Clusterin基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖与侵袭的影响

目的通过RNA干扰技术抑制卵巢癌SKOV3细胞分泌型clusterin(sCLU)基因的表达,研究其对卵巢癌细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法通过脂质体介导靶向sCLU基因的siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞,实验分为4组:实验组(sCLU-siRNA+脂质体)、阴性对照组Ⅰ(negative control siRNA+脂质体)、阴性对照组Ⅱ(sCLU-siRNA)、空白对照组(等体积的完全培养液)。RT-PCR和蛋白质印迹分析法检测sCLU表达;利用MTT法、Transwell小室体外侵袭实验及流式细胞仪AnnexinⅤ/PI法检测评价sCLU基因抑制后对卵巢癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。结果靶向sCLU基因的siRNA明显、特异性地抑制了sCLU mRNA和蛋白的表达水平;MTT实验结果显示实验组细胞增殖能力较各对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪AnnexinⅤ/PI法检测结果显示实验组细胞凋亡率较各对照组明显升高,达到(15.84±1.53)%,较空白对照组升高了约9%,差异有统计学意义(P<0.01)。侵袭实验结果提示实验组细胞侵袭能力受到明显抑制,实验组穿膜细胞数量为(26.52±6.22)个/视野,较各对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 sCLU基因沉默明显抑制了卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭能力,并增加了其凋亡率,sCLU基因有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖和凋亡的影响

目的探讨小蘖碱对体外培养人卵巢癌SKOV-3细胞增殖和凋亡的影响。方法选用人卵巢癌细胞株SKOV-3进行体外培养,以5-100μmol/L小蘖碱分别处理SKOV-3细胞24-72h,MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期;SABC法检测survivin、caspase-3在细胞中的表达。结果小蘖碱能显著抑制SKOV-3细胞体外生长,呈时间剂量依赖性。小蘖碱作用24h随浓度的升高survivin阳性表达逐渐降低,caspase-3阳性表达逐渐升高。流式细胞仪分析证实小蘖碱能使SKOV-3细胞积聚在S期和G2/M期。结论小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3的生长有显著的抑制作用,survivin的表达下降、caspase-3的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

刚地弓形虫培养上清对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的:研究体外培养条件下的弓形虫培养上清对卵巢癌细胞SKOV-3细胞增值的影响及诱导其凋亡的情况.方法:取对数生长期的SKOV-3细胞(数量为5×107/L)分别接种于不同细胞培养板,对照组加入RPMI-1640孵育,试验组加入相同体积不同数量(3×1010/L,6×1010/L,12×1010/L)弓形虫速殖子培养上清,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490nm值)并计算SKOV-3细胞增值抑制率;Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率;并以荧光显微镜观察SKOV-3细胞形态改变情况;以琼脂糖凝胶电泳观察SKOV-3细胞凋亡DNA条带.结果:MTT法检测结果显示SKOV-3细胞增殖抑制率随着弓形虫速殖子培养上清数量和作用时间增加均明显增大,12×1010/L数量组72h抑制率最高可达(33.52±2.63)%,弓形虫速殖子培养试验组抑制率与对照组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05).弓形虫培养上清流式细胞仪检测显示SKOV-3细胞凋亡率随着时间增加有升高趋势,48h达到凋亡最高值(18.23%),48h后凋亡率开始下降,死亡率增加.荧光显微镜观察到试验...     

白藜芦醇对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的影响

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 应用0、10、20、40、80 μmol/L Res处理SKOV-3细胞24、48、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞生长抑制率;Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达.结果 Res对SKOV-3细胞的生长抑制作用存在浓度和时间依赖性(P<0.05),Res作用SKOV-3细胞后,VEGF蛋白表达明显降低(P<0.05).结论 Res能明显抑制SKOV-3细胞的增殖,其机制可能与下调VEGF表达有关.     

