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1.
目的 探讨弓形虫侵染巨噬细胞过程中前列腺素E2(PGE2)的产生途径。方法 用LPS及弓形虫作用于小鼠RAW264.7巨噬细胞系。用气相色谱、ELISA方法分别检测培养上清液中PGE2及花生四烯酸(AA)含量;用RT—PCR及Western blot方法分别检测环加氧酶—l(COX—1)、环加氧酶—2(COX—2)的mRNA及蛋白质表达水平;特异性抑制剂阻断作用于细胞后检测PGE2含量,COX—l/COX—2的mRNA及蛋白质表达。结果 PGE2的合成在弓形虫侵染巨噬细胞4—8h开始升高,12--l6h后达到饱和水平;COX—2mRNA表达在4—8h出现最高峰,在特异性COX—2抑制剂Nimesulide及Indomethacin作用下其表达水平下降,而蛋白质表达水平不受影响。COX—l的mRNA及蛋白质表达在抑制剂处理前后及不同的时间点都末见明显变化。结论 弓形虫可能通过诱导巨噬细胞表达COX—2增加PGE2的合成。 相似文献
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一氧化氮供体对弓形虫速殖子DNA含量的影响 总被引:7,自引:1,他引:6
目的 探讨亚硝基铁氰化钠 (SNP)对弓形虫速殖子DNA含量的影响。 方法 采用SNP与影响胞内 /胞外钙离子浓度的试剂作用于RH株刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)速殖子 ,流式细胞仪检测其DNA含量的变化。 结果 ①SNP导致弓形虫速殖子DNA的损伤 ,并呈时间和剂量依赖性 ;② 2mmol/L胞外钙离子螯合剂EGTA ,2 5 μmol/L胞内钙离子螯合剂BAPTA/AM及 5 0 μmol/L钙离子拮抗剂verapamil单独处理弓形虫速殖子 ,其DNA含量与对照组相比无显著变化 ;③ 2mmol/LEGTA ,2 5 μmol/LBAPTA/AM及 5 0 μmol/Lverapamil明显减少 2mmol/LSNP所致的速殖子亚二倍体峰的比例。 结论 SNP通过改变弓形虫速殖子胞浆游离钙离子浓度 ,诱导其亚二倍体峰的出现 ,造成虫体的损伤 相似文献
3.
氧化砷诱导胃癌细胞凋亡的信号传导途径研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 检测氧化砷(As2O3)诱导胃癌细胞株(SGC-7901和MKN-45)凋亡过程中cAMP、蛋白激酶C(PKC)和酪氨酸蛋白激酶(PTK)活性变化,以探讨其诱导胃癌细胞凋亡过程中可能存在的信号传导途径。方法 应用钙离子拮抗剂、PKC和PTK抑制剂研究其对AS2O3诱导胃癌细胞凋亡过程的影响,以TUNEL法检测细胞凋亡率。以放射免疫法测定As2O3作用前后细胞内cAMP水平的变化。抽提PKC和PTK蛋白,以Lowry法测定As2O3作用前后各自蛋白表达水平的变化。结果 钙离子拮抗剂对As2O3诱导胃癌细胞凋亡过程没有影响,PKC和PTK抑制剂不仅本身能诱导胃癌细胞凋亡,且对As2O3诱导胃癌细胞凋亡具有协同作用。在As2O3诱导胃癌细胞凋亡过程中存在cAMP浓度增高和PKC、PTK活性显著降低,提示cAMP、PKC和PTK可能参与As2O3诱导胃癌细胞凋亡的作用。结论 PKC和PTK抑制剂可以通过影响信号传导系统诱导胃癌细胞凋亡,并能促进As2O3诱导胃癌细胞凋亡。 相似文献
4.
