黄芩苷对人肝癌SMMC-7721细胞系生物学行为的影响

目的:探讨黄芩苷对人肝癌SMMC-7721细胞系侵袭和转移的影响及其机制。方法:应用细胞培养技术培养SMMC-7721细胞,不同浓度黄芩苷处理肝癌细胞,通过Boyden小室模型测定其侵袭力、黏附力,细胞迁移实验测定细胞运动能力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞MMP2、TIMP2i、ntegrin1β、E-cd表达的改变。结果:黄芩苷能明显抑制肝癌细胞的侵袭力、黏附力及运动能力(P<0.05),并随浓度提高作用增强。形态学观察发现,黄芩苷处理组细胞形态较圆,伪足数目较少。黄芩苷处理组MMP2阳性表达细胞减少,TIMP2阳性表达细胞增多,MMP2/TIMP2比值下降;integrin1β表达增加,E-cd的表达则减低(P<0.05)。结论:黄芩苷能抑制肝癌细胞SMMC-7721侵袭与转移,其机制可能与直接抑制细胞迁移运动,抑制细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2表达,促进TIMP2表达及抑制黏附分子E-cd的表达,促进integrin1β表达有关。     

肝癌患者肝癥口服液含药血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ受体表达的影响

目的：观察肝癥口服液含药人血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ1／Smads信号转导通路中TGFβ受体（TGFβR）的影响。方法：以健康志愿者和肝癌患者用药前后血清培养人SMMC-7721肝癌细胞，应用RT-PCR和Western Blotting技术观察含药血清对肝癌细胞TGFβRⅠ和TGFβRⅡ mRNA和蛋白表达的影响。结果：健康志愿者服用肝癥口服液前后血清对SMMC-7721细胞的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ蛋白和mRNA表达无显著影响；肝癌患者肝癥口服液的含药血清可使明显受到抑制的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ表达恢复，尤其以TGFβRⅡ表达显著上调。结论：肝癌患者肝癥口服液含药血清可增加肝癌细胞TGFβR的表达，使受到抑制的TGFβ1／Smads信号转导通路功能恢复。     

肝癌患者肝癥口服液含药血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ受体表达的影响

目的:观察肝癥口服液含药人血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ1/Sm ads信号转导通路中TGFβ受体(TGFβR)的影响。方法:以健康志愿者和肝癌患者用药前后血清培养人SMMC-7721肝癌细胞,应用RT-PCR和W estern B lotting技术观察含药血清对肝癌细胞TGFβRⅠ和TGFβRⅡmRNA和蛋白表达的影响。结果:健康志愿者服用肝癥口服液前后血清对SMMC-7721细胞的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ蛋白和mRNA表达无显著影响;肝癌患者肝癥口服液的含药血清可使明显受到抑制的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ表达恢复,尤其以TGFβRⅡ表达显著上调。结论:肝癌患者肝癥口服液含药血清可增加肝癌细胞TGFβR的表达,使受到抑制的TGFβ1/Sm ads信号转导通路功能恢复。     

毒痰瘀脾虚方含药血清对HepG2肝癌细胞影响的实验研究

目的:研究毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中相关基因及细胞侵袭、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR实验观察毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响;Transwell细胞侵袭和迁移实验,观察其对Hep G2肝癌细胞侵袭和迁移的影响;AnnexinV-FITC双染流式细胞法检测其对Hep G2肝癌细胞凋亡的影响。结果:RT-qPCR结果显示,与阴性组比较,毒痰瘀脾虚方含药血清能下调HepG2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA的表达,差异有统计学意义(P0.01或P0.05);Transwell细胞侵袭实验和迁移实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞的侵袭(P0.01),对细胞的迁移无明显影响(P0.05);细胞凋亡实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能促进Hep G2细胞的凋亡,与阴性组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞侵袭,促进细胞凋亡,并能抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达。     

黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞恶性行为的影响及分子基础研究

目的：研究黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系凋亡、侵袭转移的影响及其分子基础。方法：应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞，流式细胞术、TUNEL法测定肝癌细胞凋亡，通过Boyden小室模型测定其侵袭力，细胞迁移实验测定细胞运动能力，扫描、透射电镜观察细胞形态，Western-blot检测RhoA、RhoC和ROCK-1表达。结果：黄芩甙能明显诱导肝癌细胞凋亡，抑制侵袭力及运动能力。黄苓甙处理组细胞形态较圆，伪足数目较少，并发现凋亡细胞。RhoA在对照组和黄芩甙各剂量处理组之间无显著差异，Rhoc和ROCK-1表达在黄芩甙处理后显著下降。结论：黄芩甙能诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡，抑制其侵袭与转移，其机制可能与直接抑制细胞迁移运动、抑制RhoC和ROCK-1表达有关，与RhoA表达无关。     

蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL7402生长抑制和诱导凋亡作用的研究

目的 :探讨蒺藜皂苷 (STT)对体外培养的人肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法 :应用MTT与SRB法检测蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL-7402的抑制作用 ,采用形态学观察以及流式细胞术 (FCM)检测了STT诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的效应 ,采用流式细胞术检测BEL-7402细胞Bcl-2蛋白表达。结果 :①STT能够剂量依赖地抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖 ;②细胞显现典型的凋亡形态学改变 ,FCM出现凋亡峰 ;③STT能降低BEL-7402细胞的Bcl-2蛋白表达。结论 :STT在体外能抑制BEL-7402细胞的增殖并能诱导细胞凋亡 ,其诱导凋亡作用的途径之一是下调Bcl-2蛋白表达。     

蟾酥胶囊含药血清诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:观察蟾酥胶囊含药血清对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的诱导作用。方法:采用中药血清药理学方法,选择不同浓度含药血清作为实验组,分别与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育24 h、48 h,显微镜下观察细胞形态学变化;锥虫蓝染色检测细胞蓝染率;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化及APO 2.7蛋白的阳性表达率;均与10%无药血清组做对照。结果:实验组部分细胞变小、变圆,贴壁能力明显下降,呈漂浮状态,集落性明显降低,呈单个生长状态;锥虫蓝染色显示,细胞蓝染率无明显变化;流式细胞仪检测,可见明显的凋亡峰,细胞周期中G1、S期下降,G2/M期升高,APO 2.7蛋白表达的阳性峰明显增高,细胞凋亡率与作用时间、含药血清浓度呈一定的时效和量效关系。结论:蟾酥胶囊可以诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡。     

犀黄丸诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

观察犀黄丸含药血清诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步的探讨,目的:研究犀黄丸含药血清诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨.方法:犀黄丸含药血清对肝癌细胞生长的影响,检测对肿瘤Bel-7402杀伤率.在用不同浓度犀黄丸含药血清作用Bel-7402细胞不同时间后,用TUNEL法检测凋亡,用SASB法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:犀黄丸含药血清能明显抑制Bel-7402细胞生长,其肿瘤细胞Bel-7402杀伤率最高达75%,与对照组比较有显著性差异(P＜0.01).TUNEL法显示,细胞凋亡率明显提高,与对照组比较有显著性差异;Bel-7402细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.     

黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞株的抑制作用

目的研究黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用及探讨作用机理。方法肝癌BEL-7402细胞与不同浓度的黄芪总苷培养12,24,48 h,应用MTT和流式细胞术分析黄芪总苷对细胞的作用。结果黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞增殖具有明显的抑制作用并呈剂量、时间依赖性。黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞具有促进凋亡作用,并且上调p53基因表达。结论黄芪总苷可抑制肝癌BEL-7402的增殖,其抑制肝癌BEL-7402作用与其促进肿瘤细胞凋亡、上调p53基因表达有关。     

下瘀血汤对肝癌细胞生物活性及Nanog信号通路表达的影响

目的:研究下瘀血汤对肝癌细胞的作用以及对Nanog信号通路的影响。方法:将HepG2细胞分为空白血清组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组;高剂量含药血清组,通过MTT、流式细胞仪、Transwell测肝癌细胞增殖、凋亡及侵袭情况,实时PCR、蛋白质印迹法测Nanog mRNA、Bcl-2、胱天蛋白酶-3水平。结果:空白血清组肝癌细胞的OD值及侵袭数量高于中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),肝癌细胞凋亡率低于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),高剂量含药血清组肝癌细胞OD值及侵袭数量最少、凋亡最高;空白血清组肝癌细胞中Nanog mRNA及Bcl-2蛋白表达高于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),胱天蛋白酶-3的蛋白表达水平低于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),与低剂量、中剂量剂量含药血清组比较,高剂量含药血清组肝癌细胞中Nanog mRNA及Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),胱天蛋白酶-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:下瘀血汤通可抑制肝癌细胞的活性及其侵袭力、促进癌细胞的凋亡,其作用机制可能调控与Nanog信号通路,从而促进胱天蛋白酶-3的表达、抑制Bcl-2水平有关。     

根皮素抑制肝癌细胞恶性表型的研究

目的：探讨根皮素对肝癌BEL-7402细胞株运动、侵袭、粘附、克隆形成率的影响。方法：MTT法和Costar Transwell检测根皮素抑制BEL-7402细胞的增殖、运动、侵袭、粘附、克隆形成率。结果：根皮素能抑制BEL-7402细胞的增殖、侵袭、运动、粘附及克隆形成能力,并呈现出剂量依赖性。结论：根皮素能抑制BEL-7402细胞的恶性表型。     

