JAK2/STAT3信号通路在重症急性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用

目的探讨JAK2/STAT 3信号通路在实验性重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤中的作用。方法以4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导大鼠SAP模型。32只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组(NC组)和SAP 6h、12h、18h组,每组8只。动态测定各组血清淀粉酶(AMY)水平;光镜下观察胰腺及肺组织病理变化,并计算肺湿/干重比;ELISA法检测血清IL-6及IL-18表达情况;West-ern blotting检测肺组织中JAK2和STAT 3蛋白的表达水平。结果与NC组比较,SAP各组AMY水平均明显升高(P<0.01);光镜下胰腺和肺组织损伤随病情进展而逐渐加重;SAP组肺湿/干重比与NC组比较显著升高(P<0.01)。各组血清中均有IL-6及IL-18表达,与NC组比较,SAP各组IL-6及IL-18表达水平均显著上调(P<0.01)。NC组有极少量的JAK2和STAT 3表达,SAP各组JAK2和STAT 3蛋白表达明显高于NC组,且随造模时间延长逐渐增高(P<0.01);JAK2和STAT 3表达变化与肺组织的严重程度一致。结论 JAK2/STAT 3信号通路的激活可诱导IL-6及IL-18过度表达,可能加重SAP时的炎症反应和肺损伤。     

JAK/STAT3信号通路与骨关节炎研究进展

体内研究发现,Janus激酶/信号转导与转录激活子3(JAK/STAT3)信号通路激活,可参与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21(P21)缺乏和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)等因子对软骨的损害过程;增加I型胶原蛋白α1和间充质干细胞(MSC)数量从而造成软骨下骨硬化;参与P21缺陷引起的滑膜组织炎症。体外研究发现,JAK/STAT3信号通路激活,可通过增加基质金属蛋白酶、I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶降解细胞外基质促进软骨细胞损伤;分别参与延伸蛋白2(ELP2)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、表皮生长因子样结构域7(EGFL7)调控成骨细胞、破骨细胞分化以及血管形成过程;促进成纤维细胞样滑膜细胞产生S100A8/A9,调节骨关节炎(OA)滑膜细胞周期来促进滑膜炎和OA滑膜细胞的增殖。而在体内体外实验中应用JAK/STAT3信号通路抑制剂可缓解上述过程,发挥抗OA的作用。JAK/STAT3信号通路在软骨破坏、软骨下骨变化和滑膜炎等OA病理变化过程中发挥重要作用,对JAK/STAT3信号通路进行靶向调控可作为治疗OA的潜在研究方向及新靶点。     

JAK2/STAT3通路槲皮素对先兆流产大鼠的保胎作用及对激素水平的影响

 目的 探讨槲皮素对先兆流产大鼠的保胎作用和对激素水平的影响。方法 50只妊娠大鼠随机分为正常组、模型组、槲皮素组、AG490组和槲皮素+AG490组,各10只,槲皮素组、AG490组和槲皮素+AG490组分别给予2.5 mg/ml槲皮素、0.5 mg/kg AG490和2.5 mg/ml槲皮素+0.5 mg/kg AG490灌胃干预,1次/d,连续7 d,正常组、模型组灌胃等量生理盐水,妊娠8 d除正常组外其余各组大鼠以米非司酮和米索前列醇建立先兆流产模型,妊娠9 d各组大鼠按原剂量继续灌胃4 d;妊娠14 d处死大鼠,检测血清激素及免疫因子水平,计算流产率、胚胎吸收率和脏器系数,HE染色观察子宫组织形态学变化。结果 与模型组比较,槲皮素组血清雌二醇、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、孕激素、白细胞介素-10(IL-10)水平和子宫组织磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号传导及转录激活因子3(p-STAT3)蛋白相对表达量升高,血清干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平降低,卵巢、子宫合重增加,脏器系数升高,流产率、胚胎吸收率降低(P＜0.05),AG490组血清雌二醇、β-HCG、孕激素、IL-10水平和子宫组织p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达量降低,血清IFN-γ、TNF-α水平升高,卵巢、子宫合重减小,脏器系数降低(P＜0.05);与槲皮素组比较,槲皮素+AG490组血清雌二醇、β-HCG、孕激素、IL-10水平和子宫组织p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达量降低,血清IFN-γ、TNF-α水平升高,卵巢、子宫合重减小,脏器系数降低,胚胎吸收率升高(P＜0.05);与AG490组比较,槲皮素+AG490组血清雌二醇、β-HCG、孕激素、IL-10水平和子宫组织p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达量升高,血清IFN-γ、TNF-α水平降低,卵巢、子宫合重增加,脏器系数升高,胚胎吸收率降低(P＜0.05)。结论 槲皮素对先兆流产大鼠具有保胎作用,可提高其激素水平,机制可能与调控JAK2/STAT3通路有关。     

