内皮型一氧化氮合酶、内皮素-1、蛋白激酶C、核因子-кB在门静脉高压血管内皮细胞的表达及意义

目的探讨门静脉局部内皮源性血管活性物质异常与内皮细胞应力信号转导通路激活的关系。方法用免疫组织化学和免疫荧光激光扫描共聚焦显微镜技术检测18例门静脉高压症、10例外伤性脾破裂患者脾静脉和15例门静脉高压、10例对照组大鼠门静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素-1(ET-1)、蛋白激酶C(PKC)、核因子-_κB(NF-_κB)的表达,探讨门静脉高压时其血管内皮细胞eNOS、ET-1表达改变与信息分子PKC、NF-_κB的关系。结果实验组内皮细胞PKC表达呈阳性或强阳性,对照组则呈阴性或弱阳性表达。其平均吸光度分别为实验组0．068 2±0．009 2(人)/0．059 3±0．005 7(鼠),对照组0．025 7±0．008 2(人)/0．022 4±0．006 5 (鼠),差异有统计学意义(P＜0．01)。eNOS、ET-1与NF-_κB在门静脉高压患者脾静脉和实验组大鼠模型门静脉内皮的荧光信号强度均显著高于对照组：ET-1：107．359±30．147比56．441±18．874．P＜0．01(人)；91．017±32．517比51．065±19．018,P＜0．01(鼠)。eNOS：95．610±28．333比57．872±27．374,P＜0．01(人)；88．712±28．159比50．897±16．546,P＜0．01(鼠)。NF-_κB：90．098±30．964(人)/90．348±32．852(鼠)比48．358±19．326(人)/48．070±19．065(鼠),P＜0．01 (人)/P＜0．01(鼠)。脾/门静脉内皮细胞ET-1、eNOS的表达与PKC、NF-_κB的表达呈正相关(P＜0．05)。结论门静脉血中ET-1和NO的增高是由于门静脉系统内皮细胞合成增多所致,内皮细胞合成NO的增多与其eNOS表达上调有关。门静脉高压时其血管内皮细胞的机械应力信号通路被激活,内皮细胞ET-1和eNOS表达上调与该通路激活有关。     

核因子-κB的活化与肿瘤坏死因子-αmRNA的表达在门静脉高压症性血管病变中的作用

目的探讨脾脏动、静脉组织核因子-κB(NF-κB)的活化与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达在门静脉高压症(PHT)性血管病变中的意义.方法采用化学发光凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法检测肝硬化PHT患者脾脏动、静脉和正常血管NF-κB的活性,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测TNF-α mRNA的表达情况.结果对照组内脾脏动、静脉组织TNF-α mRNA分别为(0.24±0.12)、(0.21±0.10),显著低于肝硬化PHT组脾动脉、脾静脉TNF-α mR-NA的表达(0.38±0.21)、(0.36±0.16),(P＜0.05);对照组脾动、静脉NF-κB未被检测到明显的活性,而于肝硬化PHT组检测到显著具有活性的NF-κB表达(P＜0.05),且PHT组脾脏动、静脉TNF-α mRNA表达与NF-κB的活性呈显著的正相关.结论肝硬化PHT血管组织NF-κB的活化、TNF-α表达增强,可能是肝硬化PHT时内脏血管病变形成和发展的原因之一.     

局部血管紧张素Ⅱ水平与核因子-κB、p38丝裂素活化蛋白激酶信号传导通路活化在人门静脉高压症脾静脉血管病变中的作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngII)与核因子(NF)-κB、p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路活化在人门静脉高压症(PHT)脾静脉血管病变中的作用及其机制.方法 PHT组为乙肝后肝硬化门静脉高压症患者26例;对照组选取因外伤性脾破裂行脾切除术患者10例.放免法(RIA)检测脾静脉中AngII水平;免疫组织化学法测定脾静脉中NF-κB、Phospho-p38蛋白的表达.蛋白免疫印迹法检测脾静脉及体外培养的脾静脉血管平滑肌细胞的NF-κB 、Phospho-p38蛋白的表达.结果 PHT组脾静脉组织AngII为(248.91±48.31)ng/L,显著高于对照组AngII为(143.35±36.45)ng/L(P<0.01).免疫组织化学和蛋白免疫印迹均显示PHT组脾静脉NF-κB 、Phospho-p38蛋白的表达较对照组明显增强.体外培养脾静脉血管平滑肌细胞(VSMC),AngII在1×10-8～1×10-6mol/L浓度范围内,AngII以浓度依赖性方式增加人脾静脉VSMC中NF-κB 、Phospho-p38蛋白的表达.结论 门静脉高压症时脾静脉组织AngII水平升高,NF-κB、Phospho-p38蛋白表达增加.AngII能激活脾静脉血管平滑肌细胞NF-κB、p38信号传导通路.门静脉高压症时AngII可能通过激活P38和NF-κB信号对传导通路门静脉高压症的形成和维持可能起重要作用.     