CD基因对大肠癌杀伤作用的实验研究

目的：探讨ＣＤ基因对大肠癌靶向治疗的作用。方法：构建以ＣＥＡ基因顺式转录调控序列（ＴＲＳ）驱动ＣＤ基因的组织特异性重组逆转录病毒载体Ｇ１ＣＥＡＣＤＮa,脂质体裹 法将重组组织特异性载体pＣＤ２在逆转录病毒包装细胞ＰＡ３１７细胞中进行包装,收获病毒上清后分别转染入高分泌ＣＥＡ的大肠癌细胞ＬoＶo中,经Ｇ４１８筛选阳性克隆扩增后进行体外前药敏感实验及观察旁观者交应,然后再将转基因ＬoＶo细胞接种对裸鼠皮下成     

姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的：探讨姜黄素(cureumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响.方法：选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养,以1．25—20μg/ml姜黄素分别处理HO-8910细胞6-24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,SABC免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax的表达。结果：姜黄素对HO-8910生长有抑制作用,并呈剂量时间依赖性。流式细胞仪分析证实姜黄素能使HO-8910细胞积聚在S和G2／M期,并出现亚二倍体凋亡峰。Fas、Fas-L、Bcl-2表达均上调,Bax加药前后均为阳性。结论：姜黄素对人卵巢癌细胞株H0．8910的增殖具有显著的抑制作用;Fas、Fas-L、Bcl-2的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

槲皮素联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槲皮素单独及联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取对数生长期的卵巢癌SKOV-3细胞作为研究对象,实验分6组:阴性对照组(生理盐水),槲皮素低(25μmol/L)、中(50μmol/L)、高剂量组(100μmol/L),顺铂组(10μmol/L),联合组(槲皮素50μmol/L+顺铂10μmol/L)。采用MTT法检测不同浓度槲皮素单独及联合顺铂对SKOV-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测槲皮素作用于SKOV-3细胞Bcl-2及MtP53蛋白表达水平的变化。结果与阴性对照组相比,槲皮素可明显抑制SKOV-3细胞的增殖,并具有显著的时间和剂量依赖关系,槲皮素高剂量组在72 h的抑制率可达63.49%(P<0.05);流式细胞仪分析发现槲皮素可使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P<0.05),提示其将细胞周期阻滞于G1期;槲皮素还可明显诱导SKOV-3细胞凋亡,高剂量组的凋亡率可达29.51%;槲皮素作用后,Bcl-2及MtP53表达则明显降低(P<0.05)。结论槲皮素在体外可抑制SKOV-3细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡相关蛋白MtP53和Bcl-2的蛋白表达水平有关;槲皮素与顺铂联用有协同作用。     

血管抑素基因转染联合化疗药物对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的治疗作用

目的研究血管抑素(angiostatin)基因转染联合化疗药物顺铂对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的协同治疗作用及其相关机制。方法使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型。将荷瘤裸鼠随机分为4组,分别注射空质粒PcDNA3、angiostatin/PcDNA3、化疗药物顺铂、angiostatin/PcDNA3 顺铂,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的腹水量及腹腔荷瘤量,检测各组肿瘤组织中angiostatin的表达和微血管密度,利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。结果联合治疗组裸鼠的腹水量(P<0.01)及腹腔瘤负荷(P<0.005)均显著低于其他实验组;肿瘤组织中angiostatin蛋白局部高表达,微血管密度显著低于其他实验组(P<0.01),细胞凋亡指数显著高于其他实验组(P<0.05)。结论Angiostatin基因联合化疗治疗人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤可以产生协同抑制作用,多途径联合用药是提高疗效的有效方法之一。     

癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义研究

目的 研究卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白的表达情况及其与卵巢癌病理特点的关系,探讨其在卵巢癌中的意义.方法 选择2014-2015年在该院妇产科手术切除卵巢癌组织标本63例和正常卵巢组织标本63例作为研究对象.采用Western blot法测定卵巢癌组织和正常卵巢组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因l蛋白的表达情况,并分析其与卵巢癌病理特点的关系.结果 卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白、卵巢癌基因1蛋白的表达量明显低于正常卵巢组织(P＜0.05).癌超甲基化基因1蛋白在不同卵巢癌分期、不同分化程度和不同病理类型中的表达量比较差异均无统计学意义(P＞0.05).在卵巢癌Ⅰ期中卵巢癌基因1蛋白的表达高于卵巢癌Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期(P＜0.05),Ⅱ期的表达量高于Ⅲ～Ⅳ期(P＜0.05);高分化的表达量高于中分化和低分化(P＜0.05),中分化和低分化的表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05);卵巢癌基因1蛋白在卵巢癌不同病理类型中的表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 癌超甲基化基因1蛋白失活可能只参与卵巢癌的发生,卵巢癌基因1蛋白和卵巢癌的发展有一定关系.     

