基质金属蛋白酶在小鼠病毒性心肌炎中的表达及肾素-血管紧张素系统阻断后的变化

目的探讨基质金属蛋白酶-3（MMP-3）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）在病毒性心肌炎（VM）小鼠中的作用及肾素一血管紧张素系统抑制剂（RASI）的治疗效果。方法100只Balb／c小鼠随机分为对照组（A组）、模型组（B组）、假干预组（C组）、福辛普利组（D组）和缬沙坦组（E组）5组,每组20只。B～E组小鼠腹腔接种0．1ml的柯萨奇病毒B3（CVB3）悬液建立VM模型,A组腹腔注射不含CVB3的0．1mlHep-2细胞冻溶液作对照组。C组、D组及E组于注射CVB324h后分别予生理盐水、福辛普利、缬沙坦灌胃,第14天处死小鼠,心脏切片HE染色计算病理积分,氯氨T法测定心肌胶原含量,RT—PCR法检测心肌MMP．3、TIMP-1mRNA的表达。结果与A组比较,B组、C组心肌MMP-3表达明显上调,TIMP-1表达明显下调,心肌胶原含量显著增高（P均〈0．05）;与B组比较,D组、E组心肌MMP-3表达明显下调,TIMP-1表达明显上调,心肌胶原含量显著减少（P均〈0．05）。结论MMP-3／TIMP-1参与VM小鼠的心肌病理过程,可能是导致心肌胶原重构的重要因素之一。福辛普利及缬沙坦能明显下调MMP-3的表达、上调TIMP-1的表达,逆转心肌胶原重构。     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌组织蛋白酶L表达的作用

目的探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌中组织蛋白酶L(cathepsinL,CL)表达的作用。方法BALB/C小鼠100只,随机分成6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分为正常对照组(A组10只,以羧甲基纤维素钠0.1ml灌胃7d)、9%黄芪甲甙对照组(B组10只,9%黄芪甲甙0.1ml灌胃7d);余80只小鼠以柯萨奇病毒(CVB3)腹腔无菌注射制作VMC模型,VMC小鼠随机分为心肌炎对照组和1%、3%、9%黄芪甲甙干预心肌炎组,分别以羧甲基纤维素钠及1%、3%、9%黄芪甲甙0.1ml灌胃7d(分别为C、D、E、F组,每组20只)。14d后处死全部小鼠并取其心脏。采用RT_PCR和免疫组化半定量检测心肌CLmRNA及蛋白表达水平。结果F组小鼠较C组死亡率明显降低[10%(2/20例)vs45%(9/20例),χ2=6.14,P<0.05],B组无小鼠死亡;与C组相比,CLmRNA、蛋白表达水平以及心肌病变积分在F组均显著下降,而1%、3%黄芪甲甙对心肌炎小鼠CLmRNA、蛋白表达及心肌病变积分无明显影响。结论黄芪甲甙可能通过抑制cathepsinL表达,对BALB/C小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。     

病毒性心肌炎小鼠不同时点胰岛素样生长因子-1及其相关蛋白的表达

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及其相关蛋白在病毒性心肌炎病程中的作用。方法取Balb／C小鼠60只，随机分为病毒实验组40只，腹腔感染CVB3病毒，分别于实验d3、7、15、30采血、取心肌组织；空白对组（未感染CVB3病毒小鼠）20只。用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测其血浆IGF-1的表达，用免疫组织化学法和逆转录酶多聚链反应（RT-PCR）技术检测其心肌组织IGF-1及相关蛋白的表达。结果病毒性心肌炎小鼠血浆IGF-1及相关蛋白表达均较空白对照组高，且在感染病毒后表达渐增高，15d达最高峰，30d表达降低，但仍维持一较高水平，与对照组比较仍有显著差异（F=19．53 P〈0.05），其在心肌组织中的表达与血浆中的表达变化规律一致。结论IGF-1及其相关蛋白可能参与小鼠CVB3病毒性心肌炎的病理生理过程。     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌柯萨奇病毒受体基因表达的影响