低温保护液肺动脉灌注对合并重度肺高压病儿术后肺组织eNOS和iNOS表达的影响

目的利用免疫组织化学技术研究低温肺保护液对体外循环(CPB)后内皮源型一氧化氮合酶(eNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)在肺血管内皮细胞、支气管上皮和肺泡巨噬细胞表达的影响.方法 34例合并重度肺高压的先天性心脏病病儿在常规低温体外循环下行心内畸形矫治术.分为对照组(23例)和保护组(11例),保护组在主动脉阻断后肺动脉内灌注低温肺保护液.两组体外循环后取右下肺组织利用免疫组织化学技术观察肺血管内皮eNOS、支气管上皮iNOS和肺泡巨噬细胞iNOS的表达情况.结果术后肺血管内皮细胞eNOS表达,保护组为2.24±0.60,对照组为0.92±0.70(P＜0.01);支气管上皮iNOS表达,保护组为0.88±0.60,对照组2.08±0.64(P＜0.01);肺泡巨噬细胞iNOS表达,保护组10.6±4.0,对照组28.0±7.50(P＜0.01).结论低温保护液肺动脉灌注可以保持eNOS在肺血管内皮细胞的表达,防止肺泡巨噬细胞和气管上皮细胞iNOS的过度表达,减轻肺内炎症反应,从而减轻CPB后肺高压病儿的肺损伤.     

机械压力对人脐静脉内皮细胞ET-1、NO合成的影响和意义

目的探讨压力增高对血管内皮细胞分泌血管活性物质功能的影响及其在门静脉高压症发病机制中的作用。方法用RT-PCR方法半定量研究人脐静脉内皮细胞ET-1、eNOS、i-NOS mRNA的表达;用硝酸还原酶法检测各组细胞培养液中NO代谢产物NO2-/NO3-的含量,免疫荧光标记激光扫描共聚焦显微镜检测培养细胞的ET-1蛋白表达。结果ET-1和eNOS mR-NA在正常培养的内皮细胞中即有表达,iNOS mRNA则几乎无表达。生理水平压力刺激下各组各待测基因mRNA表达与对照组无显著性差异。超生理范围压力刺激后,ET-1 mRNA有显著性升高。eNOS mRNA在40 mm Hg 24 h后才有显著性差异。iNOS mRNA在不同条件下均无显著变化。在细胞培养液中分别加入细胞外钙螯合剂EGTA、PKC抑制剂后,则见ET-1、eNOS mRNA表达下降。结论压力增高可刺激血管内皮细胞合成ET-1、NO,其作用在转录水平,其作用机制分别与PKC信号通路和细胞外钙浓度有关。门静脉压力增高与血管内皮细胞合成ET-1、NO增多之间存在相互作用。     

核因子-κB的活化与基质Gla蛋白mRNA的表达在门静脉高压症血管病变中的意义

目的 探讨脾脏动、静脉组织内核因子-kappaB（NF-κB）的活化与基质Gla蛋白（matrix Glaprotein，MGP）mRNA的表达在门静脉高压症性血管病变中的意义。方法 实验组为肝炎后肝硬化门静脉高压症（portal hypertension，PHT）患者28例，住院期间行择期脾切除加贲门周围血管离断术；对照组选取同期因外伤性脾破裂急诊入院行脾切除术患者12例。采用化学发光凝胶电泳迁移率（eleetrophoretic mobility shift assay，EMSA）方法检测脾脏动、静脉血管NF-κB的活性；采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测血管组织的MGPmRNA表达。结果 对照组内脾脏动、静脉组织MGPmRNA分别为0．23±0．10、0．26±0．13，显著低于PHT组脾动脉、脾静脉的0．58±0．19、0．55±0．15，差异有统计学意义（P〈0．05）；于PHT组脾动、静脉内检测到NF-κB活性表达1．44±0．23、1．38±0．18，显著高于对照组脾动、静脉的0．19±0．12、0．25±0．16，差异有统计学意义（P〈0．05），且PHT组脾脏动、静脉MGPmRNA表达与NF-KB的活性呈显著正相关（r=0．692，P〈0．05；r=0．703，P〈0．05）。结论 肝硬化时PHT血管组织内NF-κB的活化，MGPmRNA的表达增强，调节血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）的增殖和迁移，并参与了内脏血管病变形成和发展。     