bcl-xS基因诱导人大肠癌细胞凋亡

目的 研究bcl-xS基因对体内大肠癌细胞生长的影响及作用机制。方法 将bcl-xS基因稳定转染的人大肠癌LoVo细胞接种于裸鼠体内并使其生长,然后取移植瘤标本原位末段标记并进行电镜观察,同时将neo基因转染的及未经转染的LoVo细胞分别接种于裸鼠体内,作为对照。结果 经bcl-xS转染的LoVo细胞移植瘤有明显的散在或成团的凋亡细胞,而经neo转染的LoVo细胞则无明显的细胞凋亡。结论 本研究结果提示bcl-xS基因在体内有诱导细胞凋亡的作用。     

酪氨酸激酶3对赫赛汀耐药的卵巢癌细胞株SKOV3/H增殖和成瘤能力的影响

探索erb-b2受体酪氨酸激酶3（HER-3）对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/H的体外增殖和体内成瘤能力的影响。方法采用赫赛汀浓度递增法构建SKOV3 耐药细胞株（赫赛汀起始浓度为5 mg/L,经5～8 次浓度递增,每次提高50%）。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测HER-3在15 对非耐药卵巢癌组织和耐药卵巢癌组织中的表达（SKOV3 和SKOV3/H 细胞中的表达）。MTT 实验验证分别转染sh-HER-3 及其对照质粒vector对SKOV3/H细胞增殖能力的影响。将包含sh-HER-3的重组慢病毒质粒及其阴性对照慢病毒空载体质粒vector（均带egfp荧光标签）分别以病毒/细胞数量=15 的比例感染SKOV3/H 细胞,加入2.0μg/ml 的嘌呤霉素筛选,构建稳定转染sh-HER-3 或vector 的SKOV3/H 细胞,将2 株细胞分别注射到裸鼠皮下,复制卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察体内成瘤情况。结果成功构建卵巢癌SKOV3耐赫赛汀细胞株SKOV3/H,且SKOV3/H的群体倍增时间为SKOV3 细胞的1.4～1.9倍。HER-3在耐药卵巢癌组织中的表达水平高于非耐药癌组织（p <0.05）,且HER-3 在耐药细胞株SKOV3/H中的表达水平也高于非耐药卵巢癌细胞株SKOV3（p <0.05）。转染sh-HER-3后,SKOV3/H细胞的增殖能力低于阴性对照组（p <0.05）。转染sh-HER-3后,耐药细胞株SKOV3/H的裸鼠体内成瘤能力降低（p <0.05）。结论HER-3参与卵巢癌的赫赛汀耐药,并正向影响耐药细胞株SKOV3/H的增殖和体内成瘤能力。     

艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞作用的研究

目的 探讨艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞的抗肿瘤作用.方法 应用MTT法和RT-PCR 法、ELISA方法分别检测艾迪注射液对SKOV3细胞增殖及SKOV3细胞中VEGF mRNA、VEGF蛋白含量的影响.结果 艾迪组SKOV3人卵巢癌细胞增殖受到抑制,48 h达高峰,抑制率59.51%;SKOV3细胞中VEGF mRNA含量艾迪组较对照组减少,差异有显著性(P＜0.01).结论 艾迪能抑制SKOV3人卵巢癌细胞的增殖,在mRNA、蛋白水平抑制VEGF的表达,进而实现其抗肿瘤作用.     

