造血细胞生长因子在脐血体外扩增中作用研究的进展

人脐血中造血干/祖细胞增殖能力强,但单份脐血数量有限,因此目前脐血移植多用于低体重儿童。造血细胞生长因子具有促进脐血扩增的作用,在不同的造血细胞生长因子联合作用下,可以有目的地进行体外扩增,从而使单份脐血有望解决高体重儿童及成人脐血移植存在的造血干/祖细胞数量不足的问题,为脐血广泛应用于临床移植作出贡献。     

脐血细胞生物学特性的研究

目的 :研究单份脐血造血干 /祖细胞 (HSC/ HPC)的质和量 ,脐血中的干细胞、免疫细胞的表型特征。方法 :收集 2 0份脐血 ,采用 6 %的羟乙基淀粉沉淀去除红细胞 (RBC) ,利用甲基纤维素半固体培养法培养和观察 HSC/ HPC的集落生成情况 ,以了解增殖能力 ,用流式细胞仪检测脐血 CD34 + CD38- 、CD34 + 、CD34 + CD38+ 细胞量及免疫细胞的表型特性。结果 :2 0份脐血采集量在 4 0 m L～ 16 5 m L 之间 ,均数为 (78± 2 3) m L。每次收集的有核细胞 (NC)数在 4 .8×10 8～ 4 .6× 10 9之间 ,均数为 (1.4 3± 0 .96 )× 10 9,NC的回收率为 86 .6 %。脐血中 CD34 + CD35-细胞数占 NC总数的 (0 .10 2± 0 .0 70 ) % ,平均为 (0 .12 0± 0 .0 90 )× 10 7/份 ,CD34 + 细胞占 NC总数的 (1.2 9± 0 .31) % ,平均为 (1.4 2± 0 .92 )×10 7个 /份 ,CFU- GM为 (2 .5 4± 2 .0 2 )× 10 6个 ,BFU- E为 (1.4 1± 1.39)× 10 6个 ,CFU- GEMM(1.6 0± 2 .30 )× 10 5个 ,CD4 + T细胞表达 CD4 5RA为 (89.95± 7.86 ) % ,CD8+ T细胞表达 CD4 5RA为 (99.5 8± 3.4 6 ) % ,均显著高于成人外周血 T淋巴细胞 (P<0 .0 1) ,结论 :单份脐血的 HSC/ HPC含量可以满足体重较轻的 (<5 0 kg成人和儿童患者移植的需要 ,体重 ) ,5 0 kg以上的     

脐血造血细胞培养与脐血治疗再生障碍性贫血的疗效

目的 研究观察脐血造血细胞含量、特性,为脐血的临床应用,特别是对成人脐血移植进行基础研究。方法 应用细胞培养技术,在脐血中成功地培养出ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｇ、ＣＦＵ－ＧＭ及ＣＦＵ－Ｆ等多种造血祖细胞,并应用脐血输注治疗再生障碍性贫血（ＡＡ）４０例。结果 脐血各系造血祖细胞显高于成人外周血,而且与成人骨髓培养结果近似。脐血输注治疗ＡＡ显优于传统的治疗方法。结论 脐血输注是ＡＡ患的一     

脐血CD34+细胞向巨核系定向扩增的初步探讨

目的探讨不同细胞因子组合定向诱导CD34 细胞向巨核系分化的能力。方法利用免疫磁珠法(MACS)分离纯化脐血CD34 细胞,在无血清培养体系中以1×105/ml每孔接种,经不同细胞因子组合诱导培养。结果收集5份脐血标本,平均体积为95ml,CD34 细胞的比例为2.18%±0.89%,经过MACS分选后,CD34 细胞纯度平均可达81.55%。在细胞生长因子的刺激培养下,MK3组有核细胞数,CD34 细胞数,CD41a 细胞数在培养第16天分别达277.4倍、6.89倍、66.79倍,高于其它各组。结论脐血CD34 细胞体外在相关细胞生长因子的刺激下可向巨核细胞系定向分化。     

荷瘤SCID小鼠脐血移植后免疫功能变化的研究

目的 探讨脐血造血干/祖细胞移植重建荷瘤SCID鼠的免疫学机制是否为负荷人肿瘤激活人源性免疫功能.方法 首先培养人肝癌高转移细胞株HCCLM.细胞,然后以HCCLM6细胞株在脐血移植免疫功能重建组(A组)SLID鼠皮下建立荷瘤模型,脐血移植免疫功能重建B组未荷瘤作为对照.实验动物于5周后处死,分别进行以下检测:(1)比...     