银杏叶提取物对门静脉高压大鼠肺血管核转录因子-κB和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的观察银杏叶提取物（GBE）对门静脉高压症大鼠肺血管核转录因子-κB（NF-KB）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。方法应用免疫组织化学染色方法检测普通雄性Wistar大鼠100只（将实验动物随机分为4组：（1）PHT组（门静脉高压症组）；（2）GBE＋PHT组（腹腔注射GBE）；（3）对照组即生理盐水NS＋PHT组（腹腔注射生理盐水）；（4）假手术组。）中NF-κBp65、α-SMA的表达。结果假手术组中两者几乎无阳性表达，分别为0．129±0．001（O．229±0．101）。其余3组以PHT组和Ns＋PHT组表达最强，分别为0．329±0．004（0．349±0．089）、0．324±0．004（0．334±0．084）。组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。GBE＋PHT组阳性表达较弱为0．198±0．003（0．288±0．103）。与PHT组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论门静脉高压可以引致全身多器官血管病变，NF-κB、α-SMA可能在其发病机制中起到重要的作用。     

髓系触发受体-1在脆弱类杆菌诱导小鼠脓毒血症中的作用

目的 探讨小鼠TREM-1基因重组慢病毒干扰载体(Lentivector,LV)TREM-1 vshRNA对脆弱杆菌脓毒血症小鼠脾脏中促炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6表达及NF-κB通路的影响.方法 将清洁级BALB/c雄性小鼠分成4组,即正常对照组(C组),脆弱类杆菌脓毒症模型生理盐水组(S组),TREM-1 vshRNA干扰实验组(T组)和GFPvshRNA干扰实验组(G组).观察各组中小鼠脾内TREM-1,TNF-α,IL-1β,IL-6的蛋白表达以及IkBa,pDAP12,NF-κB p65的表达情况的变化.结果 与C组比,T组TREM-1 mRNA及蛋白表达均有显著增加(P＜0.01);T,G,S组脾细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量均较C组显著增加(P＜0.01);T组脾细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量均较S,G组明显降低(P＜0.01).S组脾细胞中的pDAPl2和核内NF-κB p65蛋白表达水平明显增强,IκBa蛋白表达水平降低;而T组与S组比较,pDAP12和NF-κB p65蛋白的表达水平显著下调.结论 小鼠TREM-1基因重组慢病毒干扰载体可选择性抑制TREM-1表达,下调脆弱类杆菌诱导的促炎症因子的分泌,而转染可能是通过下调DAPl2的表达,稳定IkBa/NF-κB复合物,抑制TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8基因的转录,而对脆弱类杆菌脂多糖炎症反应产生抑制作用.     