假单孢杆菌外毒素基因的克隆及用于裸鼠大肠癌基因治疗

目的：建立假单孢杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）基因的组织特异性抗大肠癌基因疗法。方法：用ＰＣＲ法从绿脓杆菌基因组ＤＮＡ中克隆ＥＰＡⅡ＋Ⅲ区基因，引入Ｋｏｚａｋ序列、终止信号和酶切位点，测序。构建ＰＥＡ基因转录受人癌胚抗原（ＣＥＡ）启动子调控的逆转录病毒载体。共转染法体外研究ＰＥＡ基因表达对报告基因表达的特异抑制作用。用ＤＮＡ体内直接转染法于裸鼠体内观察ＰＥＡ基因的抗人类肿瘤作用。结果：所克隆的ＰＥＡ序列与     

DMBT1过表达对胆囊癌细胞系GBC-SD粘附增殖的影响

目的:观察DMBT1体外过表达对胆囊癌细胞同质、异质粘附能力及细胞增殖能力的影响。方法:以脂质体为介导在体外建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞系,细胞分组:GBC-SD/DMBT1,转染DMBT1组;GBC-SD/Vector,转染空载体组;GBC-SD,未处理组;平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力,细胞聚集实验观察细胞同质粘附能力,层粘蛋白实验及人脐静脉上皮细胞(HUVEC)粘附实验观察细胞异质粘附能力。统计学采用配对或独立样本t检验,P<0.05有统计学意义。结果:平板克隆实验发现GBC-SD/DMBT1组克隆形成数20±3,GBC-SD/Vector组46±8,差异有统计学意义(P<0.01);细胞聚集实验表明GBC-SD/DMBT1聚集指数在振摇时间40、60min时分别为0.471±0.041、0.610±0.050,显著高于GBC-SD/Vector(40、60min时分别为0.250±0.024、0.312±0.026),差异有统计学意义(P<0.01);层粘蛋白Ln粘附实验表明GBC-SD/DMBT1在培养60、90min时残留细胞吸光度分别为0.157±0.008及0.139±0.010显著低于GBC-SD/Vector(60、90min时分别为0.347±0.026、0.476±0.023),差异有统计学意义(P<0.01);人脐静脉粘附表明GBC-SD/DMBT1粘附率为0.341±0.042、GBC-SD/vector粘附率为0.694±0.058,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:DMBT1在体外过表达抑制胆囊癌细胞的增殖能力,促进胆囊癌细胞与细胞之间的粘附,抑制细胞与基质或异种细胞的粘附。     

大肠癌卵巢转移的外科治疗和预后

目的探讨大肠癌卵巢转移的治疗.方法回顾性分析大肠癌卵巢转移患者73例临床资料.结果大肠癌卵巢转移好发于绝经前患者,临床分期以Dukes C期为多,预后较无卵巢转移者差.结论对于同时有卵巢转移应行大肠癌根治术 子宫及双侧附件切除术;绝经后的患者可行预防性卵巢切除术;绝经前患者则采取个体化原则.所有患者术后应进行综合治疗.     

CGB5对卵巢癌细胞OVCAR-3成瘤率及成瘤速度影响的体内研究

目的 :通过体内实验研究β绒毛膜促性腺激素的第5号亚基(chorionic gonadotropin beta polpeptide 5,CGB5)对卵巢癌细胞OVCAR-3成瘤率及成瘤速度的影响。方法:采用慢病毒载体转染的方法 ,在卵巢癌细胞OVCAR-3中分别转入CGB5小干扰、过表达及无关序列。另外,未处理的OVCAR-3细胞作为空白对照,将高表达CGB5的绒癌细胞Be Wo作为阳性对照。用RT-PCR和酶联免疫吸附试验法测定转染后细胞的CGB5浓度。裸鼠随机分为5组(正常OVCAR-3细胞组,CGB5小干扰组,CGB5过表达组,CGB5无关序列组,Be Wo细胞组),每组6只,将这5种不同的细胞株分别打入裸鼠右侧腋窝皮下建立皮下移植瘤模型。观察5组模型的肿瘤成瘤率及成瘤速度,并用免疫组化测定肿瘤细胞增殖指标Ki67的表达情况。结果:(1)CGB5过表达组和Be Wo细胞组裸鼠的皮下移植瘤成瘤率是100%(6/6),OVCAR-3正常细胞组和无关序列对照组细胞的裸鼠的皮下移植瘤成瘤率是83.3%(5/6),而CGB5小干扰组细胞的裸鼠皮下移植瘤成瘤率是33.3%(2/6)。(2)CGB5过表达组和CGB5表达高的Be Wo细胞组的肿瘤生长较快,而CGB5小干扰组的肿瘤生长最慢。结论:CGB5能增加卵巢癌OVCAR-3细胞皮下移植瘤的成瘤率及肿瘤的生长速度,这将有望为卵巢癌的治疗提供新的思路。     

