CK、Tubulin-β和PCNA在鼻咽癌放疗后复发组织中的表达及意义

 目的 研究鼻咽癌中CK、Tubulin-β及PCNA的表达,探讨其与鼻咽癌放疗后复发和转移的可能机制。方法裸鼠体内移植瘤实验观察鼻咽癌细胞F1、S1放射治疗前后的细胞形态、体内增殖和转移能力,采用免疫组织化学SP法检测裸鼠移植瘤组织、鼻咽癌及放疗后复发组织中CK、Tubulin-β及PCNA的表达。结果放射后F1、S1裸鼠移植瘤瘤体质量分别较未放射组的F1、S1裸鼠移植瘤瘤体质量低（P<005）。各组均无肺转移,放射治疗后S1裸鼠移植瘤淋巴结转移率高于F1组,但差异无统计学意义（P>005）。未放射组F1裸鼠移植瘤组织中PCNA表达高于未放射S1裸鼠移植瘤（P<0.05）;放射治疗后S1裸鼠移植瘤中CK和PCNA表达均高于放射后的F1裸鼠移植瘤（P<0.05/0.01）。鼻咽癌放疗后复发组织中PCNA表达高于鼻咽癌组（P<0.05）。Spearman相关分析显示,鼻咽癌组织中CK与Tubulin-β、Tubulin-β与PCNA表达呈正相关关系,放疗后复发组织中CK与Tubulin-β和PCNA表达呈正相关（P<0.05）。鼻咽癌及放疗后复发组织中CK、Tubulin-β及PCNA的表达与患者年龄、性别、颈部淋巴结转移和临床分期无关。结论CK和Tubulin-β参与鼻咽癌放疗后复发的过程,并与细胞增殖关系密切,但不能独立作为鼻咽癌放疗后复发的预测指标。     

CK、Tubulin-β及 PCNA与鼻咽癌放疗后复发与转移的相关性研究

目的：探析CK、Tubulin-β及PCNA与鼻咽癌放疗后复发与转移的相关性。方法采用裸鼠体内移植瘤法。根据治疗方式的不同将裸鼠分成放射组与未放射组两组,分别用10只裸鼠接种每组S1、F1细胞。分析鼻咽癌细胞F1、S1放疗前、后的细胞形态、体内增殖及转移能力。结果鼻咽癌及放疗后复发组织中CK、Tubulin-β及PCNA水平与临床分期、颈部淋巴结转移、年龄及性别无关。放疗后复发组织中CK与Tubulin-β及PCNA表达则表现为正相关性（ P＜0．05）。两组均未发生肺转移,比较放疗后两组F1、S1裸鼠移植瘤瘤体质量,放射组均较未放射组低,且有统计学差异（P＜0．05）。放疗后PCNA、CK的表达水平,S1裸鼠移植瘤明显比F1高（P＜0．05）。结论鼻咽癌放疗后的复发过程中CK、Tubulin-β的水平与细胞增殖密切相关,但不是鼻咽癌放疗后复发的独立预测指标。     

照射存活后代的鼻咽癌细胞株放射生物学特性研究

目的　了解鼻咽癌细胞系CNE -2Z具有淋巴道转移倾向的克隆株H 5照射存活后代的放射敏感性和体内、体外细胞生长特性。方法　采用克隆形成率检测H 5及照射存活后代 2组癌细胞的放射敏感性 ;体外细胞增殖实验结晶紫染色法检测体外细胞增殖能力 ;用瘤细胞裸鼠体内移植观察 2组细胞的体内增殖、转移能力。结果　H5细胞照射存活后代的放射敏感性比未处理的H5细胞低 ,处理前 2Gy存活率 (SF2 )为 0 .3 0 ,平均致死剂量 (D0 )为 1.93Gy ,处理后细胞的SF2为 0 .49,D0 为 2 .56Gy ;体外细胞增殖减慢 ,有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;体内细胞增殖减慢 ,有显著性差异 (P <0 .0 5) ;成瘤率减小 ,转移率增高 ,体积倍增时间延长 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5)。结论　照射存活后代的细胞放射敏感性降低 ,体内、体外细胞增殖减慢。     