目的　探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎 (VM)小鼠心肌柯萨奇 腺病毒受体 (CAR)基因表达影响。方法　Balb/c小鼠 1 0 0只 ,分为 6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液 ,分为正常对照组 (A组 ,1 0只 ,以羧甲基纤维素钠 0 .1mL灌胃 7d)、9%黄芪甲甙对照组 (B组 ,1 0只 ,9%黄芪甲甙 0 .1mL灌胃 7d) ;余 80只小鼠以柯萨奇病毒 (CVB3)腹腔无菌注射制作病毒性心肌炎模型 ,VM小鼠随机分为心肌炎对照组和 1 %、3 %、9%黄芪甲甙干预心肌炎组 ,分别以生理盐水、1 %、3 %、9%黄芪甲甙 0 .1mL灌胃 7d(分别为C、D、E、F组 ,每组 2 0只 )。 1 4d后处死一小部分鼠并取其心脏。采用RT PCR检测心肌CARmRNA表达水平。结果　F组小鼠死亡率较C组明显降低 (1 0 %与 45 %比较 ) ,(χ2 =6 .1 4　P <0 .0 5) ,B组无小鼠死亡 ;与C组相比较 ,CARmRNA表达水平以心肌病变积分在F组显著下降 ,而 1 %、3 %黄芪甲甙对心肌炎小鼠CARmRNA表达及心肌病变积分无明显影响。结论　 9%黄芪甲甙可抑制CAR表达 ,提高心肌炎小鼠生存率 ,减轻心肌损害 ,安全有效 ,对VM有良好的治疗作用。     

干扰素和黄芪对小鼠病毒性心肌炎TNF-α影响的研究

目的 研究病毒性心肌炎（VM）小鼠外周血肿瘤坏死因子仪（TNF-α）的动态变化以及干扰素、黄芪对其的影响,为临床应用干扰素、黄芪治疗病毒性心肌炎提供客观依据。方法 将小鼠随机分为正常对照组（A组）、病毒对照组（B组）、干扰素治疗组（C组）、黄芪治疗组（D组）。腹腔接种柯萨奇B3（CVB3）病毒液建立VM模型。在感染病毒24h后,C组腹腔注射干扰索1万U／（g·d）,D组用灌胃器喂服黄芪30mg／（g·d）。均连用5d;在接种病毒后第7、14、21天时留取血液、心肌标本。分别进行血清TNF-α及心肌病理检查。并分析TNFnd与心肌病理改变的关系。结果 VM小鼠TNF-α水平升高,并与心肌病理损害程度密切相关;干扰素和黄芪治疗VM,均可降低血清TNF—α水平。减轻心肌病理损害程度;干扰索对VM的治疗效果明显优于黄芪。结论 TNF—α参与了病毒性心肌炎的发生发展过程;通过降低血清TNF—α水平,调节免疫反应,可能是干扰索、黄芪治疗VM的作用机制之一。     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠神经生长因子表达的影响

目的探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎(VM)小鼠心肌中神经生长因子(NGF)表达的影响。方法Balb/c小鼠100只,随机分成6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分为正常对照组[A组,10只,以羧甲基纤维素钠(CMC)0.1 mL灌胃7 d]、高剂量对照组(B组,10只,9%黄芪甲甙液0.1 mL灌胃7 d);余80只小鼠以柯萨奇病毒(CVB3)腹腔无菌注射制作VM模型,VM小鼠随机分为心肌炎对照组和低、中、高剂量干预组,分别以CMC、1%、3%、9%黄芪甲甙液0.1 mL灌胃7 d(分别为C、D、E、F组,每组20只)。14 d后处死小鼠并取其心脏,采用RT-PCR和免疫组织化学检测NGF mRNA及蛋白表达水平。结果F组小鼠较C组死亡率明显降低,B组无小鼠死亡;与C组比较,NGF mRNA、蛋白表达水平以及心肌病变积分在F组均显著下降,而低、中剂量黄芪甲甙对心肌炎小鼠NGF mRNA、蛋白表达及心肌病变积分无明显影响。结论黄芪甲甙可能通过抑制NGF表达,对Balb/c小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。     

基质金属蛋白酶-3在病毒性心肌炎中的表达及福辛普利的干预作用

目的探讨基质金属蛋白酶-3(MMP-3)在病毒性心肌炎(VM)小鼠中的表达及福辛普利的干预作用。方法鼠龄4~6周Balb/c纯种雄性小鼠57只随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、假干预组(C组)、福辛普利组(D组)。B~D组小鼠腹腔接种0.1mL柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VM模型。C、D组于注射CVB324h后分别予生理盐水、福辛普利灌胃治疗,d14断颈处死小鼠,心脏石蜡切片HE染色计算病理积分,免疫组化法检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-3mRNA表达。结果B、C组心肌MMP-3表达显著上调,心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原增生显著与A组比较(P<0.05);D组心肌MMP-3表达显著下调,与B组比较心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原增生显著减少(P<0.05)。结论MMP-3参与VM小鼠病理过程,福辛普利能明显下调MMP-3mRNA表达,显著减少心肌胶原增生。     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌组织蛋白酶B mRNA表达的影响