目的 构建柔嫩艾美球虫(E.tenella)杂交株F2 SO7基因重组鸡痘病毒。 方法 将柔嫩艾美球虫杂交株F2 SO7基因,插入到以胸苷激酶(TK)基因为侧翼的鸡痘病毒表达载体pUTA2中的复合启动子下游,获得重组表达质粒pUTA-SO7。用脂质体将重组表达质粒转染鸡痘病毒(FPV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),培养、收获病毒后,用含40 mg/L 5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)的培养液,在TK基因阳性CEF细胞中筛选培养2代,然后用不含BrdU的培养液进行病毒噬斑纯化以筛选rFPV。 结果 PCR扩增可见650 bp左右蛋白条带,间接荧光抗体试验(IFAT)可见重组病毒感染细胞表面有绿色荧光物质,蛋白质印迹分析(Western Blotting),在相对分子质量(Mr)36 000处有1条特异条带,证实了重组病毒在CEF中表达了SO7基因。 结论 成功筛选出表达E.tenella杂交株F2 SO7基因的重组鸡痘病毒。 相似文献
5.
《中国老年学杂志》2019,(16)
目的明确Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路在氨诱导星形胶质细胞水肿中的作用。方法①向体外培养星形胶质细胞中分别加入磷脂酶(PLC)抑制剂U73122(1μmol/L),Ca~(2+)螯合剂BAPTA(25μmol/L)或PKC抑制剂GF109203X(3μmol/L),再以氯化铵刺激细胞12 h,以Calcein作为荧光探针检测细胞水肿情况;②向细胞中分别加入PLC抑制剂U73122或表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478(1μmol/L),再加入氯化铵,以Fura-2作为荧光探针,检测细胞内Ca~(2+)瞬时变化;③氯化铵刺激细胞20 min,免疫共沉淀法检测PLC/EGFR相互结合情况;④向细胞中加入PKC抑制剂GF109203X,再以氯化铵刺激星形胶质细胞2 h检测ERK磷酸化情况。结果①U73122、BAPTA及GF109203X预处理均可显著抑制氨诱导的星形胶质细胞水肿(均P0.05);②U73122及AG1478显著抑制氨诱导的细胞内Ca~(2+)瞬时升高(均P0.05);③20 min氨刺激可增加PLC与EGFR间的相互结合(P0.05);④GF109203X显著抑制氨诱导的ERK磷酸化(P0.05)。结论 Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路介导了氨诱导星形胶质细胞水肿的过程。 相似文献
6.
环氧化酶-2(COX-2)是内源性前列腺素(PGs)合成中的限速酶。它通过多种途径参与肺癌的发生发展和转移,并与肺癌患者的预后有关。一些体内外研究表明COX-2抑制剂能够抑制肺癌细胞的生长与转移临床上选择性COX-2抑制剂有可能成为肺癌预防和化学治疗的新靶点。 相似文献
7.
目的 探讨花生四烯酸在弓形虫侵染巨噬细胞中的信号作用。 方法 采用普通光镜、流式细胞仪检测巨噬细胞的感染率;Fura2/AM染色,荧光分光光度法测定游离钙离子浓度。 结果 宿主细胞内钙离子浓度及巨噬细胞感染率随着外源性花生四烯酸浓度的增加而升高,并呈剂量依赖性关系。细胞外的钙离子内流,细胞内储存的钙离子释放,包括胞膜钙离子通道均在花生四烯酸的作用下,参与了胞内钙离子的升高。钙离子通道阻断剂对花生四烯酸作用前后的感染率的影响不明显。 结论 花生四烯酸可能通过钙离子作用于宿主细胞,增高其感染率。 相似文献
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目的 对华支睾吸虫F0-ATP合酶b亚基(CsF0-ATP-synt_B)基因进行克隆、表达及重组蛋白的免疫原性分析。 方法 以华支睾吸虫成虫cDNA文库中含有F0-ATP合酶b亚基基因的质粒为模板,扩增该基因(去除线粒体靶向序列的成熟肽基因),将其克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经亲和层析获得的纯化表达产物免疫SD大鼠,制备抗血清。蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的免疫原性。 结果 华支睾吸虫F0-ATP合酶b亚基成熟肽基因的编码区含813个碱基,编码271个氨基酸,相对分子质量(Mr)为31 171.9。经亲和层析获得的重组蛋白可被其免疫的大鼠血清识别。 结论 华支睾吸虫F0-ATP合酶b亚基基因可在原核表达系统中获得具有免疫原性的高效表达。 相似文献
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香菇多糖对巨噬细胞一氧化氮合酶活性和还原型谷胱甘肽的影响 总被引:7,自引:1,他引:7
目的 研究香菇多糖 (LTN)对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)活性和细胞内还原型谷胱甘肽 (GSH)水平的影响及其关系 ,探讨 L TN的免疫调节作用机制。方法 1观察 LTN诱导小鼠腹腔巨噬细胞 i NOS活性和细胞内 (GSH)水平的影响 ;2观察 m RNA转录抑制剂、蛋白质合成抑制剂和 NOS抑制剂对巨噬细胞 i NOS活性和细胞内 GSH水平的影响 ;3观察 GSH去除剂对巨噬细胞 i NOS活性的影响。结果 1 LTN诱导小鼠腹腔巨噬细胞 i NOS活性增加和细胞内 GSH减少 ;2 3种抑制剂抑制 L TN诱导的小鼠腹腔巨噬细胞 i NOS活性增加和细胞内 GSH减少 ;3GSH去除剂抑制 LTN诱导的巨噬细胞 i NOS活性。结论 LTN能增加小鼠腹腔巨噬细胞 i NOS的活性 ,并同时消耗细胞内的 GSH,提示细胞内GSH可能起到调节巨噬细胞 i NOS活性和保护宿主细胞免受 NO介导的细胞毒作用。 相似文献