Testin基因对鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响

目的探讨Testin基因(TES)对鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响。方法将鼻咽癌5-8F细胞分为两组:未转染组(正常的5-8F细胞)和TES组(高表达TES的5-8F细胞),经过0、2、4、6、8 Gy放射剂量点照射后,进行细胞克隆形成实验,绘制生存曲线。为建立鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤模型,将24只BALB/c Nude裸鼠随机均分为四组:未转染组(注射5-8F细胞液)、TES组(注射高表达TES的5-8F细胞液)、照射组(注射5-8F细胞液+局部照射)、TES照射组(注射高表达TES的5-8F细胞液+局部照射),每隔3天测量移植瘤长短直径,计算肿瘤体积并绘制移植瘤生长曲线,1月后处死小鼠,取肿瘤块称质量,流式细胞仪检测各组移植瘤中细胞凋亡情况。结果与未转染组比较,TES组细胞的存活率明显降低(P<0.01)。未转染组、TES组、照射组、TES照射组瘤体生长速度依次减慢、瘤体质量依次降低、细胞凋亡率依次增加。以TES照射组瘤体生长速度最慢、质量下降最大、细胞凋亡率最高,组间多重比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Testin基因能有效提高体外培养的鼻咽癌5-8F细胞的放疗敏感性。     

肝激酶B1增强肺癌H460细胞放射敏感性的体内研究

目的 研究肝激酶B1(LKB1)对肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤放射敏感性的影响。方法 构建肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予空载质粒(pEGFP-Ctrl)、照射+空载质粒(IR+pEGFP-Ctrl)、过表达LKB1质粒(pEGFP-LKB1)、照射+过表达LKB1质粒(IR+pEGFP-LKB1)处理;观察移植瘤生长情况,计算抑瘤率及放射增敏比;并采用免疫组织化学和蛋白印记技术检测各组瘤组织中LKB1表达情况,分析LKB1与放射敏感性的关系。结果 相较于pEGFP-Ctrl组,IR+pEGFP-Ctrl组、pEGFP-LKB1组和IR+pEGFP-LKB1组的肿瘤生长都受到不同程度的抑制,抑瘤率分别为31.30%、14.78%和43.48%,其中IR+pEGFP-LKB1组较其他组最为明显。IR+pEGFP-LKB1组LKB1的放射增敏系数为1.18。转染pEGFP-LKB1组的LKB1在免疫组织化学和蛋白印记水平上表达增高,其余组未见LKB1表达。结论 成功构建肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤模型,LKB1具有增强肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤放射敏感性作用。     

时钟基因Bmal1对鼻咽癌移植瘤放疗敏感性的影响

目的:探讨双向调控时钟基因Bmal1(brain and muscle arnt-like1)对鼻咽癌CNE1裸鼠移植瘤生长的影响及与放疗敏感性的关系。方法:采用慢病毒感染方法,构建Bmal1基因CNE1OE(过表达组)、CNE1OENC(过表达对照组)、CNE1sh3(低表达组)、CNE1shNC(低表达对照组)4株细胞,Western blot验证各组细胞Bmal1蛋白表达情况;4株细胞分别皮下注射相应的4组裸鼠,移植瘤生长后测量其体积;给予6-MeV电子线15 Gy照射裸鼠移植瘤,观察放疗后各组移植瘤体积变化情况。剥离移植瘤,RTPCR及Western blot分别检测Bmal1、P53、P21 mRNA及蛋白表达情况。结果:Western blot结果提示,与各自对照组对比,CNE1OE组Bmal1蛋白过表达,CNE1sh3组Bmal1蛋白低表达,表明细胞转染成功。成功构建裸鼠移植瘤模型,CNE1OE组裸鼠移植瘤体积明显小于CNE1OENC组,CNE1sh3组体积明显大于CNE1shNC组(P<0.05)。放疗后,CNE1OE、CNE1OENC、CNE1shNC组裸鼠移植瘤体积均缩小(P<0.05),其中CNE1OE组缩小最明显。CNE1sh3组放疗前后自身体积变化差异无统计学意义。Bmal1基因、P53及P21的mRNA及蛋白相对表达量在CNE1OE组明显高于CNE1OENC组(P<0.05),CNE1sh3组则明显低于CNE1shNC组(P<0.05)。结论:Bmal1基因过表达能抑制鼻咽癌CNE1裸鼠移植瘤生长,增强其放疗敏感性,可能与P53、P21蛋白上调相关;敲低则促进移植瘤生长,导致其辐射抗拒,可能与P53、P21蛋白下调相关。     