目的探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎(VM)小鼠心肌中组织蛋白酶B(cathepsinB,CB)mRNA表达的影响。方法Balb/c小鼠100只随机分为6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分为正常对照组(A组10只,以羧甲基纤维素钠0.1mL灌胃7d)、9%黄芪甲甙对照组(B组10只,9%黄芪甲甙0.1mL灌胃7d);余80只小鼠以柯萨奇病毒(CVB3)腹腔无菌注射制作VM模型,VM小鼠随机分为VM对照组和1%、3%、9%黄芪甲甙干预VM组,分别以生理盐水、1%、3%、9%黄芪甲甙0.1mL灌胃7d(分别为C、D、E、F组,每组20只)。14d后处死全部小鼠并取其心脏。采用RT-PCR半定量检测心肌CBmRNA表达水平。结果F组小鼠较C组死亡率明显降低[10%(2/20)vs45%(9/20),χ2=6.14P<0.05],B组无小鼠死亡;与C组比较CBmRNA表达水平及心肌病变积分在F组显著下降,而1%、3%黄芪甲甙对VM小鼠CBmRNA表达及心肌病变积分无明显影响。结论黄芪甲甙可能通过抑制CB表达,对Balb/c小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。     

病毒性心肌炎心肌细胞间粘附分子 -1表达的实验研究

目的 研究病毒性心肌炎心肌组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达及早期应用α干扰素对其表达的影响。方法 BALB／c小鼠腹腔接种柯萨奇B3病毒,干扰素组于接种病毒后24h起腹腔注射α1b干扰素10^4U/g,每天1次,共5d。于接种病毒后第7、14、21天分别处死小鼠,免疫组化法检测心肌组织ICAM-1表达。结果 正常对照组心肌组织ICAM-1表达量极少,病毒性心肌炎小鼠心肌细胞和血管内皮细胞ICAM-1表达增加,且呈现动态变化,α干扰素治疗使ICAM-1表达减少。结论 病毒性心肌炎小鼠心肌组织ICAM-1过度表达,早期应用α干扰素可抑制ICAM-1的过度表达。     

病毒性心肌炎不同时点血管内皮细胞生长因子mRNA的表达

目的 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)在BALB/c小鼠感染柯萨奇病毒B3(CVB3)所致病毒性心肌炎(VM)病程中的作用.方法 取BALB/c小鼠70只,随机分为VM组60只,腹腔感染CVB3,分别于实验第3、7、10、14、18、21天取心肌组织;正常组10只,于实验第21天取心肌组织.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测其心肌组织VEGF mRNA的表达.结果 病毒性心肌炎小鼠心肌VEGF mRNA表达较正常组高,且在感染病毒后表达渐增高,14 d达最高峰,其后表达降低,但仍维持一较高水平,与正常组比较仍有统计学意义(P<0.01).VEGF mRNA表达与心肌病理损害程度密切相关.结论 VEGF可能参与BALB/c小鼠病毒性心肌炎的病理生理过程.     

维生素D受体在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表达

目的 探讨维生素D 受体(VDR)在病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌中的表达动态变化和作用。方法 选取120 只4 周龄雄性BALB/c 小鼠,随机分为对照组(n=40)和实验组(n=80),实验组小鼠腹腔注射柯萨奇B3 病毒制备VMC 模型,对照组小鼠腹腔注射等量的DMEM 液作为替代。分别在注射3、7、14和28 d 后各处死15 只实验组小鼠和10 只对照组小鼠,取小鼠心脏标本。用免疫组织化学法检测小鼠心肌组织VDR 的表达动态变化,并用苏木精-伊红染色观察小鼠心肌的病理变化。结果 实验组小鼠接种病毒后VDR表达显著升高,并在第7 天表达水平达到高峰,然后逐渐下降,在第28 天仍处于较高水平(PPP结论 VDR可能参与了VMC发病的炎性免疫过程。     