急性脊髓损伤后炎症反应、自噬和凋亡相关因子的变化以及JAK2/STAT3信号通路研究

目的 观察大鼠急性脊髓损伤(Acute Spinal Cord Injury,ASCI)后神经细胞炎症反应、自噬和凋亡相关因子的变化,探讨靶向干预JAK2/STAT3信号通路活化的治疗作用.方法 选择健康成年8～10周龄SD雄性大鼠共45只,随机分为假手术组、模型组和JAK2抑制剂AG-490干预组各15只,采用改良A...     

JAK/STAT通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤(I/R)中的作用。方法将36只SD大鼠随机分为对照组I、/R组、Ag490(JAK2激酶抑制剂)组(n=12)。I/R组和Ag490组大鼠夹闭双侧肾动脉60min,恢复再灌注24h,对照组大鼠除不钳夹双侧肾蒂外,余步骤与I/R组、Ag490组相同。Ag490组大鼠术前1h以8mg/kg Ag490灌胃,对照组和I/R组给予等量生理盐水灌胃。HE染色观察肾组织的病理改变,免疫组化方法检测肾组织中STAT 3、Bcl-2蛋白表达,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果组织学检查发现对照组肾小管排列整齐,间质无充血水肿;I/R组可见部分肾小管上皮细胞肿胀,空泡变性,肾小管扩张,可见管型和坏死脱落细胞,间质充血水肿,大量炎细胞浸润;Ag490组组织损伤较I/R组加重。免疫组化结果显示,I/R组STAT 3、Bcl-2蛋白表达较对照组明显增多,细胞凋亡增加(P<0.05);Ag490组STAT 3、Bcl-2的蛋白水平较I/R组明显降低,细胞凋亡加重(P<0.05)。结论 I/R可通过JAK2途径诱导STAT 3激活,上调Bcl-2蛋白表达;阻断JAK2激活可抑制STAT 3表达,下调Bcl-2蛋白表达,加重细胞凋亡。     

维甲酸诱导基因Ⅰ信号通路在西尼罗病毒感染中的作用研究

目的 探讨维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)信号通路在西尼罗病毒感染过程中的作用.方法 用西尼罗病毒Chin-01株感染A549细胞,分别通过RT-PCR和Western blotting检测病毒感染对RIG-Ⅰ及干扰素β(IFN-β)启动子刺激因子-1(IPS-1)表达的影响,通过含CAT报告基因的重组质粒观察病毒感染对干扰素调控因子-3(IRF-3)和IFN-β启动子活性的影响,并用ELISA法检测IFN-β的表达水平,明确西尼罗病毒感染对RIG-Ⅰ信号通路下游信号分子的激活作用.通过瞬时转染法在A549细胞中过表达RIG-Ⅰ,观察其对西尼罗病毒感染的影响.结果 西尼罗病毒感染能够上调RIG-Ⅰ的表达,激活IPS-1、IRF-3等下游信号分子,诱导Ⅰ型IFN的产生.同时,RIG-Ⅰ的过表达能够抑制西尼罗病毒的增殖.结论 RIG-Ⅰ信号通路介导的固有免疫反应可能在西尼罗病毒感染过程中发挥重要作用.     

