蛋白酶激活受体-2与哮喘

蛋白酶激活受体-2为一种细胞膜表面受体,属于G蛋白耦联受体家族,广泛分布于肺组织,具有较特异的激活方式.该受体与哮喘的关系正倍受关注,本文综述了其在哮喘发生与发展过程中所发挥的作用,显示在哮喘方面潜在的应用价值.     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的探讨蛋白酶激活受体1（PAR1）激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介索-8（IL-8）分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内，并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和／或凝血酶抑制剂水蛭索进行刺激，刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果经过16h的培养，SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加，增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍，RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放．凝血酶在浓度1kU／L时就可引起IL-8释放量增加，10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰，为基础分泌量的7．5倍。水蛭索可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明，PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加，16h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8，PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的 探讨蛋白酶激活受体1(PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响。方法 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果 经过16h的培养,SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加,增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍,RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放,凝血酶在浓度1kU/L时就可引起IL-8释放量增加,10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰,为基础分泌量的7.5倍。水蛭素可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明,PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加,16h达高峰。结论 PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

蛋白酶激活受体2激动剂诱导肺上皮细胞分泌IL-8

目的 探讨蛋白酶激活受体（PAR）-2激动剂对人上皮细胞白细胞介素-8（IL-8）分泌的影响。方法 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内。并分别用不同浓度的PAR-2激动剂，反PAR-2激动剂进行刺激。刺激时间为2h、8h和16h。用ELISA方法检测上清液中IL-8的分泌水平。结果 经过16h的培养。PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性IL-8的释放增加，tc-LIGRLO引起的最大IL-8释放量达基础分泌量的6倍。反PAR-2激动剂对IL-8释放的影响较小。时间相关曲线表明。PAR-2激动剂的作用从2h开始，16h达高峰。结论 PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞IL-8的促分泌剂。其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用。     

蛋白酶激活受体2激动剂诱导上皮细胞分泌MCP-1

目的:探讨蛋白酶激活受体(PAR)-2激动剂对人上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)分泌的影响.方法:人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR-2激动剂,反PAR-2激动剂进行刺激.刺激时间为2,8和16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果:经过16 h的培养,PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性MCP-1释放增加,tc-LIGRLO引起的最大MCP-1释放量达基础分泌量的13倍.反PAR-2激动剂对MCP-1释放的影响较小.时间相关曲线表明,PAR-2激动剂的作用从2 h开始,16 h达高峰.结论:PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞MCP-1的促分泌剂.其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用.     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响.方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加.凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍.凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用.时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰.结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用.     

蛋白酶激活受体介导的凝血激活在脓毒症中的作用

脓毒症时由于内毒素及炎性递质的作用,机体处于高凝状态,凝血激活过程中产生的许多蛋白酶,如凝血酶、组织因子复合物等又可通过其特异的受体--蛋白酶激活受体(Protease-activated receptors,PARs)促进炎性反应过程。目前已有许多针对脓毒症时的凝血紊乱进行干预的临床前及临床试验,其中许多与PARs有关的试验都得出了肯定的结论。本文就有关PARs介导的凝血激活在脓毒症中的作用研究做一综述。     

人肺上皮细胞表达蛋白酶激活受体

目的: 蛋白酶激活受体(protease-activated receptors, PARs) 广泛分布在多种组织细胞上,但4种PARs在肺上皮细胞的表达情况尚不清楚. 我们用A549细胞研究PARs在肺上皮细胞的表达. 方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪和免疫荧光细胞染色分析技术分析肺上皮细胞系A549细胞PARs的表达情况. 结果:4种PARs在肺上皮细胞上均有不同程度的表达. 结论:肺上皮细胞同时表达PAR 1～4 4种受体,这为进一步研究PARs在肺上皮细胞的功能奠定了基础.     