门静脉高压症血流动力学改变及冠状静脉脾静脉壁NOS2、VEGF表达与出血的关系

目的研究门静脉高压症病人门静脉系统血流动力学改变与食管胃底静脉曲张破裂出血的关系,及不同出血史病人门静脉系统血管壁NOS2、VEGF的表达.方法 43例门静脉高压症病人依照出血病史分为两组,A 组(无上消化道出血史或1次出血史)26例,B组(>1次出血史)17例行门静脉系统超声血流检查,术中测压,取冠状静脉脾静脉血管壁免疫组化NOS2、VEGF染色(S-P法).结果门静脉主干内径(PVD)(14.56±1.69)mm,最大血流速度(PVMAX)(19.47±5.35) cm/s,血流量(PVBF)(840.66±211.81)L/min,门静脉压(PVP)(33.2±7.07) cmH2O.A、B两组病人门静脉最大血流速度及门静脉压(PVP)无统计学意义.A组病人门静脉直径及门静脉血流量显著高于B组.43例中28例(65.1%)有冠状静脉逆流(离肝血流).脾静脉血流量(422.5±139.4)L/min,脾静脉平均血流量与门静脉平均血流量之比为0.503,B组病人脾静脉血流量低于A组.脾静脉NOS2阳性率A组为30.8%,B组为52.9%.冠状静脉VEGF阳性率A组为38.5%,B组为58.8%.门静脉系统血管内皮的NOS2和VEGF均有高表达.结论门静脉系统高血流动力学是引起出血的基本条件,初期高血流动力学是机体代偿机制;多次出血史病人门静脉脾静脉血流量明显下降;脾静脉主动充血在门静脉高压症的发生中起重要作用;血管结构改变是影响出血的重要抑或直接因素;门静脉系统血管内皮NOS2高表达在维持高血流动力学中起重要作用;门静脉系统血管内皮VEGF高表达与血管结构改变紧密关联,并因此影响出血情况.     

慢性肾功能衰竭大鼠主动脉核因子κB活化及泛素通路的调节作用

目的　探讨慢性肾功能衰竭大鼠主动脉泛素（Ub）-NF-κB通路的表达变化规律。 方法　将大鼠随机分为假手术对照组（CON）、肾功能衰竭组（CRF）、肾功能衰竭加 MG-132干预组（CRF+M），观察6个月。采用部分肾动脉结扎加对侧肾切除法复制慢性肾功能衰竭大鼠模型。ELISA法测定血液中炎性因子白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α (TNF-α)的含量。RT-PCR半定量测定主动脉中NF-κB及Ub mRNA表达。免疫组织化学方法检测主动脉中NF-κB及Ub蛋白表达。Western印迹法测定主动脉泛素化蛋白的含量。凝胶电泳迁移率（EMSA）法测定动脉中NF-κB的活化情况。 结果　与CON组比较，CRF组大鼠术后4～6个月时血清中IL-1β[ (9.02±1.29)比(2.74±0.96) mg/L]和TNF-α[(50.02±9.52)比(14.04±1.29) mg/L]水平显著升高（P < 0.01）；主动脉NF-κB、Ub的 mRNA表达升高1.38倍和1.29倍（P < 0.01）；NF-κB、Ub的蛋白质表达升高 3.75倍和20.5倍（P < 0.01）；NF-κB活性增强1.82倍（P < 0.01），术后6个月各指标均有进一步上升趋势。与CRF组比较，CRF+M组大鼠干预治疗4～6个月后，大鼠血清中IL-1β[(2.94±0.33) mg/L]和TNF-α[(12.80±2.12) mg/L]含量显著下降（P < 0.01）；NF-κB 、Ub的mRNA及蛋白质表达显著减少（P < 0.01）；NF-κB的活性显著降低（P < 0.01），与CON组比较，差异已无统计学意义，而主动脉中泛素化蛋白含量显著升高（P < 0.01）。 结论 慢性肾功能衰竭大鼠主动脉泛素-NF-κB炎性反应信号明显活化，抑制蛋白酶体活性可能是降低主动脉NF-κB活化的重要药物靶点。     

细胞间粘附因子-1在门静脉高压患者脾静脉的表达及意义

目的 探讨细胞间粘附因子—1(ICAM—1)在门静脉高压患者脾静脉的表达及其在贲门周围血管离断术后门静脉血栓形成的意义。方法 对34例门静脉高压患者和34例单纯脾破裂患者的脾静脉行苏木素—伊红染色观察形态学变化；行ICAM—1原位杂交并行定量分析，术后观察门静脉血栓的发生，对两者的关系进行研究。结果 门静脉高压患者脾静脉中膜平滑肌增生，内膜增厚，门静脉高压组和脾破裂组之间脾静脉内皮细胞ICAM—1mRNA表达差异有非常显著性(P＜0．01)；脾破裂组术后无门静脉血栓形成，门静脉高压组有8例门静脉血栓形成；门静脉高压组内有无门静脉血栓形成病例之间脾静脉内皮细胞ICAM—1mRNA表达差异有显著性(P＜0．05)。结论 门静脉高压性血管病变及其内皮细胞ICAM—1mRNA过度表达可能是门静脉高压患者门静脉血栓形成重要原因。     