中性粒细胞弹性蛋白酶在重症急性胰腺炎并急性肺损伤发病中的表达和意义

目的探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)在重症急性胰腺炎并急性肺损伤(SAP-ALI)发病过程中的作用和意义。方法健康SD大鼠60只,随机分成3组:假手术组(n=18)、SAP-ALI组(n=22)、NE处理组(n=20)。ELISA法测定血清NE、TNF-α、IL-1β含量,RT-PCR法检测肺组织中NE的变化,Western blot检测肺组织中NE的表达,ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)和血清中的NE的含量变化,同时观察肺和胰腺组织湿/干质量比和病理形态学变化。结果 NE处理组肺组织、BALF和血清NE含量均较假手术组和SAP-ALI组大鼠明显增加(P<0.05或P<0.01),血清TNF-α、IL-1β含量也明显增加(P<0.05)。结论中性粒细胞的大量激活及其NE、TNF-α、IL-1β的过度释放参与了SAP-ALI的发病过程。     

PLC/PIP2信号通路在辐射诱导NRP1+Treg 细胞中的作用机制

目的 观察X射线照射后小鼠胸腺细胞中CD4+ CD25+ NRP1+ Treg细胞数量及TGF-β1分泌量的变化,并探索PLC/ PIP2信号通路在其中的作用机制.方法 36只ICR小鼠按随机数字表法分为假照组、0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 Gy的不同剂量组,X射线深部治疗机进行全身照射,于照射后16 h应用流式细胞仪分析小鼠胸腺细胞中CD4+ CD25+ NRP1+ Treg细胞的变化,ELISA法检测胸腺细胞TGF-β1含量的变化.EL-4细胞株经PKC激动剂(PMA)、Ca2+阻断剂(TMB-8)作用2h后并经4 GyX射线照射,于照射后48 h应用流式细胞术及ELISA法分别检测CD4+CD25+ NRP1+ Treg细胞及TGF-β1含量的变化.结果 小鼠胸腺细胞中NRP1+ Treg在0.5 GyX射线作用后稍有下降,于1.0 Gy降至最低(t=6.96,P＜0.01),而后呈剂量依赖性升高,于6.0 Gy升至最高(t =6.70,P＜0.01);胸腺细胞TGF-β1在0.5 GyX射线照射后显著下降(t=12.53,P＜0.01),而1.0～4.0 Gy照射后则呈剂量依赖性升高,于6.0 Gy仍保持高水平(t=10.40 ～ 15.30,P＜0.01).PMA作用后,与假照组相比,单独PMA组NRP1+ Treg细胞表达显著降低(t=3.06,P＜0.01),而联合照射后表达则明显上调(t=8.27,P＜0.01),TGF-β1无论受照与否,其含量均明显降低(t=10.46 ～39.69,P＜0.01);而TMB-8作用后,无论受照与否CD4+ CD25+ NRP1+ Treg的表达及TGF-β1的分泌量均显著上调(t=5.53～44.26,P＜0.01).结论 高剂量电离辐射可以诱导小鼠胸腺细胞中NRP1+ Treg细胞表达并增加TGF-β1的含量,此现象可能与启动PLC/PIP2信号通路有关.     