人胃癌裸鼠移植瘤DNA含量异质性的研究

两株人胃癌细胞MKN-28和MKN-45,分别经皮下、腹腔、胃壁和尾静脉接种在无胸腺裸小鼠体内。对不同接种部位形成的胃癌移植瘤,用流式细胞仪分析了瘤细胞的DNA含量。结果证实,胃癌移植瘤细胞的DNA含量存在异质性。由此提示,在人胃癌裸鼠移植瘤的发展过程中,伴有瘤细胞DNA含量的异质性改变。这种变化也受接种部位器官环境的影响。     

HIF-1α沉默对鼻咽癌CNE-1细胞移植瘤生长和转移的影响

目的 低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)在鼻咽癌组织中存在高表达,与淋巴结转移和临床分期偏晚密切相关,是鼻咽癌患者独立的不良预后因子.前期研究显示,沉默HIF-1α可有效降低鼻咽癌CNE-1细胞的黏附和侵袭能力.本研究通过探讨沉默HIF-1α对鼻咽癌CNE-1细胞移植瘤生长和转移能力的影响,进一步为临床提供参考和实验依据.方法 采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默鼻咽癌CNE-1细胞中HIF-1α表达,RT-PCR检测其沉默效果;15只雄性裸鼠随机分为未转染组、阴性对照组和RNAi组,每组5只.将CNE-1细胞分别接种于裸鼠右大腿外侧皮下,建立鼻咽癌CNE-1细胞裸鼠移植瘤模型,观察各组成瘤时间并记录其生长情况,待分别形成肉眼可见的肿瘤后再培养20 d.收集移植瘤组织及裸鼠两侧腹股沟淋巴结.测量移植瘤大小并计算其体积.采用HE染色,计算各组淋巴结转移率及阳性率;蛋白质印迹法检测3组移植瘤中HIF-1α、E-钙粘蛋白(E-cadherin)及CX-CR4蛋白的表达.结果 RNAi可有效沉默鼻咽癌CNE-1细胞中HIF-1α表达;成功构建了裸鼠移植瘤模型;未转染组、阴性对照组和RNAi组裸鼠成瘤时间分别为(8.3±1.2)、(7.8±1.5)和(15.6±2.1)d,差异有统计学意义,F=21.181,P=0.002;最终成瘤体积分别为(1184.4±145.8)、(1254.0±130.5)和(322.7±118.2) mm3,F=82.081,P＜0.001.淋巴结转移率及阳性率均明显降低;与未转染组及阴性对照组比较,HIF-1α(P＜0.001)和CXCR4 (P=0.001)蛋白在RNAi组中表达明显降低,而E-cadherin则明显增强,P=0.003.结论 RNAi沉默HIF-1α可有效抑制鼻咽癌CNE-1细胞移植瘤的生长和转移,其机制可能与上调E-cadherin、下调CXCR4蛋白表达有关.     

ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤中的表达及其与转移的关系

目的 建立裸鼠鼻咽癌转移模型并探讨 E-选择素（ELAM-1）与鼻咽癌转移的相关性。方法 将鼻咽癌5-8F细胞悬液注射于裸鼠左后肢爪垫，观察裸鼠状态、成瘤情况并测量裸鼠体重及移植瘤长短径；采用连续病理切片苏木精-伊红染色观察移植瘤及转移情况，将16只人鼻咽癌荷瘤裸鼠分为转移组和非转移组；采用免疫组织化学法检测两组移植瘤组织中ELAM-1的表达。 结果 16只裸鼠均成瘤，成瘤率为100.0%，其中10只裸鼠出现转移瘤，转移率为62.5%。建模前，两组裸鼠体重差异无统计学意义［（13.83±0.56）g vs （14.62±0.30） g，t=1.026，P=0.071］。建模后4~7周，裸鼠瘤体体积呈指数增长，且转移组移植瘤增长速度较非转移组快，非转移组裸鼠瘤体体积小于转移组［（198.91 ± 163.29） mm³ vs （268.76 ±174.31） mm³，t=4.376，P=0.005］。ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤、淋巴结转移灶及远处转移灶中的表达均为阳性，主要表达于细胞膜。转移组移植瘤光密度值高于非转移组（0.4497±0.0705 vs 0.0435±0.0082，t=4.388，P＝0.001）。结论 本研究成功构建稳定性好、转移率高的鼻咽癌裸鼠移植瘤转移模型，且ELAM-1在裸鼠移植瘤中高表达，可促进鼻咽癌裸鼠移植瘤生长和转移。     

胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞内cAMP含量的影响

目的 :探讨胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞内环磷酸腺苷 (cAMP)含量的影响。方法 :建立人结肠癌SW4 80 裸鼠移植瘤模型 ,实验动物随机分为 5肽胃泌素 (PG)组及对照组 (生理盐水 ) ,观察移植瘤的体积、重量及细胞内cAMP含量的变化。结果 :移植瘤的体积、重量、细胞内cAMP含量 ,PG组均显著高于对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论 :胃泌素在体内使人结肠癌移植瘤细胞内cAMP含量增加 ,从而促进移植瘤的生长     

miRNA-381表达及其与鼻咽癌放疗敏感性的关系

目的:观察人鼻咽癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系.方法:采用RT-PCR法测定正常鼻咽部上皮细胞株NP460,人鼻咽癌细胞株CNE-2,放疗抵抗细胞株CNE-2R及20例符合纳入标准的鼻咽癌组织中miRNA-381的表达.完成放疗后3个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效.所有病例都有2年或2年以上随访记录,根据随访记录制定放疗敏感性评估标准.采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性.结果:入组患者根据放疗敏感性评估标准,分为放疗抵抗组(7例)和放疗敏感组(13例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P＜0.01).克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为NP460＞ CNE-2＞CNE-2R,且有显著统计学差异(P＜0.01).RT-PCR结果显示正常鼻咽部上皮细胞株NP460中miRNA-381表达量高于鼻咽癌细胞株,放疗抵抗细胞株CNE-2R中miRNA-381表达量远低于其亲代细胞株CNE-2.近期疗效和鼻咽癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.77,P ＜0.000 1).结论:miRNA-381在放疗抵抗的鼻咽癌细胞及临床标本中的表达量显著低于放疗敏感的细胞及组织.miRNA-381相对表达量越高的鼻咽癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好.     

鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性异质性与凋亡的关系

目的评估人鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性异质性与凋亡敏感性的相关性。方法用流式细胞仪、荧光显微镜、电镜、Western-blot检测H5和S1凋亡能力的不同及凋亡相关蛋白表达的差异。结果H5、S1两种细胞的凋亡率均随着照射后时间的延长而增加,但H5比S1高且差异有显著性(P<0.05)。结论人鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性的异质性,与细胞受射线照射后凋亡呈正相关,对射线敏感的亚细胞系凋亡率高。     

食管鳞状细胞癌DNA倍体异质性及其与患者预后关系的研究

 本研究采用多点取材的方法，应用流式细胞术对80例中晚期食管鳞状细胞癌的瘤体内DNA倍体异质性进行了研究。DNA异倍体的检出率为88.8%（71/80），DNA指数范围为0.77～1.74。80例标本中，38例瘤体内表现为DNA倍体异质现象（47.50%）。DNA倍体异质性肿瘤患者的5年生存率（34.2%）极显著地低于非异质性肿瘤患者（64.3%）（P<0.025）。文中对瘤体内DNA倍体异质性的可能意义和发生机制进行了讨论。     

STAT-3介导的非依赖VEGFR-2通路对NSCLC细胞放射敏感性影响的研究

目的 研究抑制STAT-3对非依赖VEGFR-2通路的NSCLC细胞放射敏感性的影响,并探讨其可能机制。 方法 采用Q-PCR及蛋白印迹法检测各组中VEGFR-2、STAT-3相关信号分子及HIF-1α、CyclinD₁ mRNA与蛋白表达变化;克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布。 结果 经VEGFR-2抑制剂Apatinib处理后,Calu-1细胞中VEGFR-2、STAT-3 mRNA无显著变化,HIF-1α、CyclinD₁ mRNA表达降低;联合STAT-3抑制剂S3I-201后,VEGFR-2、STAT-3及下游相关基因mRNA表达降低(F=304.54、118.99,P<0.01);VEGFR-2、STAT-3及下游相关靶蛋白磷酸化水平均降低(F=144.34、529.66,P<0.01);细胞凋亡率与G₂+M期阻滞增加,同时抑制STAT-3和VEGFR-2组更明显(F=72.37,P<0.01)。与Calu-1细胞相比,A549细胞加Apatinib抑制VEGFR-2细胞放射增敏效果有限,SER=1.39;联合S3I-201抑制STAT-3后,放射增敏效果显著,SER=1.72(t=-48.61,P=0.000)。 结论 NSCLC细胞VEGFR-2被抑制时,旁路活化的STAT-3直接和间接调控CyclinD₁表达,进而影响肺癌细胞的放射敏感性,联合抑制肺癌细胞VEGFR-2和STAT-3,具有良好的放射增敏效果。     