黄芪甲甙对急性病毒性心肌炎小鼠IGF-1及相关蛋白表达的作用研究

目的：探讨黄芪甲甙在治疗病毒性心肌炎过程中对胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及相关蛋白的影响。方法：65只4周龄Balb/C小鼠随机分为正常对照、黄芪对照、病毒对照及黄芪小剂量、黄芪大剂量等5组。后3组腹腔接种柯萨基B组病毒（CVB3）病毒。黄芪小剂量、黄芪大剂量每日分别给予0.07、0.6 mg/kg黄芪甲甙液灌胃1次。15 d后采血、取心肌组织,用酶标免疫吸附测定法(ELISA)测血浆中IGF-1的表达,用免疫组织化学法检测心肌组织中IGF-1及相关蛋白的蛋白表达,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测心肌组织IGF-1基因表达。结果：感染CVB3病毒后小鼠心肌组织IGF-1及相关蛋白明显升高,大剂量黄芪甲甙干预可调节小鼠IGF-1及相关蛋白的表达;小剂量黄芪甲甙则无明显效果。结论：大剂量黄芪甲甙对急性病毒性心肌炎小鼠心肌组织的保护作用可能是通过影响IGF-1及相关蛋白表达的途径来实现。     

黄芪对心肌炎心肌穿孔素及外周血TNF-α的影响

目的：儿童病毒性心肌炎(VMC)发病率高,临床上缺乏有效的治疗药物。该研究旨在探讨黄芪注射液治疗小鼠柯萨奇B3(CVB-3)病毒性心肌炎的疗效及其机制。方法：24只Balb/C鼠腹腔感染柯萨奇病毒B3亲心肌细胞株后,随机等分为两组：黄芪治疗组(黄芪注射液10 g/kg,腹腔注射,每天1次,连续7d)和对照组(同法每天注射等容积注射用水)。实验第8天留取心肌和血液标本,进行心肌病理检查,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测心肌穿孔素(PFP)mRNA表达及放免法检测外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果：①黄芪治疗组心肌组织病理改变明显轻于对照组;②黄芪治疗组心肌PFP mRNA的表达明显低于对照组［(1.10±0.07) vs (1.31±0.12)］(P<0.01);③黄芪治疗组血清TNF-α含量明显低于对照组［(2.39±0.21) ng/ml vs (2.97±0.32) ng/ml］(P<0.01)。④PFP mRNA表达水平与血清TNF-α含量呈显著正相关(r=0.84,P<0.01)。结论：黄芪注射液对病毒性心肌炎有明显的治疗作用,其机制可能是通过减轻病毒性心肌炎中PFP介导的细胞毒性作用和炎症反应。     

心脏肥大细胞及Toll样受体4在小鼠病毒性心肌炎中的作用

目的：探讨心脏肥大细胞及Toll样受体4（TLR4）在病毒性心肌炎（VMC）发生发展中的作用。方法：48只BALB/C小鼠随机分为对照组和模型组,每组24只,以柯萨奇病毒B3腹腔注射制作VMC模型,分别于制模后7 d、14 d和28 d,两组各取8只小鼠心肌组织,行苏木精-伊红和Masson染色观察两组小鼠心肌病理改变,以甲苯胺蓝染色法和透射电镜检测两组小鼠各时间点心肌肥大细胞数目及脱颗粒情况,采用免疫组化法及RT-PCR检测小鼠心肌TLR4及其mRNA的表达,并对模型组各时间点肥大细胞数目及TLR4 mRNA的表达进行相关性分析。结果：模型组各时间点心肌病理评分均较对照组明显增高（均P<0.05）;模型组28 d时心肌胶原纤维容积分数较对照组各时间点以及模型组7 d、14 d时均明显增高（均P<0.05）。模型组肥大细胞数目明显多于对照组相应时间点（均P<0.05）;各时间点模型组心肌TLR4及其mRNA表达均高于对照组（P<0.05）。模型组各时间点心肌肥大细胞数目和TLR4 mRNA表达呈正相关（R2=0.877, P<0.05）。结论：VMC小鼠心肌肥大细胞数和TLR4的表达在各时间点均较对照组明显增加,提示肥大细胞及TLR4可能在VMC的炎症反应和纤维化过程中起重要作用。     

