非小细胞肺癌组织中3p区抑癌基因启动子的甲基化

目的：探讨3p位点上3个抑癌基因RASSF1α、RAR-β和FHIT启动子甲基化在非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer．NSCLC）组织中的作用。方法：应用甲基化特异的PCR（methyl-specific PCR,MSP）和RTPCR方法分别测定53例NSCLC组织中RASSF1α、RAR-β和FHIT的甲基化率与转录水平。结果：NSCLC癌组织和癌旁组织中的甲基化率分别是FHIT为53％和8％,RAR-β为42％和6％,RASSF1α为57％和9％;FHIT、RASSF1α的甲基化率在吸烟指数〉400年支组高于≤400年支组（P值分别为0．004与0．008）;FHIT、RASSF1α的甲基化率Ⅱ期高于Ⅰ期（P值分别为0．016与0．008）,Ⅲ期高于Ⅱ期（P值分别为0．033与0．029）。结论：3P位点RASSF1α、RAR-β和FHIT基因甲基化的发生与NSCLC的病理生理密切相关,而启动子CpG岛甲基化是导致转录沉默的重要机制。     

胃癌中DNA甲基化转移酶3A的表达与幽门螺杆菌感染的关系

目的 探讨胃癌患者胃黏膜上皮组织中DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)表达与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系.方法 选取胃癌(GC)、腺瘤性息肉(GA)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、慢性非萎缩性胃炎(CNAG)患者各30例,比较不同患者胃黏膜组织中DNMT3A mRNA的表达水平及Hp的感染情况.结果 4种胃部疾病患者胃黏膜组织中DNMT3A mRNA的相对表达量比较,差异有统计学意义(P﹤0.01).随着病情的发展,DNMT3A mRNA的相对表达量呈逐渐升高趋势.GC患者胃黏膜组织中DNMT3A mRNA的相对表达量高于CAG和CNAG患者,GA患者胃黏膜组织中DNMT3A mRNA的相对表达量高于CNAG患者(P﹤0.05).在同种疾病的胃黏膜组织中,Hp感染胃部疾病患者胃黏膜组织中DNMT3A mRNA的相对表达量高于非Hp感染的胃部疾病患者(P﹤0.05).低分化、伴有淋巴结转移GC患者GC组织中DNMT3A mRNA的相对表达量分别高于高中分化、不伴淋巴结转移的GC患者(P﹤0.05).结论 Hp感染可诱导胃黏膜中DNMT3A高表达,DNMT3A表达的上调可能促进GA、GC的发生发展,Hp感染和DNMT3A可协同作用参与从慢性炎症向GC发展的过程.     

非小细胞肺癌中Reprimo以及14-3-3 Σ基因启动子异常甲基化检测

目的探讨Reprimo以及14-3-3 Σ基因启动子在非小细胞肺癌(NSCLC)中的异常甲基化状态及其与临床病理资料的联系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation Specific-PCR,MSP)技术检测60例NSCLC以及癌旁正常组织中Reprimo以及14-3-3 Σ基因启动子异常甲基化状态。结果Reprimo以及14-3-3 Σ基因启动子异常甲基化在NSCLC组织中发生频率分别为36.67%(22/60)和28.33%(17/60),与癌旁正常组织具有显著性差异(P值分别为0.000和0.002)。Reprimo基因启动子异常甲基化频率与吸烟习惯以及年龄相关;14-3-3 Σ启动子异常甲基化与年龄、吸烟习惯、性别、病理类型和临床分期以及淋巴结转移等无相关。结论NSCLC中存在Reprimo和14-3-3 Σ等基因启动子较高频率的异常甲基化。     

金属硫蛋白1h与常染色质组蛋白甲基转移酶1结合调节组蛋白H3K9甲基化并抑制肺癌细胞周期及运动

目的:观察常染色质组蛋白甲基转移酶1(euchromatic histone methyltransferase1,EHMT1)与金属硫蛋白1h(metallothionein1h,MT1h)的相互作用及定位,探讨其对组蛋白H3K9甲基化和肺癌细胞生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:将pGBKT7-MT1h质粒与pGADT7-EHMT1质粒共同转化至酵母菌株AH109,进行酵母双杂交实验。将pcDNA4/TO/myc-hisA/MT1h与pcDNA6/TR质粒共转染肺癌细胞株A549和A2,并用四环素诱导MT1h表达后,采用免疫共沉淀和激光共聚焦法检测MT1h、标签蛋白c-myc和EHMT1蛋白的表达及定位;运用组蛋白H3K9甲基转移酶试剂盒检测甲基化转移酶活性,Western印迹法检测三甲基化的组蛋白H3K9表达;FCM和克隆形成实验检测MT1h表达对细胞增殖的影响;划痕实验和Borden小室法检测MT1h对细胞迁移的影响。结果:实验证实MT1h与EHMT1存在直接作用,且二者共定位于细胞核。诱导MT1h表达后,组蛋白甲基化转移酶活性升高,并且MT1h与组蛋白赖氨酸H3K9三甲基化密切相关。功能分析显示,MT1h稳定转染的肺癌细胞多处于G0期,细胞运动和迁移能力降低。结论:MT1h与EHMT1在细胞核内直接作用,可能通过调节组蛋白H3K9甲基化来发挥抑癌基因的作用。     