电磁辐射对CD34+造血干细胞JAK2和STAT5蛋白活化的影响及意义

目的 观察电磁辐射对CD34+造血干细胞JAK2和STAT5蛋白活化的影响,探讨JAK2和STAT5蛋白在电磁辐射致造血干细胞损伤中的作用。方法 从脐血中分离培养CD34+造血干细胞,分别用平均功率为1、5、25 mW/cm²的电磁波辐射20 min,干预组(平均辐射强度为25 mW/cm²)使用AG490(终浓度10^-6 mol/L)预处理CD34+造血干细胞30 min。检测正常组、辐射组和干预组12、24和48 h时细胞活力(MTT法)、细胞凋亡率(流式细胞术)、Caspase-3蛋白水平(WB法)、磷酸化JAK2和STAT5蛋白水平(WB法)。结果 与正常组比较,辐射组细胞12和24 h活力降低、细胞凋亡率升高,具有剂量效应,磷酸化JAK2和STAT5蛋白表达呈升高后降低的趋势。干预组12和24 h细胞活力显著高于辐射25 mW/cm²组,细胞凋亡率显著低于辐射25 mW/cm²组,磷酸化JAK2和STAT5蛋白水平较辐射25 mW/cm²组低。结论 JAK2和STAT5蛋白参与了1～25 mW/cm²功率范围内的电磁辐射对CD34+造血干细胞的损伤过程,阻断JAK2和STAT5蛋白活化可缓解CD34+造血干细胞凋亡的发生。     

异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及JAK2/STAT3通路的影响

 目的 探讨异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法 采用MTT法测定不同浓度的异丙酚对胶质瘤U87细胞和人正常星型胶质细胞HEB生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外迁移能力的影响,蛋白印迹法(WB)测定10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果 与对照组相比,5、10、25、50、100 μM异丙酚均能显著抑制胶质瘤U87细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05),后续选择2、5、10 μM异丙酚进行实验。与对照组相比,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理后,侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验说明,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理48 h后,迁移能力分别降低了(19.69±2.67)%、(41.41±3.28)%、(59.75±2.91)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。且胶质瘤U87细胞中JAK2蛋白磷酸化水平、STAT3蛋白磷酸化水平明显下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 异丙酚可能通过下调JAK2/STAT3信号传导通路相关蛋白表达,抑制胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移能力。     

川芎嗪对顺铂诱导豚鼠耳蜗毛细胞模型中JNK/c-JUN信号转导通路调控及Caspase-3表达影响

目的通过观察川芎嗪对顺铂诱导豚鼠耳蜗毛细胞中JNK、c-JUN及Caspase-3蛋白表达水平的影响,探讨其抗凋亡的机制。方法将60只听力正常的健康白毛红目豚鼠按照随机字数表法分为空白组与模型组,空白组豚鼠正常饲养,模型组豚鼠腹腔注射顺铂,诱导药物性耳聋模型。造模成功后,将空白组及模型组分别随机分为两组,即空白对照组、空白+川芎嗪组、模型对照组、模型+川芎嗪组。空白+川芎嗪组、模型+川芎嗪组豚鼠腹腔注射川芎嗪注射液进行干预,2周后处死豚鼠,采用Western-blot法对各组豚鼠耳蜗组织中c-JUN、JNK及Caspase-3蛋白表达水平进行检测。结果与空白组相比,模型组豚鼠听性脑干反应(ABR)阈值显著提高,差异有统计学意义(P<0.01);空白组豚鼠耳蜗毛细胞排列整齐、均匀,无缺失及坏死细胞出现;模型组豚鼠耳蜗毛细胞变形明显,排列不均,溶解破坏的毛细胞较多。与空白对照组和空白+川芎嗪组比较,模型对照组豚鼠耳蜗组织中c-JUN、JNK、Caspase-3蛋白表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组比较,模型+川芎嗪组豚鼠耳蜗组织中c-JUN、JNK、Caspase-3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论川芎嗪可通过调控JNK/c-JUN信号通路的活化,进而调控Caspase-3来抑制细胞凋亡途径,进而发挥其抗凋亡作用。     