蛋白酶激活受体-2在子宫内膜异位症组织中的表达及意义

目的:探讨蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在子宫内膜异位症组织中的表达及意义.方法:应用SP免疫组织化学法检测30例异位子宫内膜、10例正常子宫内膜的PAR-2表达.结果:PAR-2在子宫内膜上皮细胞和间质细胞中均有表达.异位子宫内膜内PAR-2呈强阳性表达;正常子宫内膜内PAR-2呈弱表达.图像分析结果显示异位子宫内...     

蛋白酶激活受体2在类风湿关节炎中的作用研究进展

蛋白酶激活受体2 (protease activated receptor-2,PAR-2)是G蛋白偶联受体,主要是由肥大细胞表达,并可被胰酶、类胰蛋白酶激活,然后可导致肥大细胞去颗粒化而引起炎症。类风湿关节炎发生的本质过程可能就是通过激活肥大细胞上表达的PAR-2起作用。     

气道上皮细胞损伤修复在哮喘中的研究进展

气道上皮细胞是肺内环境与外界环境之间的第一道屏障,损伤修复功能是其维持屏障作用、保护内环境稳态的重要因素.目前研究认为,哮喘患者气道上皮细胞损伤修复功能下降,并导致气道炎性反应加重.气道炎性反应过程中分泌的炎性因子也会显著影响上皮细胞损伤修复功能.由于人体内损伤修复研究的局限性,人们探索出多种损伤修复模型,并利于各自的...     

蛋白酶激活受体在心搏骤停后综合征兔肾组织的表达

目的:探讨蛋白酶激活受体(protease-activated receptor,PAR)在心搏骤停后综合征(post-cardiac arrest syndrome,PCAS)兔肾组织的表达及其意义。方法:采用窒息性心搏骤停制备兔心搏骤停后综合征模型(PCAS组),取股静脉血监测器官功能,心肺复苏后48 h,取肾脏组织,采用免疫组织化学技术分别测定兔肾组织PAR-1、PAR-2蛋白表达情况。同时,以假手术组作为对照组。结果:免疫组化结果显示PCAS组、假手术组肾组织PAR-1平均光密度值分别为(1047.67±186.04)、(2278.79±285.77);PCAS组、假手术组肾组织PAR-2平均光密度值分别为(1495.99±133.26)、(2020.85±419.02),PCAS组兔肾脏组织PAR-1、PAR-2蛋白含量均显著减少,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PAR-1、PAR-2蛋白表达减少可能与PAR激活有关,并可能与心搏骤停后综合征的多器官功能障碍发生发展相关。     

FIZZ1诱导气道上皮间质转化导致哮喘早期气道重塑

目的 观察FIZZ1在小鼠哮喘模型气道上皮间质转化(EMT)中的作用,探讨FIZZ1引起哮喘早期气道重塑的机制.方法 随机将BALB/c小鼠分为哮喘模型组(OVA组)和正常对照组.采用免疫组织化学法测定小鼠气道上皮中FIZZ1蛋白的表达,采用实时定量-聚合酶链反应法检测小鼠肺组织中FIZZ1mRNA、Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白1、E钙粘蛋白的表达,采用小鼠肺上皮细胞(MLE-12)体外原代培养,FIZZ1重组蛋白及FIZZ1-shRNA干预,免疫印迹法检测E钙粘蛋白、Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白1的表达.结果 与对照组相比,OVA组小鼠气道上皮中FIZZ1、FIZZ1mRNA表达显著增强,Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白1显著增高,E钙粘蛋白明显降低,并且分别与FIZZ1呈正相关和负相关;体外原代培养MLE-12,FIZZ1重组蛋白干预,Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白1增高,E钙粘蛋白显著降低;FIZZ1-shRNA干预,蛋白表达正常.结论 FIZZ1作为EMT的一个潜在诱导剂,诱导E钙粘蛋白表达减少,而Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白1表达增加,从而诱导哮喘早期气道重塑.     