脐血造血细胞低温保存的实验研究

目的：探索脐血造血细胞冷冻保存的更简便，可靠，经济的方法：以5％DMSO（二甲基亚砜），6％HES（羟二基淀粉），4％人血白蛋做为联合冷冻护液，－80℃冰箱冷冻并保存脐血，与传统的速率降温方法比较其冷冻前后细胞活性，有核细胞回收率，CFU－GM（粒单－集落形成单位）回收率与CD^ 34细胞回收率间的差异，结果：脐血在二种冷冻方法间，用同一冷冻方法全血与分离的MNC（单个核细胞）间其以上指标差异均无显著性（P＞0．05），结论：脐血冷冻保存可采用－80℃冰箱进行。     

干细胞因子对正常造血祖细胞作用的研究

采用半固体和液体培养技术研究人工重组小鼠干细胞因子（SCF），观察对正常人骨髓和外周血造血祖细胞的刺激作用，发现SCF单独存在即有促增殖作用，与促红细胞生成素（Epo）联合应用有明显的协同作用。SCF可能是一种有效的刺激骨髓和／或外周血造血祖细胞增殖的造血生长因子。     

脐血内皮祖细胞梗塞心肌移植参与血管再生

目的 观察犬脐血内皮祖细胞(EPCs)参与梗死心肌血管再生.方法 从妊娠犬脐血提取EPCs,免疫组化鉴定,建立成年杂种犬冠状动脉梗死模型,将1,1-二(十八烷基)-3,3,3′, 3′-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐(Dil)标记的EPCs移植入梗死区域,1、4、8周后于冠脉灌注Ⅰ型荆豆凝集素(UEA-1)标记EPCs,处死动物.取心肌标本HE染色确认梗死模型,并在荧光显微镜下观察Dil和UEA-1标记确认EPCs参与梗死心肌血管再生.结果 EPCs呈"铺路石"样外观,细胞标记白细胞分化抗原31阳性(CD31 ),血管性假血友病因子阳性(vWF ),胎肝激酶1阳性(FLK-1 ),白细胞分化抗原34阳性(CD34 );心肌梗死区可见有大量的瘢痕组织、成纤维细胞以及小血管再生;实验组梗死心肌区域标本内小血管上见Dil和UEA-1标记阳性细胞,对照组仅见UEA-1标记细胞.结论 犬脐血EPCs梗死心肌移植可参与血管再生.     

严重联合免疫缺陷小鼠脐血移植后移植物抗宿主病的初探

目的观察SCID鼠在人脐血干/祖细胞移植后免疫功能的变化,探讨移植后移植物抗宿主病（GVHD）的发生情况。方法采集足月健康胎儿新鲜脐血,以6%HES＋NH4CL破红细胞液法分离人脐带血有核细胞。按随机原则将SCID鼠分为A、B、C三组,每组各8只：A组为脐血移植免疫功能重建、无肿瘤组;B组为脐血移植免疫功能重建、荷瘤组;C组为未重建免疫功能（免疫缺陷）、荷瘤组。A、B组分别经尾静脉程序移植（分5次）,注入人脐血有核细胞（总量5×107）,两组小鼠移植前都给予低剂量的环磷酰胺（150mg/kg）,并连续使用甲基强的松龙1周（自20mg/kg逐渐减量至5mg/kg）作为预处理。C组为未移植对照组。观察各组小鼠免疫功能的变化及GVHD的发生情况。结果 （1）脐血移植后第3周即可在SCID小鼠外周血测得人IgG,第4周即出现人源性CD3＋细胞并随着时间的延长其数值增加;（2）在观察期间SCID小鼠无腹泻、厌食、脱毛、皮疹、体重减轻、生长落后等表现,病理检查均未见明显GVHD的特征。结论人脐血程序移植加低剂量的环磷酰胺方案可替代照射预处理成功地在SCID鼠体内建立类似人类的细胞和体液免疫,并有效地预防GVHD的发生。     

脐血间充质干细胞向神经细胞诱导分化的研究进展

脐血间充质干细胞是从胎儿脐带血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为神经细胞的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的研究价值,该文将对脐血间充质干细胞向神经细胞定向分化的诱导方法作一综述。     

体外定向诱导脐血间充质干细胞向类肝细胞分化的研究

目的 探讨诱导人脐血间充质干细胞（UBCMSCs）向类肝细胞定向分化的可能性。方法 采用密度梯度离心法与直接贴壁法相结合，从人脐血中分离UBCMSCs；通过流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD44，确定UCBMSCs的比例。在UCBMSCs培养体系中，加入人肝细胞株L-02细胞培养上清液或诱导因子（联用HGF和FGF-4）共培养，检测诱导后第7天、14天细胞内细胞角蛋白18（CK18）、白蛋白及糖原的表达。结果 从脐血中分离获得均一贴壁的UBCMSCs；在UBCMSCs培养体系中，无论是添加L-02细胞培养上清液，还是采用诱导因子HGF和FGF-4，均可诱导UCBMSCs细胞内表达中晚期成熟肝细胞表面标志物CK8＆18、白蛋白及糖原。结论 密度梯度离心法和直接贴壁法相结合能够有效分离UCBMSCs；L-02人肝细胞培养上清液或诱导因子HGF、FGF-4均具有诱导UCBMSCs向类肝细胞定向分化的作用。     