雌、孕激素作用后小鼠子宫内膜细胞中核因子-кB的表达

目的探讨不同浓度雌、孕激素对小鼠子宫内膜细胞核因子-кB(NF-кB)表达的影响.方法采用去势雌性昆明小鼠模型,分为假手术、雌激素、孕激素及雌、孕激素联合组,采用免疫组织化学方法检测给药后小鼠子宫内膜NF-кB的表达.结果雌激素浓度为30及100μg·kg-1·d-1时均可促进小鼠子宫内膜细胞NF-кB的表达(P＜0.01),但无明显的量效相关性(P＞0.05).单用孕激素降低子宫内膜细胞胞浆中NF-кB的表达(P＜0.01).雌、孕激素联合促进细胞浆及细胞核的NF-кB表达(P＜0.01).结论雌激素可上调小鼠子宫内膜细胞NF-кB的表达,而孕激素对其表达呈降调节作用;NF-кB途径可能参与了雌、孕激素对子宫内膜容受性建立的调节.     

吗啡对小鼠脑微血管内皮细胞P-糖蛋白表达的影响

目的 评价吗啡对小鼠脑微血管内皮细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法 小鼠脑微血管内皮细胞b.End3,培养于RPMI 1640无血清高糖培养基中,接种于10 cm培养皿中,分为3组,每组9皿,每皿2 ml,M组加入1 μg/ml吗啡,P+M组在加人吗啡前1 h加入5 μnol/L NF-κB抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯,药物浓度均为终浓度,C组不作药物处理.加入吗啡后24 h时收集细胞,测定P-gp和NF-κB p65-abcb1b DNA复合体的表达水平.结果 与C组比较,M组P-gp和NF-κB p65-abcb1bDNA复合体的表达水平上调(P＜0.01);与M组比较,P+M组P-gp和NF-κB p65-abcb1b DNA复合体的表达水平下调(P＜0.05或0.01).结论 吗啡可上调小鼠脑微血管内皮细胞P-gp表达,其机制与NF-κB介导的P-gp基因abcb1b激活有关.     

蛋白激酶B参与门静脉高压症高动力循环的研究

目的 探讨蛋白激酶B （AKT）与肝硬化门静脉高压症（portal hypertension,PHT）高动力循环的关系,特别是AKT与肝门静脉高压症内脏血管收缩反应性降低的关系.方法 将SD大鼠随机分为4组：正常对照组（N组,n=7）、四氯化碳诱导的肝硬化门静脉高压组（PHT组,n=7）,经AKT特异性阻滞剂LY294002处理的门静脉高压组（LY组,n=7）和注射二甲基亚枫（DMOS）的门静脉高压组（DMOS组,n=7）,分别测量门静脉压力（portal vein pressure,PP）,离体肠系膜分支动脉对缩血管物质去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）的反应性,应用LY294002对离体微动脉收缩反应性的影响以及肠系膜动脉内皮细胞内AKT、内皮一氧化氮合酶（eNOS）的蛋白表达变化.结果 ①与N组相比,PHT组PP明显增高（P＜0.01）,应用LY294002后,PP无明显降低（P＞0.05）;②PHT组肠系膜微动脉对NE的反应性较N组明显降低（P＜0.01）,LY294002可改善这种低反应性（P＜ 0.01）;③AKT在PHT肠系膜动脉内皮中的表达明显上调（P＜0.05）,eNOS的表达PHT组和N组无明显差别（P＞ 0.05）,但p-eNOS的表达在PHT组动脉内皮中明显增高（P＜ 0.05）.结论 肝硬化门静脉高压症的内脏动脉中,AKT的表达上调,通过促进eNOS的活化和降低血管收缩反应性,参与内脏高动力循环的形成.     

