构成及临床特点。方法采集2010年6月聊城地区240例HFMD患者（包括23例重症患者）咽拭子并提取病毒RNA。采用real—timeRT—PCR方法,以肠道病毒5’UTR区通用引物及探针对病毒RNA进行初步筛查,初筛阳性标本进一步采用CA16及EV71VP1区特异性引物及探针进行型别鉴定。结果普通患者EV71阳性143例、CA16阳性6例、其他肠道病毒阳性21例;重症患者中EV71阳性率达82．6％（19／23）,CA16感染未见引起重症。结论聊城地区HFMD患者以1～3岁儿童为主,男性高发于女性,农村高发于城市;HFMD的病原包括EV71、CA16及其他肠道病毒,主要病原为EV71,且EV71感染容易引起重症并发症。     

手足口病的居家治疗

手足口病是一种由肠道病毒（Coxsackie A16和肠道病毒71型或Coxsackie A5、A10、A9、B5、B2,分离患者的口腔分泌物、疱疹液、粪便中均可找到这些病毒,以柯萨奇A组16型,