鼻咽癌放射敏感性异质性的形态学差异观察

目的探讨鼻咽癌放射敏感性异质性与形态学变化的相关性。方法应用电镜观察并用体视学技术测算,比较鼻咽癌细胞系CNE-2Z亚克隆株H5和S1,于体内体外照射后形态学改变的差异;用流式细胞仪、荧光显微镜检测H5和S1放射后凋亡率的不同,用Western-blot检测H5和S1放射后凋亡蛋白Bcl-2表达的差异,以期探讨其形态学异质性机制。结果H5和S1照射后形态学改变差异有显著性;照射后的H5比S1凋亡率高,对射线敏感;S1细胞的各个照射剂量组Bcl-2蛋白表达无明显差异;而H5细胞的各个照射剂量组Bcl-2蛋白表达随照射剂量的增加而递减。结论H5、S1照射后形态学的差异变化可用于预测其放射敏感性的异质性。     

Cyclin D1及PCNA与鼻咽癌放射敏感性相关性研究

[目的]探讨鼻咽癌的细胞周期素(cyclin)D1和增殖细胞核抗原(PCNA)表达与放射敏感性的关系。[方法]65例初治行放疗的鼻咽癌患者,免疫组化测定治疗前活检标本的cyclinD1和PC鄄NA表达,并与放射敏感性(放疗后的近期疗效)进行单因素和多因素的分析研究。[结果]cyclinD1阳性表达率为60%,PCNA表达率为52.3%。放射敏感者(CR)40例(61.5%),放射低敏者(PR和MR)25例(38.5%)。cyclinD1阳性表达和PCNA高表达的CR率分别为74.4%和82.4%,明显高于阴性表达及低表达者(CR率分别为42.3%和38.7%)(P<0.01)。各期中cyclinD1阳性与阴性表达及PCNA高与低表达者疗效为CR的差异有显著性(P<0.01)。Logistic多因素回归分析显示明显影响放疗效果的因素依次为:PCNA,临床分期,原发肿瘤大小,病人年龄和性别。[结论]cyclinD1阳性表达及PCNA高表达的鼻咽癌放射敏感性高,在作为预测放疗敏感性的指标上,PCNA可能较cyclinD1更有意义,为个体化的治疗方案增添了重要参考价值的生物学指标。     

Survivin蛋白在鼻咽癌组织中表达及其临床意义

目的探讨Survivin表达与NPC临床分期、放疗敏感性、复发及预后的关系。方法应用免疫组化二步法,检测128例NPC组织中Survivin的表达情况。结果 Survivin在鼻咽癌组织中表达率为70.3%,survivin表达与肿瘤临床分期相关,Ⅰ～Ⅱ期其阳性率(38.1%)明显高于Ⅲ～Ⅳ期(81.8%),两者比较有统计学意义(P<0.01),且表达强度亦有统计学意义(P<0.01),而Ⅲ期与Ⅳ期比较无统计学意义(P>0.05);survivin表达与肿瘤淋巴结转移、远处转移及患者生存率均相关(P<0.05);survivin表达与患者放疗敏感性相关(P<0.01)。结论 Survivin在鼻咽癌组织中呈高表达,其异常表达与鼻咽癌临床分期、远处转移、放疗敏感性及预后有关,可能作为NPC诊断、疗效评估及预后判断的新辅助指标。     

TP53 and p21WAF1/CIP1 Behave Differently in Euploid versus Aneuploid Bladder Tumours Treated with Radiotherapy

The aim of this study was to examine any relation between DNA ploidy and previously detected TP53 (p53) or p21^WAF1/CIP1 expression in 94 patients with muscle-invasive transitional cell carcinoma of the urinary bladder and to associate these factors with survival. DNA ploidy was determined by image cytometry. In a subgroup of patients, the mutational status of the TP53 gene was assessed by temporal temperature gradient electrophoresis (TTGE) or perpendicular denaturant gradient gel electrophoresis (DGGE) and subsequent sequencing. Significantly more aneuploid than euploid tumours showed TP53 accumulation (p = 0.003). Patients with aneuploid tumours lived longer than patients with euploid tumours (p = 0.003). In the euploid, but not in the aneuploid group, TP53 and p21^WAF1/CIP1 were associated with cancer-specific survival (p = 0.002 and 0.02, respectively). Patients with > 50% TP53 expression had the longest survival time. Mutation analyses showed acceptable concordance with TP53 expression. We conclude that DNA aneuploidy may confer increased radiosensitivity in bladder cancer patients and that TP53 accumulation may confer increased radiosensitivity, but its effect is detectable only in euploid tumours.