苦瓜素对柯萨奇B3病毒所致病毒性心肌炎小鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察苦瓜素对柯萨奇B3病毒（CVB3）所致病毒性心肌炎大鼠心肌组织TNF-α水平、基因转录及相应蛋白质表达的影响，探索苦瓜素治疗病毒性心肌炎的药理机制。方法50只Balb／c实验小鼠随机分为苦瓜素治疗组（20只）、病毒感染空白对照组（20只）、正常对照组（10只）。苦瓜素治疗组与病毒感染空白对照组分别予腹腔注射0．1mL内含1&#215;10^5TCID。的PRIM1640液，而正常对照组予腹腔注射同等体积培养液。苦瓜素剂量为25mg／（kg&#183;d），1次／d，疗程7d。第15天取小鼠心肌采用ELISA进行TNF-α测定，HE染色行心肌病理检查，RT-PCR检测TNF-αmRNA转录水平，免疫组织化学测定TNF-α蛋白表达。结果与病毒感染空白组比较，苦瓜素治疗组小鼠心肌病理积分明显减少[（3．26&#177;0．84）m（1．56&#177;0．48），t=3．90 P〈0．01]，大鼠心肌组织TNF—α水平明显降低[（85．6&#177;16．7）vs（34．5&#177;10．3），t=5．24P〈0．01]，大鼠TNF-α mRNA转录水平亦显著减少[（0．09&#177;0．02）vs（0．41&#177;0．06），t=7．37 P〈0．01]。结论苦瓜素通过抑制TNF—α基因转录与蛋白质表达、降低心肌TNF—α水平，对Balb／c小鼠CVB，致病毒性心肌炎具有明显的治疗作用。     

不同时期应用胰岛素样生长因子-1对小鼠病毒性心肌炎心肌细胞凋亡蛋白表达的影响

目的探讨不同时期应用胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对小鼠病毒性心肌炎心肌细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(BCL-2)和BCL-2关联X蛋白(BAX)的影响。方法Balb/c雄性小鼠50只,随机分为对照组、柯萨奇B3病毒感染组(感染组)及病毒感染早期治疗组(0～6d)和急性期治疗组(7～13d),后2组腹腔注射外源性IGF-130μg/(kg.d),连用7d。d14处死动物,留取心肌标本,免疫组织化学法检测其心肌组织BCL-2和BAX蛋白的表达。结果与对照组和治疗组相比,感染组BCL-2表达减少,BAX表达增加(Pa<0.01);感染早期治疗组较急性期治疗组BCL-2表达明显增多、BAX表达明显减少(Pa<0.01)。结论病毒感染早期应用IGF-1对小鼠病毒性心肌炎的疗效优于急性期。     

干扰素-λ2对急性病毒性心肌炎小鼠凋亡相关蛋白的研究

目的：干扰素-λ（IFN-λ)广泛存在于人体各组织中,目前研究发现其具有抗病毒、抗肿瘤等作用。但其是否能用于治疗病毒性心肌炎尚缺乏相关报道。探讨IFN-λ2在病毒性心肌炎（VMC）早期的作用,为IFN-λ2 是否能应用于临床治疗或预防VMC提供实验室依据。方法：采用腹腔注射柯萨奇B3（CVB3）病毒的方法制造病毒性心肌炎小鼠模型。实验分3组：空白对照组、病毒组、IFN-λ2 治疗组。空白对照组给予腹腔注射等量的PBS培养液,记为第0天;IFN-λ2治疗组从第1天开始,连续5 d每天经背部皮肤不同点给予小鼠IFN-λ2 400 ng （0.1 mL）,空白对照组和病毒组则每天以同样方法给予等量生理盐水。死亡小鼠从组中剔除。9 d后处死所有存活小鼠。检测各组小鼠心脏的病理改变。采用免疫组织化学技术检测各组小鼠心脏组织中凋亡相关蛋白Bcl-2 及Bax的表达。结果：①病毒组心肌病理评分要高于空白对照组及IFN-λ2治疗组。 ②免疫组化结果显示正常心肌组织有少量Bcl-2及Bax的表达,病毒组较空白对照组Bcl-2表达减少、Bax表达明显增加(P<0.01);IFN-λ2治疗组较病毒组Bcl-2表达增加、Bax表达减少(P<0.01) 。结论：INF-λ2 能减轻柯萨奇病毒所致心肌炎小鼠的心肌病理改变,能抑制小鼠心肌细胞凋亡,对VMC小鼠的心肌细胞具有保护作用。［中国当代儿科杂志,2009,11（4）：296-300］     