蛋白酶活化受体-1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的探讨蛋白酶活化受体（PAR）-1在宫颈鳞癌、腺癌及原位癌组织中的表达情况。方法收集宫颈鳞癌组织35例、腺癌组织25例、原位癌组织20例及正常宫颈组织标本20例，采用免疫组织化学方法、PAR-1单克隆抗体检测上述组织中PAR1表达。结果PAR-1在正常宫颈组织中无表达，宫颈原位癌和宫颈浸润癌I期及Ⅱ期组的阳性表达率分别为20．0％、36．4％和44．7％，显著高于正常宫颈组（P=0．0028）。有盆腔淋巴转移的宫颈癌组的PAR-1阳性表达率为68．4％，显著高于无淋巴转移组的29．3％（P=0.0042）。结论PAR-1与宫颈癌的发生和转移密切相关。     

Involvement and therapeutic implications of airway epithelial barrier dysfunction in type 2 inflammation of asthma

Type 2 inflammation is a complex immune response and primary mechanism for several common allergic diseases including allergic rhinitis, allergic asthma, atopic dermatitis, and chronic rhinosinusitis with nasal polyps. It is the predominant type of immune response against helminths to prevent their tissue infiltration and induce their expulsion. Recent studies suggest that epithelial barrier dysfunction contributes to the development of type 2 inflammation in asthma, which may partly explain the...     

p27kip-1在支气管哮喘气道上皮组织中的表达及意义

【目的】探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p27kip-1在支气管哮喘气道上皮组织中的表达及意义。【方法】60只雄性SD大鼠随机分为对照组与哮喘组,每组30只。用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型。应用免疫组化SP法,检测对照组和哮喘组气道上皮组织中气道黏膜上皮细胞、p27kip-1的表达情况;测定两组气道上皮组织中气道平滑肌增生细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的阳性计数。分离各组气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC),以α-Actin抗体标记其核数。【结果】半定量评分显示,哮喘组气道黏膜上皮细胞及p27kip-1显著低于对照组(P<0.05),哮喘组PCNA阳性计数、ASMC核数显著大于对照组(P<0.01)。【结论】支气管哮喘时,p27kip-1在气道上皮组织中表达减少。通过上调p27kip-1在气道上皮组织表达可以抑制气道上皮组织中ASMC的增殖,为哮喘的防治研究提供了新思路。     

表皮生长因子受体拮抗剂对气道上皮细胞生长及修复的影响

目的 探讨表皮生长因子受体拮抗剂Tyrphostin AG1478对培养的气管上皮细胞生长以及修复的影响。方法 用MTT法测定不同浓度（0.1,0.2,1.0,2.5及10μmol/L)的Tyrphostin AG1478对原代培养的大鼠气管上皮细胞增殖的影响;同时,机械刮除一定面积的上皮细胞,观察Tyrphostin AG1478. 2.5μmol/L与低血清培养基两种不同的处理24h后刮除细胞面积的变化。结果 Tyrphostin AG1478对气管上皮细胞的增殖具有浓度依赖性抑制作用;Tyrphostin AG1478 2.5μmol/L处理组与低血清培养基组比较刮除细胞面积明显增大,P＜0．001。结论 Tyrphostin AG1478所抑制原代培养的大鼠气管上皮细胞的生长,并抑制其损伤的修复。     