核因子κB在缺血性急性肾衰竭中作用的实验研究

目的了解核因子κB(NF-κB)在缺血性急性肾衰竭(ARF)发病中的作用.方法分别应用凝胶滞留分析方法和半定量RT-PCR方法检测缺血性ARF大鼠肾组织内NF-κB DNA结合活性及iNOS表达情况.结果肾皮质NF-κB DNA结合活性在缺血再灌注早期从对照组的1.00±0.17升高到缺血再灌注6 h的3.67±1.94(P＜0.05);之后下降,再灌注24 h为1.32±0.27.髓质区NF-κB DNA结合活性在缺血再灌注早期从缺血前的1.03±0.05降到缺血再灌注6 h的0.41±0.09(P＜0.01);随后开始升高,至48 h达1.56±0.39.肾皮质iNOS mRNA随着缺血再灌注时间逐渐延长,表达量逐渐上升,缺血前为0.48±0.06,12 h达高峰(0.86±0.09),随后在小幅下降后又升到再灌注48 h的0.83±0.12.髓质区iNOS mRNA表达量在缺血再灌注早期呈升高趋势,缺血前为0.77±0.04,再灌注6～12 h达高峰(分别为0.94±0.12和0.94±0.09),之后小幅下降后又开始升高,至48 h为0.87±0.04.结论NF-κB在缺血性ARF中存在动态变化,可能在ARF发生中起重要作用.     

肝硬变门静脉高压症患者血红素氧化酶-1的表达

目的　探讨肝硬变门静脉高压症患者脾脏及脾血管血红素氧化酶 (HO ) 1mRNA的表达。方法　应用原位杂交方法检测 2 0例肝硬变门静脉高压症患者脾脏、脾动脉、脾静脉组织HO 1mRNA的表达 ,以 12例脾破裂患者作对照。结果　对照组仅有 4例脾组织可见弱阳性表达 ,平均阳性染色指数为 0 .0 5± 0 .0 1,其脾动、静脉组织未见HO 1mRNA表达。肝硬变门静脉高压症组 18例脾脏HO 1mRNA阳性表达 ,平均阳性染色指数为 0 .68± 0 .12 ,显著高于对照组 (P <0 .0 0 1)。脾动、静脉HO 1mRNA全部表达者 15例 ,脾动、静脉阳性染色指数分别为 0 .5± 0 .1与 0 .5 6± 0 .1,两者差异无显著性 ,(P >0 .0 5 )。结论　肝硬变门静脉高压症合并多种应激原刺激患者HO 1mRNA表达增强 ,HO 1及其代谢产物可能参与门静脉高压症多种病理过程。     

肿瘤坏死因子-α诱导膀胱癌细胞上皮间质转化

目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人膀胱癌细胞的上皮间质转化(EMT)及分子机制.方法 5 μg/L TNF-α处理BLX细胞,凝胶迁移实验(EMSA)观察NF-κB活性,Westem blot和免疫荧光检测波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达及定位,体外侵袭转移实验观察细胞侵袭转移能力.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测EMT相关转录因子的表达.结果 TNF-α激活核转录因子-κB(NF-κB),促使细胞由多边形向纺锤形转换,E-cadherin表达下调(0.37±0.08比0.75±0.15,P＜0.05)且细胞膜定位消失,Vimentin表达上调(0.46 ±0.12比0.00±0.00,P＜0.05),细胞转移和侵袭能力提高(182.00±17.58比134.00 ±9.00;119.00±7.21比85.33±10.11,P＜0.05).TNF-α诱导Twist和Slug转录因子表达上调(0.91 ±0.03比0.36±0.07;0.78±0.11比0.22±0.10,P＜0.01).结论 TNF-α激活NF-κB诱导膀胱癌细胞发生EMT,可能在膀胱癌侵袭转移中发挥作用.     