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目的研究HDL通过1-磷酸鞘鞍醇受体途径上调COX-2表达的细胞内信号机制。方法培养人脐静脉内皮细胞,HDL不同时间和浓度处理,qPCR和WB检测COX-2、CREB和Sphk2表达情况。人脐静脉内皮细胞转染SiRNASphk2后,qPCR和WB检测HDL对COX-2表达情况。人脐静脉内皮细胞用采用JTE(抑制S1P2)、PTX(抑制Gi/o)、SB203580(抑制p38MAPK)、Stau-rosporine(抑制PKC)及U0126(抑制ERK1/2)抑制剂处理后,qPCR和WB检测HDL对COX-2的表达情况。免疫共沉淀检测p-CREB和Sphk2结合情况,用激光共聚焦进行定位观察。结果 HDL呈时间和剂量上调COX-2、SphK2表达及CREB磷酸化,转染SphK2siRNA后COX-2表达水平下调;采用JTE(抑制S1P2),SB203580(抑制P38MAPK),Staurosporine(抑制PKC),U0126(抑制ERK1/2)抑制剂处理后,HDL对COX-2的上调作用明显抑制;免疫共沉淀和激光共聚焦显示p-CREB和SphK2结合。结论 HDL通过S1P2-G i/o-PKC(P38MA... 相似文献
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目的 探讨弓形虫Ⅰ型(RH)ROP16蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期及凋亡方面的作用。方法 以空载体(MCF-7-HBLV)和过表达ROP16蛋白的慢病毒(HBLV-RH ROP16)分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选出稳定表达ROP16的细胞株,Real time PCR、Western blot法检测MCF-7细胞中ROP16 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖、周期和凋亡。Western blot法检测细胞周期及凋亡相关蛋白表达。结果 相比MCF-7-HBLV(空载体组)和MCF-7细胞组(对照组),MCF-7-RH ROP16细胞组中ROP16 mRNA和蛋白表达升高;细胞增殖率降低(P<0.01);S期细胞比例、细胞凋亡率升高(P<0.01)。促凋亡因子Bax、P53、Caspase-9、Caspase-3及细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子P21表达增高(P<0.01);抗凋亡蛋白Bcl-2及细胞周期蛋白A1(CyclinA1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达均下降(P<0.01)。结论 弓形虫Ⅰ型(RH)ROP1... 相似文献
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目的 探讨弓形虫感染对体外诱导的人外周血单核细胞(Human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)极化特点的影响。方法 用佛波酯(PMA)诱导THP-148 h使之由悬浮的单核细胞诱导为贴壁的巨噬细胞,体外选择不同时间点感染弓形虫,用Diff染色分析弓形虫在细胞内的增殖情况。Western blot检测极化相关蛋白,Q-PCR检测mRNA的表达情况。结果 成功诱导得到贴壁的巨噬细胞模型,感染弓形虫后,M1型巨噬细胞标志性蛋白iNOS 及M2型巨噬细胞标志型蛋白Arg-1 36 h表达量与对照组差异明显(t=10.23,P<0.05)。Q-PCR的结果显示不同的处理组IL-1、IL-12、iNOS和TNF-α逐渐减少,而IL-10、Arg-1呈逐渐增加,到36 h达到顶峰(t=9.587,P<0.05)。结论 弓形虫RH株感染THP-1巨噬细胞后可以在胞内生长增殖,THP-1细胞感染后向M2型巨噬细胞方向极化。 相似文献
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Interleukin 10 is induced by recombinant HIV-1 Nef protein involving the calcium/calmodulin-dependent phosphodiesterase signal transduction pathway
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Emerita Brigino Soichi Haraguchi Angelos Koutsonikolis George J. Cianciolo Una Owens Robert A. Good Noorbibi K. Day 《Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America》1997,94(7):3178-3182