CRTH2受体拮抗剂缓解大鼠哮喘模型气道炎症

目的:通过对大鼠哮喘模型嗜酸性粒细胞(EOS)上DP1/CRTH2受体及细胞因子变化的分析,研究DP1/CRTH2拮抗剂对大鼠哮喘模型气道炎症的影响和机制.方法:40只雄性SD清洁级大鼠,随机分为正常对照组、哮喘组、CRTH2拮抗剂BAYu3405应用组、DP1受体拮抗剂BWA868C应用组,每组10只.用卵白蛋白(OVA)雾化诱喘.放射配体分析其外周血EOS上的PGD_(2)受体;ELISA测定大鼠血中IL-4和IL-5及IFN-γ水平;肺组织病理切片,HE染色镜检.结果:CRTH2拮抗剂BAYu3405应用组大鼠支气管壁EOS浸润显著减少,血清IFN-γ水平显著增高,(IL-4)、IL-5水平显著低于哮喘组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组(P<0.01);在肺泡灌洗液中EOS计数较哮喘组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组显著减少(P<0.01),外周血EOS计数与哮喘组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组相似,较正常对照组显著增加(P<0.01).与正常对照组相比,哮喘组、CRTH2拮抗剂BAYu3405应用组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组外周血EOS上DP总结合和CRTH2受体结合容量显著增加(P<0.01),DP1无显著性差异(P>0.05).结论:CRTH2受体(DP2)拮抗剂能缓解大鼠哮喘模型气道炎症,减少气道中EOS浸润,可能与CRTH2受体拮抗剂能通过拮抗EOS上增高的CRTH2结合容量,降低IL-4、IL-5和增高IFN-γ水平有关,DP1拮抗剂BWA868C对大鼠哮喘模型气道炎症无显著改善作用.     

高糖对视网膜色素上皮细胞Toll样受体2表达的影响

目的观察高糖对体外培养的ARPE-19细胞Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)表达的影响及机制。方法各组ARPE-19(RPE细胞系)细胞分别刺激48 h,正常糖浓度组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、中度高糖组(15.5 mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(25.5 mmol/L D-葡萄糖)、PKC-α抑制剂组(25.5 mmol/L D-葡萄糖加10 mmol/L Go6976 PKC-α抑制剂)、高渗对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖加20 mmol/L甘露醇)。Western blot检测各组ARPE-19细胞TLR2蛋白表达水平,以及PKC-α蛋白胞浆向胞膜的转位情况;Real-time PCR分析各组ARPE-19细胞TLR2的mRNA表达水平。结果与正常糖浓度组相比,高糖组和中度高糖组TLR2的mRNA和蛋白表达,以及PKC-α转位均增加(P<0.05),并且高糖组高于中度高糖组(P<0.05)。与高糖组比较,PKC-α抑制剂组的TLR2蛋白表达降低(P<0.05),PKC-α蛋白转位显著降低(P<0.01)。结论高糖可以上调ARPE-19细胞TLR2的mRNA和蛋白表达,刺激PKC-α转位;高糖可能是通过PKC-α通路上调ARPE-19细胞TLR2表达。     

IL-25通过nuocyte细胞诱导哮喘小鼠气道重塑

目的 探索白细胞介素-25(IL-25)通过nuocyte细胞对哮喘小鼠气道重塑的作用。 方法 30只SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为对照小鼠组、哮喘小鼠组、抗IL-25小鼠组,每组10只,鸡清卵蛋白(OVA)诱导哮喘模型。分离培养哮喘小鼠组nuocyte细胞,并分为对照细胞组、IL-25细胞组、抗IL-25细胞组。HE染色观察肺组织变化,流式细胞法计数肺泡灌洗液(BALF)中nuocyte细胞,ELISA法检测BALF及细胞上清液中IL-4、IL-13含量,免疫组化、Western blotting及RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ胶原蛋白(collagen-Ⅰ)在肺组织中的表达。 结果 与对照小鼠组相比,哮喘小鼠组BALF中IL-4、IL-13表达升高,nuocyte细胞增多,α-SMA和collagen-Ⅰ表达升高(P<0.05),而抗IL-25小鼠组表达无明显变化(P>0.05);与对照细胞组相比,IL-25细胞组上清液IL-4、IL-13表达增高(P<0.05),抗IL-25细胞组上清液IL-4、IL-13表达无明显变化(P>0.05)。 结论 IL-25可能通过nuocyte细胞促使TH2型细胞因子分泌,导致哮喘小鼠气道重塑。