CecropinXJ抑制肝癌BEL-7402细胞增殖及机制研究

目的研究新疆家蚕抗菌肽Cecropin XJ抗肝癌细胞BEL-7402的功能并探讨其机制。方法分别利用CCK-8和体内移植瘤模型检测Cecropin XJ抑制肝癌细胞生长的功能,检测其对正常肝脏细胞(LO2细胞)和小鼠血液系统的影响,并通过Western blotting检测凋亡相关蛋白表达情况。结果 Cecropin XJ可显著抑制BEL-7402细胞的增殖和体内移植瘤的生长,对正常肝脏细胞和小鼠血液系统无明显影响,抑瘤率为36.7%,Western blotting结果显示Cecropin XJ可以显著上调Bax/Bcl-2的表达,促进Cleaved-Casp3的表达。结论Cecropin XJ具有抑制肝癌BEL-7402细胞增殖作用,并且无明显毒副作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡相关。     

血府逐瘀汤对大鼠血管平滑肌细胞MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的 观察血府逐瘀汤含药血清对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移、侵袭的影响,以及其生成MMP -2、TIMP -1情况,探讨其作用机制.方法 通过划痕损伤实验、Boyden - chamber细胞侵袭实验观察VSMCs的迁移、侵袭,RT - PCR检测血府逐瘀汤含药血清对基质金属蛋白酶-2(MMP -2)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的mRNA表达.结果 与空白对照组比较,血府逐瘀汤高剂量组和中剂量组能显著抑制VSMCs的增殖和迁移(P＜0.05);与空白对照组比较,血府逐瘀汤组均能明显下调MMP-2 mRNA的表达同时上调TIMP-1 mRNA的表达(P＜0.01).结论 血府逐瘀汤含药血清有抑制VASMCs迁移和侵袭的作用,MMP -2表达降低、TIMP -1的表达升高可能是其机制之一.     

复方鳖甲软肝方对LPS刺激肾小管上皮细胞MMP9／TIMP1表达的影响

目的:研究复方鳖甲软肝方对肾小管上皮细胞LPS刺激不同时段表达MMP9、TIMP1的影响。方法:制备含药血清,将5％含药血清培养基加入体外培养的肾小管上皮细胞,分别于LPS刺激 24 h及48 h采用免疫组化及Western blot方法检测各组MMP9、TIMP1的表达。结果:LPS刺激肾小管上皮细胞12 h后,细胞胞浆内MMP9活性逐渐增强;24h达到高峰;TIMP1于LPS刺激24 h逐渐增强,48 h达到高峰上。复方鳖甲软肝方降低24h时MMP9的表达,同时也降低48h时TIMP1的表达。结论:复方鳖甲软肝方含药血清能抑制细胞早期MMP9的表达,可降低MMP9早期对基膜的破坏引起的上皮细胞转化,同时又降低后期TIMP1的表达,从而促进细胞外基质的降解,其双向调节作用可能是其防治肾间质纤维化的机制之一。     

复方鳖甲软肝方对LPS刺激肾小管上皮细胞MMP9/TIMP1表达的影响

目的：研究复方鳖甲软肝方对肾小管上皮细胞LPS刺激不同时段表达MMP9、TIMP1的影响.方法：制备含药血清,将5%含药血清培养基加入体外培养的肾小管上皮细胞,分别于LPS刺激24 h及48 h采用免疫组化及Western blot方法检测各组MMP9、TIMP1的表达.结果：LPS刺激肾小管上皮细胞12 h后,细胞胞浆内MMP9活性逐渐增强;24h达到高峰;TIMP1于LPS刺激24 h逐渐增强,48 h达到高峰上.复方鳖甲软肝方降低24h时MMP9的表达,同时也降低48h时TIMP1的表达.结论：复方鳖甲软肝方含药血清能抑制细胞早期MMP9的表达,可降低MMP9早期对基膜的破坏引起的上皮细胞转化,同时又降低后期TIMP1的表达,从而促进细胞外基质的降解,其双向调节作用可能是其防治肾间质纤维化的机制之一.     