环状RNA CircHIPK3通过miR-379调控IGF1表达促进非小细胞肺癌细胞系NCI-H1299与NCI-H2170的细胞增殖

背景与目的 已有的研究证明:环状RNA是一类在哺乳动物中普遍存在的具有稳定闭合环状结构的内源性RNA分子.环状RNA circHIPK3(circular RNA HIPK3,circHIPK3)在肝细胞癌(hepatocellular carcino-ma,HCC)中表达水平较高,促进肝癌细胞生长.但是其在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的作用及其调控机制尚无文献报道.本研究拟探讨环状RNA circHIPK3对NSCLC细胞系NCI-H1299和NCI-H2170细胞增殖的影响,并进一步研究其调控的分子机制.方法 Real-time PCR法检测circHIPK3在NSCLC各细胞系中的表达水平.CCK-8实验和克隆形成实验检测过量表达和干扰circHIPK3对细胞增殖的影响.双荧光素酶报告基因实验分别检验miR-379与circHIPK3及miR-379与IGF1 mRNA的结合情况.Western blot和ELISA检测细胞内外的IGF1蛋白表达水平.结果 环状RNA circHIPK3在6株NSCLC细胞株中均有表达,其中H1299表达最低,H2170表达最高,通过转染过表达的circHIPK3可显著促进NCI-H1299细胞增殖,干扰circHIPK3可显著抑制NCI-H2170细胞增殖.miR-379可与circHIPK3及IGF1 mRNA直接结合.过表达circHIPK3导致IGF1表达量上调,干扰circHIPK3能够下调IGF1表达水平,转入miR-379 mimics恢复了circHIPK3稳转细胞株IGF1表达水平的上调及细胞增殖表型.结论 环状RNA circHIPK3在NSCLC细胞系NCI-H1299及NCI-H2170中可通过miR-379调控IGF1表达促进细胞增殖,环状RNA circHIPK3可能成为非小细胞肺癌治疗的新靶点.     

3株肺癌细胞中9个肿瘤相关基因的启动子甲基化状态和部分基因表达的相关性

目的对3株肺癌细胞中9个肿瘤相关基因的启动子甲基化状态和部分基因表达的相关性进行评估.方法通过甲基化特异性多聚酶链反应法(MSP)结合DNA测序来确定3株肺腺癌细胞株(A549,SH77和SPE-A-1)中9个基因的启动子CpG岛的甲基化状态:APC,CDH13,DAPK1,MGMT,MYOD1,p16INK4a,p73,RAR-β和WT1基因.同时采用半定量RT-PCR的方法来量度下列5个基因的表达:CDH13,MGMT,MYOD1,RAR-β和WT1基因.结果在9个受检基因之中,下列4个基因在三株细胞中均呈同样的甲基化谱式:仅有去甲基化:APC和DAPK1,以及兼有甲基化和去甲基化:p73和p16INK4a.而其余5个基因则表现为不同的甲基化模式.尽管,这5个基因的表达谱式大体上符合其启动子CpG岛甲基化的表达静息的原则,个别的例外亦是有的.这提示着与DNA甲基化状态无关的机制可能也会参与该基因的表达调控.结论肺癌细胞株中的肿瘤相关基因的启动子CpG岛的过甲基化可与该基因的表达状态有较高的相关性.     

碳离子(^(12)C^(6+))抑制JAK2/STAT3通路促进肺癌中CD8^(+)T细胞浸润的研究北大核心CSCD

目的探索碳离子(^(12)C^(6+))照射后JAK2/STAT3通路的改变及下游蛋白FOXP3调控的肺癌中CD8+T细胞的浸润差异。方法基于C57BL/6小鼠Lewis荷瘤模型的RNA测序分析,筛选出碳离子照射后肺癌中显著改变的JAK2/STAT3通路及相关的差异表达基因及蛋白如FOXP3。利用R软件“GSVA”中ssGSEA免疫浸润算法,探索FOXP3与肺癌免疫微环境中主要免疫细胞浸润的相关性并基于碳离子联合STAT3抑制途径(氯硝柳胺)对肺癌中CD8+T细胞浸润进行分析。结果碳离子照射后,肺癌中JAK2/STAT3通路被抑制,相关基因和蛋白表达下调。基于ssGSEA算法的免疫评分显示,FOXP3表达与肺癌免疫微环境中CD8+T细胞浸润呈显著负相关。通过碳离子照射联合STAT3抑制剂氯硝柳胺,进一步明确了靶向JAK2/STAT3通路对于增加肺癌中CD8^(+)T细胞浸润的协同作用。结论碳离子(^(12)C^(6+))可以通过靶向JAK2/STAT3通路与免疫治疗发挥协同增效的作用。     

碳离子（12C6+）抑制JAK2/STAT3通路促进肺癌中CD8+ T细胞浸润的研究

目的 探索碳离子（¹²C⁶⁺）照射后JAK2/STAT3通路的改变及下游蛋白FOXP3调控的肺癌中CD8⁺T细胞的浸润差异。方法 基于C57BL/6小鼠Lewis荷瘤模型的RNA测序分析,筛选出碳离子照射后肺癌中显著改变的JAK2/STAT3通路及相关的差异表达基因及蛋白如FOXP3。利用R软件“GSVA”中ssGSEA免疫浸润算法,探索FOXP3与肺癌免疫微环境中主要免疫细胞浸润的相关性并基于碳离子联合STAT3抑制途径（氯硝柳胺）对肺癌中CD8⁺T细胞浸润进行分析。结果 碳离子照射后,肺癌中JAK2/STAT3通路被抑制,相关基因和蛋白表达下调。基于ssGSEA算法的免疫评分显示,FOXP3表达与肺癌免疫微环境中CD8⁺T细胞浸润呈显著负相关。通过碳离子照射联合STAT3抑制剂氯硝柳胺,进一步明确了靶向JAK2/STAT3通路对于增加肺癌中CD8⁺T细胞浸润的协同作用。结论 碳离子（¹²C⁶⁺）可以通过靶向JAK2/STAT3通路与免疫治疗发挥协同增效的作用。