下调microRNA-214表达对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的观察下调microRNA-214(miRNA-214)表达对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法采用脂质体介导方法将miRNA-214抑制剂转染人卵巢癌SKOV-3细胞,分为正常对照组、阴性对照组和miRNA-214下调组,采用实时定量聚合酶链反应方法检测miRNA-214、p21和p53基因mRNA表达,Western blot法检测细胞p21和p53蛋白表达。四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果正常对照组、阴性对照组和miRNA-214下调组人卵巢癌SKOV-3细胞miRNA-214表达分别为11.32±0.47、10.18±0.45和6.52±0.49,细胞增殖率分别为(17.61±1.83)%、(19.14±1.86)%和(11.24±1.89)%,细胞凋亡率分别为(14.47±1.86)%、(13.72±1.89)%和(21.21±1.91)%,p21基因mRNA表达分别为5.96±0.69、5.38±0.74和8.31±0.72,p53基因mRNA表达分别为3.64±0.39、3.17±0.38和5.86±0.37,p21蛋白表达分别为0.47±0.19、0.49±0.21和0.75±0.22,p53蛋白表达分别为0.40±0.14、0.39±0.16和0.66±0.18。与正常对照组和阴性对照组比较,miRNA-214下调组人卵巢癌SKOV-3细胞miRNA-214表达、细胞增殖率降低(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率、p21基因mRNA表达、p53基因mRNA表达、p21蛋白表达、p53蛋白表达均增加(P<0.05,P<0.01);阴性对照组与正常对照组比较,miRNA-214表达、细胞增殖率、细胞凋亡率、p21基因mRNA表达、p53基因mRNA表达、p21蛋白表达、p53蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论下调人卵巢癌SKOV-3细胞miRNA-214表达可抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,上调p21和p53基因表达可能是其作用机制。     

抑癌基因MTS1对卵巢癌细胞增殖的影响

目的：探讨多肿瘤抑制基因１（ＭＴＳ１）对卵巢癌细胞系增殖的影响。方法;绘制细胞生长曲线图,比较卵巢癌细胞系ＨＯ－８９１０（无ｐ１６基因的表达）与８９１０－ｐ１６（转染ｐ１６基因）,８９１０－ｐｃＤＮＡ３（转染空载体ｐｃＤＮＡ３）的生长特性;采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验比较３种细胞的ＤＮＡ合成情况。结果：８９１０－ｐ１６细胞在转染ｐ１６基因后其增殖特性受到抑制,ＤＮＡ８９１０－ｐ１６细胞在转染ｐ１６基     

HSV-tk基因特异性杀伤大肠癌细胞的实验研究

目的：探讨单纯疮疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－tk)ad基因在大肠癌组织细胞中特异地表达, 以达到靶向基因治疗的作用。方法：构建以ＣＥＡ基因顺式转录调控序列（ＴＲＳ）驱动tk基因的组织特异性重组逆转录病毒载体Ｇ１ＣＥＡtkＮa,然后以重组逆转录病毒上清染法将重组组织特异性载体及非组织特异性载体分别转导入高分泌ＣＥＡ的大肠癌ＬoＶo细胞中,以Ｇ４１８筛选阳性克隆扩增后给予前药更昔洛韦（ＧＣＶ）进行敏感试验。结果：转导