IL-6/STAT3活化在大鼠肝移植胆管上皮细胞增殖中的作用

目的探讨大鼠移植肝胆管上皮细胞(BEC)增殖过程中IL-6/STAT3信号通路活化的意义。方法在"两套袖法"基础上,以"支架法"建立肝动脉重建大鼠原位肝移植(OLT)模型,并随机分为CP1h、CP12h组(供肝在4℃UW液中分别冷保存1h、12h后行OLT)、雷帕霉素(RPM)组(CP12h组术后给予RPM),和对照(C)组。分别于术后1、3、7、14d,采用实时荧光定量RT-PCR法检测肝组织IL-6mRNA表达,激光扫描共聚焦显微镜(LSM)原位检测肝BEC内活化型STAT3(p-STAT3)的表达水平,并利用免疫组化法检测BEC增殖情况。结果CP1h组术后1d肝内IL-6mRNA表达升高(0.41±0.03),随后(3、7、14d分别为0.28±0.03、0.23±0.03、0.27±0.05)逐渐接近C组水平;BEC内STAT3的活化水平(94±8、61±6、39±4、34±3),及肝内BEC增殖率(分别为2.1%±0.3%、5.9%±0.5%、2.6%±0.5%、2.3%±0.5%)的变化也呈现相同趋势。与C组及CP1h组相比,CP12h组术后各时相点肝组织IL-6mRNA表达明显增加(分别为0.60±0.03,0.73±0.02,0.38±0.02,0.30±0.04);BEC内STAT3活化水平(167±17、247±13、110±9、74±8)和BEC增殖率(分别为7.0%±0.5%、27.8%±1.8%、23.1%±1.6%、17.8%±1.2%)亦明显升高,且IL-6mRNA表达水平与STAT3活化程度呈显著正相关(r=0.95,P<0.05)。RPM可明显降低CP12h组BEC内STAT3的活化水平(分别为88±7、106±4、84±5、40±4)和BEC增殖率(4.2%±0.5%、11.2%±1.2%、12.9%±1.3%、8.5%±0.6%)。结论严重的冷保存-再灌注损伤活化BEC内IL-6/STAT3信号通路,可能是调控移植肝BEC增殖的分子机制之一。     

JNK/AP-1信号通路在As_2O_3诱导乳腺癌细胞凋亡中的作用

目的探讨c-Jun N端激酶（JNK）信号通路在As2O3诱导乳腺癌细胞凋亡中的作用。方法体外培养MCF7细胞,以As2O3为刺激源,溴化丙锭（PI）染色结合流式细胞术方法检测细胞周期及细胞凋亡;双荧光素酶报告基因法检测MCF7细胞中AP-1的诱导活化;Western印迹法检测JNK、c-Jun的诱导活化及Fra-1的蛋白表达。结果 As2O3可显著诱导MCF7细胞凋亡并导致细胞周期行进阻滞;As2O3可诱导JNK持续性高强度表达,转录因子AP-1的转录激活活性上调;As2O3可诱导c-Jun活化并诱导Fra-1表达;转染c-Jun显性负性突变体TAM67或Fra-1shRNA可有效降低As2O3诱导的乳腺癌细胞凋亡。结论 JNK/AP-1途径是介导As2O3诱导乳腺癌细胞凋亡反应的重要信号通路。     

PI3K/Akt信号通路与肝星状细胞活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路与肝星状细胞(HSC)活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用。方法 6 MV X射线照射,联合PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂处理HSC,分为空白对照组、抑制剂组、10 Gy照射组、10 Gy+抑制剂组、20 Gy照射组和20 Gy+抑制剂组。检测各组的细胞凋亡率、细胞上清液转化生长因子β1(TGF-β1)浓度、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达量和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达量。结果 与空白对照组相比,10 和20 Gy照射组细胞的凋亡率随照射剂量的增加而增加(t=8.43、11.63,P<0.05);与10 和20 Gy照射组比较,分别加抑制剂后细胞的凋亡率降低(t=8.09、4.88,P<0.05)。与10 Gy照射组比较,20 Gy照射组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量增加(t=6.91、7.80、9.28,P<0.05),10 Gy+抑制剂组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量降低(t=6.17、15.11、10.34,P<0.05)。与20 Gy照射组比较,20 Gy+抑制剂组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量同样降低(t=10.04、6.85、23.84,P<0.05)。结论 X射线通过激活PI3K/Akt信号通路使HSC活化,导致放射性肝纤维化的发生。