HIV-1 Nef protein shares a significant homology with the immunosuppressive and highly conserved retroviral transmembrane protein p15E. In the present study, extracellular Nef protein is shown to induce interleukin (IL)-10 mRNA expression in human peripheral blood mononuclear cells as well as in cells of H9 T and U937 promonocytic human cell lines. Release of IL-10 protein into supernatants of peripheral blood mononuclear cells stimulated with Nef is dose-dependent. Expression of cytokines IL-2, IL-4, IL-5, IL-12 p40, IL-13, and interferon γ is not affected by Nef stimulation. IL-10 protein production induced by Nef is inhibited by the calcium/calmodulin phosphodiesterase inhibitor W-7 but not by the protein kinase A inhibitor H-89 nor the protein kinase C inhibitors staurosporine and calphostin C. The calcium chelating agent EGTA also inhibits the IL-10 production induced by Nef, and this inhibition is reversed by the addition of calcium along with Nef. These findings indicate that extracellular Nef may contribute to the immunopathogenesis of HIV infection by inducing IL-10. 相似文献
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Durand F Brenier-Pinchart MP Berger F Marche PN Grillot R Pelloux H 《Parasite immunology》2004,26(10):419-422
We have used human astrocytoma-derived cells to investigate the cellular responses of central nervous system cells to Toxoplasma gondii infection. At 24 h post inoculation, the secretion of CCL-2 (or Monocyte Chemotactic Protein-1) was augmented six-fold over the control. This secretion was down-regulated by D609, a specific inhibitor of phosphatidylcholine-dependent phospholipase C (PC-PLC), but not modulated by gamma interferon (IFN-gamma). Ribonuclease protection assay analyses showed significant down-regulation of CCL-2 mRNA production during infection by Toxoplasma gondii when cells were treated by D609. The mRNA levels of the seven other chemokines studied were not modified by D609. CCL-2 seems to contribute to the cell recruitment during human cerebral reactivation of Toxoplasma gondii. Cellular production of this CC chemokine during toxoplasmosis may be regulated by a PC-PLC-dependent pathway. 相似文献
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Mechanisms of glucose-induced expression of pancreatic-derived factor in pancreatic beta-cells 总被引:1,自引:0,他引:1
Pancreatic-derived factor (PANDER) is a cytokine-like peptide highly expressed in pancreatic beta-cells. PANDER was reported to promote apoptosis of pancreatic beta-cells and secrete in response to glucose. Here we explored the effects of glucose on PANDER expression, and the underlying mechanisms in murine pancreatic beta-cell line MIN6 and primary islets. Our results showed that glucose up-regulated PANDER mRNA and protein levels in a time- and dose-dependent manner in MIN6 cells and pancreatic islets. In cells expressing cAMP response element-binding protein (CREB) dominant-negative construct, glucose failed to induce