TNF配体相关分子1A在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表达及意义

目的 探讨TNF配体相关分子1A(TLlA)在实验性小鼠病毒性心肌炎(VM)发病中的作用.方法 80只小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔注射CVB3,建立病毒性心肌炎实验模型,对照组注射生理盐水.分别于实验第3、7、15、30天随机选取存活小鼠10只处死,对照组小鼠在接种后30 d处死作为总体对照,取其心肌,采用免疫组织化学技术及RT-PCR技术检测心肌细胞TLlA表达水平,检测心肌病理变化,并对11L1A水平与心肌病变程度行相关性分析.结果 VMC小鼠在接种病毒后3 d心肌TL1A mRNA及蛋白表达水平升高,7 d表达水平最高,此后逐渐下降,但30 d仍维持在一个较高水平,各时点TLlA mRNA及蛋白表达水平与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01).结论 CVB3病毒感染可引起TLlA表达上调,TLlA表达增加可能在CVB3病毒性心肌炎发病机制中起重要作用.     

穿孔素在重组白细胞介素-12治疗小鼠病毒性心肌炎过程中的表达

目的观察重组白细胞介素-12(rmIL-12)治疗小鼠病毒性心肌炎过程中自然杀伤细胞(NK细胞)活性、穿孔素表达水平及小鼠心肌病理变化等指标,探讨rmIL-12治疗病毒性心肌炎的机制。方法选取BALB/c雄性小鼠60只,随机分成6组,分别为空白对照组,病毒对照组,干扰素对照组,rmIL-12小、中、大治疗剂量组,每组10只小鼠。除空白对照组外,余每只小鼠均腹腔注射CVB30.2mL/d,连续3d。开始接种病毒日定为第0天,从第0天开始,于接种病毒4h,空白对照组和病毒对照组腹腔注射9g/L盐水0.1mL/d,干扰素对照组腹腔注射干扰素-α400 IU/d;rmIL-12小、中、大治疗组分别注射1、10、100ng/d rmIL-12,连续5d。第5天每组分别取5只鼠,颈椎脱臼处死,取心脏,留取心脏标本用于做心肌病理学检测。应用四甲基偶氮唑蓝法检测各组小鼠脾脏NK细胞活性。Trizol试剂提取心脏组织总RNA,应用RT-PCR法检测小鼠心脏穿孔素表达水平,应用HE染色法观察小鼠心肌病理改变。结果NK细胞活性病毒对照组与rmIL-12中剂量组及大剂量组比较有显著差异(Pa<0.05),与干扰素对照组及小剂量治疗组比较无明显差异(Pa>0.05)。NK细胞活性随着rmIL-12剂量的增加而增加。空白对照组无穿孔素表达,rmIL-12中剂量组和大剂量组表达量多于小剂量组和干扰素对照组。各组心肌炎性变化以rmIL-12中剂量治疗组心肌炎性反应浸润最轻,而rmIL-12大剂量组心肌细胞变性坏死最重。结论适当增加NK细胞的活性可以减轻心肌细胞的损伤,但NK细胞活性过度增加会加重心肌细胞损伤。rmIL-12通过增加NK细胞活性而增加了穿孔素的表达。穿孔素表达量随rmIL-12治疗剂量的增加而增加。     

病毒性心肌炎小鼠体内γ-IFN与NO相关性研究

为探讨γ -IFN、NO在实验性病毒性心肌炎小鼠中的变化及其在病毒性心肌炎中的作用 ,以柯萨奇病毒B3亲心肌株(CVB3m)诱导的BALB/C心肌炎小鼠为研究对象 ,每隔7天观察小鼠血清中γ -IFN、心肌匀浆中NO在病程中的动态变化 ,并计算感染小鼠心肌组织光镜下病理积分。结果显示 ,BALB/C鼠感染病毒后体内γ -IFN、NO均有不同程度升高 ,急性期(第7天)最高 ,且NO的升高与γ -IFN相关(r=0.95,r2=0.9,P<0.05) ,而感染后心肌病理积分又与NO相关(r=0.66,r2=0.43,P<0.05)。结果表明 ,γ -IFN在病毒性心肌炎发病中起重要作用 ,介导NO产生以发挥抗病毒作用 ,而过分表达则可造成自身损伤 ,故适当降低其表达水平有利于病理转归