舒洛地特对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用与机制探讨

目的 观察舒洛地特对糖尿病大鼠肾脏组织核因子NF-κB活性及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响,探讨舒洛地特对糖尿病肾病的保护机制.方法 高脂高糖喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立Wistar大鼠糖尿病模型,并按随机数字表法分为非治疗组(DM)及舒洛地特治疗组( DMS).非糖尿病大鼠作为正常对照组(NC).12周后杀检,测定血糖、血肌酐、尿素氮、三酰甘油、胆固醇;免疫比浊法测定24h尿白蛋白;光镜下观察肾小球形态和结构,计算平均肾小球体积;免疫组化法检测肾组织MCP-1表达;Western印迹方法测定NF-κB活性.结果 与NC组比较,DM组及DMS组血糖、三酰甘油、胆固醇均显著升高(均P＜ 0.01);DMS组与DM组比较,以上指标差异无统计学意义.与NC组相比,DM组及DMS组血肌酐、尿素氮、24 h尿白蛋白显著升高(均P＜0.01).与DM组比较,DMS组血肌酐[(39.1±0.88) μmol/L比(41.0±2.16) μmol/L,P＜0.05]、尿素氮[(9.12±1.06) mmol/L比(9.87±0.19) mmol/L,P＜0.05]、24h尿白蛋白[(19.92±0.96) mg/24 h比(25.99±0.52) mg/24 h,P＜ 0.01]均显著降低.与NC组比较,DM组平均肾小球体积显著增加[(7.47±1.11)×105 μm3比(4.22±1.09)×105μm3,P＜ 0.01];DMS组平均肾小球体积[(6.64±0.71 )×105 μm3,P＜0.05]较DM显著降低,但仍显著高于对照组(P＜0.01).与NC组相比,DM组肾组织MCP-1表达显著升高[( 12.17±1.94 )/HPF比(1.19±0.70)/HPF,P＜0.01];与DM组比较,DMS组肾组织MCP-1表达[(9.22±1.61 )/HPF,P＜0.01]显著降低,但仍高于NC组(P＜0.01).与NC组相比,DM组肾组织NF-κB活性显著升高[(0.89±0.07)比(0.24±0.03),P＜0.01];与DM比较,DMS组肾组织NF-κB活性[(0.27±0.01),P＜0.01]显著降低,与NC组比较,差异无统计学意义.结论 舒洛地特对糖尿病肾病具有防治作用,抑制NF-κB活性及MCP-1表达可能是其作用机制之一.     

大鼠肾移植后载脂蛋白M的表达变化及其在急性排斥反应中的作用和机制

目的 观察大鼠肾移植后载脂蛋白M(apoM)的表达,探讨apoM在急性排斥反应(AR)中的作用及机制.方法 以SD大鼠和Wistar大鼠作为供鼠,Wistar大鼠作为受鼠,建立同系和同种大鼠原位肾移植模型.实验共分3组,对照组取同系移植受鼠,AR组和PDTC组取同种移植受鼠,其中PDIC组受鼠术后0.5 h注射核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC),其余2组注射等量生理盐水.术后1、3、5和7d,取各组血清和移植肾组织进行检测,采用蛋白质印迹法检测NF-κB P65和apoM蛋白的表达,采用实时聚合酶链反应法检测apoM、穿孔素和颗粒酶BmRNA的表达,并对各检测指标进行相关性分析.结果 术后各时间点,AR组和PDTC组apoM、穿孔素和颗粒酶BmRNA的表达水平均明显高于同期对照组(P＜0.01),而PDTC组3种mRNA的表达水平均较同期AR组显著降低(P＜0.01).AR组和PDTC组apoM和NF-κBP65蛋白的表达均较同期对照组明显增高(P＜0.01),PDTC组2种蛋白的表达水平均较同期AR组显著降低(P＜0.01).经相关性分析,apoM蛋白与NF-κB P65蛋白的表达呈直线正相关(r=0.469、P＜0.05),apoM mRNA与穿孔素和颗粒酶BmRNA的表达均呈正相关(r=0.731、P＜0.0l,r=0.514,P＜0.05).结论 同种肾移植后,受鼠移植肾组织内apoM的表达显著上调,其可能通过NF-κB的介导参与AR的发生.     

As2O3对人乳腺癌中NF-κB p65、survivin和caspase-3的作用及相关性研究

目的探讨As2O3对人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤组织中NF-κB p65、survivin及caspase-3表达的影响.方法复制人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤模型,共22只,随机分为3组:对照组、顺铂组及不同浓度(1.5、3.0 mg/kg)的As2O3组(简称As2O3组).用原位杂交法检测survivin mRNA的表达;用免疫组化法检测肿瘤组织NF-κB p65、survivin及caspase-3蛋白的表达.结果人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤中NF-κB p65蛋白及survivin mRNA和蛋白表达的阳性细胞密度As2O3组明显低于顺铂组和对照组(P＜0.01),顺铂组也低于对照组(P＜0.01);而caspase-3蛋白表达结果则相反(P＜0.01).NF-κB p65蛋白、survivin蛋白及survivin mRNA阳性表达间相互呈正相关,而三者的表达均与caspase-3蛋白表达呈负相关.结论 As2O3可能通过抑制NF-κB p65的活性抑制survivin,从而激活caspase-3,诱导人乳腺浸润性导管癌细胞的凋亡,且呈剂量依赖性.