人脐血源性间充质干细胞的体外培养及生物学鉴定

目的 建立体外培养、扩增人脐带血间充质干细胞(MSCs)的方法．初步鉴定其生物学特性。方法 无菌条件下取正常足月剖宫产的脐带血,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞．以偏酸性的Mesencult^TM作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细咆层,测定MSCs的生长曲线．用流式细胞技术分析细胞的表面抗原。结果 来源于脐血的单个核细胞存体外用合适的培养基培养,细胞贴壁后出现破骨样及间充质样的细胞。间充质细胞为成纤维样的细胞形态,并表达MSCs相关的抗原CD29、CD44、CD105。但不表达CD34、CD45、CD106和HLA-DR。这与源于骨髓的MSCs一致。结论 脐带血中含有的MSCs可在体外培养、扩增,能够为实验和临床的应用提供一种新的间充质干细胞来源。     

苍耳子2种提取物对正常脐带血细胞的影响及其急性毒性的比较

目的观察苍耳子水提物及醇提物对正常脐带血细胞的影响和对小鼠的急性毒性反应。方法采用细胞体外培养技术及细胞染色体标本制作技术,观察姊妹染色单体交换(SCE)频率;急性毒性试验采用小鼠ig给药测定其半数致死量(LD50)和最大耐受量(MTD)。结果苍耳子水提物对SCE频率影响不明显,其小鼠ig给药的LD50及其95%可信限为201.14g·kg-1(181.01~223.51g·kg-1生药)。醇提物能显著降低SCE频率,其小鼠ig给药的MTD大于2.4kg·kg-1生药。结论苍耳子水提物毒性较大。     

延迟断脐法对新生儿脐部感染、脐带残端脱落时间及渗血情况的影响

目的：分析延迟断脐法对新生儿脐部感染、脐带残端脱落时间及渗血情况的影响。方法选取本院新生儿226例,将其随机分为观察组和对照组各113例,观察组采用延迟断脐法,对照组采取传统断脐法,比较两组新生儿脐带残端创面干燥情况、脐带残端脱落时间及脐部并发症情况。结果观察组新生儿残端创面干燥良好率为100.0%,明显高于对照组（89.4%）,且脐带残端脱落时间为（6.45±1.67）d,低于对照组[（10.13±2.66）d],两组比较差异有统计学意义（P<0.01）;观察组脐部感染、脐部出血、脐周发红发生率分别为3.5%、1.8%、2.7%,均低于对照组（21.2%、15.9%、9.7%）,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论延迟断脐法可有效促进脐带残端脱落,降低脐部感染、渗血风险。     

新生儿脐带血葡萄糖-6-磷酸脱氢酶筛查检测结果分析

目的探讨新生儿脐带血葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活性在新生儿G6PD缺乏症早期诊断中的意义。方法选择新生儿4625例,采用全自动生化分析仪对新生儿脐带血进行G6PD活性定量检测,并与新生儿自身静脉血进行对比,根据说明书参考值判定G6PD是否缺乏。结果 本组新生儿脐带血G6PD轻度缺乏症检出率为6.07%高于静脉血的5.36%,差异有统计学意义(P<0.05)。脐带血G6PD缺乏症总检出率为9.23%,静脉血为8.41%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。脐带血与静脉血样本中均检测为G6PD缺乏症的384例患儿中,男性患儿检出率为83.33%高于女性的16.67%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论新生儿脐带血取材方便、简单,可早期有效检测G6PD缺乏症,开展新生儿脐带血G6PD筛查,可对G6PD缺乏症引起的新生儿黄疸尽早明确诊断并及时治疗,且对降低新生儿高胆红素血症的发生率具有重要意义。     

广州大学城大学生对脐带血治疗肿瘤疾病的认知程度调研

目的脐带血已成为造血干细胞的重要来源,特别是无血缘关系造血干细胞的来源,为了解人们对脐带血治疗肿瘤疾病的认知程度,本研究对广州大学城的大学生进行关于脐带血认知程度调研。方法于2011年6月间在针对广州大学城大学生在问卷星网站进行在线问卷调查,问卷包括11个问题。数据采用SPSS13.0统计分析。结果共收到有效问卷193份,大部分人对于脐带血不了解,高达34.2%的被调查者完全没听过脐带血,"十分熟悉,且对脐带血有一定认识"的人只占8.29%;而对于"脐带血的医学价值主要在于能够治疗疾病",50.26%被调查者表示"不了解"。90.67%被被调查者表示"目前大量的脐带血作为废物被处理掉觉得很浪费",但仅23.83%的人会为孩子保留脐带血。大多数人对脐带血的了解来自电视(34.72%),网络(26.42%)、报刊杂志(21.24%),而他们最希望得到医学知识的途径则是电视(63.21%)、网络(70.06%)、报刊杂志(52.85%),同时也有54.92%被调查者表示"人际交流"也是他们获得健康知识的途径。结论人们对脐带血的认知度较低,不了解其医学价值的重要性,还需进一步加强相关的科普宣传和教育。