人参多糖注射液对肝细胞癌的增殖抑制作用及机制探讨

目的:观察人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2增殖抑制作用,并探讨其机制。方法:将不同浓度的人参多糖注射液与人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2作用,采用cell counting kit-8(CCK8)检测细胞的增殖抑制,通过倒置显微镜观察用药前后细胞形态、数量变化,透射电镜观察细胞坏死、凋亡等形态学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)蛋白表达情况。结果:人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显抑制作用(P0.05),并且与浓度和时间呈正相关。60,80,100 g·L~(-1)人参多糖注射液作用于人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 24,48,72h后,可显著抑制其增殖(P0.01),40 g·L~(-1)人参多糖注射液作用于人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 24,48,72 h后可明显抑制其增殖(P0.05)。人参多糖注射液作用人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 48 h后,细胞出现细胞核边集、凋亡小体等凋亡形态变化,72 h后部分细胞出现空泡样变等形态学变化。与空白组比较,40,60,80 g·L-1人参多糖注射液组作用人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2后,TNFR1蛋白相对表达量明显升高(P0.05,P0.01)。结论:人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显的抑制作用;诱导细胞凋亡可能是抑制作用的机制。     

白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其机制研究

目的探讨白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其相关机制。方法采用MTT法考察白头翁皂苷D对人肝癌细胞BEL-7402增殖的影响,同时观察BEL-7402细胞形态的变化,采用集落形成实验考察白头翁皂苷D对BEL-7402细胞集落形成的影响;Hoechest 33342染色观察BEL-7402细胞凋亡的形态变化;流式细胞术检测BEL-7402细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化;采用Western blotting法检测BEL-7402细胞Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果 MTT结果显示白头翁皂苷D对BEL-7402细胞增殖有抑制作用;集落形成实验结果显示白头翁皂苷D能明显抑制BEL-7402细胞集落的形成,白头翁皂苷D(25.00μg/m L)能显著诱导BEL-7402细胞凋亡;白头翁皂苷D(18.75、25.00μg/m L)能显著降低BEL-7402细胞线粒体膜电位;白头翁皂苷D(12.50、18.75、25.00μg/m L)可显著上调BEL-7402细胞中Caspase-3的表达;白头翁皂苷D(25.00μg/m L)可显著下调Bcl-2的表达。结论白头翁皂苷D有良好的体外抗肝癌作用,其机制与调节线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞增殖与凋亡的影响

[目的]观察消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其对Bcl-2表达的影响。[方法]运用血清药理学方法,选择不同浓度的消癥丸含药血清与胶质瘤C6细胞共同孵育,用MTT法计算增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测C6细胞中的Bcl-2的表达情况。[结果]MTT法结果显示大、中剂量组消癥丸含药血清可显著抑制胶质瘤C6细胞的增殖,且呈现含药血清浓度-时间依赖性的特点。流式细胞仪检测可见各组消癥丸含药血清作用下C6细胞凋亡率呈含药血清浓度依赖性特点,大、中剂量组凋亡率较高。免疫组化学检测Bcl-2表达显示消癥丸能显著降低其表达。[结论]消癥丸可通过抑制胶质瘤细胞的增殖,降低Bcl-2表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡,发挥其临床抗肿瘤,抑制脑瘤的作用。     

化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo增殖侵袭迁移及FGA、ITGB3表达的影响

目的 研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)增殖、侵袭、迁移以及纤维蛋白原α链(fibrinogen alpha chain, FGA)、整合素β3(integrinβ3,ITGB3)表达的影响。方法 CCK8法检测化瘀消癥颗粒含药血清干预HTR-8/SVneo细胞的增殖情况;Transwell、细胞划痕分别检测化瘀消癥颗粒含药血清(低、中、高浓度组)对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qRT-PCR检测FGA、ITGB3 mRNA表达;Western blot检测FGA、ITGB3蛋白表达。结果 化瘀消癥颗粒含药血清高、中、低浓度组对HTR-8/SVneo细胞活性具有明显抑制作用。与对照组相比,各剂量化瘀消癥颗粒含药血清组对HTR-8/SVneo细胞增殖活性均有不同程度的抑制作用(P<0.05);不同剂量HTR-8/SVneo细胞穿过Transwell小室滤过膜数量均低于空白组,其中低剂量组HTR-8/SVneo细胞穿膜率最低(P<0.05)。化瘀消癥颗粒含药血清组FGA、ITGB3蛋白表达下调;低浓度化瘀消癥颗粒含药血清组FGA...     

肝癥口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:探讨肝口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,为临床应用肝口服液治疗肝癌提供实验室依据。方法:选取Ⅱb或Ⅲ期肝癌病人和健康志愿者各5例,分别在用药前及用药后8周采集血清,与SMMC-7721细胞共同培养24h、48h后,应用噻唑氮蓝(MTT)比色法测定肝癌细胞SMMC-7721增殖水平。结果:HCC患者含药血清对SMMC-7721细胞增殖抑制率在24h、48h分别为45.00%3、9.32%;而健康志愿者为4.58%、7.70%,HCC患者含药血清对肝癌细胞增殖抑制作用明显高于健康志愿者。结论:肝口服液含药血清对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用并促进其凋亡,表明肝口服液有抗肿瘤作用。