PANDER gene expression and promoter activation. Treatment of the cells with calcium chelator [EGTA, 1,2-bis(o-aminophenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid tetra(acetoxymethyl)ester (BAPTA/AM)], the voltage-dependent Ca(2+) channel inhibitor (nifedipine), the protein kinase A (PKA) inhibitor (H89), the protein kinase C (PKC) inhibitor (Go6976), or the MAPK kinase 1/2 inhibitor (PD98059), all significantly inhibited glucose-induced PANDER gene expression and promoter activation. Further studies showed that glucose induced CREB phosphorylation through Ca(2+)-PKA-ERK1/2 and Ca(2+)-PKC pathways. Thus, the Ca(2+)-PKA-ERK1/2-CREB and Ca(2+)-PKC-CREB signaling pathways are involved in glucose-induced PANDER gene expression. Wortmannin (phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor), ammonium pyrrolidinedithiocarbamate (nuclear factor-kappaB inhibitor and nonspecific antioxidant), and N-acetylcysteine (antioxidant) were also found to inhibit glucose-induced PANDER promoter activation and gene expression. Because there is no nuclear factor-kappaB binding site in the promoter region of PANDER gene, these results suggest that phosphatidylinositol 3-kinase and reactive oxygen species be involved in glucose-induced PANDER gene expression. In conclusion, glucose induces PANDER gene expression in pancreatic beta-cells through multiple signaling pathways. Because PANDER is expressed by pancreatic beta-cells and in response to glucose in a similar way to those of insulin, PANDER may be involved in glucose homeostasis. 相似文献
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目的研究生长分化因子11(GDF11)对巨噬细胞胆固醇逆转运的影响,并探究GDF11发挥作用的具体机制。方法提取小鼠腹腔巨噬细胞后给予氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、GDF11和激活素受体样激酶7(ALK7)抑制剂SB431542孵育24 h。利用油红O染色观察细胞脂质蓄积,提取总m RNA和总蛋白后,利用realtime PCR和Western blot检测GDF11、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)的m RNA和蛋白表达水平。给予小鼠腹腔注射外源GDF11,提取腹腔巨噬细胞用3H标记的胆固醇孵育后注射回小鼠腹腔内,每8 h收集一次小鼠粪便,48 h后收集小鼠肝脏和血液样本,检测样本3H含量,计算胆固醇逆转运水平。结果 ox-LDL孵育24 h显著诱导巨噬细胞内脂质蓄积,同时抑制GDF11 m RNA及蛋白的表达。GDF11处理能有效抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞脂质蓄积,同时显著诱导ABCA1 m RNA及蛋白的表达。经外源补充GDF11后显著提高小鼠体内胆固醇逆转运水平。GDF11孵育巨噬细胞后,在给予巨噬细胞ALK7抑制剂SB431542孵育后,GDF11对ox-LDL诱导细胞内脂质蓄积的抑制作用被拮抗,对ABCA1表达的调控作用也被抑制。结论 GDF11通过ALK7调节ABCA1的表达,从而促进巨噬细胞胆固醇逆转运。 相似文献
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目的观察表面抗原3(SAG3)对弓形虫入侵相关蛋白的影响,为深入研究弓形虫的致病机制奠定基础。方法用电穿孔的方法将针对SAG3基因3-′UTR区的dsRNA转入弓形虫速殖子体内,转染后的虫体感染Hela细胞,转染后2 h提取总RNA,RT-PCR检测SAG3的抑制效率,同时检测弓形虫入侵蛋白ROP2、MIC2的表达情况。结果dsRNA电穿孔转染弓形虫速殖子后抑制SAG3 mRNA表达,ROP2、MIC2的表达量显著低于对照组。结论抑制SAG3的表达影响ROP2、MIC2的表达。 相似文献